生物科技公司实验室高效液相色谱仪使用操作规程及注意事项

高效液相色谱仪操作一、简介高效液相色谱仪（High-performance liquid chromatography，HPLC）是一种常用的分析仪器，主要用于分离、定量和检测样品中的化合物。

它具有分离效率高、分离时间短、操作方便等优点，广泛应用于制药、化妆品、食品、环境监测等领域。

本文将为您介绍高效液相色谱仪的操作步骤和注意事项。

二、操作步骤1.准备工作在使用高效液相色谱仪之前，需要确保仪器和所需材料的准备工作已完成。

包括以下几个方面： - 选用合适的色谱柱：根据样品的特性和分离要求，选择相应的色谱柱类型和规格。

- 准备好流动相：根据试验要求和分析方法，配置好正确的流动相，确保其符合实验要求。

- 检查仪器状态：检查仪器的电源是否正常，色谱柱是否安装正确，流速控制装置是否工作正常等。

2.样品准备•将待分析样品溶解或稀释到合适的浓度。

•过滤样品以去除杂质，确保样品的纯度和稳定性。

•如果需要，可以对样品进行衍生化处理，以提高分离效果。

3.仪器设置•打开操作软件，确保仪器和计算机正常连接。

•根据分析要求设置进样体积、流速、检测器参数等。

•在进样器中加入样品，设置为自动进样或手动进样。

4.开始分离•启动色谱泵，使流动相从色谱柱中流动，建立起足够的流速。

•启动检测器，选择适当的检测模式和波长。

根据样品特性选择合适的检测器类型，如紫外/可见光检测器、荧光检测器等。

•开始记录数据，在色谱软件上观察色谱图的变化，根据需要进行峰的识别和峰面积的积分计算。

5.数据分析•根据分析要求，对色谱图进行峰的分析和峰面积的计算。

•根据标准曲线或对照品，进行定量分析。

三、注意事项1.安全操作：使用高效液相色谱仪时，应注意仪器操作安全，避免发生意外事故。

如注意电源和高压电缆的连接是否牢固，避免漏电和触电危险。

2.样品准备：样品准备过程中，应避免受到外界污染和杂质的干扰，保证样品的纯度和稳定性。

3.色谱柱的选择：根据样品的性质和分离要求，选用合适的色谱柱。

高效液相色谱仪的操作步骤及注意事项一、操作步骤：1.开机前先将流动相过滤和超声：水流动相用混合滤膜（0.2μm）过滤,有机流动相用有机滤膜过滤，之后超声脱气15-20分钟。

（过滤的目的是除去流动相里的杂质，以免杂质进入色谱柱堵塞色谱柱；超声的目的是排除流动相里面的气体，以防气体进入色谱柱损害色谱柱，影响柱效能）注：试验过程中由于只有0.45μm的混合滤膜，第一次使用时感觉效果不好，于是过滤水时同时使用两张混合滤膜过滤水流动相。

2.超声结束后，将流动相放置到规定位置（1号泵接水流动相，2号泵接有机流动相），开机逐个排气（先启动泵，排气结束后再打开检测器）。

3.排气结束后，关闭所有排气阀。

先用纯有机流动相冲洗色谱柱20-30分钟，基线走稳之后，再打开水流动相（注意：水流动相和有机流动相流速之和为1ml/min），继续走基线，直到基线平稳。

注意：实验结束后，再用纯有机流动相冲洗色谱柱20-30分钟，冲出色谱柱内残留的样品物质，预防长时间不使用仪器样品的残留物质沉积在色谱柱内，导致下次使用难以冲出，色谱柱柱压偏高，基线不稳，出现大量鬼峰。

（不同规格的色谱柱其所允许的最大流速之和不同）4.走基线时，应将进样阀处于Load状态，用注射器进样时应快速进样，进样后将进样阀立即扳回到Inject状态，此时液相系统开始进入采样状态。

