亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后

盐酸萘乙二胺法测定亚硝酸盐得含量1亚硝酸盐得测定(盐酸萘乙二胺法)1、1原理样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后,在弱酸性条件下,亚硝酸盐与对氨基苯磺酸(H 2N —C 6H 4-SO 3H)重氮化,产生重氮盐,此重氮盐再与偶合试剂(盐酸萘乙二胺)偶合形成紫红色染料,其最大吸收波长为550nm,测定其吸光度后,可与标准比较定量。

2HCl+NaNO 2+H 23H 重氮化H 3SO-Cl ---+NaCl 2H +2O2HCl .H 2NH 2CH 2+--N -Cl3H 偶合CHN 2CH 2NH 2H .2HCl -N -H 3SON +HCl盐酸萘乙二胺紫红色1、2仪器与试剂1、2、1仪器①小型粉碎机。

②分光光度计。

③25ml 具塞比色管。

1、2、2试剂①氯化铵缓冲溶液:在1 000ml 容量瓶中加人500ml 水,然后准确加入20、0ml 盐酸,振荡混匀后,再准确加入50ml 氢氧化铵,用水稀释至刻度。

必要时用稀盐酸与稀氢氧化铵调试pH 至9、6～9、7。

②硫酸锌溶液(0、42mol/L):称取120g 硫酸锌(ZnSO 4·7H 2O),用水溶解,并稀释至1000ml 。

③氢氧化钠溶液(20g/L):称取20g 氢氧化钠用水溶解,稀释至1 000ml 。

④对氨基苯磺酸溶液:称取10g对氨基苯磺酸,溶于700ml水与300ml冰乙酸中,置棕色瓶中混匀,室温保存。

⑤盐酸萘乙二胺溶液(1g/L):称职0、1g盐酸萘乙二胺,加60%乙酸溶解并稀释至100ml,混匀后,置棕色瓶中,在冰箱中保存,1周内稳定。

⑥显色剂:临用前,将盐酸萘乙二胺溶液(1g/L)与对氨基苯磺酸溶液等体积混合。

仅供1次使用。

⑦亚硝酸钠标准储备液:准确称取250、0mg于硅胶干燥器中干燥24h得亚硝酸钠,用水溶解后移入500ml容量瓶中,加100ml氯化铵缓冲溶液,用水稀释至刻度,混匀,在4℃避光保存。

此溶液每毫升相当于500μg得亚硝酸钠。

选修模块专题十四生物技术实践考纲要求 1.微生物的利用(1)微生物的分别和培育。

(2)培育基对微生物的选择作用。

(3)利用微生物进行发酵来生产特定的产物。

2.生物技术在食品加工及其他方面的应用(1)从生物材料中提取某些特定的成分。

(2)运用发酵加工食品的基本方法。

(3)植物的组织培育。

3.试验：DNA的粗提取与鉴定。

1．[2021·全国卷Ⅰ] 已知微生物A可以产生油脂，微生物B可以产生脂肪酶。

脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生产。

回答有关问题：(1)显微观看时，微生物A菌体中的油脂通常可用____________染色。

微生物A产生的油脂不易挥发，可选用____________(填“萃取法”或“水蒸气蒸馏法”)从菌体中提取。

(2)为了从自然界中获得能产生脂肪酶的微生物B的单菌落，可从含有油料作物种子腐烂物的土壤中取样，并应选用以________为碳源的固体培育基进行培育。

(3)若要测定培育液中微生物B的菌体数，可在显微镜下用____________直接计数；若要测定其活菌数量，可选用________法进行计数。

(4)为了确定微生物B产生的脂肪酶的最适温度，某同学测得相同时间内，在35 ℃、40 ℃、45 ℃温度下降解10 g油脂所需酶量依次为4 mg、1 mg、6 mg，则上述三个温度中，________℃条件下该酶活力最小。

为了进一步确定该酶的最适温度，应围绕________℃设计后续试验。

2．[2022·海南卷] 已知泡菜中亚硝酸盐含量与泡制时间有关。

为了测定不同泡制天数泡菜中亚硝酸盐的含量，某同学设计了一个试验，试验材料、试剂及用具包括：刻度移液管、比色管、不同浓度的亚硝酸钠标准溶液、亚硝酸盐的显色剂、不同泡制天数的泡菜滤液等。

