《基因工程》课程习题
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第一章绪论名词解释:1.基因操作:将在细胞外产生的核酸(物质)分子插入到病毒,质粒或其它载体系统中,再整合到特定的宿主中,从而形成一种新的可连续繁殖的有机体。
2.间断基因:序列中间插入有与氨基酸编码无关的DNA间隔区,使一个基因分隔成不连续的若干区段。
我们称这种编码序列不连续的基因为间断基因。
3.启动子:DNA分子可以与RNA聚合酶特异结合的部位,也就是使转录开始的部位。
4.亚克隆:当初始克隆中的外源DNA片段较长,含有许多目的基因以外的DNA片段时,在诸如表达、序列分析和突变等操作中不便进行,将目的基因所对应的一小段DNA找出来,这个过程叫“亚克隆”。
填空题:1.基因操作的核心部分是基因克隆,基因克隆的基本要点有(克隆基因的类型),(受体的选择)和(载体的选择)。
2.(基因)是遗传物质的基本单位,也是作为遗传物质的核酸分子上的一段片段。
它可以是连续的,也可以是(不连续的);可以是(DNA),也可以是RNA;可以存在于染色体上,也可以(存在于染色体之外如质粒、噬菌体)。
3.基因操作并不是一个法律概念,除了包括基因克隆外,还包括基因的(表达)、(调控)、(检测)和(改造)等与基因研究相关的内容。
4.启动子是指(基因转录过程中控制起始的部位)。
通常一个基因是否表达,(转录起始)是关键的一步,是起决定作用的。
在转录过程中,启动子还是(RNA聚合酶)的结合位点。
5.原核生物的RNA聚合酶主要由两部分组成:(核心酶)和(σ因子),其中σ-因子并不参与RNA的合成,它的作用主要是(识别要转录的起始位点)。
6.从(启动区)到(终止区)的这一段距离称为一个转录单位,或者一个转录产物,其中可包括一个或者多个基因。
7.转录终止子主要有两种,一种是(依赖ρ因子),另一种是(不依赖ρ因子)。
8.基因的书写方式,通常是写出的DNA序列总是与(mRNA)相同的那条链,方向是从(5')到(3')。
对于碱基的位置,一般自转录起始点向两个方向编号,其中转录起始点定为(+1),(在起始点上游第一个碱基)定为-1。
《基因工程》课程习题第二章习题一、单选题1.在基因操作中所用的限制性核酸内切酶是指( B )A.I类限制酶 B. II类限制酶 C. III类限制酶 D.核酸内切酶 E. RNAase2.下列关于同裂酶的叙述错误的是( B )A.是从不同菌种分离到的不同的酶,也称异源同工酶。
B.它们的识别序列完全相同。
C.它们的切割方式可以相同,也可以不同。
D.有些同裂酶识别的完整序列不完全一样,但切割位点间的序列一样。
E.两种同裂酶的切割产物连接后,可能会丢失这两个同裂酶的识别位点。
3. 多数限制酶消化DNA的最佳温度是( A )A. 37℃B.30℃C.25℃D.16℃E.33℃4. 下列关于限制酶的叙述错误的是( B )A. I类限制酶反应需要 Mg2+、ATP和S-腺苷蛋氨酸。
B. II类限制酶反应需要Mg2+、ATP。
C. III类限制酶反应需要Mg2+、ATP,S-腺苷蛋氨酸能促进反应,但不是绝对需要。
D. I、III类限制酶对DNA有切割和甲基化活性,II类限制酶对DNA只有切割活性而无甲基化活性。
E. II类限制酶要求严格的识别序列和切割点,具有高度精确性。
5. 如果一个限制酶识别长度为6bp ,则其在DNA上识别6bp的切割概率为( D )A. 1/44B. 1/66C. 1/64D.1/46E. 1/1066. 多数II类限制酶反应最适PH是 ( C )A. PH:2-4B. PH:4-6C. PH:6-8D. PH:8-10E. PH:4-107. 下列关于限制酶反应的说法错误的是 ( D )A. 限制酶识别序列内或其邻近的胞嘧啶、腺嘌呤或尿嘧啶被甲基化后,可能会阻碍限制酶的酶解活性。
B. 许多限制酶对线性DNA和超螺旋DNA底物的切割活性是有明显差异的。
C. 有些限制酶对同一DNA底物上不同酶切位点的切割速率会有差异。
D. 限制酶反应缓冲系统一般不用磷酸缓冲液,是由于磷酸根会抑制限制酶反应。
基因工程试题及答案解析一、选择题1. 基因工程中常用的限制酶是:A. 蛋白酶B. DNA聚合酶C. 核糖核酸酶D. 限制性核酸内切酶答案:D2. 基因工程中,用于将目的基因导入植物细胞的方法是:A. 电穿孔法B. 显微注射法C. 农杆菌转化法D. 脂质体介导法答案:C3. 下列哪项不是基因工程的基本步骤?A. 目的基因的获取B. 基因表达载体的构建C. 目的基因的扩增D. 目的基因的检测与鉴定答案:C二、填空题1. 基因工程中,常用的运载体有____、____和____。
答案:质粒、噬菌体、动植物病毒2. 基因工程中,常用的筛选标记基因有____、____和____。
答案:抗性基因、荧光蛋白基因、酶基因三、简答题1. 简述基因工程的应用领域。
答案:基因工程的应用领域包括农业、医学、工业、环境保护等。
在农业中,基因工程可以用于培育抗病、抗虫、抗旱等性状的作物;在医学领域,基因工程可以用于生产重组蛋白药物、基因治疗等;在工业上,基因工程可以用于生产酶、疫苗等;在环境保护方面,基因工程可以用于生物修复、污染物降解等。
2. 基因工程中,如何确保目的基因在宿主细胞中正确表达?答案:确保目的基因在宿主细胞中正确表达需要考虑以下几个方面:首先,目的基因需要有合适的启动子和终止子,以确保其在宿主细胞中得到正确转录和终止;其次,需要考虑目的基因的密码子偏好性,以确保其在宿主细胞中能被高效翻译;再次,需要考虑目的基因的稳定性,避免其在宿主细胞中被降解;最后,还需要考虑目的基因产物的后翻译修饰和定位。
四、论述题1. 论述基因工程在医学领域的应用及其可能带来的伦理问题。
答案:基因工程在医学领域的应用主要包括生产重组蛋白药物、基因治疗、疾病诊断和基因疫苗等。
重组蛋白药物可以用于治疗糖尿病、侏儒症等疾病;基因治疗可以用于治疗遗传性疾病;疾病诊断可以通过基因检测来实现;基因疫苗可以用于预防某些遗传性疾病。
然而,基因工程的应用也带来了伦理问题,如基因隐私权、基因歧视、基因治疗的安全性和有效性等。
高中生物《基因工程》练习题题号一二总分得分一、单选题(本大题共20小题,共20.0分)1.如图为DNA分子的某一片段,其中①②③分别表示某种酶的作用部位,则相应的酶依次为()A. 解旋酶、限制酶、DNA连接酶B. 限制酶、解旋酶、DNA连接酶C. 限制酶、DNA连接酶、解旋酶D. DNA连接酶、限制酶、解旋酶2.下列有关基因工程技术的叙述,正确的是()A. 重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶和运载体B. 所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列C. 选用细菌为重组质粒受体细胞是因为质粒易进入细菌细胞且繁殖快D. 只要目的基因进入受体细胞就能成功实现表达3.如图为基因表达载体的模式图。