采样结束后，可在数据分析里面查看分析结果并可进行编辑，也可以在脱机状态下查看样品的分析结果并编辑。

二、使用中常见的问题及注意事项1.过滤时有时会出现流动相漏液。

可能的原因是滤膜放置不正确（有点偏）和接头有点错位，导致流动相从缝隙中漏出。

注意：操作时，应先向滤瓶内倒入少量流动相，观察是否漏液并开始过滤，若未漏液，再向滤瓶中添加流动相。

2.超声时，瓶外液体的液面应高于瓶内流动相的液面，否则流动相内的气体可能无法排出液体，气体仍然残留在流动相内，以致开机排气时无气泡排出。

3.开机排气结束后，应先将流动相流量调小，再关闭排气阀，否则会导致柱压瞬间升高超过压力上限，致使泵停止工作。

高效液相色谱仪安全操作规定一、前言高效液相色谱仪(HPLC)是一种灵敏、准确、高效的分离和定量分析技术。

但是，如果不正确地操作HPLC，会造成安全事故和设备损坏。

为了确保实验室人员和设备的安全，特制定以下操作规定。

二、操作前的准备工作1.在使用HPLC之前，应仔细阅读设备操作手册和相关化学品安全资料，确保自己了解HPLC的操作原理和已知的安全提示。

2.总是戴上安全眼镜和实验室外套、手套。

3.确保工作区域清洁，用于分析的试样和溶剂必须是纯净的。

4.使用合适的容器和标签标记所有样品和溶剂，确保容器盖子完全紧固并避免倾泻。

三、HPLC操作过程中的安全措施1.确定所有操作步骤和解决方案，确保混合物的比例和流量是准确的，避免因不正确的操作而产生安全隐患。

2.需要使用毒性或易燃的化合物时特别小心，确保其不与操作人员的皮肤和眼睛接触。

操作过程中要尽量避免吸入有毒气体或挥发性有机化合物。

3.在加热系统中使用加热棒时，必须正确地控制加热器温度，并确保加热棒与任何易燃或易爆物质保持安全距离。

4.在使用HPLC时，总是要注意设备、高压线路以及相关部件是否完好无损。

必要时，可以使用物料检查清单进行检查和维护。

5.当操作HPLC时必须避免任何不必要的移动和干扰，以确保设备免受损坏和人员安全。

6.完成实验后，必须仔细清理所有设备，特别是液体管路和溶解瓶。

处理过程中需要小心谨慎，避免溅出、散布和混合化学物品。

四、在实验室中进行HPLC操作的个人安全提示以下是在实验室中进行HPLC操作时需要注意的安全提示：1.避免高压泵和简单手动琼脂泳道中的任何泄漏。

2.避免发生应力。

3.不要将任何药物或物质注入琼脂泳道中。

4.使用牢固的安全带，在前面跑的样品数量超过一定数量时，必须进行维护和验证。

5.当进料水槽或样品浓度过高时，必须使用合适的洗手液和橙色印记保护皮肤，通过强光聚焦来检查洗手液和印记的情况。

五、总结在HPLC操作中，合理、规范的标准操作步骤是非常重要的，并且需要制定良好的设备日常维护策略。

高效液相色谱仪操作规程1开机先打开电脑，再依次接通2695分离单元、检测器和打印机的电源（注：在打开2424蒸发光散射检测器电源之前，先开启气体供应）。

接通2695分离单元后，约20秒仪器自检，约1分钟后，显示主屏幕，此时继续各部件的初始化，待主屏幕上主标题区出现“Idle”仪器自检通过，进入待命状态。

2溶剂管理系统的准备2.1流动相的脱气确认所有溶剂管路都充满溶剂，按[Menu/Status]，进入“Status（1）”屏幕，光标选“Degasser”按[Enter]显示选项屏幕，Mode为“on”。

2.2启动溶剂管理系统2.2.1干启动当溶剂的管路是干的或是需要更换溶剂时，在“Status（1）”屏幕下，按[Direct Function]，光标选中“Dry Prime”，按[Enter]，显示“Dry Prime”屏幕，按欲启动的溶剂管路的屏幕键，如[Open A]，光标选“Duration”，按数字键输入时间（一般为5分钟），按[Continue]，待限定时间结束后，重复操作，使实验所需的各溶剂管路均启动、排气并充满流动相。