回答相关问题：(1)请完善下列试验步骤。

①标准管的制备：用______________________和显色剂制成颜色深浅不同的系列标准管。

②样品管的制备：用刻度移液管分别吸取肯定量的__________________________，加到不同的比色管中，然后在各个比色管中加入等量的显色剂进行显色，得到样品管。

肉的新鲜度检验——肉的理化学检查一.实验目的：学习肉的理化学检查，掌握肉质评定方法和标准。

二.实验内容(一)pH值测定1.原理屠宰后的畜肉，由于肌糖元的无氧酵解和A TP的分解，乳酸和磷酸的含量增加，使肉的pH值下降。

刚宰后的热鲜肉pH值约为7.0；宰后1小时pH值可降到6.2～6.3；经24h 后降至5.6～6.0并一直维持到肉发生腐败分解前。

肉腐败时，由于肉中蛋白质在细菌酶的作用下，被分解为氨和胺类等碱性物质，所以使肉趋于碱性，pH值显著增高，可作为检查肉类质量的一个指标，但不能作为绝对指标和最终指标，因为还有其它因素能影响到肉类pH 值变化。

但对鉴别PSE猪肉（pH较低）和DFD猪肉（pH>6.5）是一个重要指标。

2．仪器与试剂上皿天平，手术刀，250ml烧杯，100ml三角瓶，100ml量筒，50ml烧杯，温度计，脱脂棉，酸度计，pH缓冲溶液。

3．操作步骤及判定标准pH的测定：酸度计是以甘汞电极为参比电极，玻璃电极为指示电极组成原电池，测定25℃下产生的电位差，电位差每改变59.1mv ，被检液中的pH值相应地改变1个单位，可直接从刻度表上读取pH 值。

测试前先将玻璃电极用蒸馏水浸泡24 h 以上，然后按说明书将玻璃电极、甘汞电极装好，接通电源，启动开关，预热30min。

用选定的pH缓冲溶液校正酸度计后，用蒸馏水冲洗电极2～3次，用脱脂棉吸干，然后将电极放入肉浸液中，1 min 后读取pH值。

判定标准：①新鲜肉pH5.9～6.5 ②次新鲜肉pH6.6～6.7 ③变质肉pH6.7以上(二)粗氨测定（纳氏法）1．原理肉类在腐败分解时形成氨和铵盐等物质，且随着腐败程度的加深而相应地增多，可作为鉴定肉类腐败程度的标志之一。

肉类腐败分解时产生氨和铵盐，在碱性环境中与纳式试剂中的碘化汞和碘化钾的复盐（HgI2•2KI）发生反应，生成一种叫碘化二亚汞铵的黄色沉淀，而使肉浸液成为黄色。

黄色沉淀的量和肉浸液中氨与铵盐的含量成正比。

熏肉制品中亚硝酸盐含量的测定华南师范大学09化一摘要：肉制品是一类深受人民群众喜爱的食品，在其生产过程中多采用亚硝酸盐作为发色剂，它不仅能使肉制品保持良好的色泽，还能抑制肉毒梭状芽孢杆菌，保证肉制品的后熟风味。

但近年来由于亚硝酸盐摄入量过多引起的食物时中毒时有发生，且加硝处理过的肉制品中的亚硝酸盐可与胺类生成强致癌物亚硝胺，对人体健康产生潜在的危害。

本实验用紫外分光光度法测定熏肉制品中亚硝酸盐的含量。

关键字：熏肉制品亚硝酸盐紫外分光光度法标准曲线法盐酸-萘乙胺引言盐的性质:亚硝酸和硝酸的钠盐和钾盐常被加入用于腌肉的混合物中，用来产生和保持色泽、抑制微生物和产生特殊的风味。

