1 目的
规Waters e2695液相色谱仪的操作规程，正确使用本仪器，保证检测工作顺利进行以及操作人员、设备、周围环境的安全。
2 适用围
本指导书适用于Waters e2695液相色谱仪、2489紫外检测器及随机工作站。
3 职责
3.1操作人员按本规程操作仪器，对仪器进行日常维护，作使用登记。
3.2保管人员负责监督仪器操作是否符合规程，对仪器进行定期维护，保养。
3.3科室负责人负责对仪器综合管理。
4 仪器性能指标
4.1.Alliance e2695系统
4.1.1 泵/溶剂管理系统：相互独立控制的线性双柱塞驱动装置,双压力传感器反馈回路, 无脉动, 无需混合器和阻尼器。
4.1.1.1溶剂数：4
4.1.1.2流速围：0.001--10.000ml/min, 以0.001ml为增量
4.1.1.3流速精度：±0.075%RSD
4.1.1.4流速准确度：±1.0%RSD
4.1.1.5操作压力：0-6000psi(0-410bar) ，可设上,下限
4.1.1.6混合围：0.0~100.0%，以1% 增量
4.1.1.7梯度准确度：±0.5%，不随反压变化
4.1.1.8梯度精度：±0.15%，不随反压变化
4.1.1.9压缩补偿：自动，连续
4.1.1.10梯度曲线：多种梯度曲线: 线性, 凸线和凹线等11种
4.1.1.11系统体积：< 650μL, 不随反压变化
4.1.2 自动进样器/样品管理系统：
4.1.2.1样品盘数：120位,分5个样品盘,每个样品盘可放置24个2ml样品瓶
4.1.2.2进样次数：每个样品可进样1到99次
4.1.2.3进样精度：<0.5%RSD
4.1.2.4样品污染度：<0.1%
4.1.2.5进样准确度：±1 uL
4.1.2.6进样体积：0.1 to 100 uL
4.1.2.7进样线性度：> 0.999 coefficient of deviation
4.1.3 在线柱塞清洗装置：
可在线清洗柱塞杆，可防止因缓冲盐溶液结晶而造成的堵塞，延长密封圈的使用寿命。
4.1.4 在线脱气装置：
4.1.5柱温箱：
4.1.
5.1温度设定围：室温至65℃
4.1.
5.2温度稳定性：±0.15℃
4.1.
5.3柱容量：4根7.8X300柱
4.2检测器：
4.2.1 2489双波长紫外检测器
双通道紫外检测器，可进行双波长同时测定；最新专利梯形狭缝池设计，确保低噪音，高灵敏度，宽线性围；Maxplot,Ratioplot优化灵敏度，检测共流出物杂质，可作简单峰纯度鉴定。
4.2.1.1波长围：190-700nm
4.2.1.2 灯：氘灯，具有灯优化软件,可以延长灯的使用寿命，可编程控制灯的开关
4.2.1.3波长准确度：±1.0nm
4.2.1.4波长重现性：±0.1nm
4.2.1.5光谱带宽：5nm
4.2.1.6噪音：5 X 10-6AU
4.2.1.7漂移：≤1 X 10-4AU/hr
4.2.1.8线性围：< 5% at 2.5 AU
4.2.1.9流通池：池长10mm，池体积10ul
4.2.1.10 采集速率：80Hz
5 操作规程
5.1操作前准备
5.1.1色谱柱的检查与安装首先打开柱温箱门看是否是所需用的色谱柱，若不是则旋下色谱柱螺母，卸下色谱柱，马上用死堵堵上。取出所需色谱柱，两端用螺母旋紧，固定在卡槽上，注意色谱柱的方向，不能装反。
5.1.2 溶剂的准备。
5.1.2.1 甲醇或乙腈必须用HPLC纯，其他无机试剂也最好用HPLC纯，且需经过0.45μm 滤膜溶剂过滤装置过滤。试剂的纯净非常重要。必须要采用超纯水，可以用哇哈哈纯净水替代。
5.2 主机操作
5.2.1灌装及清洗系统
5.2.1.1当真空脱气机第一次使用或当真空管是空的，或当改变溶剂，且当前溶剂与真空管中溶剂不相溶时，应当灌装清洗系统。
5.2.1.2如果使用易挥发的混合溶剂或改变溶剂时，若系统长时间关机（比如，隔夜）灌装系统推荐将泵的流速控制在高水平（3-5ml/min）。
5.2.1.3使用注射器灌装系统（干灌装）：点击仪器面板上“Menu/status”按钮，选择“Direct Function”,然后点击“dry prime”选择欲灌装的通道并逆时针方向旋开灌装/排放阀，将专用注射器插入灌装/排放阀入口，拉动注射器活塞吸入大约10毫升灌装液或直到管路中不在有气泡为止。灌装完成后顺时针方向拧紧灌装/排放阀。
5.2.1.4首次灌装系统时，使用干灌装并使用异丙醇、甲醇、乙醇作为灌装溶剂。
5.2.1.5置换管路中的流动相，使用湿灌装：点击仪器面板“Menu/status”按钮，选择“Direct Function”,然后点击“wet prime”选择欲灌装的通道。
5.2.1.6如果当前管路中溶剂是有机的或水而当前流动相也为有机溶剂或为水，在能互相溶解的情况下，用流动相作为灌装溶剂。
5.2.1.7如果当前管路中溶剂是有机的或水而当前流动相也为有机溶剂或为水，但不能互相溶解的情况下，使用异丙醇灌装系统。
5.2.1.8如果管路中溶剂为有机的而当前流动相为缓冲盐或管路中为缓冲盐而流动相为有机溶剂时，使用10%异丙醇、甲醇、乙醇灌装系统。
5.3优化泵的性能
5.3.1总是把存放溶剂瓶的溶剂瓶架放在泵的顶部（或在相对于泵较高的位置）。
5.3.2当使用盐溶液的时候，常需要用水冲洗所有流路。这样就可以将阀门端口的沉淀的盐冲洗掉。在运行泵之前，用至少两倍体积（30ml）的水冲洗真空脱气机，特别是当泵关闭较长时间时或者通道中使用易挥发混合溶剂时。
5.3.3当基线长时间不能处于稳定状态时，通常情况下应考虑溶剂进口过滤器是否堵塞。当溶剂过滤器堵塞时，应将其从溶剂瓶中取出并将其放入30%硝酸溶液中超声清洗30min。在将其重新装入溶剂瓶之前，必须用MillQ水对其进行彻底的清洗。长期处于水或缓冲液中的过滤器常因为溶剂中藻类等微生物的生长，造成过滤器的堵塞。因此建议在使用完此类流动相后，用50%乙腈清洗溶剂过滤器。
5.3.4当使用缓冲溶液时，在关闭系统前必须将通道中的溶剂置换成50%乙腈，以防止藻类等微生物的生长。
5.4使用Empower色谱工作站
5.4.1双击电脑桌面上的Empower快捷图标，出现Empower登陆窗口。输入用户名与密码，默认账号为“system”，密码为“manager”，点击“OK”进入Empower工作站。
单击高级键, 选择用户类型和QuickStart 界面。
5.4.2．选择QuickStart 界面，点击“确定”,然后选择待选定的操作项目以及色谱系统（仅查看数据可选择色谱系统中的"没有系统"），单击“确定”。
5.4.3编辑仪器方法和方法组
5.4.3.1监视区单击方法组编辑向导
5.4.3.2选择新建按钮，弹出仪器方法编辑器。
5.4.3.3单击2690/5，弹出2695 编辑界面。
5.4.3.4 Alliance 系统（包括2695、2795 和2695D）通用编辑页面中，可选择单次输送体积。查看脱气选项，确认设置正确。流量选项中设置泵模式、总流量以及流动相配比。选择等度或者梯度。
5.4.3.5单击2489，弹出2489编辑界面。在波长模式中选择相应的波长模式。单波长或者双波长，输入所需的波长，选择相应的采样速率，一般为2点/秒。TUV 检测器滤波常数"快速"选项仅适用于单波长模式；采样速率以一个色谱峰上的采样点不少于15 个点为准。
5.4.3.6点击"文件"，选择"另存为"，输入仪器方法名称，点击"保存"；点击"文件"，选择"退出"。
5.4.3.7在被选项中选择所需的仪器方法名称，点击“下一步”。
5.4.3.8在下拉菜单中选择所需的处理方法和报告方法（如果没有合适的方法选择"无处理"、"无报告"），点击“下一步”。
5.4.3.9输入方法组名称，单击"完成"。
5.4.4进样
