乳品脂肪测定方法
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脂肪的测定方法
脂肪的测定方法主要包括索氏提取法、酸水解法和碱水解法等。
索氏提取法适用于各类食品中脂肪含量的测定,操作简便,准确度高,但提取时间长。
酸水解法适用于食品中游离态脂肪及结合态脂肪总量的测定,而碱水解法适用于乳及乳制品、婴幼儿配方食品中脂肪的测定。
此外,盖勃法也适用于乳及乳制品、婴幼儿配方食品中脂肪的测定。
在索氏提取法中,需要将粉碎或经处理而分散的试样放入圆筒滤纸内,利用乙醚在水浴中加热回流,提取试样中的脂类于接受烧瓶中,经蒸发去除乙醚,再称出烧瓶中残留物的质量,即可计算出试样中脂肪的含量。
具体操作步骤包括滤纸筒的制备、样品制备、索氏抽提器的准备、抽提和回收溶剂等。
请注意,每种方法都有其适用范围和局限性,应根据具体的食品种类和脂肪类型选择合适的测定方法。
乳与乳制品常规理化指标检验脂肪的检测YLNB 2.61. 范围本方法规定了脂肪测定的基准方法。
本方法适用于乳粉、液体奶、婴儿配方食品、炼乳、稀奶油和奶油、冰淇淋样品中脂肪的测定。
2. 原理样品用浓氨水和乙醇处理,氨水使酪蛋白钙盐变成可溶解的盐,促进脂肪球和乙醚的作用;加入乙醇使一系列的能被酒精浸出的物质留在水相中。
然后利用乙醚提取试样中脂肪。
加入石油醚使乙醚不被水饱和,并使分层清晰。
将醚层倒入脂肪收集瓶中后使乙醚和石油醚挥发掉,就可得到剩在收集瓶中的脂肪的重量。
3. 试剂所有试剂,如未注明规格,均指分析纯;所用实验用水,如未注注明其他要求,均指三级水。
按5.4规定的步骤进行空白试验,检验试剂的纯度。
按5.1的操作准备一空的脂肪收集瓶用来校正环境的影响。
试剂残余物含量不得大于0.5mg(见8.1)。
如果全部试剂空白残余物大于0.5mg,则分别蒸馏100ml 乙醚和石油醚,测定溶剂残余物的含量。
用空的控制瓶测得的量和每种溶剂的残余物的含量都不应超过0.5mg。
若超过0.5mg,则应更换不合格的试剂,或对试剂进行提纯。
3.1 淀粉酶3.2 氨溶液:质量分数约25%,ρ20约910g/L。
注:如果买不到此浓度的氨溶液,可使用已知的、更大浓度的氨溶液。
3.3 乙醇或由甲醇变性的乙醇:体积分数至少为94%(8.5)。
3.4 刚果红溶液:1g刚果红溶于水中,稀释至100mL。
注:可选择性地使用。
刚果红溶液可使溶剂和水相界面清晰(见5.5.4),也可使用其他能使水相染色而不影响测定结果的溶液。
3.5 乙醚:不含过氧化物(见8.3),不含抗氧化剂,或抗氧化剂含量不大于2mg/kg,并满足空白试验的要求(见8.1和8.4)3.6 石油醚:沸程30-60℃。
3.7 混合溶剂:等体积混合乙醚(3.5)和石油醚(3.6),使用前配制。
3.8氯化钠溶液:20g/L,将20g 氯化钠溶于水中,稀释至1000mL。
4. 仪器及器材由于测定中使用了挥发性可燃溶剂,所有电器的使用均按照这些溶剂使用的有关规定进行。
食品中脂肪的测定(碱性乙醚提取法)GB/T 5413.3—1997
本法适用于乳及乳制品中脂肪的测定。
测定方法:
称取乳粉1克左右,放入抽脂瓶(即具塞量筒)中,加入10ml 65±50C的水,混匀。
加入2ml 氨水,摇匀后放入65±50C的水浴中,加热15-20分钟。
(在此期间将接受瓶干燥恒重M1)
取出具塞量筒,用流水冷却至室温。
加入10ml乙醇,摇匀,再加入25ml乙醚振摇1min,再加入25ml石油醚,震荡30秒。
静止30min,待分层清晰后,用移液管将有机层吸入至已恒重的接受瓶中。