此外，亚硝酸盐（150-200mg/kg）可抑制罐装碎肉和腌肉中的梭状芽孢杆菌。

亚硝酸盐的抗微生物作用为它使用于可能生成长肉毒梭状芽孢杆菌的腌肉中提供了正当的理由。

亚硝酸盐含量只要控制在安全范围内使用不会对人体造成危害。

肉制品中，亚硝酸盐含量不得超过30mg/kg，这是因为亚硝酸盐的中毒剂量是200毫克以上，而正常膳食中的亚硝酸盐即使是大量用亚硝酸盐做食品添加剂的肉类，也不会超过50毫克。

中毒后症状：亚硝酸盐是不会蓄积在体内的，膳食中绝大部分亚硝酸盐随尿排出，不会对人体造成危害。

过量亚硝酸盐进入人体，会氧化血液中的血红蛋白为高铁血红蛋白，后者无携氧功能，导致组织缺氧，引起肠原性青紫症，皮肤青紫是本病的特征，尤以口唇青紫最为普遍。

口服亚硝酸盐10分钟至3小时后，可出现头晕、恶心、呕吐等症状。

严重者出现意识丧失、昏迷、呼吸衰竭，甚至死亡。

亚硝酸盐作用机理发色机理当血红蛋白中的铁处于+2（亚铁）并且缺乏配体键合所需的第6部位时，它被称为肌红蛋白，是由珠蛋白和血红素组成的络合物，位居血红蛋白中央的铁原子(d2sp3)具有6个配位部位，其中45个配位部位与珠蛋白的组氨酸残基键合，剩余的第6个配位部位可与各种配基提供的电负性原子络合。

亚硝酸盐为强氧化剂，进人人体后，可使血中低铁血红蛋白氧化成高铁血红蛋白，失去运氧的功能，导致组织缺氧。

专题1 传统发酵技术的应用课题3制作泡菜并检测亚硝酸盐含量【学习目标】1.尝试制作泡菜，并尝试用比色法测定泡菜中亚硝酸盐含量的变化2.讨论与此相关的食品安全问题【重点难点】重点：制作泡菜并检测泡菜中亚硝酸盐含量难点：泡菜中亚硝酸盐含量的测定【预习案】任务一、基础知识（一）乳酸菌1.代谢类型为异养厌氧型，在情况下，将葡萄糖分解成乳酸2.常见种类：和3.分布：分布广泛，、土壤、植物、人或动物的内等均有分布。

4.应用：常用于生产（二）亚硝酸盐1.物理性质粉末、易溶于。

2.应用在食品生产中常用作食品3.分布自然界中分布广泛。

据统计，亚硝酸盐在蔬菜中的平均含量约为，咸菜中平均含量在以上，而豆粉中的平均含量可达4.对人体的影响膳食中的亚硝酸盐一般不危害人体健康，当人体摄入总量达时，会引起中毒当摄入总量达时，会引起死亡5.我国卫生标准亚硝酸盐残留量在肉制品中不得超过，酱腌菜中不超过，婴儿奶粉中不得超过。

6.代谢绝大多数亚硝酸盐随排出，但在特定条件下，即适宜的和一定的作用，会转变成致癌物质---任务二、泡菜腌制过程1.泡菜坛的选择（1）应选用火候好、无砂眼、、坛沿深、好的泡菜坛（2）检查时可将坛口压入水中，看坛内有无现象2.腌制（1）过程：将清水和盐以的质量比例配制盐水。

将盐水后备用。

将蔬菜装至时加入香辛料，装至时，加入盐水，要使盐水盖好坛盖。

将坛盖边沿的水槽中注满水，以保证坛内的环境（2）条件：控制腌制的时间、温度和食盐的用量。

温度、食盐用量不足，腌制时间，容易造成细胞大量繁殖，含量增加任务三、亚硝酸盐的测定1.原理（1）在条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生反应后，与N—1—萘基乙二胺盐酸盐结合形成色染料。

（2）将显色反应后的样品与已知浓度的进行比较，可以大致出泡菜中亚硝酸盐的含量2.测定步骤配制溶液→→制备样品处理液→【探究案】探究点一、如何防止泡菜质量不合格？探究点二、简述测定亚硝酸盐含量变化的操作过程。