单击平衡系统按钮进入平衡系统/监视基线界面，选择相应的仪器方法，点击平衡/监视器，在监视窗口监视基线至系统平衡，停止系统监视状态，点击停止按钮。单击样，点击参数编辑快捷方式进入定义单进样参数编辑界面，输入样品名、功能、方法组等参数。点击“进样”。
5.4.5使用向导建立样品组和样品组方法
5.4.5.1选择“运行样品”任务栏，然后单击“样品队列”，进入样品列表。单击新建样品组向导，建立样品组。选择创建样品组方法类型为"LC 或PDA/MS"，然后点击“定义样品板”，在"选择标准进样在那里开始"中选择合适的选项。检查开始加载样品瓶的位置是否正确，点击“下一步”。
5.4.5.2在描述标样中需要设置一下容：样品组中的标样数：x；每瓶标样进样次数: x；进样体积: x ；行时间：xx；方法组xxx；点击"选项"：输入下一进样延迟时间x ；点击“下一步”。样品数：x；每瓶样品进样次数：x；进样体积：x ; 行时间：x 方法组x；点击“选项”。输入下一进样延迟时间x；点击“下一步”。
5.4.5.3在识别标准样界面中，输入标样名称，增量后缀使用1。在识别样品界面中，输入样品名称，增量后缀使用a。点击“下一步”。运行模式选项中选择"只测试"。查看摘要，点击“下一步”。[ 注：弹出组分编辑器，输入标样中每个组分的名称（标不需要输入含）。可以直接关闭该窗口，在处理数据的时候再添加。点击“完成”，5.4.5.4在菜单栏中选择文件。为方法组命名并保存样品组方法。单击“样品队列”，打开运行样品窗口，点击运行当前样品组方法键，选择“运行”。选择需运行的样品组名称，点击“运行”。样品组运行过程中，在"正在运行"栏中正在运行以及运行完毕的样品以红色显示。注：以向导建立的样品组首行功能一般为清除校正，一般在运行样品前删除该行或改为"平衡"。
5.4.6建立数据处理方法。
5.4.
6.1单击“浏览项目”键，在“样品组”中选择目标样品组。在样品组上点击鼠标右键选择查看相关通道，样品组在单个通道中显示。
5.4.
6.2选择定最低浓度的标样，点击鼠标右键，选择下拉菜单中的查看，会显示未处理的色谱图形。
5.4.
6.3点击处理方法向导快捷键，选择创建新处理方法，点击”确定”。确认处理类型为LC，积分方式可选择为传统，再点击使用处理方法向导，选择“确定”。积分-峰检测1：要设定峰宽，用鼠标左键拖拽放大选定区域，放大感兴趣的最窄峰。注：在色谱图区域方可以放大某个需要监测的峰。点击鼠标右键选择全视图可以还原色谱图。积分-峰检测2：在色谱图的积分界面选择一段典型的基线作为积分的阈值，点击“下一步”。积分-几分区域：用鼠标左键拖拽放大选定区域，在基线上选取积分的起始时间点。积分-剔除峰：建议选择最小峰高，选择所要积分的高度最小峰（或键入相应数值）。小于此峰高90%的峰将不被积分。点击“下一步”。
5.4.
6.4在定量方法中选择"面积" ，组分信息中选择"含量"，校正曲线你和类型选择"线性" 。点击“下一步”。QuickStart: 跨通道标样界面点击否。校正-名称和保留时间：因为选择的是标样，点击峰1 可以看到一个下拉菜单选择相应的组分名称或者键入运行样品个组分相应的名称。添加于组分名称相匹配的标准含量，然后点击“下一步”。注：如果需要输入多水平的标样浓度或含量，请忽略此含量缺省值的设置步骤，点击“下
一步”。（如果使用的单一水平的标样，可以在缺省含量中输入对应的数值）。
5.4.
6.5校正：选择外标法，校正：选择单一标样，需要在下拉菜单中选择或键入标相应得名称，然后点“下一步”。校正：选择多重标需要输入所有标的名称。
处理方法名：为处理方法命名，点击完成。色谱图界面会显示该处理方法应用后
的色谱结果，包括积分。如需为积分方法添加积分事件，鼠标右键点击色谱图窗口，选择添加积分事件。积分事件所示功能会立刻应用于处理方法中。编辑处理方法的高级功能需要选择快捷键。有任何更改均需再次保存处理方法。点击峰表底部可预览2D 通道和峰。点击“浏览项目”键，选择“通道”或“样品组”标签栏。右键点击目标样品组或通道并选择处理。在处理界面，选择使用指定的处理方法，选择相应的处理方法名称，点击清除校正，选择校正并定量。点击”确定”，数据处理，产生结果。可在结果栏中查看。
5.4.7查看结果和视图筛选
选择“结果”标签栏，使用视图筛选器从下拉菜单中选择"今天" 。选择需查看的结果，右键点击选择"查看" 查看结果点击“曲线”快捷键，查看每个组分的校正曲线。切换至主窗口点击“峰型”按钮。
5.4.8预览结果并创建一个综合报告方法
5.4.8.1点击“浏览项目”切换回结果表预览状态。
5.4.8.2选中一个或多个结果，点击鼠标右键选择预览。
5.4.8.3打开报告方法：若选取一个结果，在预览窗口选择使用以下方法：使用缺省单个报告，单击“确定”。
5.4.8.4预览报告并查看数据。点击“修改方法”键修改报告。
5.4.8.5双击色谱图或峰结果表编辑报告属性。
5.4.8.6点击文件，选择保存，为新建的报告方法命名。点击“预览”键预览报告。
5.4.8.7 如需将报告保存为PDF 格式，点击“另存为”标签栏。
5.4.9方法组的建立
5.4.9.1在建立了适当的仪器方法、处理方法与报告方法后，可以将其组合得到一个方法组
5.4.9.2采集区单击方法组编辑向导。
5.4.9.3弹出"新方法组：选择仪器方法"界面。选择相应的仪器方法，点击“下一步”。
5.4.9.4选择缺省方法界面：选择相应得处理方法和报告方法，导出方法缺省。点击“下一步”。
5.4.9.5命名方法组：为方法组命名，点击完成。
5.4.9.6在运行样品时，方法组/报告方法中调用该方法组，可以自动完成采集、处理、报告数据流程。
5.4.10数据管理
5.4.10.1、项目的备份
1）在QuickStart界面，选择菜单"管理-备份当前项目"。
2）出现"项目备份向导"，单击“下一步”。
3）出现"项目备份向导-选择目的地" 。通过浏览选择目的地。建议选择在非操作系统安装的硬盘分区。一旦选择完成，单击"“确定”"关闭后，回到项目备份窗口，单击“下一步”。
4）出现"项目备份向导-备份显示"。确认数据的复制已经成功，再单击“下一步”。5.4.10.2．项目的还原
1）在QuickStart界面，选择菜单"管理"，下拉菜单中选择"还原项目"。
2）出现"还原项目向导"。
3）通过"浏览"选择被还原的项目所在的路径，单击“确定”。
4）单击“下一步”。
5）如出现类似以下容的对话框，则需为还原的项目另起一个名字。
6）在"输入磁盘空间配额"页中，输入项目名，并注意此处的"表空间配额"应不得小于欲还原的项目原有的配额（数据文件大小），然后单击“下一步”。
7）如果需要，可以在此页面中，选择该项目是否属于某个父项目。
8）在"还原显示"中，如果出现如下对话框，单击"确定"。
9）在"还原显示"中，等待数据还原结束后，单击"完成"。
5.4.11项目管理
5.4.11.1新建项目
1）进入到Emopwer 3 的QuickStart界面。在菜单中选择"管理－创建新项目" 。
2）出现"新项目向导"的对话框，选择新建项目的父项目：
3）单击"下一步"，，弹出"新建项目向导－表空间" ，表空间50MB为默认设置，可根据需要增减。
4）出现"新建项目向导－选项"页。选择用于本项目的选项，如果无法确定适当的设置，请接受默认选项。单击"下一步" 。
5）新建项目向导－访问控制：根据需要选择设置对您所创建的项目具有访问权限的用户和用户组，或者接受缺省的选项，然后单击"下一步"。
6）新建项目向导-复制所选项：需要选择复制的项目，一般选择Defaults项目。
7）新建项目向导－输入名：为新项目命名。
5.4.11.2查看及更改项目属性
在建立了新项目以后，可以根据需要在不同的项目之间进行切换。
1) 进入Empower 2的QuickStart界面，选择菜单"管理－改变系统/项目"
2) 改变项目/系统：根据需要进行选择项目或者选择系统（如果存在二个或者二个以上的系统）。选择完毕后，单击确定。