下列有关基因工程的说法错误的是()A. 基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建B. 任何基因表达载体的构建都是一样的,没有差别C. 图中启动子和终止子不同与起始密码子和终止密码子D. 抗生素抗性基因的作用是作为标记基因,用于鉴别受体细胞中是否导入了载体4.一些细菌能借助限制性核酸内切酶抵御外来入侵者,而其自身的基因组DNA经预先修饰能躲避限制酶的降解。
下列在动物体内发生的过程中,与上述细菌行为相似的是()A. 巨噬细胞内溶酶体杀灭病原体B. T细胞受抗原刺激分泌淋巴因子C. 组织液中抗体与抗原的特异性结合D. 疫苗诱导机体产生对病原体的免疫5.某目的基因两侧的DNA序列所含的限制性核酸内切酶位点如图所示,最好应选用下列哪种质粒作为载体()A. B.C. D.6.下图是研究人员利用供体生物DNA中无限增殖调控基因制备单克隆抗体的思路流程。
下列相关叙述正确的是()A. 酶a、酶b作用位点分别为氢键和磷酸二酯键B. Ⅰ是经免疫的记忆细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交瘤细胞C. 筛选出既能无限增殖又能产生专一抗体的Ⅱ必须通过分子检测D. 上述制备单克隆抗体的方法涉及转基因技术和动物细胞核移植技术7.下列关于基因工程技术的说法,正确的是()A. 切割质粒的限制酶均只能特异性地识别3-6个核苷酸序列B. PCR反应中两种引物的碱基间应互补以保证与模板链的正常结合C. 载体质粒通常采用抗生素抗性基因作为标记基因D. 目的基因必须位于重组质粒的启动子和终止子之间才能进行复制8.在其他条件具备的情况下,在试管中进入物质X和物质Z,可得到相应产物Y.下列叙述正确的是()A. 若X是DNA,Y是RNA,则Z是逆转录酶B. 若X是DNA,Y是mRNA,则Z是脱氧核苷酸C. 若X是RNA,Y是DNA,则Z是限制性内切酶D. 若X是mRNA,Y是核糖体上合成的大分子,则Z是氨基酸9.下图表示的是三种黏性末端,下列说法正确的是A. 甲、乙、丙黏性末端是由两种限制酶作用产生的B. 若甲中的G处发生突变,限制酶可能无法识别该切割位点C. 乙中的酶切位点在A与G之间D. 目前常用的运载体有质粒、噬菌体和动植物病毒等几类原核生物10.如图是利用基因工程技术生产可使用疫苗的部分过程,其中PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ为四种限制性核酸内切酶。
基因工程练习题一、选择题1. 基因工程中常用的工具酶是:A. 纤维素酶B. 限制性核酸内切酶C. DNA聚合酶D. RNA聚合酶2. 以下哪个不是基因工程的步骤?A. 目的基因的获取B. 基因表达载体的构建C. 基因的转录D. 目的基因的检测与鉴定3. 基因工程中,将目的基因导入植物细胞最常用的方法是:A. 农杆菌介导法B. 显微注射法C. 电穿孔法D. 脂质体介导法4. 基因工程中,检测目的基因是否成功表达的方法是:A. DNA分子杂交技术B. 抗原-抗体杂交技术C. 酶联免疫吸附测定D. 所有选项都是5. 基因工程在医学领域的应用不包括:A. 基因治疗B. 生产重组疫苗C. 基因诊断D. 基因编辑二、填空题6. 基因工程的基本操作步骤包括四个环节:目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的________和鉴定。
7. 基因工程中,常用的运载体包括质粒、噬菌体的衍生物以及________。
8. 基因工程在农业上的应用包括抗虫转基因植物的培育、抗病转基因植物的培育、耐除草剂转基因植物的培育以及________转基因植物的培育。
9. 基因工程在环境保护方面的应用包括污染物的生物降解、生物修复等,其中生物修复是指利用生物,特别是微生物催化降解________,从而净化环境。
10. 基因工程产品在食品工业中的应用包括生产________、改良食品加工所需的酶等。
三、简答题11. 请简述基因工程在医学领域的主要应用。
12. 请列举基因工程在农业领域中的三个具体应用实例。
13. 基因工程中,目的基因的检测与鉴定方法有哪些?四、论述题14. 论述基因工程在现代生物技术中的重要性及其潜在的伦理问题。
15. 基因工程产品在食品工业中的应用前景如何?请结合实例进行分析。
五、实验设计题16. 设计一个实验方案,以验证某转基因植物是否成功表达外源基因。
六、案例分析题17. 阅读以下案例:某公司利用基因工程技术培育出一种抗虫棉,该棉能够抵抗棉铃虫的侵害。
《基因工程》习题及参考答案一、习题:1. What are biotechnology and genetic engineering?2. What is a gene?3. What are genetically engineered medicines?4. What do genome research and human genetics deal with?5. What potentials are held out by genetic diagnosis?6. What options are given by gene therapy?7. What is an embryo - and what is a fetus?8 What is a genetic fingerprint?9 What does the term "therapeutic cloning" mean?10 What are stem cells?11 What is a transgenic organism?12 What does xenotransplantation mean?13 How will genetic engineering be used in agriculture?14 How are genetically modified organisms assessed?15 What does the German Embryo Protection Act regulate?16. What is a genome?17. Is there a risk of bioterrorism?18. How