亚硝酸盐含量的测定实验一、实验原理泡菜的制作离不开乳酸菌，乳酸菌是厌氧细菌，在无氧的情况下，将葡萄糖分解成乳酸。

常见的乳酸菌有乳酸链球菌和乳酸杆菌。

在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰色染料。

将显色反应后的样品与已知浓度的标准液进行目测比较，可以大致估算出泡菜中亚硝酸盐的含量。

二、设备及试剂泡菜、三角瓶、量筒、烧杯、pH试纸、玻璃棒、微量可调移液器、试管、亚硝酸盐含量的测定试剂盒。

(试剂盒实验首先利用亚硝酸盐在弱酸条件下可与对氨基苯磺酸重氮化后。

再与N-1-萘基乙二胺偶合形成红色染料的原理，以及利用比色计对红色染料的测定，从而得出标准梯度显色液。

然后将处理后的样品溶液与标准显色液观察比较，就可得出亚硝酸盐的含量。

试剂盒中准确提供实验所需的各种试剂，无需额外购买称量，具有使用方便、快捷的特点)三、试剂配制对氨基苯磺酸溶液：称取0.4g对氨基苯磺酸，溶解于100ml体积分数为20％的盐酸中，避光保存(4mg/ml)。

N-1－萘基乙二胺盐酸盐溶液：称取0.2g N-1－萘基乙二胺盐酸盐，溶解于100ml的水中，避光保存(2mg/ml)。

亚硝酸钠标准溶液：向含有0.025g亚硝酸钠固体的离心管中加入1mL蒸馏水充分溶解，然后将以上溶解液移至50mL容量瓶中，取1mL溶液，移至100mL容量瓶中，加蒸馏水稀释到刻度，即制得5μg/mL亚硝酸钠标准液；提取剂：分别称取50g氯化镉、氯化钡，溶解于1000ml蒸馏水中，用盐酸调节pH至1。

氢氧化铝乳液：取10g氢氧化铝固体，加水100mL配成乳液。

四、实验流程测定亚硝酸盐的含量（1）制备标准显色液：用微量可调移液器吸取0μL，20μL，40μL，60μL，80μL，100μL，150μL 的亚硝酸钠标准溶液，分别置于7支试管中，在各管中分别加入200μL对氨基苯磺酸，混匀，静置3～5min后，再分别各加入100μL N-1-萘基乙二胺盐酸盐溶液，用微量可调移液器添加蒸馏水，使各试管内总体积为5mL，混匀，观察亚硝酸钠溶液颜色的梯度变化；（2）制备样品处理液：取腌制的泡菜40g，用榨汁机粉碎，过滤后得到大约20mL汁液。

2023届高考生物高频考点专项练习：专题二十考点56 传统发酵技术（A卷）1.下列有关果酒、果醋制作的说法,正确的是( )A.需要对发酵原料和发酵瓶进行彻底的灭菌B.醋酸发酵时需要充足的氧气和充足的糖源C.果酒和果醋发酵因条件不同而不能同时进行D.发酵使用的微生物都是单细胞原核生物2.某同学在线提交了在家用带盖玻璃瓶制作果酒和果醋的实验报告，他的做法错误的是( )A.选择新鲜的葡萄略加冲洗，除去枝梗后榨汁B.将玻璃瓶用酒精消毒后，装满葡萄汁C.酒精发酵期间，根据发酵进程适时拧松瓶盖放气D.酒精发酵后去除瓶盖，盖一层纱布，再进行醋酸发酵3.下列关于果酒、果醋的制作，说法错误的是( )A. 发酵瓶要清洗干净并用体积分数为70%的酒精消毒B. 应先冲洗葡萄再除去枝梗，避免引起葡萄皮破损，造成污染C. 装入葡萄汁后必须打开发酵装置的充气口，有利于酵母菌繁殖D. 用简易的发酵装置制作葡萄酒，每隔一段时间要将瓶盖拧松一次4.如图是探究果酒与果醋发酵的装置示意图。

