细菌内毒素检查记录word精品
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附录ⅩⅢ D 细菌内毒素检查法
附录ⅩⅢ D 细菌内毒素检查法本法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。
细菌内毒素检查包括两种方法，即凝胶法和光度测定法，后者包括浊度法和显色基质法。
供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行试验。
当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准。
本试验操作过程应防止微生物和内毒素的污染。
细菌内毒素的量用内毒素单位(EU)表示，1EU与1个内毒素国际单位(1U)相当。
细菌内毒素国家标准品系自大肠埃希菌提取精制而成，用于标定、复核、仲裁鲎试剂灵敏度和标定细菌内毒素工作标准品的效价。
细菌内毒素工作标准品系以细菌内毒素国家标准品为基准标定其效价，用于试验中的鲎试剂灵敏度复核、干扰试验及各种阳性对照。
细菌内毒索检查用水系指内毒素含量小于0.015EU／ml (用于凝胶法)或0.005EU／ml(用于光度测定法)且对内毒素试验无干扰作用的灭菌注射用水。
试验所用的器皿需经处理，以去除可能存在的外源性内毒素。
耐热器皿常用于热灭菌法(250℃、30分钟以上)去除，也可采用其他确证不干扰细菌内毒素检查的适宜方法。
若使用塑料器械，如微孔板和与微量加样器配套的吸头等，应选用标明无内毒素并且对试验无干扰的器械。
供试品溶液的制备某些供试品需进行复溶、稀释或在水性溶液中浸提制成供试品溶液。
一般要求供试品溶液的pH值在6.0～8.0的范围内。
对于过酸、过碱或本身有缓冲能力的供试品，需调节被测溶液(或其稀释液)的pH值，可使用酸、碱溶液或适宜的缓冲液调节pH值。
酸或碱溶液须用细菌内毒素检查用水在已去除内毒素的容器中配制。
缓冲液必须经过验证不含内毒素和干扰因子。
内毒素限值的确定药品、生物制品的细菌内毒素限值(L)一般按以下公式确定：L ＝K ／M式中 L 为供试品的细菌内毒素限值，一般以EU ／ml 、EU ／mg 或EU／U(活性单位)表示；K 为人每千克体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU ／(kg ·h)表示，注射剂K=5EU ／(kg ·h)，放射性药品注射剂K＝2.5EU ／(kg ·h)，鞘内用注射剂K ＝0.2EU ／(kg ·h)；M 为人用每千克体重每小时的最大供试品剂量，以ml ／(kg ·h)、mg ／(kg ·h)或U ／(k8·h)表示，人均体重按60kg 计算，人体表面积按1.62m 2计算。
细菌内毒素检测方法验证
细菌内毒素检测方法验证方案起草人起草日期审核人审核日期批准人批准日期目的-------------------------------------------------------------------------范围-------------------------------------------------------------------------责任人----------------------------------------------------------------------内容-------------------------------------------------------------------------1.实验材料及用具-------------------------------------------------------2 实验准备----------------------------------------------------------------3.具体验证步骤----------------------------------------------------------3.1. 鲎试剂灵敏度复核------------------------------------------------3.2..干扰实验--------------------------------------------------------------3.3.供试品细菌内毒素检查--------------------------------------------4.验证结论--------------------------------------------------------------附：表1.鲎试剂灵敏度复核记录表2.干扰试验记录表3.细菌内毒素检查记录目的：为确保盐酸罗哌卡因一水合物细菌内毒素检测方法的专属性、灵敏度，保证检测结果可符合质量标准要求，特制定此方案。