.重复乙醚、石油醚的再提取(一般乙醚和石油醚分别减为15ml和10ml两次),合并有机层于同一接受瓶中。
将接受瓶放置1000C水浴中蒸去醚液后,置于100-1050C烘箱干燥2小时,取出置干燥器中,冷却室温后称量,反复操作直至恒重。
M2。
结果计算:
M2—M1
粗脂肪(%)=——————x 100
M样
注意:结果保留小数点后二位;平行测定两个结果间的差数≦0.2%
脂肪测定实验结果记录表
1、选用设备
答案:
2、实验结果记录
答案:(填写于下表内)
检测人:。
第1篇一、实验目的1. 了解乳品成分的基本知识。
2. 掌握乳品成分测定的实验方法。
3. 通过实验,提高分析乳品成分的能力。
二、实验原理乳品成分测定主要包括蛋白质、脂肪、糖类、矿物质等成分的测定。
本实验采用凯氏定氮法测定蛋白质含量,比色法测定脂肪含量,滴定法测定糖类含量,原子吸收光谱法测定矿物质含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料:鲜牛奶、奶粉、酸奶等乳制品。
2. 仪器:凯氏定氮仪、分光光度计、滴定仪、原子吸收光谱仪、分析天平、移液器、烧杯、锥形瓶、试管等。
四、实验步骤1. 蛋白质含量测定(1)称取乳品样品1g,加入10mL浓硫酸,搅拌均匀,放入凯氏定氮仪中消化。
(2)消化完成后,取出消化液,用蒸馏水定容至100mL。
(3)取1mL消化液,加入1mL硫酸铜溶液,搅拌均匀,放置10min。
(4)用分光光度计在620nm波长下测定吸光度。
(5)根据标准曲线计算蛋白质含量。
2. 脂肪含量测定(1)称取乳品样品1g,加入10mL石油醚,搅拌均匀,放置30min。
(2)用滤纸过滤,将滤液在60℃下烘干,称重。
(3)根据烘干前后质量差计算脂肪含量。
3. 糖类含量测定(1)称取乳品样品1g,加入10mL稀硫酸,搅拌均匀,放入滴定仪中。
(2)用氢氧化钠标准溶液滴定至终点。
(3)根据滴定结果计算糖类含量。
4. 矿物质含量测定(1)称取乳品样品1g,加入10mL稀硝酸,搅拌均匀,放入原子吸收光谱仪中。
(2)在特定波长下测定吸光度。
(3)根据标准曲线计算矿物质含量。
五、实验结果与分析1. 蛋白质含量:实验结果显示,鲜牛奶、奶粉、酸奶的蛋白质含量分别为3.2%、3.5%、3.0%。
2. 脂肪含量:实验结果显示,鲜牛奶、奶粉、酸奶的脂肪含量分别为3.5%、3.8%、3.0%。
3. 糖类含量:实验结果显示,鲜牛奶、奶粉、酸奶的糖类含量分别为4.2%、4.5%、4.0%。
4. 矿物质含量:实验结果显示,鲜牛奶、奶粉、酸奶的矿物质含量分别为0.6%、0.7%、0.5%。
乳脂肪测定实验报告
《乳脂肪测定实验报告》
实验目的:
本实验旨在通过乳脂肪测定实验,掌握乳制品中脂肪含量的测定方法,了解乳制品质量的相关指标。
实验原理:
乳脂肪测定是通过乳脂肪的提取和测定来确定乳制品中脂肪含量的方法。
实验中常用的方法有脂肪提取法和脂肪测定法。
脂肪提取法是将乳制品中的脂肪提取出来,然后通过称量或化学方法测定脂肪含量;脂肪测定法是直接测定乳制品中的脂肪含量。
实验步骤:
1. 准备样品:取适量的乳制品样品,如牛奶、奶粉等。
2. 脂肪提取:将样品加入适量的有机溶剂,如醚、醇等,进行脂肪提取。
3. 脂肪测定:通过蒸发溶剂、干燥和称重等方法,测定提取得到的脂肪含量。
实验数据:
通过实验测定,得到不同乳制品样品中的脂肪含量分别为:牛奶为3.5%、奶粉为10%。
实验结论:
通过乳脂肪测定实验,我们成功地测定了不同乳制品样品中的脂肪含量,了解了乳制品质量的相关指标。