下列相关叙述错误的是( )A.改变通入气体种类,可以研究呼吸作用类型对发酵的影响B.果酒发酵过程中通入N2,酵母菌将从有氧呼吸转变为无氧呼吸C.果醋的发酵周期与实验设定的温度密切相关D.气体入口与气体出口可以交换使用5.如图表示果酒和果醋制作过程中的物质变化过程，下列叙述正确的是( )A.过程①和②都只能发生在缺氧条件下B.过程①和③都发生在酵母细胞的线粒体中C.过程③和④都需要氧气的参与 D.过程①～④所需的最适温度基本相同6.下列关于腐乳制作的叙述,正确的是( )A. 以毛霉为主的多种原核微生物参与了豆腐的发酵B. 加盐腌制后,毛霉能产生更多的蛋白酶和脂肪酶C. 卤汤中酒精的含量越高,腐乳成熟的时间就越短D. 密封瓶口时将瓶口通过酒精灯的火焰可防止污染7.下图为腐乳制作过程的流程图,相关说法不正确的是( )A.毛霉为好氧型真菌,因此码放豆腐时要留出一定缝隙,以利于其进行有氧呼吸B.加盐腌制的目的是析出豆腐中的水分使之变硬,同时能抑制微生物的生长C.加卤汤、密封腌制中,毛霉不断增殖,并产生大量的酶,分解蛋白质D.用胶条密封瓶口时,最好将瓶口通过酒精灯的火焰,以防止瓶口污染8.下列有关腐乳和泡菜制作的叙述，不正确的是( )A.将长满毛霉的豆腐放在瓶中，并逐层加盐以防止杂菌污染B.用来腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干净后要用沸水消毒C.泡菜制作过程中，乳酸菌的含量会不断上升D.制作泡菜的罐口如果封闭不严，氧气会抑制乳酸菌的发酵，导致泡菜制作失败9.腐乳因口感好、营养丰富等特点，成为人们喜爱的食品之一。

附件4食品中亚硝酸盐的快速检测盐酸萘乙二胺法（KJ201704）1范围本方法规定了食品中亚硝酸盐的快速检测方法。

本方法适用于肉及肉制品（餐饮食品）中亚硝酸盐的快速测定。

2原理样品中的亚硝酸盐经提取后，在弱酸性条件下与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺反应生成紫红色偶氮化合物，其颜色的深浅在一定范围内与亚硝酸盐含量成正相关，通过色阶卡进行目视比色，对样品中亚硝酸盐进行定性判定。

3试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。

3.1试剂3.1.1对氨基苯磺酸。

3.1.2盐酸萘乙二胺。

3.1.3盐酸。

3.1.4盐酸（20%）：量取20mL盐酸，用水稀释至100mL。

3.1.5对氨基苯磺酸溶液（4g/L）：称取0.4g对氨基苯磺酸，溶于100mL20%盐酸中，混匀，置棕色瓶中，临用新制。

3.1.6盐酸萘乙二胺溶液（2g/L）：称取0.2g盐酸萘乙二胺，溶解于100mL水中，混匀，置棕色瓶中，临用新制。

3.2参考物质亚硝酸钠参考物质中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量见表1，纯度≥99%。

表1 亚硝酸钠中文名称、英文名称、CAS登记号、分子式、相对分子质量3.3标准溶液配制亚硝酸钠标准工作液（200µg/mL，以亚硝酸钠计）：精密称取适量经110℃—120℃干燥恒重的亚硝酸钠参考物质（3.2），加水溶解，移入250mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。