如果选择了"在该窗口切换项目/系统" ，当前的项目/系统会被新选中的项目/系统
所代替，如果选择了"为项目/系统打开新窗口" ，则会为选中的项目重新打开另外一个QuickStart的界面。
3) 在新的项目/系统的QuickStart界面即可进行下一步的操作。
3．系统配置
1）在QuickStart界面，选择菜单"视图-系统" ，查看系统。
2）出现系统信息窗口。在该窗口中，可以在地址栏中可以查看显示的地址是否与仪器的设置相同。此外，可从"仪器"选项卡里的"正常？"一栏中查看仪器状态，在正常情况下，应显示"是"字样。
如有仪器在"正常？"一栏出现"否"，可单击"扫描仪器"进行检查。如检查后显示"是"，即恢复正常。
3) 创建或连接到新的色谱系统
a. 在QuickStart界面，选菜单"管理-新建系统" 。
b.出现"新建色谱系统向导-输入类型"页面，选择系统类型为"新建系统"。然后单击"下一步" 。
c、出现"新建色谱系统向导-选择系统"页面，在"可用仪器"组中，选中新系统的
组件，然后用鼠标拖拽至右侧"新系统仪器"组中。选择完毕，单击"下一步"。如有
误选，则如法，将误选的新系统仪器，用鼠标拖拽回"可用仪器"组中。
d.出现"新建色谱系统向导-访问控制"页面。
4) 删除色谱系统
a．在"配置"目录区，单击"系统"。
b．在"系统"表中，右键单击要删除系统的行号，然后在菜单中选择"编辑-删除" c．出现"确认删除"提示框，单击"是" 。
d．再次出现"删除色谱系统"提示框，此时需要选择"删除全部" 。
删除全部- 从Empower 数据库、Empower 节点和Empower 数据库上的所有用户中删除选定色谱系统。当不再配置实际系统时，请使用此选项。
删除- 从此数据库上的所有用户中删除选定色谱系统，但保留采集服务器上配
置的系统。Empower 节点继续运行该系统，可于稍后重新与其连接。当您不再需要该系统但其他用户仍需要它时，请使用此选项。
e、如果出现如下对话框，请单击"确定" 。待仪器空闲后，即可通过前述步骤，将系统删除。规则：不能删除MS 系统。即使该系统不再出现在列表中，它仍会出现在"仪器"选项卡中。物理连接到Empower 节点的所有仪器将出现在该节点的仪器列表中。
6 支持性文件
《Waters e2695液相色谱仪操作指南》
岛津液相色谱仪使用注意事项 1.流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)。 2.流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用。 3.不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液。 4.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。对于柱塞杆外部，做完样品后也必须用去离子水冲洗20ml以上。 5.长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉。 6.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。 7.C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。 8.堵塞导致压力太大，按预柱→混合器中的过滤器→管路过滤器→单向阀检查并清洗。清洗方法；①以异丙醇作溶剂冲洗：②放在异丙醇中间用超声波清洗；⑧用10％稀硝酸清洗。 9.气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避免产生气泡。 10.如果进液管内不进液体时，要使用注射器吸液：通常在输液前要进行流动相的清洗。 11.要注意柱子的pH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。 12.更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边靖洗，然后插入新的流动相中。更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。液相色谱柱使用经验谈 色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件)，只有这样，测得的结果才有可比性。 1、样品的前处理： a、最好使用流动相溶解样品。 b、使用预处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。 c、使用0.45μm的过滤膜过滤除去微粒杂质。
Agilent 1290 超高效液相色谱仪标准操作规程Ⅰ目的：制定Agilent 1290超高效液相色谱仪使用操作规程，确保操作人员能正确规范地操作液相色谱仪。Ⅱ范围：适用于Agilent1290超高效液相色谱仪的使用。Ⅲ规程： 1 开机 1.1 打开计算机，进入 Windows画面。 1.2 打开 1290INFINITY HPLC 各模块电源。 1.3 待各模块自检完成后，双击“Instrument 1 Online”图标，化学工作站自动与12001290INFINITY HPLC 通讯。 1.4 从“View”菜单中选择“方法和运行控制”画面，点击”视图”菜单中的“样品视图“系统视图”，使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面。 1.5 点击泵下面的瓶图标，选择‘瓶填充‘如下图所示，输入溶剂的实际体积和瓶体积。也可输入停泵的体积。点击“Ok”。 1.6 从菜单“视图”中，选中“在线信号”，选中“信号窗口1”，然后点击“改变…” 钮，将所要绘图的信号移到右边的框中，点击“确定”。(如同时检测二个信号，则重复选中“信号窗口2”) 2 排气 2.1 首先在方法编辑中，泵的参数设置部分，选好需要排空的通道（保证是开的） 2.2 点击仪器状态视图中泵的图标，选择控制，出现如下图 2.3 勾上吹扫，并且输入流速，
时间，比例就可以 purge 泵头。排空的时候阀会自动切换，无需人为介入。 2.4 当我们发现泵头里面有气泡出不来的时候，选择预备---开。然后点击确定。此时泵会用很强烈的方式朝外泵液体，并持续20 次自动停止。 3 编辑数据采集方法 3.1 开始编辑完整方法： 从“方法”菜单中选择“编辑完整方法…” 项，如下图所示选中除“数据分析”外的三项，点击“确定” ，进入下一画面。 3.2 方法信息：在“方法注释”中加入方法的信息（如：This is for test!）。点击“确定” ，进入下一画面。 3.3 进样方式选择根据自动进样器的类型，选择合适的进样方式。 3.4 泵参数设定：在“流速”处输入流量，如 1.5ml/min，停止时间：10 min。在“溶剂B”处输入70.0，(A=100-B) ，也可“插入”一行“时间表” ，编辑梯度。在“压力限”处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。 3.5 自动进样器参数设定: 选择合适的进样方式，如图所示，进样体积1.0ul ，标准进样”----只能输入进样体积，此方式无洗针功能。“洗针进样”----可以输入进样体积和洗瓶位置，此方式针从样品瓶抽完样品后，会在针座旁边中洗针。 3.6 柱温箱参数设定: 在“温度”下面的空白方框内输入所需温度，如：40度。并选中它，点击“更
Agilent1200液相色谱仪A验证报告文件编码：REC-JYYQ-B001-01-00
