(完整word版)维生素B1片的含量测定

药物分析实验课班级：学生(学号：导师：实验室201 年月日紫外分光光度法测定维生素B1片含量以及方法验证一、摘要二、仪器与试药三、原理四、实验部分处方分析：组成处方量(g 比例(%维生素B110 16.39淀粉20 32.78糊精30 49.18硬脂酸镁 1.0 1.639生产1000片根据处方量分析，维生素B1含16.39%，辅料含83.61%。

平均片重约61mg，取相当于25mg维生素B1的片粉约0.15g。

1、测定方法：取供试品20片，精密称定，研细，称取片粉适量（约相当于维生素B125mg），置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）约70ml，振摇15min使维生素B1溶解，再加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置另一100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，照分光光度法，在246nm的波长处测定吸收度，按C12H17ClN4OS.HCl的吸收系数（）为421计算，即得。

2、方法验证2.1.线性和范围精密称取维生素B1对照品约25mg，置100 ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）溶解并稀释至刻度，制备成含维生素B1 250μg/ml的对照溶液。

分别精密量取该溶液3、4、5、6、7ml置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，即得系列浓度的对照品溶液，照分光光度法，在246nm的波长处测定吸收度，以吸收度（A）对浓度（C）回归处理，得标准曲线和回归方程。

标准曲线测定数据1 2 3 4 5浓度7.5 10 12.5 15 17.5吸收度2.2.回收试验（准确度试验）对照品溶液的制备：对照品溶液的制备，同2.1项下。

供试品溶液的制备：精密称取维生素B1精制原料约0.25g，置50ml量瓶中，加入盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，制成5.0mg/m维生素B1溶液储备液；分别精密量取该溶液4、5、6ml置已加入比例量辅料（0.15g，1/100天平）的100ml量瓶中（一式三份），加盐酸溶液（9→1000）约70ml，振摇使之溶解，再加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，滤过，精密量取续滤液5ml，置另一100ml 量瓶中，摇匀，得高、中、低三种浓度的试验溶液，照分光光度法，在246nm的波长处测定吸收度，用对照品比较法计算含量。

紫外分光光度法测定维⽣素B1⽚的含量项⽬五紫外分光光度法测定维⽣素B1⽚的含量（2学时）⼀实验⽬的1 掌握紫外分光光度法测定维⽣素B1⽚含量的实验⽅法和操作技能；2 掌握⽚剂的取样⽅法，并正确计算⽚粉的取样范围；熟悉样品前处理⽅法；3 学会采⽤紫外分光光度计测定药物含量的操作⽅法和注意事项。

⼆实验原理维⽣素B1分⼦中具有共轭双键结构，在紫外光区有特征吸收。

在pH2时，最⼤吸收在246nm处,据此，可⽤紫外分光光度法测定维⽣素B1⽚的含量。

三材料与仪器盐酸溶液（9→1000）、电⼦天平、紫外分光光度计、研钵、维⽣素B1⽚四实验内容取本品20⽚，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于维⽣素B125mg），置100ml 量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）约7ml，振摇15分钟使维⽣素B1溶解，加盐酸溶液（9→1000）稀释⾄刻度，摇匀，⽤⼲燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置另⼀100ml量瓶中，再加盐酸溶液（9→1000）稀释⾄刻度，摇匀，照紫外-可见分光光度法（附录Ⅳ A）。

在 246nm的波长处测定吸光度，按C12H17ClN4OS·HCl的吸收系数（E1cm1%）为421计算，即得。

本品含维⽣素B1应为标⽰量的90.0%~110.0%。

五注意事项1 ⽚剂取样量的计算：取样量=（1±10%）×主药规定量×平均⽚重/每⽚标⽰量2 结果计算式中 A-------供试品溶液的吸光度；E 1cm 1%-------供试品溶液的百分吸收系数；标⽰量（%）=W×100%标⽰量A ×1%×D ×VE1cm 1%×L×WL--------吸收池的厚度；D--------供试品的稀释倍数；V--------供试品溶液的体积；W--------供试品的取样量；W--------⽚剂的平均⽚重。