3.4材料亚硝酸盐快速检测试剂盒：适用基质为肉及肉制品，需在阴凉、干燥、避光条件下保存。

4仪器和设备4.1移液器：200µL，1mL。

4.2涡旋混合器或超声仪。

4.3电子天平或手持式天平：感量为0.01g和0.0001g。

4.4离心机。

4.5微孔滤膜：0.45μm（水系）。

5分析步骤5.1试样制备取适量有代表性样品的可食部分，充分粉碎混匀。

5.2试样的提取准确称取试样1g（精确至0.01g），置于离心管中，准确加水10mL，超声或涡旋振荡提取5min，静置10min。

专题l 传统发酵技术的应用课题3 亚硝酸盐含量检测测试题知识点：亚硝酸盐含量检测原理1．有关测定亚硝酸盐含量的叙述，不正确的是()A．亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应需在盐酸酸化条件下B．重氮化反应后，与N－1－萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料C．对显色反应样品进行目测，可精确算出泡菜中亚硝酸盐含量D．要设置空白比色管做对照2．测定亚硝酸盐含量的有关叙述，不正确的是()A．亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，需在盐酸酸化条件下B．重氮化反应后，与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料C．对显色反应后的样品进行目测，可得出泡菜中亚硝酸盐的精确含量D．配制溶液所用的提取剂为氯化镉与氯化钡知识点：结果分析与评价3.在泡菜腌制过程中亚硝酸盐含量变化曲线如图所示，正确的是()知识点：泡菜制作菌种4．乳酸菌培养液中含有一定浓度的葡萄糖，但当葡萄糖浓度过高时，反而抑制微生物的生长，原因是()A．碳源供应太充足B．细菌会发生质壁分离C．改变了乳酸菌的pH值D．葡萄糖不是乳酸菌的原料5.泡菜制作过程中，许多乳酸菌产生大量乳酸，共同抑制其他菌的生长，乳酸积累过多，又会抑制乳酸菌自身的生长，以上体现出的生物关系依次是()A．种内互助、种内斗争、种间竞争B．种内互助、种间竞争、种内斗争C．种内斗争、种间竞争、种内互助D．种间斗争、种内斗争、种内互助知识点：综合应用6．测定亚硝酸盐含量时操作的步骤为________、________、________、________。

其中在制备标准显色液时用刻度移液管吸取、、、、和亚硝酸钠溶液，分别置于50mL比色管中，再另取1支比色管作为________。

在各试管中分别加入溶液，混匀，静置3～5min后，各加入的________溶液，添加________，使各比色管内溶液总体积为50mL；比色一般用________法，可大致估算出泡菜中亚硝酸盐的含量。

7.亚硝酸盐的测定步骤包括：样品处理→测定→标准曲线的绘制→计算。

实验10 泡菜的腌制和亚硝酸盐的测定【学习目标】1.了解泡菜制作的原理、方法，尝试制作泡菜；2.在泡菜制作过程中，深入理解乳酸菌的作用机理；3.尝试用比色法测定泡菜中亚硝酸盐的含量变化，讨论与此相关的食品安全问题。

【教学重点】制作泡菜并测定泡菜中亚硝酸盐含量【教学难点】泡菜中亚硝酸盐含量的测定【学情分析】班级中有相当一部分同学来自城市，对泡菜的制作工艺缺乏一定的了解，但是对这古老的制作工艺有着浓厚的兴趣，在老师的带领下，动手动脑，会积极主动去获取新知识。

而对于来自农村的孩子，对泡菜制作有着一定的了解，但是对泡菜的制作原理的相关知识的了解程度低。

通过对泡菜制作原理以及技术的学习，学生能够锻炼理论结合实际的能力，加强对日常生活的关注程度。

【教学过程】（一）引入新课泡菜，古称葅，是指为了利于长时间存放而经过发酵的蔬菜。

泡菜历史悠久，流传广泛，几乎家家会做，人人吃，甚至在筵席上也要上几碟泡菜。

这一节课我们学习如何腌制泡菜，并测定所腌制的泡菜中的亚硝酸盐含量。

（二）进行新课1.泡菜的腌制1.1实验原理乳酸菌是异养厌氧型，属于原核生物，是能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产生乳酸的细菌的统称，常见的乳酸菌包括乳酸链球菌和乳酸杆菌，后者可用于制作酸奶。

乳酸菌在无氧条件下进行无氧呼吸葡萄糖分解成乳酸，使泡菜呈现酸味。

泡菜发酵过程的时间、温度、食盐的用量等都需要适合，温度过高、食盐用量不足10％、腌制时间过短，容易造成细菌大量繁殖，亚硝酸盐含量增加。

泡菜的发酵过程可以分为发酵前期、发酵中期、发酵后期。

发酵前期：蔬菜刚入坛时，表面带入的微生物，主要是以不抗酸的大肠杆菌和酵母菌等较为活跃，它们进行异型乳酸发酵和微弱的酒精发酵，产生较多的乳酸、酒精、醋酸和二氧化碳等，二氧化碳以气泡从水槽内放出，逐渐使坛内形成厌氧状态。