目录 1．概述 2．验证目的 3．验证依据及验证范围 4．验证工作小组 5．验证方案审批 5.1验证方案起草 5.2验证方案会签 5.3验证方案批准 5.4验证方案实施 6.验证内容 6.1安装确认 6.1.1 文件资料 6.1.2售后服务 6.1.3 消耗性备品备件 6.1.4安装检查 6.1.5安装确认结论及批准 6.2 运行确认 6.2.1 灵敏度及稳定性测试 6.2.2运行确认结论及批准 6.3性能确认 6.3.1 系统适用性试验： 6.3.2定量重复性试验 6.3.3性能确认结论及批准 7.验证结论 8.最终批准
1.概述 液相色谱仪为安捷伦科技有限公司生产（检测器为紫外检测器，色谱柱有C18柱，可以进行含量、有关物质和聚合物的定量或定性分析。我司在购买前对该产品的性能、价格、外观和售后服务进行了广泛地调查研究，在同类产品中价格适中、性能稳定、美观且售后服务好。 2、验证目的 为了确保使用该仪器检测数据真实可靠，也为了确认该仪器的各项指标能达到该仪器所设计的性能指标，对该仪器进行验证。 2.验证依据及适用范围 参照国家技术监督局“实验室液相色谱仪检定规程”及中国药典2008版附录V D液相色谱法起草本验证方案。本验证方案适用于实验室液相色谱仪的验证。 4.验证工作小组 成立由组成的验证工作小组，担任验证工作小组组长。 5.验证方案审批 6.验证内容 6.1安装确认 6.1.1 文件资料
检查人日期 检查人日期 检查人日期6.1.4安装检查 对照使用说明书要求安装，确认环境、电源等符合要求。 检查人日期6.1.5安装确认结论及批准 6.2 运行确认(见计量局计量证书) 证书号： 运行确认结论及批准：
LC3000液相色谱仪操作规程 1、首先将色谱仪电源打开，让仪器进行预热。 2、进行样品前处理，以及流动相进行过滤和脱气，过滤流动相时使用溶剂过滤器，有机试剂使用有机膜，水使用水系膜。过滤完后对其进行脱气处理。注意脱气处理大概需要15-20分钟左右。 3、甲醇处理完后将其接入液路，然后将P3000泵的放空阀打开，并启动泵让甲醇充满液路，并保证没有汽泡，然后关闭放空阀。也可借助外力（使用洗耳球或注射器）在放空阀处将液体吸过来再启动泵，这样可以省时间。走30分钟，停止泵，等待泵没有压力。换10%甲醇水冲洗30分钟以上。停泵，等待压力降至0左右。换流动相冲洗，查看管路中有无气泡，保证没有汽泡的情况下，启动泵。 4、双击CXTH-3000色谱工作站→点击CXTH-3000（中文版）→出现提示，关闭即可；→出现色谱数据处理及仪器控制面板界面。 5、在色谱数据处理及仪器控制面板界面中设置所分析样品的色谱条件，如果使用单泵操作时，先确定所用泵是A泵还是B泵。点开时间程序中查看有无打［√］,如果有［√］；去掉√为［］。 6、设置参数： 6.1在基本控制栏中设置波长（nm) ,然后点击［！］确认。时间常数、量程切换都为2.［切记开灯不要点］。 6.2设定流速（ml/min): 后点击［！］确认。 6.3设定最小压力为0，最大压力为35，如果数据已经符合，就不要改动。 6.4确定管路有无气泡，如果没有气泡，点击电脑上的第一个绿色图标（启动图标） 7、做样品之前，保证仪器先用色谱甲醇走30分钟，采集基线。把满屏量程改至100，其他参数不变。查看基线走直后，停止采集，进样。 8、如果分析的样品流动相中含有酸、盐，必须用甲醇：水（10:90）及（20:80）的甲醇水过渡40分钟左右。即先用色谱纯甲醇走基线30min，停止泵，换上甲醇水走基线40min,再停止泵，更换为流动相。 注意：没走一步都要先确认管路中有无气泡后，才能启动泵。 9、等待流动相基线走直后方可进样，所进样品必须用0.45μm有机系滤头过滤。进样之前，需手动停止泵（点击停止采集红色图标），待变成绿色的图标后，把进样阀扳到
验证文件 类别：验证方案编号：STP-VMP-xxx 部门：质量保证部页码：共9页 LA PC2000型高效液相色谱仪验证方案 版次：第0版 起草：年月日 审核：年月日 验证小组会签： 年月日 批准：年月日 实施日期：年月日 复印数：2份 分发至：质量保证部、设备部
关于成立LA PC2000型高效液相色谱仪验证小组的通知 为了加速我企业GMP认证的步伐。顺利的完成验证工作，特成立LA PC2000型高效液相色谱仪验证小组，小组成员如下： 组长： 组员： 验证小组的职责： 1、负责起草验证方案、报告，确定再验证周期，报质量保证部审核，总工程师批准。 2、组织质量保证部及有关部门对本方案进行实施。 本通知自下发之日起，各有关部门要积极配合验证小组的工作，争取早日圆满完成验证工作。 质量保证部 2002年7月5日
目录 一、概述 (1) 二、验证内容 (1) 三、职责 (1) 四、安装确认(IQ) (2) 五、运行确认(OQ) (4) 六、再验证 (7) 七、验证结果 (7) 八、LA PC2000型高效液相色谱仪验证报告（附表1） (8) 九、验证合格证书(附表2) (9)
一、概述 1.1 设备概述： 本仪器的输液泵为单泵恒流结构，泵压平稳，流速可在0-10ml/min之间任意选择，为触摸键盘输入式，为单片机控制。 检测器为单波长紫外可见检测器，波长可在190-800nm之间任意可调，面板为旋钮式和开关式控制。 有数码管显示窗，可观察氘灯的起辉情况和AU值的升降情况。 工作站运用的是美国LA公司提供的“ANASTAR”软件，此软件独立运行，热行处理色谱数据功能。 本仪器主要用于xxx的含量及杂质检测。 二、验证内容 本方案主要包括LA型高效液相色谱仪的安装确认（IQ）,运行确认（OQ）。 三、职责 3.1 验证小组 ⑴起草验证方案及验证报告，确定再验证周期，报质量保证部审核、总工程师批准。 ⑵组织、协调使用单位对验证方案进行实施。 3.2 质量保证部 ⑴根据验证对象成立验证小组。 ⑵负责验证方案及报告的审核。
岛津LC-20AT 型高效液相色谱仪（仪器编号：）检定规程 一．概述 本组所有的LC-20AT型高效液相色谱仪（仪器编号：）为日本岛津公司生产的产品，由DGU-20A3脱气机、2 个LC-20AT溶剂输送泵（分为A，B泵）、7725i 手动进样器、色谱柱（3个C18柱，3个手性柱）、SPD-20A紫外-可见检测器、SEDEX 80 LT-ELSD蒸发光散射检测器、LCSolution（Version.1.2）中文工作站等。工作原理为高压输液泵将规定的液流动相泵入色谱柱，手动进样器注入供试品，由流动相带入色谱柱内，各组分在色谱柱内被分离，并依次进入紫外检测器和蒸发光散射检测器进行检测。 二．检定目的 为了确保LC-20AT型液相色谱仪（仪器编号：）检测数据安全可靠，也为了确认该仪器的各项指标能达到仪器所设计的性能指标，对该仪器进行检定。 三．检定依据及判断标准 本检定规程参照国家技术监督局JJG705-2014“液相色谱仪检定规程”制订。 四．检定要求 4.1环境条件 4.1.1检定室应清洁无尘，无易燃、易爆和腐蚀性气体，排风良好。 4.1.2仪器应平稳地放在工作台上，周围无强烈机械震动和电磁干扰源，仪器接地良好。 4.1.3电源电压为(220±22)V，频率为（50±0.5）HZ。 4.2检定设备 4.2.1秒表：分度值不大于0.1s。 4.2.3分析天平: 最大称量不小于100g，最小分度值不大于1mg。 4.2.4 注射器:10μL一支。 以上计量器具需经计量检定合格。 4.2.5 10ml注射器一支。 4.2.6 游标卡尺：15cm/0.02mm。 4.2.7容量瓶：5ml，20个。 4.3标准物质：咖啡因标准溶液0.005mg/ml、0.010mg/ml、0.015mg/ml、