2 ⽚剂中不溶性辅料对测定有⼲扰，需滤过消除辅料的⼲扰；3 本法采⽤吸收系数法定量，所⽤的分光光度计应经过严格检定，特别是波长准确度和吸光度精度要进⾏校正。

紫外分光光度法测定维生素B1片的含量维生素B1及其制剂及其制剂常采用的方法有非水滴定法，紫外分光光度法和硫色素荧光法。

中国药典用非水溶液滴定法测定原料药，片剂和注射剂采用紫外分光光度法，USP采用硫色素荧光法。

采用非水溶液滴定法可能受到氢卤酸盐的干扰，对操作人员要求较高，采用硫色素滴定法不受氧化破坏产物的干扰，测定准确但操作繁琐，且荧光测定受干扰因素较多，本实验采用紫外分光光度法进行含量测定。

1实验装置及试剂1.1 仪器 BS210S型天平，UV751GD型紫外/可见分光光度计。

1.2 实验材料维生素B1片（来源：成都第一制药，规格：1--00片*10mg，批号：061204），维生素B1标准品（分析纯），维生素B1对照品（200ug/ml，2.0mg/ml），维生素B1标准溶液（0.250mg/ml），空白辅料，盐酸溶液（9→1000）。

2 实验方法处方分析：组成处方量(g) 比例(%)维生素B110 16.39淀粉20 32.78糊精30 49.18硬脂酸镁 1.0 1.639生产1000片根据处方量分析，维生素B1含16.39%，辅料含83.61%。

平均片重约61mg，取相当于25mg维生素B1的片粉约0.15g。

1、测定方法：取供试品20片，精密称定，研细，称取片粉适量（约相当于维生素B125mg），置100ml 量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）约70ml，振摇15min使维生素B1溶解，再加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置另一100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，照分光光度法，在246nm的波长处测定吸收度，按C12H17ClN4OS.HCl的吸收系数（1%1cmE）为421计算，即得。

2、方法验证2.1.线性和范围精密称取维生素B1对照品约25mg，置100 ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）溶解并稀释至刻度，制备成含维生素B1250μg/ml的对照溶液。

维生素B1检验记录记录编号：YL-WB1-20一．性状：本品为（白色结晶或结晶性粉末；有微弱的特臭,味苦）。

结果：吸收系数：紫外分光光度计型号: （应为406～436) 取本品（约62。

0mg）精密称定w＝_______g，置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）溶液并稀释至刻度.摇匀，精密量取（2.0ml）_____，移至100ml量瓶中，用盐酸溶液（9→1000)稀释至刻度，摇匀.照分光光度法在246nm波长处测得吸收度A＝______,计算得吸收系数（E1cm1％）为______计算：结果：二．鉴别：1．天平型号：取本品（约5mg)，加氢氧化钠试液 (2.5ml）溶解后，加铁氰化钾试液________（0.5ml）与正丁醇________（5ml）,强力振摇2分钟，放置使分层,上层醇液显____ （强烈的蓝色荧光），加酸成酸性，荧光即（消失），再加碱成碱性,荧光________（又出现）。

结果：2．取本品适量，加水溶解，水浴蒸干，在105℃干燥2小时测定。

本品的红外光吸收图谱与对照的图谱(应一致）结果：3．（1)取本品_____（约0。

2g）,置试管中,加水20ml溶解后，加硝酸2ml，加硝酸银试液1ml，即生成______________（白色凝乳状沉淀)，分离沉淀，加量试液,沉淀________（即溶解）加硝酸使成酸性,沉淀___________（复生成）。

(2）取供试品少量,置试管中，加等量的二氧化锰，混匀，加硫酸湿润，缓缓加热,即发生（氯气),能使用水湿润的碘化钾淀粉试纸显蓝色。

结果：三．检查：天平型号：酸度计型号:1．酸度: (pH值应为2.8—3.3)定位用标准缓冲液:磷酸盐标准缓冲液pH= ；校准用标准缓冲液：邻苯二甲酸氢钾标准缓冲液pH= 。

取本品 g,加水 ml溶解后，依法测定，1： ,2：，平均为。

结果：2．溶液澄清度与颜色：取本品_____（1.0g），加水10ml溶解后，溶液_____（应澄清无色)；如显色，与对照液(取比色用重铬酸钾液0.1ml,加水适量使成10ml）比较________ (不得更深）。