does genetic engineering affect the environment?19. Are genetically engineered crops good for farmers?20.What is the difference between restriction digestion and restriction mapping?21.Can you combine two different restriction enzymes in the same reaction tubes todigest the DNA molecules?22.Why should we need to generate restriction mapping data?23.How many restriction enzymes available now on the market?24.Why do you consider mutagenesis in vitro as one of the most critical techniquesfor us to understand in genetic engineering class?25.How do we choose the methods for DNA modification?26.How do we choose a gene expression system?27.How can we express eukaryotic gene in E.coli?28.What should we consider before we start the recombinant protein expressionexperiment?29.What is the advantage of yeast expression system?30.What is the advantage of insect expression system?31.Why there are so many different types of vectors available for cloning?32.What is the difference between cloning vector and expression vector?33.What is a genetic fingerprint?34. 基因具体分成多少种类?35. 什么叫印记基因?36.什么叫遗传漂变?37.人类基因组图谱和初步分析结果是在哪一年公布的?38.人类基因组共有多少基因?39. 克隆羊成功的技术关键是什么?40. 有人计划将两个不同物种的动植物体细胞进行融合,然后将融合体的核移植到其中一种生物的未受精卵细胞中,进行体细胞克隆。
高中生物基因工程练习题学校:___________姓名:___________班级:___________一、单选题1.蛋白质工程中目前已成功的是( )A.对胰岛素进行改造,使其成为速效型药品B.蛋白质工程应用于微电子方面C.室温下可保存半年的干扰素D.耐储存的番茄2.下列有关限制性酶的描述,错误的是()A.限制酶主要从原核生物中提取B.限制酶具有热稳定性C.限制酶和DNA连接酶作用的化学键相同D.一种限制酶一般只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列3.蛋白质工程的最终目的是()A.分析蛋白质的三维结构B.研究蛋白质的氨基酸组成C.获取编码蛋白质的基因序列信息D.改造现有蛋白质或制造新的蛋白质,满足人类的需求4.下列基因工程的基本操作程序中,属于基因工程核心步骤的是()A.基因表达载体的构建B.目的基因的检测与鉴定C.将目的基因导入受体细胞D.目的基因的筛选与获取5.葡萄糖异构酶在工业上应用广泛,科学家将其第 138 位甘氨酸替换为脯氨酸后,其最适温度提高了 10℃左右。
相关叙述正确的是()A.蛋白质功能是由氨基酸的种类和数量决定B.改造蛋白质结构可通过改造基因结构实现C.蛋白质工程不可以定向改变蛋白质的结构D.酶最适温度提高是因为脯氨酸比甘氨酸更耐热6.基因和表达载体相连时既可以正向连接也可以反向连接。
下图甲、乙分别表示某质粒、含目的基因和酶切位点的DNA片段,构建基因表达载体时应用酶B和酶C进行切割,不应用酶A切割运载体和DNA片段,其原因不包括()A.防止目的基因和运载体发生反向连接B.保证构建的重组质粒中含有标记基因C.防止目的基因或运载体重新自身环化D.保证构建的重组质粒中含有启动子7.关于基因工程和下图所示黏性末端的叙述,正确的是()A.①与③是由相同的限制酶切割产生的B.DNA连接酶可催化①与③的连接C.经酶切形成④需要脱去2分子水D.基因工程中常用的工具酶有限制性核酸内切酶、DNA连接酶和运载体8.DNA琼脂糖凝胶电泳的分子筛效应是指作为支持介质的琼脂糖,具有网络结构,使大分子物质在通过时受到较大阻力,借此分离不同大小的DNA片段。
基因工程练习题一、选择题1. 下列哪种技术属于基因工程的核心技术?A. PCR扩增B. Southern blotC. Western blotD. Northern blot2. 基因工程中,用于切割DNA分子的酶是:A. 限制性内切酶B. 连接酶C. DNA聚合酶D. RNA聚合酶A. 目的基因B. 启动子C. 终止子4. 在基因工程中,将目的基因导入植物细胞常用哪种方法?A. 转化B. 转染C. 电穿孔D. 显微注射5. 下列哪个是基因敲除技术的应用?A. 生产转基因作物B. 疾病模型研究C. 基因治疗D. 生物制药二、填空题1. 基因工程的基本步骤包括:______、______、______、______和______。
2. 在基因克隆过程中,常用的载体有:______、______和______。
3. 利用PCR技术扩增目的基因时,需要用到______、______和______。
4. 转基因植物的研究与应用包括:______、______和______。
5. 基因敲除技术是一种通过______方法,使特定基因失去活性的技术。
三、判断题1. 基因工程可以定向改造生物的遗传特性。
()2. 限制性内切酶可以识别并切割特定的DNA序列。
()3. 基因表达载体必须包含启动子和终止子。
()4. 转基因动物技术可以用于生产药物。
()5. 基因治疗是一种治疗遗传病的方法,目前已经在临床广泛应用。
()四、简答题1. 简述基因工程的基本原理。
2. 什么是基因敲除技术?请举例说明其应用。
3. 简述转基因植物的研究与应用。