高效液相色谱法的标准操作规程 1 定义及概述： 1.1 高效液相色谱法是一种现代液体色谱法，其基本方法是将具不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液作为流动相，用高压输液泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理，得到测定结果。由于应用各种性质的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高、分析速度快的特点。 1.2 高效液相色谱法适用于能在特定填充剂的色谱柱上进行分离的药品的分析测定，特别是多组分药品的测定、杂质检查和大分子物质的测定。有的药品需要在色谱分离前或后经过衍生化反应，方能进行分离或检测。常用的色谱柱填充剂有：硅胶，用于正相色谱；化学键合固定相，根据键合的基团不同可用于反相或正相色谱，其中最常用的是十八烷基硅烷（又称ODS）键合硅胶，可用于反相色谱或离子交换色谱；凝胶或玻璃微球等填充剂是有一定孔径的大孔填料，用于排阻色谱。 1.3 高效液相色谱仪基本由泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理组成。检测器最常用的为可变波长紫外检测器或紫外—可见检测器。色谱信息的收集和处理常用积分仪或数据工作站进行。梯度洗脱，可用两台泵或单台泵加比例阀进行程控实现。 2 高效液相色谱仪的使用要求： 2.1 按国家技术监督局国家计量检定规程汇编中“实验室液相色谱仪检定规程”的规定作定期检定，应符合规定。 2.2 仪器各部件应能正常工作，管路为无渗漏连结，流路中无堵塞或漏液，在设定的检测器灵敏度条件下，色谱基线噪音和漂移应能满足分析要求。 2.3 具体仪器在使用前应详细参阅各操作说明书。
关键词：高效液相操作规程流动相配比 目的：制定Agilent 1100型高效液相色谱仪操作规程使用标准操作规程，确保操作的规范性、正确性。 适用范围：本标准适用于Agilent 1100型高效液相色谱仪操作规程的使用、维护保养及清洁。 责任：保证维护仪器正常运转及其附件的完整 主体内容： 1、开机前准备 1.1 检查桌面是否清洁、整齐。 1.2 检查设备是否清洁，连接管线是否正常。 1.3 检查电源线有无破损。 1.4 接通电源，检查插座上各插孔的指示灯是否显示正常。 1.5 准备好超声过的流动相和流路冲洗溶剂。准备好10%的异丙醇溶液做sealwash。 2、开机 2.1 撤下设备停用卡，换上设备运行卡。 2.2 运行检查，打开电脑， 2.3 打开仪器各部件开关，开sealwash，待机器自检，核实无异常。并打开软件。 2.4 拧松泵头上的purge快速冲阀（1圈左右），排你需要走的每个流路的气泡，每 个约2至5分钟左右。然后，拧紧快速冲洗阀。（不要拧的太紧） 做好仪器运行前的检查，如实填写检查情况，如有问题及时向仪器管理员报告并记录。 否则后果有当前实验人负责。 2.5 换上色谱柱用色谱纯的甲醇或乙腈冲洗流路约40分钟左右。若流动相中有盐或 酸，再用95%水（加5%甲醇）冲洗约40分钟。 2.6 换上流动相冲洗流路，待基线和压力稳定后，开始分析样品。 2.7 样品分析完后，处理数据。
2.8 若流动相中有缓冲盐或酸，用95%水冲洗60分钟左右。 2.9 换上甲醇冲洗流路约30分钟。 3、关机 3.1 把泵的流速设为0ml/min，再依次关闭各仪器模块，关闭Online软件， 关闭仪器各部件上的电源开关，并关闭电脑。 3.2 拔掉机器电源插头。 3.3 如实规范验在记录本实填好实验记录！ 4、清洁程序 4.1 停机并切断机器电源。 4.2 松开仪器上各活动面板，用无水酒精定期插洗仪器表面的灰尘和污垢。 4.3 定期清洗溶剂瓶中的溶剂过滤头。 4.4 用干净、无纤维抹布擦拭机器，使机体表面光亮清洁，无污迹水渍，机身各部位无污物残留。 5、安全及操作注意事项 5.1 流动相冲洗用的水，必须是重蒸水或二次蒸馏水，并用0.22微米的微孔滤膜过滤，实验完后，倒去水，换上甲醇5ml/min，purge3分钟，防止长细菌堵塞仪器管路。 5.2 操作有机溶剂时一律戴一次性手套。 5.3 流动相中有盐或酸时，在流动相冲洗前后一定要用水冲洗流路，防止柱效下降、堵塞或柱塌陷。 5.4 仪器使用前后一定要用甲醇或乙腈冲洗流路，平衡色谱柱，赶走管路中的杂质和水分。 5.5 流动相禁止使用氯仿、三氯（代）苯、亚甲基氯、四氢呋喃、甲苯等；慎重使用四氯化碳、乙醚、异丙醚、酮、甲基环己胺等，以免造成对柱塞密封圈的腐蚀。5.6 仪器长期不用时，应用甲醇冲洗各流路。 5.7 检测器的紫外或可见灯在开的情况下，一定要保证有液相流经检测池。若不需要做样，可设置一个较低的流速（如0.05ml/min）
高效液相色谱仪操作步骤： 1)．过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜(0.45um)。 2)．对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。 3)．打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。 4)．进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。 5)．有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。 6)．调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。 7)．设计走样方法。点击file，选取select users and methods，可以选取现有的各种走样方法。若需建立一个新的方法，点击new method。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。选完后，点击protocol。一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。 8)．进样和进样后操作。选定走样方法，点击start。进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。 9)．关机时，先关计算机，再关液相色谱。 10)．填写登记本，由负责人签字。 注意事项： 1)．流动相均需色谱纯度，水用20M的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。 2)．柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。 3)．所有过柱子的液体均需严格的过滤。
. ... .. 标准文件 1、目的Objective：建立高效液相色谱仪部校验规程，确保校验工作规、顺利进行。 2、围Scope ：本规程适用于本公司使用的高效液相色谱仪（紫外-可见光检测器/二极管阵列检测器）的校验。 3、职责Responsibilities： 3.1 培训职责：本文件起草人或审核人或批准人负责对质量管理部全体人员培训。 3.2 QC：负责制定本规程，并对本规程的实施负责。 3.3 QA：负责监督和检查本规程的实施。 4、定义Definition：无。 5、程序Procedures： 5.1 依据 国家计量校验规程JJG 705-2002液相色谱仪，安捷伦液相说明书，岛津液相说明书。 5.2 备件及材料 5.2.1水：HPLC级水。 5.2.2化学试剂：乙腈（HPLC）、丙酮（分析纯）。 5.2.3咖啡因标准品。 5.2.4咖啡因标样。 0.005 mg/ml, 0.010 mg/ml, 0.025 mg/ml,0.050 mg/ml,0.125 mg/ml和0.250 mg/ml咖啡因水溶液。 5.2.5色谱柱：4.6mm×250mm，C18，5μm。 5.2.6 容量瓶：10ml。 5.2.7玻璃注射器。 5.2.8 限流阻尼管。