同时,实验中也发现了不同乳制品样品中脂肪含量的差异,为乳制品的生产和质量控制提供了参考依据。
实验意义:
乳脂肪测定实验是乳制品生产和质量控制中的重要环节,通过该实验,可以及时了解乳制品中的脂肪含量,保证乳制品的质量和安全。
同时,也可以为乳制品生产工艺的改进和优化提供参考依据。
总结:
乳脂肪测定实验是一项重要的实验内容,通过该实验,我们可以了解乳制品中脂肪含量的测定方法和原理,为乳制品生产和质量控制提供重要的数据支持。
希望通过本次实验,同学们能够深入了解乳脂肪测定的相关知识,并将其应用于实际生产中。
测乳脂率实验报告实验目的本实验旨在通过测定乳液中的乳脂含量,了解乳制品的质量,并探究乳脂率对产品稳定性的影响。
实验原理乳脂率是指乳制品中乳脂(脂肪)质量与整个乳制品总质量的比例。
乳制品的乳脂率直接影响其质地、口感和保质期等特性。
本实验中,采用称量法测定乳脂率。
首先将一定质量的样品称量,然后通过酸化和酶解等方法将乳脂和蛋白质分离,经过离心后可以得到乳脂和脱脂乳液两部分,最后用称量法得到乳脂率。
实验步骤1. 准备工作:清洗严实的玻璃容器、天平、离心机等实验器材,并确保无水无油。
2. 称量法测定乳脂率:首先将干燥的容器称重,并记录质量。
然后加入一定质量的样品,再次称重,得到样品的质量。
将样品加入适量的酶解液,搅拌均匀后放入离心机进行离心,离心时间和速度根据样品的具体情况来决定。
离心后,将脱脂乳液倒入干燥的容器中,再次称重,得到脱脂乳液的质量。
根据公式计算乳脂率:乳脂率= (样品质量- 脱脂乳液质量) / 样品质量×100%。
实验结果与数据处理据我们实验测得的数据统计,样品的质量为30.5g。
离心后,脱脂乳液质量为25.2g。
根据上述公式,可计算出该乳制品的乳脂率为(30.5 - 25.2) / 30.5 ×100% = 17.38%。
实验讨论乳脂率主要受到乳脂的含量以及制作工艺的影响。
较高的乳脂率常常意味着乳制品更加浓稠,但过高的乳脂率可能会导致产品口感过厚、容易产生沉淀,同时也增加产品的热量。
因此,在乳制品生产中,需要根据产品的要求和市场需求来确定乳脂率的合适范围。
实验结论通过本实验,我们成功测定了乳制品样品中的乳脂率,并计算得出乳脂率为17.38%。
乳脂率是一项重要的指标,对乳制品的质量和特性有着直接的影响。
本实验结果可为乳制品生产过程中的质量控制和产品稳定性研究提供参考。
实验改进为了进一步提高实验的准确性和可重复性,可以进行以下改进:1. 样品制备时要确保样品完全均匀,避免样品不均匀导致测定结果的误差。
测定牛奶中脂肪含量的常规方法
测定牛奶中脂肪含量的常规方法有以下几种:
1. 脂肪分析法:这是最常用的方法之一。
它利用化学反应将牛奶中的脂肪与其他成分分离开来。
一种常见的方法是酸化脂肪分析法,其中牛奶样品被酸化,使脂肪与其他成分分离。
然后,通过离心等步骤,将脂肪从其他组分中分离出来,并用溶剂提取脂肪。
最后,通过蒸发溶剂并称重的方式来确定脂肪的含量。
2. 红外光谱法:这是一种非常快速和准确的方法,它利用红外光的吸收特性来测定牛奶中的脂肪含量。
通过将红外光照射到牛奶样品上,然后测量光的吸收情况,可以根据吸收谱图来确定脂肪含量。
3. 超声波法:这种方法利用超声波在不同介质中传播速度不同的特性来测定牛奶中的脂肪含量。
通过将超声波传输到牛奶样品中,并测量返回超声波的时间,可以计算脂肪在牛奶中的含量。
4. 乳脂肪球直径测定法:该方法通过测量牛奶中脂肪球的直径来推断脂肪含量。
脂肪球的直径与脂肪含量成正比,因此可以通过显微镜或像素分析仪来测量脂肪球的直径,并根据相关的标准曲线来计算脂肪含量。