4. 基因工程在医药领域有哪些应用?5. 试述基因工程的安全性评价及其措施。
五、名词解释1. 重组DNA技术2. 基因克隆3. 转基因生物4. 同源重组5. 基因编辑六、论述题1. 论述基因工程中,如何从基因组DNA中提取目的基因,并详细描述提取过程中的关键步骤。
2. 试述基因工程中,将目的基因导入微生物细胞、植物细胞和动物细胞的常用方法及其原理。
基因工程练习题一、单项选择题1.在基因工程中,切割载体和含有目的基因的DNA片段中,一般需使用A.同种限制酶B.两种限制酶C.同种连接酶D.两种连接酶2.基因工程常用的受体有①大肠杆菌②枯草杆菌③结核杆菌④动植物细胞A.①②③④B.①②③C.②③④D.①②④3.有关基因工程的叙述正确的是A.限制酶只在获得目的基因时才用B.重组质粒的形成是在细胞内完成的C.质粒都可作为载体D.蛋白质的结构成分为合成目的基因提供资料4.下列哪项不是基因工程中经常使用的用来运载目的基因的载体A.细菌质粒B.噬菌体C.动植物病毒D.细菌核区的DNA5.基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。
在基因操作的基本步骤中,不进行碱基互补配对的是A.人工合成目的基因B.目的基因与运载体结合C.将目的基因导入受体细胞D.目的基因的检测表达6.不是基因工程方法生产的药物是A.干扰素B.白细胞介素C.青霉素D.乙肝疫苗7.在基因工程中用来修饰改造基因的工具是A.限制酶和连接酶B.限制酶和水解酶C.限制酶和运载酶D.连接酶和运载酶8.下列哪项叙述不是运载体必须具备的条件A.具有某些标记基因B.决定宿主细胞的生存C.能够在宿主细胞中复制D.有一个或多个限制酶切点9.水母发光蛋白由236个氨基酸构成,其中有三种氨基酸构成发光环,现已将这种蛋白质的基因作为生物转基因的标记。
在转基因技术中,这种蛋白质的作用A.促使目的基因导入宿主细胞中B.促使目的基因在宿主细胞中复制C.使目的基因容易被检测和选择D.使目的基因容易成功表达10.应用基因工程技术诊断疾病的过程中必须使用基因探针才能达到检测疾病的目的。
这里的基因探针是指A.用于检测疾病的医疗器械B.用放射性同位素或荧光分子等标记的DNA分子10/ 1C.合成β—球蛋白的DNAD.合成苯丙氨酸羟化酶的DNA片段11.基因工程第一步的一种方法是把所需的基因从供体细胞内分离出来,这要利用限制性内切酶。
第18讲基因工程目录01 基因工程101 基因工程1.(不定项)聚合酶链式反应(PCR)是一种体外扩增DNA片段的技术。
某DNA片段的PCR反应程序如图所示。
下列叙述错误的是()A.预变性可促进模板DNA边解旋边复制B.退火是让解旋状态模板DNA恢复双螺旋C.延伸结束后,新片段中的引物将被切除D.终延伸可使目的基因的扩增更加充分【答案】ABC【分析】PCR过程为①变性,当温度超过90①时,氢键断裂,双链DNA解聚为单链;①复性,当温度降低到50①左右时,两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合;①延伸,温度上升到72①左右时,溶液中的四种脱氧核苷酸在耐高温的DNA聚合酶的作用下,根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。
【详解】A、预变性的目的是破坏DNA中可能存在的较难破坏的复杂二级结构,使DNA充分变性,A错误;B、退火是让两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合,B错误;C、延伸结束后,新片段中不会切除引物,C错误;D、终延伸过程是为了让引物完全延伸并让单链产物完全复性形成双链结构,可使目的基因的扩增更加充分,D正确。
故选ABC。
2.R型细菌生长至一定阶段会分泌感受态因子,诱导感受态特异蛋白质的表达;使细胞表面的DNA结合蛋白及核酸酶裸露,具有与DNA结合的活性。
S型细菌中控制荚膜形成的S基因吸附在R型细菌上即可整合到R型细菌的基因组中,完成转化。
据此解释格里菲思实验中只有少数R型细菌发生转化的原因,错误的是()A.S基因只有从加热杀死的S型细菌中释放出来才能促成R型细菌的转化B.只有少数的S基因可吸附在R型细菌上,完成部分R型细菌的转化C.蛋白质和DNA对高温的耐受力不同是导致蛋白质不是转化因子的原因D.R型细菌的转化与S基因的数量、R型细菌的状态有关【答案】A【详解】A、S基因从获得S型细菌中释放出来也能促成R型细菌的转化,A错误;B、因为R型细菌只有进入感受态才相对比较容易接受外源基因,而即使进入了感受态,也会受到外源基因大小等各种因素的影响,从而只有少数的S基因可吸附在R型细菌上,完成部分R型细菌的转化,B正确;C、蛋白质空间结构不稳定容易受到高温等因素的影响而变性,DNA空间结构为双螺旋结构较稳定;蛋白质和DNA对高温的耐受力不同是导致蛋白质不是转化因子的原因,C正确;D、转化效率受外源基因大小、数量、细菌密度及生长状况等因素的影响,故R型细菌的转化与S基因的数量、R型细菌的状态有关,D正确。
基因工程习题答案基因工程,又称DNA重组技术,是一种按照人们的意愿,将不同来源的基因按预先设计好的蓝图,在体外构建杂种DNA分子,然后导入活细胞,以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、生产新产品的技术。
基因工程在医学、农业、工业等领域都有着广泛的应用。
1. 基因工程的基本步骤:- 目的基因的获取:从生物体中提取出所需的基因。
- 基因载体的构建:将目的基因插入到载体DNA中,常用的载体有质粒、病毒等。
- 转化:将重组DNA分子导入宿主细胞。
- 筛选:通过特定的标记基因筛选出含有重组DNA的细胞。
- 表达:在宿主细胞中表达目的基因,产生所需的蛋白质或性状。
2. 基因工程的应用:- 农业:通过基因工程改良作物,提高作物的抗病性、抗旱性、产量等。
- 医学:生产重组蛋白药物,如胰岛素、干扰素等。
- 工业:利用基因工程生产特定的工业酶,提高生产效率。
3. 基因工程的伦理和安全性问题:- 伦理问题:基因工程可能涉及到对生物的改造,需要考虑其对自然生态的影响。
- 安全性问题:基因工程产品可能对人体健康和环境安全造成影响,需要严格的安全性评估。
4. 基因工程的前景:- 随着技术的进步,基因工程在疾病治疗、生物制药、环境保护等方面将有更大的发展空间。
- 同时,也需要加强相关法律法规的建设,确保基因工程的健康发展。
5. 习题答案:- 习题一:基因工程中常用的载体有哪些?答案:常用的载体包括质粒、噬菌体、人工染色体等。