实验室调查-细菌内毒素检查测试
NOI编号：
问题和回答部分
序号
实验室调查人员：同检验人员对以下问题进行回顾
Yes
No
N/A
1
样品标识和储存是否正确？
□
□
□
2
样品包装容器和盖子是否完好无损？
□
□
□
3
检测所用样品量是否正确？
□
□
□
4
样品稀释是否正确？
□
□
□
5
样品反应条件是否正确？
□
□
□
6
检测用到的移液器是否在校准效期内？
□
□
□
7
检测用到的鲎试剂灵敏度是否正确？
□
16
？检测用的试管是否经过除热原？
□
□
□
17
检测用到的移液管是否经过除热原？
□
□
□
18
实验过程中是否用到了其它试剂，是否在有效期内？
□
□
□
19
检测前是否对仪器进行正确的清洁？
□
□
□
20
仪器是否在校验周期内？
□
□
□
21
检测过程中，仪器的使用方法是否正确？
□
□
□
22
检验人员是否按现行文件进行过培训？
□
□
□
□
8
使用的鲎试剂是否在有效期内？
□
□
□
9
使用的内毒素工作标准品是否在效期内？
□
□
□
10
使用的内毒素检查用水是否在效期内？
□
□
□
11
取样检测间隔是否正确？
□
□
□
12
问题和回答部分
序号
实验室调查人员：同检验人员对以下问题进行回顾
Yes
No
N/A
1
样品标识和储存是否正确？
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2
样品包装容器和盖子是否完好无损？
□
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3
检测所用样品量是否正确？
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4
样品稀释是否正确？
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□
5
样品反应条件是否正确？
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6
检测用到的移液器是否在校准效期内？
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7
检测用到的鲎试剂灵敏度是否正确？
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16
？检测用的试管是否经过除热原？
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17
检测用到的移液管是否经过除热原？
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18
实验过程中是否用到了其它试剂，是否在有效期内？
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19
检测前是否对仪器进行正确的清洁？
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仪器是否在校验周期内？
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检测过程中，仪器的使用方法是否正确？
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检验人员是否按现行文件进行过培训？
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使用的鲎试剂是否在有效期内？
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9
使用的内毒素工作标准品是否在效期内？