5.2.9 分析天平。 5.2.10 秒表。 5.2.11 热电偶 5.3 校验项目及技术指标 5.3.1泵性能的测试 表1 5.3.2柱温箱温度稳定性测试* 表2 备注：如药典专论规定的特定柱温，不在以上温度围之，则对分析该品种的仪器增加该温度点校验，校验项目和可接受指标相同。 5.3.3 检测器性能测试 表3 5.3.4进样器性能测试 表4
高效液相色谱法测定手册 一目的：制定高效液相色谱法，规范高效液相色谱法的测定操作。 二适用范围：适用于高效液相色谱法的测定。 三责任者：品控部。 四正文 1 简述 高效液相色谱法是一种现代液体色谱法，其基本方法是将具一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液，作为流动相，用泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理，得到测定结果。由于应用了各种特性的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高，分析速度快的特点。 高效液相色谱法适用于能在特定填充剂的色谱柱上进行分离的药品的分析测定，特别是多组分药品的测定、杂质检查和大分子物质的测定。有的药品需在色谱分离前或后经过衍生化反应方能进行分离或检测。常用的色谱柱填充剂有：硅胶，用于正相色谱；化学键合固定相，根据键合的基团不同可用于反相或正相色谱，其中最常用的是十八烷基硅烷（又称ODS）键合硅胶，可用于反相色谱或离子对色谱；离子交换填料，用于离子交换色谱；具一定孔径的大孔填料，用于排阻色谱。 高效液相色谱仪基本由泵，进样器，色谱柱，检测器和色谱数据处理系统组成。检测器最常用的为可变波长紫外可见光检测器，其他检测器有如示差折光检测器和蒸发光散射检测器等。色谱信息的收集和处理常用积分仪或数据工作站进行。梯度洗脱，可用两台泵或单台泵加比例阀进行程控实现。 2 高效液相色谱仪的使用要求 2.1 按国家技术监督局国家计量检定规程汇编中“实验室液相色谱仪检定规程（JJG705—90）”的规定作定期检定，应符合规定。 2.2 仪器各部件应能正常工作，管路为无死体积连结，流路中无堵塞或漏液，在设定的检测器灵敏度条件下，色谱基线噪音和漂移应能满足分析要求。 2.3 具体仪器在使用前应详细参阅各操作说明书。
Agilent1100高效液相色谱仪操作规程操作说明： 1.开机前准备： 1.1仪器设备：Agilent 1200LC ● G1322A (在线脱气机)。● G1311A (四元泵)。● G1329A（标准型自动进样器）。● G1316A（柱温箱）。 ● G1315A（DAD检测器）。● 色谱柱 1.2溶剂准备：● 有机相必须是色谱级纯。● 水相必须是二次蒸馏水或用二级蒸馏水配置的缓冲盐溶液、酸碱溶液。● 流动相使用前必须过0.45μm的微孔滤膜。有机相和水相微孔滤膜的选择参考下表。产品类别代表产品品系产品特点纤维素酯类混合纤维素水相成孔性能好，亲水性好，材料成本低。膜（CN-CA）可耐稀酸。不适合于酮类、酯类、强酸、强碱类液体过滤。尼龙6 通用具有亲水性，较耐碱不耐酸。在酮、酚、聚酰胺类（PA-6）醚及高分子醇类不被腐蚀。聚砜（PS）通用良好的化学和热稳定性，耐辐射，机械聚砜类强度高。有机PDEF耐化学腐蚀，耐氧化，耐高温，疏聚偏氟乙烯/PDEF/PTFE 水性（酒精处理后变清水性），PTFE耐酸聚四氟乙烯膜碱性强。具有良好的化学稳定性，耐酸碱和各种聚烯烃类聚丙烯膜有机有机溶剂。价格便宜，但孔径分布宽。（PP）耐高温，耐有机溶剂、耐生物降解等。无机材料陶瓷、玻璃通用 BP、金属膜
2.基本操作步骤: (一)、开机：1、打开计算机,进入中文Windows XP画面,并运行CAG Bootp Server程序（部分安装程序不需要运行Bootp）。 2、打开 1200 LC 各模块电源。3、待各模块自检完成后，双击“仪器1 联机”图标，化学工作站自动与1200LC通讯，进入的工作站画面如下所示。4、从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面, 点击“视图” 菜单中的“仪器实际值”，“在线光谱”，“化学工作站状态”，“系统视图”,“样品视图”，使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面。5、把流动相放入溶剂瓶中。6、打开冲洗阀。7、点击“泵”图标，点击“设置泵…”选项，进入泵编辑画面。8 、设流速：5ml/min，点击“确定”。9、点击“泵” 图标，点击“控制…”选项，选中“启动”，点击“确定” ，则系统开始冲洗，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续冲洗，直到所有要用通道无气泡为止。 10、点击“泵” 图标，点击“控制…”选项，选中“关闭”，点击“确定”关泵，关闭冲洗阀。11、点击“泵”图标，点击“设置泵…选项”，设流速：例如1.0ml/min。
面。 8、设Flow：5ml/min，单击OK。 9、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Pumpcontrol选项，选中On，单击OK，则系统开始Purge，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止，切换通道继续Purge，直到所有要用通道无气泡为止。 10、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击PumpControl选项，选中Off，单击Ok关泵，关闭 Purgevalve。 11、单击Pump图标，出现参数设定菜单，单击Setuppump选项，进入Pump编辑画面，设Flow：1.0ml/min。 12、单击泵下面的瓶图标，如图所示（以二元泵为例），输入溶剂的实际体积和瓶体积。也可输入停泵的体积。单击Ok。 （二）数据采集方法编辑： 1、开始编辑完整方法： 从“Method”菜单中选择“Editentiremethod”项，如上图所示选中 除“Dataanalysis”外的三项，单击Ok，进入下一画面。 2、方法信息： 在“MethodComments”中加入方法的信息（如：方法的用途等）。 单击Ok进入下一画面。
3、泵参数设定：（以二元泵为例） 在“Flow”处输入流量，如1ml/min，在“SolventB”处输入70.0，(A=100-B)，也可Insert一行”Timetable”，编辑梯度。在“PressureLimitsMax”处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。 单击Ok进入下一画面。 4、自动进样器参数设定： 选择合适的进样方式，如图所示，进样体积1.0ul，洗瓶位置为6 号。“StandardInjection”----只能输入进样体积，此方式无洗针功 能。“InjectionwithNeedleWash”----可以输入进样体积和洗瓶位置，此方式针从样品瓶抽完样品后，会在洗瓶中洗针。“Useinjectorprogram”---可以点击Edit键进行进样程序编辑。 点击Ok进入下一画面。 5、柱温箱参数设定： ●在”Temperature”下面的方框内输入所需温度，并选中它，点击”more>>”键，如图所示，选中”Sameasleft”---使柱温箱的温度左右一致。 ●点击ok进入下一画面。 6、VWD检测器参数设定： ●在”Wavelength”下方的空白处输入所需的检测波长，如254nm， 在”Peakwidth(Responsetime)”下方点击下拉式三角框，选择合适的响应时间，如 >0.1min(2s)。
液相色谱仪的检定规程摘录 4.1.环境温度为10～30℃，8小时内温度波动不超过±3℃，相对湿度低于65%。 4.2.电源电压：220±22V，电源频率：50±0.5Hz。 4.3.检定设备 4.3.1.秒表：分度值小于0.1s。