- 习题二:基因工程在医学上的应用有哪些?答案:基因工程在医学上的应用包括生产重组蛋白药物、基因治疗、疾病诊断等。
通过以上内容的学习,可以对基因工程有一个基本的了解,同时认识到其在社会和科学发展中的重要性。
在实际应用中,需要综合考虑技术、伦理和安全等多方面因素,以确保基因工程的可持续发展。
《基因工程》习题集第一章基因工程概述1.什么是基因工程,基因工程的基本流程?2.基因工程诞生的条件与标志分别是什么?3.简述基因工程的发展简史。
4.基因工程有哪些主要应用?5.通过本章的学习,请举两个基因工程应用的具体例子并加以简单说明。
第二章基因工程的载体和工具酶1. 基因工程载体必须满足哪些基本条件?2. 质粒载体有什么特征,有哪些主要类型?3. 噬菌体载体有哪些?携带能力分别有多大?4. 什么是人工微小染色体?有哪些类型?5. 什么是穿梭载体?6. 表达载体应该具备什么条件?7. 限制性内切核酸酶的特点与使用注意事项有哪些?8. DNA聚合酶和Klenow大片段各有什么作用?9. DNA连接酶在什么情况下使用?如何将不同DNA分子末端进行连接?10. 碱性磷酸酶有什么作用?11. 末端脱氧核苷酸转移酶有哪些作用?12. 在基因工程研究和应用中,为什么必须使用载体来克隆外源DNA片段?13. 分析影响限制性内切核酸酶酶切的因素有哪些?14. 举例说明大肠杆菌DNA聚合酶Ι在基因工程中的应用。
15. 请描述用载体pUC18来克隆DNA片段的过程。
在这个克隆实验中,你怎样选择含有克隆片段的重组子?第三章基因工程的常规技术1. 琼脂糖凝胶电泳的原理是什么2. 琼脂糖凝胶电泳的影响因素有哪些?3. 探针有哪些类型?探针标记有哪些方法?4. 探针的间接标记有什么优点?什么是ABC荧光(显色酶)标记法?5. Southern杂交的基本原理、流程与主要目的分别是什么?6. Northern杂交的基本原理、流程与主要目的分别是什么?7. Western杂交的基本原理、流程与主要目的分别是什么?8. 菌落(嗜菌斑)原位杂交的基本原理、流程与主要目的分别是什么?9. 简述PCR技术的基本原理。
10. PCR反应体系的主要成分与主要程序是怎样的?11. 提高PCR反应特异性的因素有哪些?12. 什么是逆转录PCR?13. 什么是反向PCR?14. 什么是多重PCR?15. 什么是荧光定量PCR?16. 什么是基因芯片技术?17. DNA芯片有哪些主要的应用?18. 什么是蛋白质芯片?19. 什么是基因组文库?其构建方法是怎样的?20. 什么是cDNA文库?它的构建流程是什么?21. 构建cDNA文库需要用到哪些工具酶?22. 合成cDNA第二条链有哪些方法?23. 简述酵母双杂交系统的基本原理。
基因⼯程练习题(附答案)基因⼯程练习题1、在基因⼯程中使⽤的限制性核酸内切酶,其作⽤是( )A、将⽬的基因从染⾊体上切割出来B、识别并切割特定的DNA核苷酸序列C、将⽬的基因与运载体结合D、将⽬的基因导⼊受体细胞2、基因⼯程中常⽤细菌等原核⽣物作受体细胞的原因不包括( )A、繁殖速度快B、遗传物质相对较少C、多为单细胞,操作简便D、DNA为单链,变异少3、基因⼯程是DNA分⼦⽔平的操作,下列有关基因⼯程的叙述中,错误的是( )A、限制酶只⽤于切割获取⽬的基因B、载体与⽬的基因可以⽤同⼀种限制酶处理C、基因⼯程所⽤的⼯具酶是限制酶,DNA连接酶D、带有⽬的基因的载体是否进⼊受体细胞需检测4、运⽤现代⽣物技术,将苏云⾦芽孢杆菌的抗⾍基因整合到棉花细胞中,为检测实验是否成功,最⽅便的⽅法是检测棉花植株是否有( )A、抗⾍基因B、抗⾍基因产物C、新的细胞核D、相应性状5、转基因动物转基因时的受体细胞是( )A、受精卵B、精细胞C、卵细胞D、体细胞6、基因⼯程中常见的载体是( )A、质体B、染⾊体C、质粒D、线粒体7、⽔母发光蛋⽩由236个氨基酸构成,其中Asp、Gly、Ser构成发光环,现已将这种蛋⽩质的基因作为⽣物转基因的标记,在转基因技术中,这种蛋⽩质的作⽤是( ) A、促使⽬的基因导⼊宿主细胞中B、促使⽬的基因在宿主细胞中复制C、使⽬的基因容易被检测出来D、使⽬的基因容易成功表达8、运⽤现代⽣物技术的育种⽅法,将抗菜青⾍的Bt基因转移到优质油菜中,培育出转基因抗⾍的油菜品种,这⼀品种在⽣长过程中能产⽣特异的杀⾍蛋⽩质,对菜青⾍有显著抗性,能⼤⼤减轻菜青⾍对油菜的危害,提⾼油菜产量,减少农药使⽤,据以上信息,下列叙述正确的是( )A、Bt基因的化学成分是蛋⽩质B、Bt基因中有菜青⾍的遗传物质C、转基因抗⾍油菜能产⽣杀⾍蛋⽩是由于具有Bt基因D、转基因抗⾍油菜产⽣的杀⾍蛋⽩是⽆机物9、⼈的糖蛋⽩必须经内质⽹和⾼尔基体进⼀步加⼯合成,通过转基因技术,可以使⼈的糖蛋⽩基因得以表达的受体细胞是( )A、⼤肠杆菌B、酵母菌C、T噬菌体 D、质粒DNA410、不属于质粒被选为基因运载体的理由是()A.能复制 B.有多个限制酶切点C.具有标记基因D.它是环状DNA11.下列关于各种酶作⽤的叙述,不正确的是()A.DNA连接酶能使不同脱氧核苷酸的磷酸与脱氧核糖连接B.RNA聚合酶能与基因的特定位点结合,催化遗传信息的转录C.⼀种DNA限制酶能识别多种核苷酸序列,切割出多种⽬的基因D.胰蛋⽩酶能作⽤于离体的动物组织,使其分散成单个细胞12、治疗⽩化病、苯丙酮尿症等⼈类遗传疾病的根本途径是A、⼝服化学药物B、注射化学药物C、利⽤辐射或药物诱发致病基因突变D、采取基因疗法13.下列与基因⼯程⽆关的是( )A、培养利⽤“⼯程菌”⽣产胰岛素B、基因治疗C、产⽣⼈胰岛素的⼤肠杆菌D、杂交育种14.基因⼯程的设计施⼯是在什么⽔平上进⾏的 ( )A.细胞B.细胞器C. 原⼦D.分⼦15.⼈胰岛细胞能产⽣胰岛素,但不能产⽣⾎红蛋⽩,据此推测胰岛细胞中()A.只有胰岛素基因B.⽐⼈受精卵的基因要少C.既有胰岛素基因,也有⾎红蛋⽩基因和其他基因D.有胰岛素基因和其他基因,但没有⾎红蛋⽩基因16、能够使植物体表达动物蛋⽩的育种⽅法是()A、单倍体育种B、杂交育种C、基因⼯程育种D、多倍体育种17、要彻底治疗⽩化病必须采⽤()A.基因治疗 B.医学⼿术C.射线照射 D.⼀般药物18、下列哪项不是基因⼯程中经常使⽤的⽤来运载⽬的基因的载体()A、细菌质粒B、噬菌体C、动植物病毒D、细菌核区的DNA19、在基因⼯程中,作为基因运输⼯具的运载体,下列特征除哪项外,都是运载体必须具备的条件()A、能够在宿主细胞中复制,并稳定地保存B、具有多个限制酶切点C、必须是细菌的质粒或噬菌体D、具有某些标记基因20、1993年,我国科学⼯作者培育成的抗棉铃⾍的转基因抗⾍棉,其抗⾍基因的来源()A.普通棉花的基因突变B.棉铃⾍变异形成的致死基因C.寄⽣在棉铃⾍体内的线⾍D.苏云⾦芽孢杆菌体内的抗⾍基因21.正确表⽰基因操作“四步曲”的是()①提取⽬的基因②⽬的基因导⼊受体细胞③⽬的基因与运载体的结合④⽬的基因的检测和表达A.①②③④B.④①③②C.①③②④D.③①②④22.现有⼀长度为1000碱基对(bp)的DNA分⼦,⽤限制性核酸内切酶EcoRI酶切后得到的DNA分⼦仍是1000bp,⽤KpnI单独酶切得到400bp和600bp两种长度的DNA分⼦,⽤EcoRI、KpnI同时酶切后得到200bp和600bp两种长度的DNA分⼦。