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10
使用的内毒素检查用水是否在效期内？
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11
取样检测间隔是否正确？
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□
12
细菌内毒素检验记录
细菌内毒素检验记录检品名称批号批量检品规格检验依据检品来源检验日期完成日期试剂名称批号规格来源细菌内毒素工作品 EU细菌内毒素检查用水 ml鲎试剂EU/ml1、细菌内毒素工作标准品稀释：a、溶解：取 EU内毒素工作标准品，轻弹瓶壁使粉末落入瓶底后启开备用，加细菌内毒素检查用水（BET水） ml复溶后置旋窝混匀器上混匀 min。
b、稀释：取上述细菌内毒素溶液 ml于无内毒素空安瓿瓶中加入 ml BET水置旋窝混匀器上混匀 s，即得1EU/ml细菌内毒素溶液；取1EU/ml细菌内毒素溶液 ml于无内毒素空安瓿瓶中加入 ml BET水置旋窝混匀器上混匀 s，即得ml（2λ内毒素阳性对照液）细菌内毒素溶液。
2、供试品溶液配制：取供试品溶液 ml于无内毒素空安瓿瓶中加入 mlBET水置旋窝混匀器上混匀s，即得。
3、供试品阳性对照液配制：取供试品溶液 ml于无内毒素空安瓿瓶中加入 mlBET水置旋窝混匀器上混匀s，取其溶液ml于2ml无内毒素空安瓿瓶中加入 ml 1EU/ml细菌内毒素溶液置旋窝混匀器上混匀 s，即得。
4、鲎试剂溶解：取 EU/ml鲎试剂，轻弹瓶壁使粉末落入瓶底后启开加入BET水 ml，轻轻振摇使鲎试剂完全溶解。
保温仪器编号：保温温度：℃保温时间（～）反应结果：（细菌内毒素限值：应不得过3EU/ml）平行量编号鲎试剂+检查用水+检测液12阴性对照鲎试剂+检查用水+检查用水供试品鲎试剂+检查用水+供试品阳性对照鲎试剂+检查用水+λ阳性对照液供试品阳性对照鲎试剂+检查用水+λ供试品阳性液注：检验结果为阳性用“+”表示，阴性用“-”表示。
结果判定：符合规定口不符合规定口检验人：检验时间：。
04-细菌内毒素定量法测定记录报告
生产单位：
批号：；规格：ml/支；检测范围：EU/ml
细菌内毒素标准品
来源：中国药品生物制品检定所□其他□
批号：；标定效价：EU/支
细菌内毒素检查用水
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ生产单位：
批号：；
标准曲线
内毒素标准曲线浓度范围：λ1 =EU/mlλ2 =EU/ml
λ3 =EU/mlλ4 =EU/ml
根据内毒素标准曲线浓度：λ=λ4λm =EU/ml
回归方程：相关系数（γ）=
干扰试验
MVD = cL/λ=倍有效稀释倍数（n）：倍
注：有效稀释倍数必须符合干扰试验有效性的三个条件，且回收率最接近100%。
实验结果
阴性对照：内毒素含量﹥λ□内毒素含量﹤λ□
有效稀释倍数样品溶液：内毒素含量﹥L/n□内毒素含量﹤L/n□
含标准内毒素（2λm）的有效稀释倍数样品溶液：
回收率﹤50%□回收率﹥200%□50%﹤回收率﹤200%□
结论
符合规定□不符合规定□
检测人：复核人：日期：
细菌内毒素定量法测定记录报告
编号
产妇姓名
标本类型
胎盘脐带分离液（分离后□扩增后第代□）
标准规定
胎盘脐带分离液细菌内毒素限制（L=25 EU/ml）
送检日期
年月日
检测日期
年月日
检验依据
中国药典2010版附录XIIE（细菌内毒素检查法）
仪器设备
细菌内毒素测定仪BET-72
检验方法
动态浊度法
检测试剂
鲎试剂
批号：；规格：ml/支；检测范围：EU/ml
细菌内毒素标准品
来源：中国药品生物制品检定所□其他□
批号：；标定效价：EU/支
细菌内毒素检查用水
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ生产单位：
批号：；
标准曲线
内毒素标准曲线浓度范围：λ1 =EU/mlλ2 =EU/ml
λ3 =EU/mlλ4 =EU/ml
根据内毒素标准曲线浓度：λ=λ4λm =EU/ml
回归方程：相关系数（γ）=
干扰试验
MVD = cL/λ=倍有效稀释倍数（n）：倍
注：有效稀释倍数必须符合干扰试验有效性的三个条件，且回收率最接近100%。
实验结果
阴性对照：内毒素含量﹥λ□内毒素含量﹤λ□