4.3.2.分析天平：zui大称量200g，zui小分度值0.1mg。 4.3.3.容量瓶 4.3.4.微量注射器 4.3. 5.标准物质和试剂 5.检定方法 的检定。 5.1.泵流量设定值误差Ss、流量稳定性误差S R 将仪器的输液系统、进样器、色谱柱和检测器联接好，以甲醇为液动相，按表1设定流量，待流速稳定后，在流动相排出口用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，准确地收集10～25分钟，称重，按下式计算Ss和S 。 R Ss=（Fm—Fs）/Fs×100% =（Fmax—Fmin）/F×100% S R 式中Ss为流量设定值误差（%）； Fm=（W2—W1）ρt·t为流量实测值； W2：容量瓶+流动相的重量（g）； W1：容量瓶的重量（g）； Fs：流量设定值（ml/min）； ρt：实验温度下流动相的密度（g/cm3）； t：收集流动相的时间（min）； ：流量稳定性误差（%）； S R Fmax：同一组测量中流量zui大值（ml/min）； Fmin：同一组测量中流量zui小值（ml/min）； F：同一组测量中的算术平均值（ml/min）。 5.2.定性、定量测量重复性的检定 将仪器联接好，使之处于正常工作状态，用进样阀的定量管注入适当的标准溶液（萘或联苯）或稳定的待分析样品溶液，记录保留时间和峰面积，连续测量5次，按下式计算相对标准偏差RSD。
高效液相色谱仪(HPLC)是分析实验室常用的测试仪器之一，其应用越来越广泛。此种仪器在使用过程中，难免会出现各种各样的问题，并将直接影响到所测数据的准确性和仪器的正常工作。操作者如果能了解故障的成因，即可清楚预防和排除这些故障的方法，就可正确地使用仪器并最大限度地发挥仪器的性能。今天我们要从以下几个方面和您分享下在使用高效液相色谱仪中需注意的几个问题。 一、使用试管的问题 1、试管的洁净问题。高效液相色谱分析法是一个很灵敏的分析方法，如果因使用不洁净的试管，便会影响试验结果的准确性。例如，在用甲醇作溶剂来溶解样品时，所用的小试管是用橡胶塞来做盖子的，因此，在每次进样时，都有一个保留时间固定的干扰峰存在，后经证实，此干扰峰是由甲醇浸泡橡胶塞而溶下的组分所产生，换用玻璃试管后，干扰峰消除。 2、塑料试管的溶解问题。近年来，一次性塑料试管给试验人员带来了极大的方便，但是，在使用过程中一定要注意有机溶剂对试管的溶解现象，在利用此种试管提取样品时，有些有机溶剂(如氯仿等)对管壁有溶解现象，这些被溶解下来的物质有时也能在检测器上产生信号，从而干扰样品的测定。这时，可用相同的实验条件先行试验一下，看看不含被抽提物时，提取液在检测器上能否产生干扰信号，如确有干扰信号存在，就只能换用耐有机溶剂的玻璃试管了。 3、被测样品在试管壁上的吸附问题。这个问题也应引起注意，否则也会影响测试结果的准确性，在治疗药物监测(Therapeutic Drug Monitoring,TD
M)中，有些被测药物如阿米替林，丙咪嗪等易吸附在玻璃试管的管壁上，因此，操作中宜采用聚丙烯管，为防止提取中吸附现象的发生，可采用0. 5%的已二胺已烷液做为提取剂，可有效地防止吸附。 二、操作进样阀的问题 目前，在分析型高效液相色谱仪中常用的进样阀是7725型进样阀，其内部的六通阀结构使进样操作非常方便，但是，如果使用不当，也会带来问题。例如，在高效液相色谱法的试验过程中，有时会有异常色谱峰的出现以及重现性不好的问题，这主要是由于操作方法不当所引起，要想解决此类问题，需从以下几个方面入手。 1、进样量的控制。用进样阀来进样时，阀内的样品环是定量的，(一般分析型进样阀的样品环体积为20ul)，由于进样时，注射到进样阀内的样品溶液在样品环的管路中有径向的速度梯度(即管轴处比管壁处的液流速度快)。因此，要想使样品环中充满样品溶液，从而使用进样阀来准确地定量，则必须使进样量大于样品环体积的2倍。如果用注射器来控制进样量，则最大只能注射样品环体积1/2的量，这样才能防止部分样品由溢流管溢出从而导致定量分析的误差。 2、进样阀的清洁问题。如果样品环中有上次进样时样品的残留，必然会污染下次注射进的样品，为防止这种现象的发生，应按下列步骤操作：a.进样阀有2个位置，INJECT和LOAD。首先在LOAD位置时，以注射器将流动相注入进样阀内清洗几次，每次用量大约40ul；b.然后将进样阀板手扳至
1 目的 规范Waters e2695液相色谱仪的操作规程，正确使用本仪器，保证检测工作顺利进行以及操作人员、设备、周围环境的安全。 2 适用范围 本指导书适用于Waters e2695液相色谱仪、2489紫外检测器及随机工作站。 3 职责 3.1操作人员按本规程操作仪器，对仪器进行日常维护，作使用登记。 3.2保管人员负责监督仪器操作是否符合规程，对仪器进行定期维护，保养。 3.3科室负责人负责对仪器综合管理。 4 仪器性能指标 4.1.Alliance e2695系统 4.1.1 泵/溶剂管理系统：相互独立控制的线性双柱塞驱动装置,双压力传感器反馈回路, 无脉动, 无需混合器和阻尼器。 4.1.1.1溶剂数：4 4.1.1.2流速范围：0.001--10.000ml/min, 以0.001ml为增量 4.1.1.3流速精度：±0.075%RSD 4.1.1.4流速准确度：±1.0%RSD 4.1.1.5操作压力：0-6000psi(0-410bar) ，可设上 ,下限 4.1.1.6混合范围：0.0~100.0%，以 1% 增量 4.1.1.7梯度准确度：± 0.5%，不随反压变化 4.1.1.8梯度精度：±0.15%，不随反压变化 4.1.1.9压缩补偿：自动，连续 4.1.1.10梯度曲线：多种梯度曲线: 线性, 凸线和凹线等11种 4.1.1.11系统体积：< 650μL, 不随反压变化
4.1.2 自动进样器/样品管理系统： 4.1.2.1样品盘数：120位,分5个样品盘,每个样品盘可放置24个2ml样品瓶 4.1.2.2进样次数：每个样品可进样1到99次 4.1.2.3进样精度：<0.5%RSD 4.1.2.4样品污染度：<0.1% 4.1.2.5进样准确度：±1 uL 4.1.2.6进样体积：0.1 to 100 uL 4.1.2.7进样线性度：> 0.999 coefficient of deviation 4.1.3 在线柱塞清洗装置： 可在线清洗柱塞杆，可防止因缓冲盐溶液结晶而造成的堵塞，延长密封圈的使用寿命。 4.1.4 在线脱气装置： 4.1.5柱温箱： 4.1. 5.1温度设定范围：室温至65℃ 4.1. 5.2温度稳定性：±0.15℃ 4.1. 5.3柱容量：4根7.8X300柱 4.2检测器： 4.2.1 2489双波长紫外检测器 双通道紫外检测器，可进行双波长同时测定；最新专利梯形狭缝池设计，确保低噪音，高灵敏度，宽线性范围；Maxplot,Ratioplot优化灵敏度，检测共流出物杂质，可作简单峰纯度鉴定。 4.2.1.1波长范围：190-700nm 4.2.1.2 灯：氘灯，具有灯优化软件,可以延长灯的使用寿命，可编程控制灯的开关4.2.1.3波长准确度：±1.0nm 4.2.1.4波长重现性：±0.1nm 4.2.1.5光谱带宽：5nm 4.2.1.6噪音：5 X 10-6AU 4.2.1.7漂移：≤1 X 10-4AU/hr