基因工程测试题及答案一、选择题(每题2分,共10分)1. 基因工程中常用的限制酶主要来源于:A. 病毒B. 细菌C. 真菌D. 植物答案:B2. 下列哪项不是基因工程的基本步骤?A. 目的基因的获取B. 目的基因的克隆C. 目的基因的表达D. 目的基因的降解答案:D3. 基因工程中常用的载体不包括:A. 质粒B. 噬菌体C. 人工染色体D. 病毒答案:D4. 基因工程中,用于连接目的基因和载体的酶是:A. 限制酶B. DNA连接酶C. DNA聚合酶D. 反转录酶答案:B5. 基因工程中,用于将重组DNA导入受体细胞的方法不包括:A. 转化B. 转染C. 转导D. 转录答案:D二、填空题(每题2分,共10分)1. 基因工程中,将外源基因导入植物细胞的方法主要有______和______。
答案:农杆菌介导法;基因枪法2. 在基因工程中,______是将目的基因插入到载体DNA分子中的关键步骤。
答案:克隆3. 基因工程中,______是将重组DNA导入受体细胞的常用方法。
答案:转化4. 基因工程中,______是将目的基因表达成蛋白质的步骤。
答案:表达5. 在基因工程中,______是检测目的基因是否成功表达的重要手段。
答案:分子杂交三、简答题(每题5分,共20分)1. 简述基因工程在医学领域的应用。
答案:基因工程在医学领域的应用包括生产重组蛋白药物、基因治疗、疾病诊断、疫苗开发等。
2. 描述基因工程中目的基因的获取方法。
答案:目的基因的获取方法包括从基因文库中筛选、利用PCR技术扩增、人工合成等。
3. 解释基因工程中载体的作用。
答案:载体在基因工程中的作用是携带目的基因进入受体细胞,并在其中复制和表达。
4. 阐述基因工程中转化过程的重要性。
答案:转化过程是将重组DNA导入受体细胞的关键步骤,它决定了目的基因能否在受体细胞中稳定存在和表达。
四、论述题(每题10分,共20分)1. 论述基因工程在农业领域的应用及其可能带来的问题。
小学基因工程试题及答案一、选择题(每题2分,共20分)1. 基因工程中常用的运载体是:A. 质粒B. 病毒C. 线粒体D. 叶绿体答案:A2. 基因工程的基本操作步骤不包括:A. 目的基因的获取B. 目的基因的表达C. 目的基因的复制D. 目的基因的检测和表达产物的鉴定答案:C3. 基因工程中,限制性核酸内切酶的主要作用是:A. 连接目的基因和运载体B. 切割目的基因C. 切割运载体D. 切割DNA分子答案:D4. 基因工程中,用于检测目的基因是否导入受体细胞的方法是:A. DNA分子杂交技术B. 抗原-抗体杂交技术C. 核酸探针技术D. 以上都是答案:D5. 基因工程在农业上的应用不包括:A. 培育抗虫作物B. 培育抗病作物C. 培育抗旱作物D. 培育抗酸雨作物答案:D二、填空题(每空1分,共20分)1. 基因工程是指按照人们的意愿,对生物的基因进行改造,使生物表现出人们所希望的_________。
答案:性状2. 基因工程中,常用的运载体必须具备的条件包括:能在宿主细胞中稳定存在并复制、具有_________位点、具有标记基因等。
答案:限制酶3. 基因工程中,目的基因与运载体结合后,需要通过_________技术将重组DNA导入受体细胞。
答案:转化4. 基因工程在医学上的应用包括:生产_________、生产疫苗、基因治疗等。
答案:干扰素5. 基因工程在环境保护上的应用包括:利用基因工程菌处理污水中的_________,利用基因工程植物处理重金属污染等。
答案:有机物三、简答题(每题10分,共20分)1. 简述基因工程在医药领域的应用。
答案:基因工程在医药领域的应用主要包括生产重组蛋白药物、生产疫苗、基因治疗等。
通过基因工程技术,可以将目的基因导入微生物、动物或植物细胞中,使其表达出所需的药物蛋白或疫苗成分,从而用于疾病的预防和治疗。
2. 阐述基因工程在农业上的主要应用。
答案:基因工程在农业上的主要应用包括:培育抗虫、抗病、抗旱等抗逆性作物,提高作物的产量和品质;通过基因工程改良作物的营养成分,如提高作物中的维生素和蛋白质含量;利用基因工程改良作物的生长周期,使其适应不同的气候和土壤条件。
1、在序列5‘-CGAACATATGGAGT-3’中含有一个6bp的Ⅱ类限制性内切核酸酶的识别序列,该位点的序列可能是什么?答: II型限制性核酸内切酶的特点:1.识别、并切割双链DNA分子中特异序列的DNA内切酶。
2.识别序列为4-6碱基对的回文对称结构(旋转对称结构)。
3、切割产物末端:5’突出末端、3’突出末端、平头末端.该位点的回文序列是:5'-CATATG-32、Muller的PCR反应同大肠杆菌体内的DNA复制有哪些不同?你认为根本的差别在哪里?答:PCR用双引物,体内复制用单引物3、说明Southern杂交的原理和方法。
答:1975年Southern建立起来的一种杂交方法,属固相—液相杂交。
该法的主要特点是利用毛细现象将DNA转移到固体支持物上,称为Southern转移或Southern印迹 (Southern blotting)。
它首先用合适的限制性内切核酸酶将DNA切割,进行电泳分离后,利用干燥的吸水纸产生毛细作用,使液体经过凝胶,从而使DNA片段由液流携带从凝胶转移并结合在固体支持物表面。
4、什么是Klenow酶?有哪些活性?在基因工程中有什么作用?答:Klenow酶是1974年Klenow用枯草杆菌蛋白酶水解DNA聚合酶I,得到两个片段,其中大片段的分子量为75kDa,它具有5'-3'聚合酶和3'-5'外切核酸酶的活性,小片段具有5'-3'外切核酸酶活性。
由于大片段失去了DNA聚合酶I中会降解5'引物的5'-3'外切核酸酶的活性,所以在基因工程中更有用。
Klenow酶主要有下列用途:(1)修复反应,制备平末端可用Klenow酶修复限制性内切核酸酶或其他方法产生的5'或3'突出末端,制备平末端,这样可以使原来具有不相容的黏性末端的DNA片段通过平末端重组。
如在反应系统中加入放射性同位素标记的脱氧核苷酸,用这种末端填补的方法可以制备3'末端标记的探针。