有效稀释倍数样品溶液：内毒素含量﹥L/n□内毒素含量﹤L/n□
含标准内毒素（2λm）的有效稀释倍数样品溶液：
回收率﹤50%□回收率﹥200%□50%﹤回收率﹤200%□
结论
符合规定□不符合规定□
检测人：复核人：日期：
细菌内毒素定量法测定记录报告
编号
产妇姓名
标本类型
胎盘脐带分离液（分离后□扩增后第代□）
标准规定
胎盘脐带分离液细菌内毒素限制（L=25 EU/ml）
送检日期
年月日
检测日期
年月日
检验依据
中国药典2010版附录XIIE（细菌内毒素检查法）
仪器设备
细菌内毒素测定仪BET-72
检验方法
动态浊度法
检测试剂
鲎试剂
细菌内毒素检测共33页文档
பைடு நூலகம்
39、勿问成功的秘诀为何，且尽全力做你应该做的事吧。——美华纳
40、学而不思则罔，思而不学则殆。——孔子
细菌内毒素检测
41、实际上，我们想要的不是针对犯 罪的法 律，而 是针对 疯狂的 法律。 ——马 克·吐温 42、法律的力量应当跟随着公民，就 像影子 跟随着 身体一 样。— —贝卡 利亚 43、法律和制度必须跟上人类思想进 步。— —杰弗 逊 44、人类受制于法律，法律受制于情 理。— —托·富 勒
45、法律的制定是为了保证每一个人 自由发 挥自己 的才能 ，而不 是为了 束缚他 的才能 。—— 罗伯斯 庇尔
谢谢！
36、自己的鞋子，自己知道紧在哪里。——西班牙
37、我们唯一不会改正的缺点是软弱。——拉罗什福科
xiexie! 38、我这个人走得很慢，但是我从不后退。——亚伯拉罕·林肯
细菌内毒素检查法
细菌内毒素检查法
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2000版较95版药典修改要点
• 新增加三个定义 • 1.细菌内毒素检查用水 • 2.鲎试剂灵敏度 • 3.反应终点浓度
当前您正浏览第二页，共三十六页。
其他增加内容
• 前言：细菌内毒素国家标准品的用途增加了复核鲎试 剂灵敏度。
• 试验准备：增加了试验所和器皿应确证无干扰细 菌内毒素的检查。
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建议
七、由药典会制定两法转换申报程序
• 总之为使2000年版药典能有较多的品种 采用细菌内毒素检查法，必须抓紧时间， 充分利用这个良好机遇，做好品种汇总申 报和审批工作。
•
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• 论药品生物制品细菌内毒素检查 限值的确定
当前您正浏览第三十页，共三十六页。
当前您正浏览第十八页，共三十六页。
考察主要收获 五.细菌内毒素检查法
• 1.鲎试剂灵敏度复核的目的不是考察灵敏度是否准确， 而且考察操作是否准确，以及工作标准品是否准确 。
• 2. 0.1ml规格的鲎试剂的生产与使用应与国际接轨。 • 3.对供试品进行常规检查时，阳性对照对4个浓度，
至少有两个浓度，即2λ和0.25λ。同时供试品阳性对 照不可缺少。每个浓度平等做两管。
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考察主要收获 二.内毒素标准品的管理
• 1.美国FDA负责管理内毒素国家标准品 (EC系列)和鲎试剂参考品,政府免费提供 内毒素国家标准品和鲎试剂参考品给鲎试 剂生产厂家用于灵敏度标定。
• 2.工作标准品(CSE)由厂家自行生产和发 放,政府不核发有关执照。
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细菌内毒素国家标准品981的特点
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2000版较95版药典修改要点
• 新增加三个定义 • 1.细菌内毒素检查用水 • 2.鲎试剂灵敏度 • 3.反应终点浓度
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其他增加内容
• 前言：细菌内毒素国家标准品的用途增加了复核鲎试 剂灵敏度。
• 试验准备：增加了试验所和器皿应确证无干扰细 菌内毒素的检查。
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建议
七、由药典会制定两法转换申报程序