这些方法在牛奶工业和食品检测实验室中被广泛使用,并且可以提供准确可靠的脂肪含量测定结果。
不同的方法适用于不同的实际应用情况,选择合适的方法可以根据实际需要和设备可用性来决定。
乳与乳制品检验方法乳与乳制品作为人们日常生活中必不可少的食品之一,其安全性与质量是备受关注的问题。
为了确保乳制品的质量与安全,需要进行检验。
本文将介绍乳与乳制品检验方法的原理、步骤与应用。
一、牛乳成分检验方法1、脂肪检测(1)巴氏脱脂法巴氏脱脂法是常用的乳脂肪含量检验方法之一。
其原理是通过巴氏杀菌,将原乳中脂肪以及非脂肪物质分离开来。
检测时需要采用定量比色法,将样品与标准溶液进行比色,然后根据检测结果计算脂肪含量。
(2)熔融点法熔融点法是利用脂肪的熔点差异进行检验。
将不同脂肪含量的样品进行熔融,然后比较不同样品的熔融点,根据其熔融点来计算脂肪含量。
2、蛋白质检测(1)总蛋白定量法总蛋白定量法是采用双缩脲定量法或比色法来测定牛乳中总蛋白的含量。
将不同浓度的样品与双缩脲溶液进行混合后加热,然后通过比色法或分光光度法来检测蛋白质含量。
(2)酪蛋白定量法酪蛋白定量法是通过测定乳中酪蛋白的含量来进行蛋白检验的。
该方法常用的有:酸碱滴定法、免疫电泳法和比色法等。
3、水分检测(1)重量法重量法是通过称重的方法检测牛乳中的水分含量。
将样品放入烘箱中进行脱水,然后再称重,根据称重前后的变化量计算出水分含量。
(2)干燥法干燥法是通过样品在加热条件下失去水分来计算水分含量的方法。
将样品放入干燥器中干燥,然后再以称重法来计算水分含量。
4、盐分检测(1)氯化钠标准溶液法氯化钠标准溶液法是测定盐分含量的方法之一。
将样品与氯化钠标准溶液混合,通过比色法检测,根据测定结果来计算盐分含量。
(2)电导法电导法是通过检测样品电导率来测定盐分含量的方法。
将样品与纯水混合后测定其电导率,根据电导率的变化来计算样品中的盐分含量。
二、乳制品检验方法1、奶粉检验方法(1)水分检测用电子天平将样品加热至某温度,称称样品的质量,然后将样品放入烘箱中进行脱水处理,再次称重,根据称重的变化量算出样品中的水分含量。
(2)蛋白质检测通过采用Kjeldahl法来测定奶粉中的蛋白质含量。
乳品中脂肪酶的测定方法
脂肪酶是一种重要的酶类,在乳品加工中具有关键的作用。
测定乳品中脂肪酶
的含量是保证乳品质量的重要环节之一。
以下是几种常见的脂肪酶测定方法:
1. 滴定法:滴定法是一种简便而常用的测定脂肪酶活性的方法。
该方法通过将
乳样溶液与含有标准化脂肪酶的试剂混合,在一定的反应条件下,用酸碱滴定的方法测定反应溶液中未被分解的脂肪酶的剩余量。
滴定法的优点是操作简便,结果可靠,但缺点是该方法只能测定总脂肪酶活性,无法区分特定种类的脂肪酶。
2. 电化学法:电化学法是一种使用电化学传感器来测定脂肪酶活性的方法。
该
方法通过将乳样溶液与含有底物的电化学传感器接触,利用脂肪酶的催化作用产生的电流变化来测定脂肪酶的活性。
电化学法具有灵敏度高、结果稳定等优点,但需要专业的设备和操作人员,所以适用范围有一定限制。
3. 酶联免疫吸附法(ELISA):酶联免疫吸附法是一种利用特异性抗体与脂肪
酶结合并通过酶的底物催化生成的产物来测定脂肪酶的含量的方法。
该方法通过将待测样品与含有特异性抗体的酶标记试剂反应,然后用酶底物进行显色反应,最后根据显色产物的浓度来测定脂肪酶的含量。
酶联免疫吸附法具有高灵敏度、高特异性和较宽的适用范围等优点,但需要耗时和复杂的实验操作。
综上所述,选择适当的乳品中脂肪酶测定方法需要根据实际需求和实验条件来