基因工程复习题一、选择题1、下列有关基因工程中限制性内切酶的描述,错误的是()A 一种限制性内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列B 限制性内切酶的活性受温度影响C 限制性内切酶能识别和切割RNAD 限制性内切酶可从原核生物中提取2、利用外源基因在受体细胞中表达,可生产人类所需要的产品。
下列各项中能说明目的基因完成了在受体细胞中表达的是()A.棉花二倍体细胞中检测到细菌的抗虫基因B.大肠杆菌中检测到人胰岛素基因及其mRNA C.山羊乳腺细胞中检测到人生长激素DNA序列D.酵母菌细胞中提取到人干扰素蛋白3、采用基因工程技术将人凝血因子基因导入山羊受精卵,培育出了转基因羊。
但是,人凝血因子只存在于该转基因羊的浮汁中。
以下有关叙述,正确的是()A.人体细胞中凝血因子基因编码区的碱基对数目,等于凝血因子氨基酸数目的3倍B.可用显微注射技术将含有人凝血因子基因的重组DNA分子导入羊的受精卵C.在该转基因羊中,人凝血因子基因存在于乳腺细胞,而不存在于其他体细胞中D.人凝血因子基因开始转录后,DNA连接酶以DNA分子的一条链为模板合成mRNA4、我国科学家运用基因工程技术,将苏云金芽孢杆菌的抗虫基因导入棉花细胞并成功表达,培育出了抗虫棉。
下列叙述不正确的是()A.基因非编码区对于抗虫基因在棉花细胞中的表达不可缺少B.重组DNA分子中增加一个碱基对,不一定导致毒蛋白的毒性丧失C.抗虫棉的抗虫基因可通过花粉传递至近缘作物,从而造成基因污染D.转基因棉花是否具有抗虫特性是通过检测棉花对抗生素抗性来确定的5、基因工程技术可使大肠杆菌合成人的蛋白质。
下列叙述不正确的是()A.常用相同的限制性内切酶处理目的基因和质粒B.DNA连接酶和RNA聚合酶是构建重组质粒必需的工具酶C.可用含抗生素的培养基检测大肠杆菌中是否导入了重组质粒D.导入大肠杆菌的目的基因不一定能成功表达6、下列关于基因工程应用的叙述,正确的是()A.基因治疗就是把缺陷基因诱变成正常基因B.基因诊断的基本原理是DNA分子杂交C.一种基因探针能检测水体中的各种病毒D.原核基因不能用来进行真核生物的遗传改良7、在已知某小片段基因碱基序列的情况下,获得该基因的最佳方法是()A.用mRNA为模板逆转录合成DNA B.以4种脱氧核苷酸为原料人工合成C.将供体DNA片段转入受体细胞中,再进一步筛选D.由蛋白质的氨基酸序列推测密码子9、通过基因工程的方法,能使马铃薯块茎含有人奶主要蛋白。
《基因工程》课程习题第二章习题一、单选题1.在基因操作中所用的限制性核酸内切酶是指( B )A.I类限制酶 B. II类限制酶 C. III类限制酶 D.核酸内切酶 E. RNAase2.下列关于同裂酶的叙述错误的是( B )A.是从不同菌种分离到的不同的酶,也称异源同工酶。
B.它们的识别序列完全相同。
C.它们的切割方式可以相同,也可以不同。
D.有些同裂酶识别的完整序列不完全一样,但切割位点间的序列一样。
E.两种同裂酶的切割产物连接后,可能会丢失这两个同裂酶的识别位点。
3. 多数限制酶消化DNA的最佳温度是( A )A. 37℃B.30℃C.25℃D.16℃E.33℃4. 下列关于限制酶的叙述错误的是( B )A. I类限制酶反应需要 Mg2+、ATP和S-腺苷蛋氨酸。
B. II类限制酶反应需要Mg2+、ATP。
C. III类限制酶反应需要Mg2+、ATP,S-腺苷蛋氨酸能促进反应,但不是绝对需要。
D. I、III类限制酶对DNA有切割和甲基化活性,II类限制酶对DNA只有切割活性而无甲基化活性。
E. II类限制酶要求严格的识别序列和切割点,具有高度精确性。
5. 如果一个限制酶识别长度为6bp ,则其在DNA上识别6bp的切割概率为( D )A. 1/44B. 1/66C. 1/64D.1/46E. 1/1066. 多数II类限制酶反应最适PH是 ( C )A. PH:2-4B. PH:4-6C. PH:6-8D. PH:8-10E. PH:4-107. 下列关于限制酶反应的说法错误的是 ( D )A. 限制酶识别序列内或其邻近的胞嘧啶、腺嘌呤或尿嘧啶被甲基化后,可能会阻碍限制酶的酶解活性。
B. 许多限制酶对线性DNA和超螺旋DNA底物的切割活性是有明显差异的。
C. 有些限制酶对同一DNA底物上不同酶切位点的切割速率会有差异。
D. 限制酶反应缓冲系统一般不用磷酸缓冲液,是由于磷酸根会抑制限制酶反应。
E. BSA对许多限制酶的切割活性都有促进作用,所以酶切反应中常加入一定量的BSA。
8. II类限制酶反应中必须的阳离子是( C )A. Na +B. Ca2+C. Mg2+D. Zn2+E. Mn2+9. RFLP形成的原因是( A )A. 由于遗传变异造成同源染色体中碱基的随机变化。
B. 使用不同的限制性内切酶进行切割。
C. 杂交时使用不同的探针。
D. 每种染色体存在两条。
E. 提取不同的染色体DNA酶切。
10. 下列关于限制酶命名的表示方法,正确的是( E )A. Sau.3A IB. B.amH IC. pst ID. Ecor IE. Hind III11. 需进行DNA部分酶切时,控制下列哪种条件最合适( D )A. 反应时间B. 反应体积C. PHD. 限制酶量E.反应温度12. 下列酶在反应中不需要ATP的是( D )A. E coKB. T4DNA连接酶C. BamH ID. EcoBE. DNA pol I13. 限制性内切酶可特异性识别 ( B )A. 双链DNA的特定碱基对B. 双链DNA的特定碱基序列C. 单链RNA的特定碱基序列D. 单链DNA的特定碱基序列 E 双链RNA的特定碱基对14. 下列与RFLP相关的一条是( D )A. 不同限制酶在单个染色体DNA上的限制性图谱。
B. 两种物种个体间的限制性图谱。
C. 同一个体等位基因的限制性图谱。
D. 同一物种不同个体的限制性图谱。
E. 非同源染色体用同种限制酶切形成的限制酶图谱。
15.限制酶的星号活性是指在非正常条件下,限制酶( A )A. 识别和切割序列发生变化。
B. 切割活性大大提高。
C. 识别和切割序列与原来完全不同。
D. 可以任意切割DNA。
E. 只能部分切割DNA。