2.2.2湿启动在“Status（1）”屏幕下，光标选“Composition”中欲使用的流动相，输入100%，按[Direct Function]，光标选“Wet prime”，按“Enter”，显示Wet prime”屏幕，输入流速和时间（5ml/min和5min）按[OK]。

待限定时间结束后，对每种流动相重复操作。

3样品管理系统的准备A管带黄色标记、B管带蓝色标记号、C管带红色标记、D管带绿色标记，绿色管为冲洗泵头用，白色管为冲洗进样器用，所用溶剂均为甲醇：水=50%（v/v）。

将样品瓶插到样品盘合适的位置，打开样品仓门，显示“Door is Open”屏幕，装入样品盘，按[Next]，直至所有样品盘装毕，关仓门。

4编辑分析方法及执行样品分析表4.1创建项目双击电脑桌面图标“Empower”，用户名输入“system”密码输入“manager”选中操作项目和色谱系统→确定。

高效液相色谱仪操作使用过程中的注意事项一，高效液相色谱仪操作过程：1、开机操作：（1）、打开电源，用Harb相连接时，注意Harb电源，打开计算机，打开Bootp Server（一般启动时已打开）；（2）、自上而下打开个组件电源，Bootp Server里显示有信号时（有六行字符），打开工作站（先打开On line）；（3）、打开冲洗泵头的10％异丙醇溶液的开关（需用针捅抽），控制流量大小，以能流出的最小流量为准；（4）、注意各流动相所剩溶液的容积设定，若设定的容积低于最低限会自动停泵，注意洗泵溶液的体积，及时加液；（5）、使用过程中要经常观察仪器工作状态，及时正确处理各种突发事件。

2、先以所用流动相冲洗系统一定时间（如所用流动相为含盐流动相，必须先用水冲洗20分钟以上再换上含盐流动相），正式进样分析前30min 左右开启D灯或W灯，以延长灯的使用寿命；3、建立色谱操作方法，注意保存为自己命名的Method，勿覆盖或删除他人的方法及实验结果；4、使用手动进样器进样时，在进样前和进样后都需用洗针液洗净进样针筒，洗针液一般选择与样品液一致的溶剂，进样前必须用样品液清洗进样针筒3遍以上，并排除针筒中的气泡；5、溶剂瓶中的沙芯过滤头容易破碎，在更换流动相时注意保护，当发现过滤头变脏或长菌时，不可用超声洗涤，可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗涤；6、实验结束后，一般先用水或低浓度甲醇水溶液冲洗整个管路30分钟以上，再用甲醇冲洗。

冲洗过程中关闭D灯、W灯；7、关机时，先关闭泵、检测器等，再关闭工作站，然后关机，最后自下而上关闭色谱仪各组件，关闭洗泵溶液的开关；8、使用者须认真履行仪器使用登记制度，出现问题及时向老师报告，不要擅自拆卸仪器。

（续）1、操作过程若发现压力很小，则可能管件连接有漏，注意检查。

当出现错误警告（各组件指示灯均为红色），一般为漏液，其中一个感应器中已有溶剂，漏液故障排除后，擦干，点击On line操作界面中的Instrument/System Off，然后再点击操作界面中的Instrument/System On即可。

高效液相色谱仪的操作流程和注意事项引言：高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种重要的分析仪器，广泛应用于化学、生物、医药等领域。