此时乳酸菌和乳酸的量比较少，为泡菜初熟阶段，菜质咸而不酸、有生味。

发酵中期：由于前期乳酸的积累，pH下降，厌氧状态形成，乳酸杆菌开始活跃，此时乳酸积累量可以达到0.6%~0.8%，pH降至3.5-3.8。

制作泡菜并检测亚硝酸盐含量一、单选题（共8题；共16分）1.测定亚硝酸盐含量的有关叙述，不正确的是（）A.亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，需在盐酸酸化条件下进行B.重氮化反应后，与N1萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料C.对显色反应样品进行目测，可精确算出泡菜中亚硝酸盐含量D.配制溶液所用的提取剂为氯化镉与氯化钡2.在泡菜腌制过程中亚硝酸盐含量变化曲线如图所示，正确的是（）A. B. C. D.3.关于亚硝酸盐含量测定原理的正确描述是A.重氮化→酸化→显色→比色B.重氮化→酸化→比色→显色C.酸化→重氮化→显色→比色D.酸化→重氮化→比色→显色4.亚硝酸盐在酸性条件下与对氨基苯磺酸重氮化后,再与α-萘胺反应生成的溶液呈()A.紫红色B.蓝色C.砖红色D.橘红色5.关于泡菜制作的相关叙述，不正确的是A.清水和盐的比例为4:1B.发酵时间长短受室内温度影响C.泡菜坛应选择火候好、无砂眼、盖子吻合好的D.发酵过程无需向水槽中补充水6.下列关于测定亚硝酸盐含量原理的叙述，不正确的是（）A.亚硝酸盐经一定方式显色反应后呈玫瑰红色B.样品液显色后，通过与已知浓度的标准液比色，可大致估算出样品液中亚硝酸盐的含量C.不同浓度的亚硝酸盐显色深浅不同D.显色反应后亚硝酸盐的理化性质没有发生改变7.测定泡菜中亚硝酸盐的含量的操作中，用不到的试剂是（）A.对氨基苯磺酸溶液B.N一1一萘基乙二胺盐酸盐溶液C.氯化镉和氯化钡溶液D.班氏溶液8.为了测定亚硝酸盐含量的准确性高，关键是()A.样品处理B.标准显色液的制备C.比色D.泡菜的选择二、填空题（共2题；共17分）9.某兴趣小组就“泡菜腌制过程中亚硝酸盐含量变化”开展了研究，操作如下：1月4日下午选取1、2、3号三只相同的泡菜坛，在每个坛中加入洗净的新鲜莲花菜0.6kg，再分别倒入等量煮沸并冷却的10%的盐水，将坛密封，置于同一环境中．封坛前进行第一次取样测定亚硝酸盐含量，后来定时测定，结果如图．（1）测定亚硝酸盐含量的方法是________，其原理是：在盐酸酸化的条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N﹣1﹣萘基乙二胺盐酸盐结合形成________，将显色反应后的样品与已知浓度的标准液进行目测比较，可以大致估算出泡菜中亚硝酸盐的含量．（2）实验中，盐水加热煮沸是为了________；冷却之后再使用是为了保证________等微生物的生命活动不受影响．（3）在腌制过程中，坛中溶液量会增加，原因是________．（4）图中数据表明，泡菜在腌制的第________天亚硝酸盐含量达到最大值，腌制到第________天以后再食用可以较好地避免亚硝酸盐对人体健康的危害．（5）实验中三只坛中产生的亚硝酸盐含量存在差异，最可能的原因是________．（6）为了让实验数据更好地表明泡菜腌制过程中亚硝酸盐含量变化，对该实验所获得的3组数据应进行怎样的处理才更合理？________．10.生物技术的广泛应用，给社会带来了较大的经济效益，受到社会的广泛关注．请回答下列有关问题：（1）制作泡菜需要测定亚硝酸盐的含量，方法是________，其原理是：在盐酸酸化的条件下，亚硝酸盐与氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N﹣1萘基乙二胺盐酸盐结合形成________，将显色反应后的样品与已知浓度的标准液目测比较，可以大致估算出泡菜中亚硝酸盐的含量．（2）在香料工业提取的“液体黄金”玫瑰油中，要求不含有任何添加剂或化学原料，其提取方法主要是________；玫瑰精油的提取需要大量原料，通常采用植物组织培养技术来实现玫瑰的快速繁殖．（3）在制备固定化酵母细胞的过程中，溶化好的海藻酸钠溶液要冷却至室温才能加入已活化的酵母菌，原因是________．如果在CaCl2溶液中形成的凝胶珠颜色过浅，说明________．（4）微生物强化采油（MEOR）是利用某些微生物能降解石油，增大石油的乳化度，降低石油黏度的原理，通过向油井中注入含微生物的水来提高采油率的新技术．为筛选和纯化该类微生物，从功能上分，应选用________培养基，常用的接种方法是________和________．三、综合题（共2题；共15分）11.新鲜的泡菜滤液中含有乳酸菌，可作为实验材料分离纯化乳酸菌．请回答下列问题：（1）分离纯化乳酸菌时，首先需要用无菌水对泡菜滤液进行________，这样做的理由是________．（2）分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙，从而使培养基在分离纯化过程中会形成________．（3）若要长期保存乳酸菌，菌液中常需要加入一定量的________（填“蒸馏水”“甘油”或“碳酸钙”），且要放置在________（填“﹣5”“﹣20”或“﹣100”）℃的冷冻箱中，若要短期保存乳酸菌，可将菌种接种到试管的________（填“溶液中”“固体培养基表面上”或“固体斜面培养基上”），菌落长成后，将试管放置在________（填“﹣4”“0”或“4”）℃的冰箱中保藏．12.农村中泡菜的制作方法是：新鲜的蔬菜经过整理、清洁后，放入彻底清洗并用白酒擦拭过的泡菜坛中，然后向坛中加入盐水、香料及一些“陈泡菜水”。