决定。
不同的方法具有各自的优缺点,在实际应用中需综合考虑实验操作的方便性、测定结果的准确性以及设备和人员的可用性等因素。
只有选择合适的测定方法并严格执行相关操作步骤,才能保证乳品中脂肪酶含量的精确测定,从而保障乳品的质量和安全。
盖勃法测脂肪3.3原理:在牛乳中加入硫酸破坏牛乳胶质性和覆盖在脂肪球上的蛋白质外膜,离心分离脂肪后测量其体积。
3.4仪器:盖勃牛乳乳脂瓶、乳脂计架、25-50ml小烧杯、盖勃乳脂专用离心机、10ml刻度吸管、1ml刻度吸管、11ml大肚吸管。
3.5试剂:3.5.1硫酸:比重为1.820-1.825g/ml将900ml浓硫酸缓缓注入100ml水中,配制过程中须不断搅拌并用冷水冷却3.5.2异戊醇:沸点128-132℃,比重0.8090-0.8115 g/ml3.6方法:3.6.1吸取10ml硫酸加入乳脂计中;3.6.2样品量根据样品品种按下分类3.6.2.1移取纯奶样品11ml加入乳脂计中;3.6.2.2称取1.5g奶粉样品于小烧杯中,称量准确至10mg,用10ml65℃水分数次全部洗入乳脂计中;3.6.2.3移取酸牛奶样品5ml于乳脂计,用6ml水清洗所用移液管,将样液全部移入乳脂计中;3.6.3加入异戊醇1ml,再加少量水调节液位,使其低于乳脂计颈口4-6mm,旋好塞,混合乳脂计内容物,直到没有奶块。
3.6.4将加有样品的乳脂计放入离心机的离心桶内,按照离心机的操作规程进行操作,待离心5分钟后,取出读数。
读数时要使脂肪柱的凹液面与视线水平,观察时可移动胶塞使脂肪柱的下液面与某一大格刻度相吻合。
3.7结果表示:3.7.1液体乳样品中脂肪含量为乳脂计刻度管中脂肪柱上下液面的读数差。
3.7.2奶粉样品中脂肪含量由以下公式计算得出:a×11脂肪%=----------W式中:a--脂肪柱读数W--样品重,g11--换算系数每次测两个平行样,误差不应超过0.1%,否则重测。
3.7.3 酸牛奶样品的脂肪含量为乳脂计刻度的读数差乘以2.2。
要是终产品脂肪的检测,罗兹哥特里没问题的。
:)。
T logy科技分析与检测近年来社会对乳及乳制品中脂肪含量的控制要求非常严,那么脂肪含量的测定方法也要不断更新、与时俱进,以满足人民的健康需求。
基于此,本文将对乳及乳制品中的脂肪测定方法进行探讨,并提出一些改进措施,为食品安全提供科学保证。
1 碱水解法的优点和不足碱水解法适用范围较广,几乎所有乳及乳制品都可以用此方法进行检测,标准中除了乳粉和婴幼儿食品的处理、分析步骤不够详细以外其他分析步骤非常详细,处理乳粉和婴幼儿食品时,按要求称取试样后应该加点水,使试样完全溶解,再进行其他分析步骤。
若严格按照此方法步骤进行操作,测定值在质控样品值满意区间内,且准确度、精密度都非常高[1]。
但其需要重复萃取3次,检测时间长,使用的试剂多,成本相对较高[2]。
2 盖勃法的不足及其改善措施盖勃法虽然检测快,成本低,但是适用范围有限,并且实验步骤不够详细,不容易按照标准进行准确操作,容易失败。
且标准没有指定硫酸浓度,如果使用浓硫酸,样品容易碳化,影响实验结果。
因此笔者认为,应补充详细的盖勃法实验步骤,以有效提高检测结果的准确性。
2.1 硫酸溶液的浓度问题盖博法检测乳制品脂肪含量是在酸性环境下进行脂肪分离,加入高浓度的硫酸可破坏乳的胶质体,并且使乳中的酪蛋白与钙盐形成可溶性重硫酸酪蛋白化合物,减小脂肪球与乳体系的吸附能力。
但是浓硫酸会与乳制品中的碳水化合物发生焦炭化反应,影响脂肪析出;而形成的重硫酪蛋白化合物是一种白色盐类,虽然可溶,但在炭化环境下容易上浮,介于脂肪和非脂肪溶液之间,影响月牙形界面的形成,从而影响了乳脂计的读数[2]。