掌握正确的操作流程和注意事项，对保证分析的准确性和结果的可靠性至关重要。

下面将详细介绍高效液相色谱仪的操作流程和注意事项。

一、仪器准备在开始操作高效液相色谱仪之前，需要进行一些准备工作。

首先，检查仪器是否正常工作，例如电源是否正常接通，各个模块是否连接牢固等。

其次，确保色谱柱处于良好的工作状态，即没有泄漏和堵塞等问题。

最后，根据需要，选择合适的检测器，并校准相应的参数。

二、样品准备和进样样品的准备是操作高效液相色谱仪的关键一步。

首先，根据样品的性质选择合适的溶剂体系，并将样品完全溶解。

其次，为了提高分析的准确性，通常需要对样品进行预处理，例如磷酸酯酶的样品需要经过脱磷酸处理。

最后，将样品装入进样瓶中，根据仪器的要求设定进样量。

三、流动相的选择和准备流动相是高效液相色谱仪中的关键因素之一。

在选择流动相时，需要考虑样品的性质以及分析的目的。

常见的流动相包括有机溶剂、水以及它们的混合溶液。

在选择后，需要准备流动相，并进行除气处理以去除气泡。

此外，还要注意流动相的质量，例如pH值、浓度等。

四、色谱条件的设置色谱条件是操作高效液相色谱仪的关键之一。

根据分析的目的和样品的性质，需要设置合适的参数，例如流速、温度、梯度等。

在设置前，需要根据样品性质选择合适的色谱柱，并设定相应的温度以优化分离效果。

此外，还需要根据检测器的要求设定相应的参数。

五、数据采集和结果分析在操作高效液相色谱仪时，需要进行数据采集和结果分析。

首先，确保数据采集系统正常工作，并根据仪器的要求进行设定。

其次，启动数据采集并进行监控，及时记录实验过程中的各项指标。

最后，对采集的数据进行处理和分析，例如峰面积的计算、峰形的分析等。

注意事项：1. 严格按照操作流程进行操作，避免任意更改设置。

实验室高效液相色谱安全使用及注意事项高效液相色谱是一种非常常用的分析技术，广泛应用于化学、生物、医药等领域。

在实验室中使用高效液相色谱需要注意一些安全问题，本文将介绍高效液相色谱的使用方法以及注意事项，以帮助实验室工作者更好地使用高效液相色谱。

一、高效液相色谱的使用方法1. 实验前准备在进行高效液相色谱实验前，需要进行一些准备工作。

首先，要检查设备是否正常工作，包括系统的泵、检测器、进样器、柱等是否工作正常。

其次，要检查试剂的浓度和纯度是否符合要求。

最后，要准备好实验所需的溶液和样品，并按照实验要求进行处理和标记。

2. 操作步骤高效液相色谱的操作步骤包括：样品进样、柱温控制、流动相控制、检测器设置等。

具体步骤如下：（1）样品进样将样品注入进样器中，注意不要超出进样器的容积范围。

（2）柱温控制根据实验要求设置柱温，通常情况下柱温为室温或略高于室温。

（3）流动相控制设置合适的流动相组合和流速，以达到最佳分离效果。

（4）检测器设置根据实验要求选择合适的检测器，比如紫外检测器、荧光检测器等，并设置检测器的参数，如波长、灵敏度等。

3. 实验后处理实验结束后，需要对设备和试剂进行清洗和储存。

首先，要将进样器和柱进行清洗，以避免残留样品和流动相对下一次实验的影响。

其次，要将检测器进行清洗和维护，以保证检测器的正常工作。

最后，要妥善储存试剂和设备，以便下一次实验使用。

二、高效液相色谱的注意事项1. 实验室安全在使用高效液相色谱时，需要注意实验室的安全问题。

首先，要穿戴好实验室所需的防护设备，如实验服、手套、护目镜等。

其次，要保持实验室的整洁和干净，避免化学品的混合和交叉污染。

最后，要遵守实验室的规定和操作程序，以确保实验室的安全。

2. 操作注意事项在进行高效液相色谱实验时，需要注意以下几个方面：（1）样品的选择和准备在选择样品时，要注意样品的性质和纯度，以避免对实验结果的影响。

同时，要进行适当的样品处理和标记，以确保样品的准确性和可靠性。

高效液相色谱HPLC操作流程及注意事项高效液相色谱HPLC使用前期准备工作：1. 始终保持高效液相色谱仪器包括内在系统的清洁。

2. 室内温度始终保持恒定，因为室温的变化对高效液相色谱检测器有影响。

3. 所有溶液、试剂、样品、标准溶液、注射剂等都应事先准备好。

4. 最好提前准备好备用电源防止停电。

高效液相色谱HPLC操作流程：1．将已经过滤并脱气的流动相注入储液罐；2. 用流动相冲洗金属过滤器，然后将过滤器浸入储液罐的流动相中；3. 将储液罐放置在一定的高度，以避免由于搬运和其他操作人员的移动而造成不必要的跌落。