• 总之为使2000年版药典能有较多的品种 采用细菌内毒素检查法，必须抓紧时间， 充分利用这个良好机遇，做好品种汇总申 报和审批工作。
•
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• 论药品生物制品细菌内毒素检查 限值的确定
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考察主要收获 五.细菌内毒素检查法
• 1.鲎试剂灵敏度复核的目的不是考察灵敏度是否准确， 而且考察操作是否准确，以及工作标准品是否准确 。
• 2. 0.1ml规格的鲎试剂的生产与使用应与国际接轨。 • 3.对供试品进行常规检查时，阳性对照对4个浓度，
至少有两个浓度，即2λ和0.25λ。同时供试品阳性对 照不可缺少。每个浓度平等做两管。
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考察主要收获 二.内毒素标准品的管理
• 1.美国FDA负责管理内毒素国家标准品 (EC系列)和鲎试剂参考品,政府免费提供 内毒素国家标准品和鲎试剂参考品给鲎试 剂生产厂家用于灵敏度标定。
• 2.工作标准品(CSE)由厂家自行生产和发 放,政府不核发有关执照。
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细菌内毒素国家标准品981的特点
中国药品检验标准操作规程2019版细菌内毒素检查法word精品文档29页
细菌内毒素检查法1 简述1.1 本规范适用于《中国药典》2010年版二部附录Ⅺ E细菌内毒素检查法——凝胶法和光度测定法。
后者包括浊度法和显色基质法。
供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行试验。
当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准。
1.2 供试品细菌内毒素限值的确定1.2.1 药典中或国家标准有规定的，按供试品各论中规定限值；1.2.2 尚无标准规定的，按以下公式确定供试品内毒素限值：L＝K∕M式中L为供试品的细菌内毒素限值，以EU／ml、EU／mg、EU／U等表示。
K为按规定的给药途径，人用每千克体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU／(kg·h) 表示。
其中注射剂，K＝5EU／(kg·h)；放射性药品注射剂，K＝2.5EU ／(kg·h)；鞘内用药品，K＝0.2EU／(kg·h)。
M为人用每公斤体重每小时最大剂量，以ml／(kg·h)、mg／(kg·h)、U／(kg·h) 等表示。
药品人用最大剂量可依据药品使用说明书或参阅《临床用药须知》，中国人均体重按60kg计算，注射时间小于1h的按1h计。
若供试品按体表面积给药，供试品每平方米体表面积剂量乘以0.027即可转换为每千克体重剂量［即M：（最大给药剂量／(m２·h)×1.62m２）／60kg］。
1.3 供试品最大有效稀释倍数的确定供试品的最大有效稀释倍数（MVD）按下式计算：MVD＝C·L／λL为供试品的细菌内毒素限值，当L以EU／ml表示时，C等于1.0ml／m1；当L 的单位以EU／mg或EU／u表示时，C为供试品制备成溶液后的浓度，单位为mg／ml 或U／ml。
λ在凝胶法中为鲎试剂的标示灵敏度，在光度测定法中为所使用的标准曲线中的最低内毒素浓度。
供试品如为无菌粉末或原料药，供试品最小有效稀释浓度（MVC）按下式计算：MVC＝λ／L。
细菌内毒素挑战性试验记录
细菌内毒素挑战性试验记录
验证对象设备编号安置位置
验证起止日期
实验记录：
1.验证标的物的制备：标的物的细菌内毒素含量为Eu 。
1.1细菌内毒素工作标准品冻干品效价Eu 批号生产单位1.2制备方法：
2.设备装载内容：
3.验证标的物的放置位置：标的物用量支，编号
4.工艺：加热至℃，保温分钟。
5.检验：
5.1细菌内毒素工作标准品冻干品效价Eu，批号，生产单位
细菌内毒素检查用水（BET）批号规格ml/支生产单位鲎试剂灵敏度Eu/ml批号规格ml/支生产单位5.2将验证标的物取出，分别加入1ml细菌内毒素检查用水，振荡溶解。
5.3按细菌内毒素检查的标准操作规程对验证标的物进行检查。
细菌内毒素工作标准品的稀释
验正标的物溶解液的处理