所以要注意硫酸的浓度。
硫酸比重应为1.820~1.825 g/mL,浓度为90%~91%。
若硫酸比重过低,则不能使蛋白质得以有效溶解,从而使水相与脂肪相之间不能得以有效分离,也就不能准确测出乳及乳制品中的脂肪含量[3]。
2.2 溶液体积问题试剂和样品体积没有达到乳脂计的刻度范围内时,试样中加完异戊醇后要加水,以确保使脂肪层在乳脂计的可读刻度范围内,因为加水量小,不会影响硫酸的作用。
盖勃法测乳脂肪的原理盖勃法(Gerber法)是一种用于测定乳脂肪含量的化学分析方法。
该方法是基于乳脂肪与硫酸铜和硫酸盐的化学反应,通过测定产生的二氧化硫的容量来推算乳脂肪的含量。
下面将详细介绍盖勃法测乳脂肪的原理。
盖勃法的原理基于乳脂肪与硫酸铜和硫酸盐的化学反应。
通过该化学反应,乳脂肪中的脂肪酸与碱性条件下的硫酸铜生成胆甾醇脂肪酸盐(cupric soap)。
所产生的胆甾醇脂肪酸盐是一种可溶于乙醇的物质,并且它与硫酸铜生成的蓝色络合物比乳脂肪与硫酸铜反应时生成的蓝色络合物更为稳定。
因此,通过测定在酸性条件下氧化后的乙醇中产生的二氧化硫的容量,可以计算出乳脂肪的含量。
盖勃法的具体步骤如下:1. 取一定量的牛奶样品加入硫酸铜和硫酸盐。
样品中的乳脂肪与硫酸铜发生反应,生成胆甾醇脂肪酸盐。
2. 加入硫酸铜-硫酸盐溶液后,将样品置于酸性条件下反应。
酸性条件的维持可以通过加入硫酸或硫酸磷酸钠来实现。
3. 反应会产生二氧化硫,并顺便氧化掉样品中的其他成分。
4. 乙醇被用来接收生成的二氧化硫。
乙醇与二氧化硫形成的硫醇再被氧化成醛,释放出二氧化硫。
这个过程通过加热反应混合物来实现。
5. 接收到的二氧化硫会与碘反应,生成碘化物。
经过添加淀粉指示剂后,样品变蓝,产生蓝色络合物。
6. 使用标准硫酸钾溶液滴定反应混合物,直到获得明显的褪色反应。
这表明所有的二氧化硫都反应完了。
7. 根据滴定所用的标准硫酸钾溶液的体积,可以计算出乳脂肪的含量。
盖勃法的优点是简单、快速、准确。
但是在测定过程中也有一些注意事项。
首先,样品中的脂肪和蛋白质会导致滴定终点的不准确,因此需要使用盖勃法表面活性剂来去除样品中的干扰物质。
其次,反应过程中的酸度必须恰当,过高或过低都会对测定结果造成影响。
此外,还需要准确称量样品和试剂,并严格控制反应温度等因素,以保证测定的准确性和可重复性。
总结起来,盖勃法是一种用于测定乳脂肪含量的化学分析方法,通过乳脂肪与硫酸铜和硫酸盐的化学反应,推算出乳脂肪的含量。
婴幼儿食品和乳品中脂肪酸的测定1范围本标准规定了婴幼儿食品和乳品中的测定办法。
本标准适用于婴幼儿食品和乳品中脂肪酸的测定,其次法不适用于含有被包埋脂肪酸的测定。
2规范性引用文件本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不行少的。
凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本标准。
凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括全部的修改单)适用于本标准。
第一法乙酰氯—甲醇甲酯化法 3原理乙酰氯与甲醇反应得到的盐酸—甲醇使试样中的脂肪和游离脂肪酸甲酯化,用甲苯提取后,经气相色谱仪分别检测,外标法定量。
4试剂和材料除非另有解释,本办法所用试剂均为分析纯或以上规格,水为GB/T6682规定的一级水。
4.1无水碳酸钠。
4.2甲苯:色谱纯。
4.3乙酰氯。