二、多选题1. 下列因素中影响限制酶切割的有( A,B,C,D,E)A. EDTA浓度B. 甘油浓度C. DNA纯度D. 酶的自身活性E. 盐浓度2. 限制酶反应中出现星活性的可能原因是(A B D E)A.酶浓度太高 B 低盐 C 盐浓度过高 D 高PH E 甘油浓度>5%(V/V)3.限制酶切割后的DNA电泳得到的电泳条带有些扩散,可能原因是(B,C,D,E)A.酶失活 B 有蛋白质与DNA结合 C 酶切条件不合适 D 有外切核酸酶污染 E 星号活性4.下列有关回文序列的描述正确的是(A,B,C)A.是II类限制酶的识别序列 B 是某些蛋白的识别序列 C 是基因的旁侧序列 D 是高度重复序列 E 是卫星序列5.下列有关回文序列的一般特征正确的是(B,C,D,E)A.可增强基因表达 B 有对称轴 C 是自我互补的序列D.两条链从5‘-3‘方向的序列一致 E 是II类限制酶的识别序列6.关于II类限制酶说法正确的是(B,D)A.具内切核酸酶和甲基化酶活性 B.仅有内切核酸酶活性C.只识别非甲基化的DNA序列D. II类限制酶反应条件只需要Mg2+ E. II类限制酶反应需要Mg2+,ATP7.通过限制性片段分析,可对等位基因进行精确比较是因为(B,C)A.限制酶只切割两个变异等位基因中的一个 B.限制酶位点可作为遗传标记C.它不依赖变异的等位基因的产物的功能D.不同组织等位基因的核苷酸序列存在差异 E.同一组织等位基因核苷酸序列不会完全相同8. 下列关于II类限制酶的叙述正确的是(B,C,D,E)A.它既有内切酶的活性,也有外切酶活性 B.在特异位点对DNA进行切割C.同一限制酶切割双链DNA时产生相同的末端序列 D.有些限制酶切割双链DNA产生粘末端E.有些限制酶切割双链DNA产生平末端9.限制酶反应结果若显示没有切割,可能原因是(A,B,C,D,E)A.限制酶无活性 B 存在抑制剂如SDS,EDTA C DNA不纯 D.缓冲液组成不合适 E DNA甲基化10.下列关于限制酶的叙述正确的是(B,C,D)A.在限制与修饰系统中,修饰主要是甲基化作用,一旦位点被甲基化了,其他限制酶就不能切割了。
B.限制酶在DNA中的识别/切割位点的二、三级结构影响酶切效率。
C.如果限制酶的识别位点位于DNA分子末端,那么接近末端的程度也影响切割。
D.已知某限制酶在一环状DNA上有3个切点,因此该酶切割这一环状DNA,可得到3个片段。
E.能产生防御病毒侵染的限制酶的细菌,其自身的基因组中没有该酶识别的序列。
11.酶在储存过程中迅速失活,可能原因是(A,B,C,E)A.储存温度不合适 B 稀释后储存 C 储存缓冲液不合适 D.分装后储存 E 储存缓冲液中蛋白浓度低12.限制酶切反应结果显示为部分切割,可能原因是(A,B,C,D,E)A.限制酶失活 B 有抑制剂如SDS,EDTA等存在 C 反应条件不合适 D DNA不纯 E DNA结构(线形或超螺旋)的影响13.如果用限制酶切割DNA后得到的片段比预期的多,可能原因是(B,C,E)A.限制酶失活 B 限制酶的星号活性 C 有其他限制酶污染 D 有抑制剂存在 E 测试DNA中有其他DNA污染14.限制酶切割后的产物连接反应效果差,可能原因是(A,B,C,E)A.限制酶去除不完全 B 平端连接 C 核酸外切酶污染 D.连接反应温度低于16℃E.从限制酶消化中带来太高浓度的磷酸盐或其他盐类15.下列限制酶属同裂酶的是(A,B,D,E)A.BamHI G↓GATCC Sau3AI ↓GATCCCTAG↑G CTAG↑B. Sal I G↓TCGAC Xho I C↓TCGAGCAGCT↓G GAGCT↓CC. BamH I G↓GATCC EcoR I G↓AATTCCCTAG↓G CTTAA↓GD. Hpa II G↓CGC Msp I C↓CGGCGC↓G GGC↓CE. Xba I T↓CTAGA Nhe I G↓CTAGCAGATC↓T CGATC↓G三.填空题1.限制酶是一类专门切割 DNA 的酶,它能特异性识别切割双链(单、双)DNA。
2.II型限制酶识别位点一般长度为 4~6 个核苷酸对。
3.个体之间DNA限制酶片段长度存在差异称限制性片段长度多态性(RFLP)。
4.限制酶命名采用Smith和A thens提议的方案,第一个字母大写取自来源细菌的属名;第二、三个字母取自来源细菌的种名;第四个字母(如果有)取自来源菌的株系。
5.需要部分酶切时可采取的方法有(1)减少酶的用量(2)缩短反应时间(3)增大反应体积。
6.限制酶识别序列为n个碱基,则其切割频率的理论值应是 4n。
7.限制性内切酶通常保存在 50% 浓度的甘油溶液中。
8.甘油浓度是导致一些酶的星活性的原因之一,在酶切时反应体系中的甘油浓度应控制在 5% 以下。
9.限制与修饰是宿主的一种保护体系,它是通过对外源DNA的限制和对自身DNA的修饰来实现的。
10.II型限制酶既具有识别位点的专一性,也具有切割位点的专一性。
它作用时需要 Mg2+ 离子作辅助因子。
四.简答题1.在酶切缓冲液中加入牛血清白蛋白(BSA)的目的与机理是什么?答:目的是保护酶的活性;机理是通过提高反应体系中蛋白质的浓度,防止内切酶失活。
2.如果用EcoR I酶切DNA时出现星活性,试分析原因?答:主要原因有:酶浓度太高;高PH;低盐;含Mn2+、Cu2+等非Mg2+金属离子;甘油浓度高于5%;存在某些有机溶剂。
3.下列序列中哪些可能是II类限制酶的识别序列?ATATCG CCCGGG GATATC AGCCGA GAGTC答:CCCGGG GATATC GAGTC4.用Klenow酶可将5‘粘末端填补成平末端,而导致某些限制位点消失,下列酶切后用klenow处理再连接不会丢失识别位点的是哪些?XmaI C↓CCGGG BssH II G↓CGCGC PstI CTGCA↓GHhaI GCG↓C HpaII G↓CGC答:BssH II, HpaII5.当两种限制酶反应条件不同时,若要用双酶切,应采取什么措施?为什么?答:要避免星活性及部分酶切。
(1)先用低盐缓冲液中活性最高的酶切,再补盐和第二种酶;(2)用一种酶消化后,以酚:氯仿:异戊醇抽提,再经乙醇沉淀,将DNA重新溶解与适合第二种酶的缓冲液,加第二种酶消化;(3)先低温酶,后高温酶;(4)使用通用缓冲液。
6.试计算下列三种限制酶各自在某染色体DNA序列上的切割概率Sau3A I GATC Pst I CTGCAG Hinf I GANTCAcy I GPuCGPyC答: 1/44;1/46;1/44;(1/44)x(1/22)7.一长为4.2kb的DNA片段,分别用EcoRI、PstI及EcoRI+PstI消化,电泳结果如下图所示,请根据结果绘出该片段限制性图谱答:回收与连接一.单选题1.用DEAE膜片法回收电泳分离的DNA片段时,在紧靠目的DNA片段前方的凝胶切一裂缝,以插入DEAE纤维素膜,该裂缝长度与DNA条带相比应(C)A.略短 B. 等长 C. 略长 D. A或B都可 E . A、B、C都可2.用透析膜插片凝胶电泳法回收DNA片段时,再区带前挖一小槽,将透析膜置于槽中,这时应注意(B)A.透析膜要接触DNA区带一侧的胶缘。