1 目的 规Waters e2695液相色谱仪的操作规程，正确使用本仪器，保证检测工作顺利进行以及操作人员、设备、周围环境的安全。 2 适用围 本指导书适用于Waters e2695液相色谱仪、2489紫外检测器及随机工作站。 3 职责 3.1操作人员按本规程操作仪器，对仪器进行日常维护，作使用登记。 3.2保管人员负责监督仪器操作是否符合规程，对仪器进行定期维护，保养。 3.3科室负责人负责对仪器综合管理。 4 仪器性能指标 4.1.Alliance e2695系统 4.1.1 泵/溶剂管理系统：相互独立控制的线性双柱塞驱动装置,双压力传感器反馈回路, 无脉动, 无需混合器和阻尼器。 4.1.1.1溶剂数：4 4.1.1.2流速围：0.001--10.000ml/min, 以0.001ml为增量 4.1.1.3流速精度：±0.075%RSD 4.1.1.4流速准确度：±1.0%RSD 4.1.1.5操作压力：0-6000psi(0-410bar) ，可设上,下限 4.1.1.6混合围：0.0~100.0%，以1% 增量 4.1.1.7梯度准确度：±0.5%，不随反压变化 4.1.1.8梯度精度：±0.15%，不随反压变化 4.1.1.9压缩补偿：自动，连续 4.1.1.10梯度曲线：多种梯度曲线: 线性, 凸线和凹线等11种 4.1.1.11系统体积：< 650μL, 不随反压变化
4.1.2 自动进样器/样品管理系统： 4.1.2.1样品盘数：120位,分5个样品盘,每个样品盘可放置24个2ml样品瓶 4.1.2.2进样次数：每个样品可进样1到99次 4.1.2.3进样精度：<0.5%RSD 4.1.2.4样品污染度：<0.1% 4.1.2.5进样准确度：±1 uL 4.1.2.6进样体积：0.1 to 100 uL 4.1.2.7进样线性度：> 0.999 coefficient of deviation 4.1.3 在线柱塞清洗装置： 可在线清洗柱塞杆，可防止因缓冲盐溶液结晶而造成的堵塞，延长密封圈的使用寿命。 4.1.4 在线脱气装置： 4.1.5柱温箱： 4.1. 5.1温度设定围：室温至65℃ 4.1. 5.2温度稳定性：±0.15℃ 4.1. 5.3柱容量：4根7.8X300柱 4.2检测器： 4.2.1 2489双波长紫外检测器 双通道紫外检测器，可进行双波长同时测定；最新专利梯形狭缝池设计，确保低噪音，高灵敏度，宽线性围；Maxplot,Ratioplot优化灵敏度，检测共流出物杂质，可作简单峰纯度鉴定。 4.2.1.1波长围：190-700nm 4.2.1.2 灯：氘灯，具有灯优化软件,可以延长灯的使用寿命，可编程控制灯的开关 4.2.1.3波长准确度：±1.0nm 4.2.1.4波长重现性：±0.1nm 4.2.1.5光谱带宽：5nm 4.2.1.6噪音：5 X 10-6AU 4.2.1.7漂移：≤1 X 10-4AU/hr
1目得 规范Waters e2695液相色谱仪得操作规程，正确使用本仪器保证检测工作顺利进行以及操作人员、设备、周围环境得安全。 2适用范围 本指导书适用于Waters e2695液相色谱仪、2489紫外检测器及随机工作站。 3职责 3、1操作人员按本规程操作仪器，对仪器进行日常维护,作使用登记。 3、2保管人员负责监督仪器操作就是否符合规程，对仪器进行定期维护,保养。 3、3科室负责人负责对仪器综合管理。 4仪器性能指标 4、1、Alliance e2695 系统 4.1.1泵/溶剂管理系统:相互独立控制得线性双柱塞驱动装置，双压力传感器反馈回路, 无脉动，无需混合器与阻尼器。 4.1.1、1溶剂数:4 4.1.1、2流速范围:0、001-10. OOOml/min,以0、001ml 为增量 4.1.1、3流速精度:±0、075%RSD 4.1.1、4流速准确度:±1、0%RSD 4.1.1、5操作压力:0-6000psi(0-410bar)，可设上，下限 4.1.1、6混合范围:0、0-100. 0%,以1%増量 4.1.1、7梯度准确度:土0、5%,不随反压变化4.1.1、8梯度精度:±0、15%,不随反压变化4.1.1、9压缩补偿:自动，连续
4.1.1、10梯度曲线多种梯度曲线：线生凸线与凹线等11种 4.1.1、U系统体积:v 650pL,不随反压变化 4.1.2自动进样器/样品管理系统： 4.1.2、1样品盘数:120位，分5个样品盘，每个样品盘可放置24个2ml样品瓶 4.1.2、2进样次数:每个样品可进样1到99次 4.1.2、3进样精度:<0、5%RSD 4.1.2、4样品污染度:<0、1% 4.1.2、5进样准确度:±luL 4.1.2、6进样体积:0、1 to 100 uL 4.1.2、7进样线性度:> 0、999 coefficient of deviation 4.1.3在线柱塞清洗装置： 可在线清洗柱塞杆，可防止因缓冲盐溶液结晶而造成得堵塞，延长密封圈得使用寿命。 4.1.4在线脱气装置： 4.1.5柱温箱： 4.1.5、1温度设定范围:室温至65°C 4.1.5、2温度稳定tt：±0.15°C 4.1.5、3柱容量:4 根7、8X300 柱 4、2检测器：4、2、1 2489双波长紫外检测器双通道紫外检测器，可进行双波长同时测定;最新专利梯形狭缝池设计，确保低噪音，高灵敏度，宽线性范围jMaxplotRatioplot优化灵敏度，检测共流出物杂质，可作简单峰纯度鉴定。 421、1 波长范E：190-700nm
一、开机 1、开机前准备：流动相使用前必须过0.45um的滤膜（有机相的流动相必须为色谱纯；水相必须用新鲜注射用水，不能使用超过3天的注射用水，以防止长菌或长藻类）；把流动相放入溶剂瓶中。A瓶：为水相；B瓶：为有机相。 2、打开电脑，选Win 2000，进入Win 2000界面。 3、双击CAG Boodp server图标，放大CAG Boodp server小图标，出现窗口，5min内打开液相各部件电源开关，等待1100广播信息后，表示通讯成功连接，关闭CAG Boodp serve窗口。 4、双击online图标，仪器自检，进入工作站。 该页面主要由以下几部分组成： ——最上方为命令栏，依次为File，Run Control，Instrumen…等； ——命令栏下方为快捷操作图标，如多个样品连续进行分析、单个样品进样分析、调用文件保存文件……等； ——中部为工作站各部件的工作流程示意图；依次为进样器-输液泵-柱温箱-检测器-数据处理-报告； ——中下部为动态监测信号； ——右下部为色谱工作参数：进样体积、流速、分析停止时间、流动相比例、柱温、检测波长等。 4、从“View”菜单中选择“Method and control”画面。 二、编辑参数及方法 1、开始编辑完整方法： 从“Method”菜单中选择“New method”，出现DEF-LC.M，从“Method”菜单中选择“Edit entire method”，选择方法信息、仪器参数及收集参数、数据分析参数和运行时间表等各项，单击OK，进入下一画面。 2、方法信息： 在“Method Comments”中加入方法的信息，如方法的用途等。单击OK，进入下一画面。 3、泵参数设定： 进入“Setup pump”画面，在“Flow” 处输入流量，如1ml/min；在“Solvent B”处输入有机相的比例如70.0，（A=100-B），也可在Insert 一行“Timetable”，编辑梯度；输入保留时间；在“Pressure Limits Max”处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。单击OK，进入下一画面。 4、DAD检测器参数设定： 进入“DAD signals”画面，输入样品波长及其带宽、参比波长及其带宽（参比波长带宽默认值为100nm）；选择Stoptime：as Pupm； 在“Spectrum”中输入采集光谱方式“store”：选All；如只进行正常检测，则可选None；范围Range：可选范围为190~950nm；步长Step可选2.0nm；阀值：选择需要的灯； Peak width（Response time）即响应值应尽可能接近要测的窄峰峰宽，可选“2s”或4s； Slit-：狭窄缝，光谱分辨率高；宽时，噪音低。可选4nm