4. 然后按以下顺序依次启动高效液相色谱仪：泵→检测器→高效液相色谱软件→按预先计划的方法设置软件参数，如分析时间、检测波长、流速等。

5. 启动泵，运行5分钟，主要是为了排除系统中的气泡，结束后关闭所有排气阀；6. 然后按照预先计划的速度，以固定的速率，如1mL/min左右，运行流动相，走基线，直到基线平稳，就可以在计算机软件上进行监视；7. 基线平稳后，在软件中设置样品的运行参数，如流速和分析时间等。

分析时间会因样品、流速、柱长等因素变化。

8. 参数设置完毕后，将固定体积的样品溶液注入进样阀，然后在软件中启动注入命令，进样器中的样品溶液就随流动相进入色谱柱；9. 通过软件监视各项读数，当检测器检测到样品所有峰值，停止运行并设置新的进样。

在下一个样品分析前，建议留出5-10分钟，待流动相通过色谱柱，以便清洗之前样品的残留物；确认基线稳定后，进行下一次注射。

10. 分析结束后，先关闭检测器，然后关闭泵，最后关闭软件。

高效液相色谱HPLC分析注意事项：1. 用0.2μm滤纸过滤溶剂或流动相，并进行超声脱气。

2. 启动时应采用色谱级水清洗色谱柱，有助于延长色谱柱的使用寿命、检测器的稳定运行，确保检测结果的准确性。

以上由迪信泰检测平台（Biotech-Pack-Analytical）整理编辑。

迪信泰检测平台以液相/气相为依托，组建高效液相色谱(HPLC)、液质联用(LC-MS)、气质联用(GC-MS)等技术平台，致力于为各科研院所，高校，药企，生物工程类企业提供高效、准确、高性价比的小分子化合物检测技术服务。

高效液相色谱（HPLC）操作规程一操作1.准备工作⑴流动相的准备应根据实验选择合适的流动相，所有流动相原则上应选择HPLC级别，水应选择超纯水，并应保持新鲜。

所有流动相在进行实验前应经过相应的脱气处理，脱气时间应根据流动相的量相应增加，但一般超声脱气不应少于20min。

在实验过程中应保证足够的流动相，流动相的量与流速、洗脱时间等有关，应根据具体情况进行准备。

⑵样品的准备对于待测的样品，在进样之前应经过滤膜过滤，根据样品的不同选择不同种类、不同直径的滤膜。

2. 排气打开purge阀，键入stop→prime，直到无气泡停止stop。

B泵同样操作。

关闭purge阀。

3. 开机打开电脑主机和显示器，点击Galaxie，进入工作站。

选择系统，点击Agilent HPLC.点击overview，可观察仪器各部分状态。

打开泵及检测器的电源。

二 分析方法建立1.进入工作站系统界面。

点击数据，文件→新建→方法，出现视窗，点击前进即可。

键入方法名和相应描述→点击ok后出现方法文档。

2.210的设定点击控制→210图标→Elution。

选择流动相A和B的种类。

Compressibility、Pressure Constant以及Refill Time属于内置参数无需设定。

设置A、B流动相的比例，通过改变B的比例设定。

如需梯度洗脱，则根据方法对Equilibrium Time 和Hold Time进行设定。

点击Misscellaneous。

Start Mode选择Inject Trigger on Pump A。

End of Sequence 选择Leave Pump on。

210设定结束。

3.325的设定点击325图标，选择Signal。

其中Detector Bunch Rate建议设置成2（10Hz），Noise Monitor Length建议设定成64，Response Time建议设定0.5。

根据方法设定相应波长。