4.4乙酰氯甲醇溶液(体积分数为10%):量取40mL甲醇于100mL干燥的烧杯中,精确吸取5.0mL乙酰氯(4.3)逐滴缓慢加入,不断搅拌,冷却后转移并定容至50mL干燥的容量瓶中。
临用前配制。
注:为刺激性试剂,配制乙酰氯甲醇溶液时应不断搅拌防止喷溅,注重防护。
4.5碳酸钠溶液:精确称取6g无水碳酸钠(4.1)于100mL烧杯中,加水溶解,转移并用水定容至100mL容量瓶中。
4.6脂肪酸甘油三酯标准品:纯度≥99%。
4.7脂肪酸甘油三酯标准工作液:按试样中各脂肪酸含量及所要分析脂肪酸的种类配制适当浓度的标准工作液,用甲苯定容并分离保存于-10℃以下的冰箱中,有效期三个月。
5仪器和设备 5.1天平:感量为0.01g和0.1mg。
5.2恒温热水浴槽。
5.3离心机:转速≥5000转/分钟。
5.4气相色谱仪,带FID检测器。
5.5冷冻干燥仪。
5.6氮吹仪。
5.7螺口玻璃管(带有聚四氟乙烯做内垫的螺口盖):15mL。
5.8离心管:50mL。
6分析步骤6.1试样处理 6.1.1试样含水量大于5%时,冷冻干燥至含水量小于5%。
6.1.2称取试样0.5g(精确到0.1mg)于15mL干燥螺口玻璃管(5.7)中,加入5.0mL甲苯(4.2)。
由于食品的种类不同,其中脂肪含量及其存在形式也不相同,测定脂肪的方法也就不同。
常用的测定方法有:
(1)索式提取法(2)巴布科克法(3)益勒式法(4)罗斯-哥特里法(5)酸分解法
过去测定脂肪普遍采用的是索式提取法,这种方法至今仍被认为是测定多种食品脂类含量的代表性的方法,但对于某些样品测定结果往往偏低,而巴布科克法、益勒式法、罗斯-哥特里法主要用于乳、及乳制品中脂类的测定,而酸水解法测出的脂肪为游离态脂和结合脂全部脂类。
一、巴布科克法(Babcock 法)
巴布科克法是用来测定乳及乳制品的一种方法,测定牛奶前我们首先搞清牛奶的营养成分。
牛奶的平均成分:
牛乳100%:水分87.5%,总固体12.2%,维生素,免疫体和酶;
总固体12.2%:非脂固体8.8%,乳脂肪3.4%;
非脂固体8.8%:蛋白质3.5%,乳糖4.6%,矿物质Ca.p.Fe.K等;
蛋白质3.5%:酪蛋白3.0%,白蛋白0.4%,球蛋白0.1%。
在成分表中乳脂肪3.4%是需要我们检测。
在牛乳中蛋白质比人乳蛋白质高。
乳糖含量比人乳少,矿物质中Ca 的含量比人乳多,而Fe的含量比人乳少。
牛乳中脂肪含量标准如下
生鲜牛乳:
(1)特级≥ 3.2%
(2)一级≥ 3.0%
(3)二级≥ 2.8%
消毒牛乳≥ 3.0 %
众所周知牛乳是乳浊液。
它的脂类在牛乳中并不是以溶解状态存在,而是以脂肪球呈乳浊液状态存在,在它周围有一层膜,这层膜使脂肪球得以在乳中保持乳浊液的稳定状态,这层膜
其中含蛋白质。
磷脂等许多物质,通常用浓H2SO4时非脂成分溶解,脂肪球膜就被软化破坏,于是乳浊液就破坏,脂肪即可分离出来,这是公认的标准分析法。
巴布科克法和盖勃氏法这两种方法是有两个科学家研制出来,一个是美国的Babcock在1890年研究出测牛乳的脂肪,后来经过2年,即1892年由英国的盖勃液研究出测牛乳的脂肪。
这两种方法都是用来提取乳制品中的脂肪,此法也叫湿法提取,因为样品不需要事先烘干,脂肪在牛乳中以乳胶体形式存在,要测定脂肪必需要破坏乳胶体脂肪与其它非脂成分分离,分离出来的非脂成分一般用浓H2SO4分解,用容量法定量,操作简便,为许多国家用于乳制品的常规分析。
Babcock法原理
利用硫酸溶解乳中的乳糖浴蛋白质等非脂成分使脂肪球膜破坏,脂肪游离出来,在乳脂瓶中直接读取脂肪层,从而迅速求出被检乳中的脂肪率。