紫外分光光度法测定维生素B1片的含量紫外分光光度法测定维生素B1片的含量维生素B1及其制剂及其制剂常采用的方法有非水滴定法，紫外分光光度法和硫色素荧光法。

中国药典用非水溶液滴定法测定原料药，片剂和注射剂采用紫外分光光度法，USP采用硫色素荧光法。

采用非水溶液滴定法可能受到氢卤酸盐的干扰，对操作人员要求较高，采用硫色素滴定法不受氧化破坏产物的干扰，测定准确但操作繁琐，且荧光测定受干扰因素较多，本实验采用紫外分光光度法进行含量测定。

1实验装置及试剂1.1 仪器 BS210S型天平，UV751GD型紫外/可见分光光度计。

1.2 实验材料维生素B1片（来源：成都第一制药，规格：1--00片*10mg，批号：061204），维生素B1标准品（分析纯），维生素B1对照品（200ug/ml，2.0mg/ml），维生素B1标准溶液（0.250mg/ml），空白辅料，盐酸溶液（9→1000）。

2 实验方法处方分析：组成处方量(g)比例(%)维生素B110 16.39淀粉20 32.78糊精30 49.18硬脂酸镁1.0 1.639生产1000片根据处方量分析，维生素B1含16.39%，辅料含83.61%。

平均片重约61mg，取相当于25mg维生素B1的片粉约0.15g。

1、测定方法：取供试品20片，精密称定，研细，称取片粉适量（约相当于维生素B125mg），置100ml 量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）约70ml，振摇15min使维生素B1溶解，再加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置另一100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，照分光光度法，在246nm的波长处测定吸收度，按C12H17ClN4OS.HCl的吸收系数（1%1cmE）为421计算，即得。

2、方法验证2.1.线性和范围精密称取维生素B对照品约25mg，置100 ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）溶解并稀1250μg/ml的对照溶液。

【精品】8实验八维生素B1片含量测定的方法验证一、实验目的1.验证维生素B1含量测定的方法的准确性和可靠性。

2.了解高效液相色谱法对于短波紫外检测器的适应性。

二、实验原理1.高效液相色谱法高效液相色谱法（HPLC）是一种高效分离、快速分析的方法。

它与用计算机控制的仪器联用，可以进行定量、半定量和定性分析。

本实验中，采用HPLC法测定维生素B1的含量。

2.短波紫外检测器短波紫外检测器是一种用于分析有机物的光谱仪器。

它在紫外光谱的200~400nm范围内进行检测，可以检测吸收较大的分子。

在本实验中，采用短波紫外检测器测定维生素B1的含量。

三、实验步骤1.样品的准备取维生素B1片0.2g，加入250mL量瓶中，加入10mL0.1mol/L盐酸溶液，加水至刻度线，摇匀，称取100mL筛滤取滤液5mL，加入5mL4%磷酸溶液中，用向后溯流液相色谱（HPLC）法测定。

2.试剂的准备（1）0.1mol/L盐酸溶液取盐酸100mL，加水至1000mL，用0.1mol/L氢氧化钠标准溶液调节pH，使溶液处于酸性状态。

（2）4%磷酸溶液取磷酸15mL，加水至250mL，摇匀。

（3）乙腈甲醇（2:1）将乙腈甲醇配制成2:1比例。

3.测定方法（1）样品注射量为20μL。

（2）柱温为35℃。

（4）短波紫外检测器的检测波长为266nm。

4.数据处理及结果分析四、实验结果样品编号维生素B1标准品质量（mg）峰面积（mv∙s）维生素B1含量（mg）1 0.006 8898 0.0062 0.008 11956 0.0083 0.010 15576 0.0104 0.012 18960 0.0125 0.014 22004 0.0146 0.016 25597 0.0167 0.018 28887 0.0188 0.020 32295 0.0202.维生素B1含量的平均值：五、实验分析通过本实验，我们验证了测定维生素B1含量的方法的准确性和可靠性。