合格标准：验正标的物的细菌内毒素含量应下降3个log。
结论：
检验人复核人。
甘露醇细菌内毒素检查方法验证报告 模版
甘露醇细菌内毒素检查方法验证报告文件编码：D01-5303 版本号：01目录一、目的 (1)二、适用范围 (1)三、内容 (1)四、附件 (14)五、变更历史 (14)一、 目的建立甘露醇细菌内毒素检查方法，即按照《甘露醇细菌内毒素检查方法验证方案》D01-5303进行验证，在本实验条件下的适用性，所采用的检验方法能够始终如一地获得符合客观实际的数据或结果，确保检验结果的准确性。
二、 适用范围适用于本公司所生产的甘露醇细菌内毒素检查方法的验证。
三、 内容 1. 概述按照《2015年分析仪器、实验设备确认总计划》进度安排，验证小组按《甘露醇细菌内毒素检查方法验证方案》D01-5303中既定检查项目，对甘露醇细菌内毒素检查方法进行了检查、测试，且所有测试结果已收集齐全，现特此起草《甘露醇细菌内毒素检查方法验证报告》，分析、总结各项验证情况，对甘露醇细菌内毒素检查方法做出客观评价，提出合理化使用建议，以确保该检验方法的检验结果准确可靠。
2. 验证组织3. 验证实施时间：2015.10.194. 验证内容根据公司《验证管理规程》C05-0001的有关规定，对甘露醇细菌内毒素检查方法进行验证。
验证内容包涵鲎试剂灵敏度复核试验、干扰试验以及凝胶限度试验，以部 门部门职责责任人 职 务 工作划分 备注 质量部 方案起草、组织实施、过程监控、书写报告QC 组长 方案、报告起草，验证实施及操作结果的复核QC 进行验证操作 QA 过程监控 验证委员会方案、报告审核、批准、验证合格证发放验证工程师 方案、报告审核QA 经理质量部经理（质量受权人）方案、报告批准；验证合格证发放确认所建立的甘露醇细菌内毒素检查方法可行性、准确性。
5.验证依据5.1.验证的法规依据《药品生产质量管理规范（2010年修订）》《药品GMP指南·质量控制实验室与物料系统》《中华人民共和国药典》2015年版四部6.验证前完成工作检查6.1.文件资料的检查确认项目认可标准确认方法确认结果是否符合是否验证方案已起草，并经过审核、批准对验证方案进行检查验证方案已完成起草，并按照规定结果验证委员会成员审核，验证委员会组长批准。
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细菌内毒素检查记录（首页）
总 页 分 页 检品
编号： 检验日期： 检品名称：
实验地点：
一、 标准规定的细菌内毒素限度（L ）为： 二、 供试品溶液的制备： 1、 预试验确定的MVD 为 倍。
2、 取本品 ml ，加细菌内毒素检查用水 ml ，摇匀，精密量取 ml ，加细菌内 毒素检查用水 ml ，摇匀，即得。
三、 试验用细菌内毒素溶液的制备： 1、取一支细菌内毒素工作标准品，加入 ml 细菌内毒素检查用水 ml ，使溶解，得
EU/ml 的试验用细菌内毒素溶液。
2、 取 ml ( EU/ml ），加入 ml 细菌内毒素检查用水 (
EU/ml ) 3、 取 ml ( EU/ml ），加入 ml 细菌内毒素检查用水 (
EU/ml ) 4、 取 ml ( EU/ml ），加入 ml 细菌内毒素检查用水 (
EU/ml ) 5、 取 ml ( EU/ml ），加入 ml 细菌内毒素检查用水 (
EU/ml ) 6、 取 ml ( EU/ml ），加入 ml 细菌内毒素检查用水 (
EU/ml ) 四、 供试品阳性对照溶液的制备：
1、
取 ml ( EU/ml ），加入 ml 供试品溶液（ EU/ml )
2、 取 ml (
EU/ml ），加入 ml 供试品溶液（ EU/ml )
3、 取 ml ( EU/ml ），加入 ml 供试品溶液（ EU/ml )
4、 取 ml ( EU/ml ），加入 ml 供试品溶液（ EU/ml )
5、 取 ml ( EU/ml ），加入 ml 供试品溶液（ EU/ml )
6、 取 ml ( EU/ml ），加入 ml 供试品溶液（ EU/ml )
检验者： 校对者： 室负责人:
细菌内毒素检查记录（附页）
检品编号. 检验日期：总分页
页
检品名称: 实验地点：
仪器设备: 恒温箱（型号)
保温温度:
保温时间: 自至
加样量及试验结果:
结论：本品按《中国药典》2005年版二部附录XI E检验依据检验，结果
检验者: 校对者: 室负责人:。