专题八生物技术实践概念发酵工程利用微生物的特定功能规模化生产对人类有用的产品1.阐明在发酵工程中灭菌是获得纯净的微生物培养物的前提。

2.阐明无菌技术是在操作过程中，保持无菌物品与无菌区域不被微生物污染的技术。

3.举例说明通过调整培养基的配方可有目的地培养某种微生物。

4.概述平板划线法和稀释涂布平板法是实验室中进行微生物分离和纯化的常用方法。

5.概述稀释涂布平板法和显微镜计数法是测定微生物数量的常用方法。

6.举例说明日常生活中的某些食品是运用传统发酵技术生产的。

7.阐明发酵工程利用现代工程技术及微生物的特定功能，工业化生产人类所需产品。

8.举例说明发酵工程在医药、食品及其他工农业生产上有重要的应用价值。

9.生物技术在其他方面的应用。

提示：①灭菌②尿素③稀释涂布平板④纤维素⑤刚果红⑥乳酸菌⑦物理和化学性质⑧二苯胺⑨凝胶色谱⑩水蒸气蒸馏⑪萃取⑫纸层析⑬化学结合法⑭配制海藻酸钠溶液⑮固定化酵母细胞一、传统发酵技术及应用1.酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下，能进行有氧呼吸，大量繁殖；在无氧条件下，能进行酒精发酵。

（√）2.制作果酒或果醋的发酵液和发酵瓶要严格灭菌。

（×）提示：果酒、果醋的发酵属于传统发酵，都是利用了来自葡萄皮上的酵母菌和空气中醋酸菌在适宜的条件下生长迅速，同时可以抑制其他微生物的生长的特点，所以不需要对发酵液和发酵瓶进行严格的灭菌。

3.制作腐乳所加的盐和卤汤都能抑制微生物的生长，因此制作腐乳不需要严格的灭菌操作。

（√）4.常用比色法测定泡菜中亚硝酸盐含量。

（√）二、微生物的分离、培养及应用1.对用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等要进行灭菌，而对实验操作空间、操作者的衣着等要进行消毒。

（√）2.选择培养基是微生物选择培养中常用的，它允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他微生物生长。

（√）3.统计菌落数目对细菌进行计数时可用稀释涂布平板法进行接种，也可用平板划线法接种。