2、方法
准确吸取17.6ml牛乳→于乳脂瓶中→加17.5ml硫酸(用量筒量取)→混合→离心5分钟(1000转/分)→60℃水至瓶颈→离心2分钟(1000转/分)→加60℃水至4%刻度线→离心1分钟→ 60℃水浴中→使脂肪柱稳定→读取
加H2SO4的作用:
(1)溶解蛋白质
(2)乳解乳糖
(3)减少脂肪的吸附力
因为非脂成分溶解在H2SO4中,这样就增加了消化液的比重(H2SO4比重1.820-1.825,脂肪比重小于1),即比重大于1.820-1.825,脂肪的比重小于1的,这样就使得脂肪迅速而完全地与非脂沉淀,另外离心的作用是脂肪非常清晰的分离,加热的目的,使脂肪吸附力降低,上浮速度加快,这就是采用Babcock法测牛乳脂肪。
近来在有些科技书中,将Babcock法加以改进,用来测肉制品和谷物类样品。
因为Babcock法用浓硫酸作为蛋白质的溶解剂,对测肉制品会发生炭化,这些碳化物悬浮在脂肪层和水层的界面间,这样造成了读数不准确,因此,他们研究了各种代替硫酸的试剂,后来他们认为利用高氯酸-醋酸混合液代替硫酸,测定肉及肉制品的脂肪,测定值与AOAC
法一致,精密度以标准偏差表示为0.2%。
所用试剂:
高氯酸-醋酸混合液
6%的高氯酸与等容量的醋酸混合。
具体方法:
称9克绞碎的肉 ,于巴氏瓶中 ,加混合酸30m ,于沸水浴中加热15min(使样品充分溶解), 在加混合酸 ,使之达到瓶子的刻度范围
离心2min (1000转/分) 60℃水浴10min 读取
计算: Fat% = H x 0.95
H—读取脂肪柱的数值
0.95—溶解于脂肪层中的醋酸修正值
改良的巴布科克法:对溶质品质类经过加热的试样,水浴中加热15min即可完全溶解,对于生肉试样由于没发生热变性,采用混合酸后,肉蛋白质在一定时间内凝固,溶解的时间大约需要25分钟。
二、Gerber法(盖勃氏法)
这种方法对糖分高的样品,如采用此方法容易焦化,致使结果误差大,故不适宜。
1、原理:
在牛乳中加硫酸,可破坏牛乳的胶质性,使牛乳中的酪蛋白钙盐变成可溶性的重硫酸酪蛋白化合物,并且能减小脂肪球的吸附力,同时还可增加消化液的比重使脂肪更容易浮出液面,在操作中还需要加入异戊醇,降低脂肪球的表面张力,促进脂肪球的离析,但是异戊醇的溶解度很小,所以在操作中,不能加的太多,如果加的太多,异戊醇会进入脂肪中,使脂肪体积增大,而且会有一部分异戊醇和硫酸作用生成硫酸脂,反应如下:
2C5H11OH + H2SO4 → (C5H11O)2SO2 + 2H2O
在操作过程中加热65-70℃和离心处理,目的都使脂肪酸迅速而彻底分离。
2、方法
取10ml H2SO4于乳脂瓶中--准确量取11.0ml牛乳--加1ml异戊醇 --混合--65℃水浴5min
离心5min (1000转/分) --65℃水浴5min---立即读取
说明:
(1)在巴氏法中采用17.6ml吸管,实际上注入巴氏瓶中只有17.5ml,牛乳的比重
1.030g/ml,故样品质量为
17.5 x 1.030 = 18g
巴氏瓶的刻度共10大格(0-10%),每大格容积为0.2ml,脂肪的平均比重为0.9,其脂肪质量为 0.2 x 10(10大格)x0.9 (脂肪比重)= 1.8(g),18g 样品中含1.8g脂肪即瓶颈全部刻度表示的脂肪含量10%,每一大格代表1% 的脂肪,故巴氏瓶颈刻度读数即直接为脂肪的百分含量。
(2)硫酸浓度及用量要严格遵守方法中规定的要求,硫酸浓度过大会使牛乳炭化成黑色溶液而影响读数;浓度过小则不能氏酪蛋白完全溶解,会使测定值偏低或使脂肪层浑浊。