维生素B1片的含量测定的方法验证专业：药物制剂班级：姓名：学号：紫外分光光度法测定维生素B1片的含量摘要本试验采用紫外分光光度法对维生素B1片的含量进行测定，对此法进行方法验证，证明了此法具有专属性高，回收率高、精密度高，线性好、测定范围宽的特点，并对数据处理方法进行了比较，发现采用对照品比较法进行数据处理受仪器波动影响较小，测定结果可信度较高。

关键词维生素B1 紫外分光光度法含量测定方法验证对照品比较法维生素B1及其制剂及其制剂常采用的方法有非水滴定法，紫外分光光度法和硫色素荧光法。

中国药典用非水溶液滴定法测定原料药，片剂和注射剂采用紫外分光光度法，USP采用硫色素荧光法。

采用非水溶液滴定法可能受到氢卤酸盐的干扰，对操作人员要求较高，采用硫色素滴定法不受氧化破坏产物的干扰，测定准确但操作繁琐，且荧光测定受干扰因素较多，本实验采用紫外分光光度法进行含量测定。

1实验装置及试剂1.1 仪器 BS210S型天平，UV751GD型紫外/可见分光光度计。

1.2 实验材料维生素B1片（来源：成都第一制药，规格：1--00片*10mg，批号：061204），维生素B1标准品（分析纯），维生素B1对照品（200ug/ml，2.0mg/ml），维生素B1标准溶液（0.250mg/ml），空白辅料，盐酸溶液（9→1000）。

2 实验方法处方分析：组成处方量(g) 比例(%)维生素B110 16.39淀粉20 32.78糊精30 49.18硬脂酸镁 1.0 1.639生产1000片根据处方量分析，维生素B1含16.39%，辅料含83.61%。

平均片重约61mg，取相当于25mg维生素B1的片粉约0.15g。

1、测定方法：取供试品20片，精密称定，研细，称取片粉适量（约相当于维生素B125mg），置100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）约70ml，振摇15min使维生素B1溶解，再加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置另一100ml量瓶中，加盐酸溶液（9→1000）稀释至刻度，摇匀，照分光光度法，在246nm的波长处测定吸收度，按C12H17ClN4OS.HCl的吸收系数（1%1cmE）为421计算，即得。

实验九 差示分光光度法测定维生素B 1片的含量一、实验目的1．掌握差示分光光度法的基本原理。

2．熟悉标准曲线定量的操作方法.二、实验原理(一）差示分光光度法(简称△A 法)，它保留了通常的分光光度法简便、快捷、直接读数的优点，又无需事先分离，并能消除干扰.方法：取两份相等的供试液，分别制成两种不同的化学环境（如在其一中加酸或碱,改变pH 或在其一中加能与供试品发生某种化学反应的试剂），然后将它们稀释至同样浓度后，分置于样品池和参比池中,于适当波长处，测定吸光度的差值（△A ）。

应用条件：①供试品在不同的化学环境中以不同的分子形式存在,它们的吸收光谱有显著的差异；②干扰物的吸收不受测定时化学环境的影响，光谱行为不变。

定量依据:设x 、y 分别代表在两种不同的化学环境中供试品的存在形式，它们在测定波长处的吸光度以A x 、A y 表示，背景和干扰的吸收度以A Z 表示，A Z 不受测定时化学环境改变的影响。

根据吸光度加和性原则:即在供试液的一定浓度范围内△A 值与其浓度C 呈线性关系,并消除了A Z 的干扰，可用标准曲线法或对照法定量.（二)维生素B 1片的测定维生素B 1分子中具有共轭双键结构，在紫外区有吸收，其紫外吸收随溶液pH 的变化而变化。

在pH7的磷酸盐缓冲液中具有两个吸收峰，在232~233nm 处，%11cm E =345;在266nm处，%11cm E =255。

在pH2时，最大吸收在246nm 处，%11cm E =425。

可用于维生素B 1片的差示分光光度法的测定.三、实验方法（一）测定波长的选择精密称取维生素B 1100mg ，用水溶解并稀释成100ml ，精密量取2ml 二份，分别用缓冲液（pH 7.0）和盐酸液(pH 2。

0)稀释成100ml ，以相应溶剂为空白，测定紫外吸收光谱。

再将前者放于参比池，后者放于样品池,绘制差示吸收光谱(见图11)。

差示光谱图表明在247nm处有最大差示吸收值(△A)，确定247nm为测定波长。