拟南芥室内培养技术

种拟南芥的步骤
种拟南芥的步骤
1、紫外线照实验台15-20分钟。

准备：1/2MS培养基；平皿；枪；灭菌水；
0.1%Agar溶液（高温高压灭菌）；灭菌枪头（黄枪头要剪）；marker笔；无
水乙醇；95%乙醇；封口膜。

2、数种子于1.5ml的EP管中，做好标记。

3、微波炉化1/2MS培养基，倒板。

需要加抗生素的要加抗生素（潮霉素：每
100ml培养基加56ul；卡纳：每100ml培养基加100ul），无菌操作。

4、洗种子：
A、向盛种子的EP管中加1ml 75%的乙醇（250ul的无菌水加750ul的无水
乙醇，现配现用，且要先加无菌水），剧烈晃动8分钟。

【或者洗两次，每次4分钟】
B、将上述酒精倒出后，加入95%的乙醇冲洗5遍。

【3遍也可以】
C、用无菌水清洗2遍，倒掉水。

【1遍也可以】
5、将种子悬起。

加入100—200ul的0.1%的Agar溶液，将种子用枪吹起。

【Agar
的量要视情况而定】
6、点种子。

用200ul的枪和剪过的黄枪头吸取种子，在培养基上依次点种，尽
量分散均匀，晾干。

7、封皿，并做好标记。

8、层化。

放于4度的冰箱处理3天。

9、将层化的种子置于光照培养箱中育苗一周，培养皿要倾斜放置。

10、移栽于土中。

拟南芥盆栽方案拟南芥（学名：Arabidopsis thaliana）是一种小型的一年生植物，因其生命周期短、易于培养和遗传实验的可行性，被广泛应用于植物科学研究中。

在本文中，我们将提供一个拟南芥盆栽方案，以帮助那些对这一植物进行自家种植的人。

1. 材料准备- 拟南芥种子：可在植物学实验室、种子公司或在线购买。

- 盆：选择适宜大小的盆，保证拟南芥根系能够充分扩展。

- 泥土：使用适宜的培养土，可在花草市场或园艺店购买。

- 平底盘或托盘：用于放置盆，以避免水滴在室内滴落。

2. 盆栽步骤2.1 准备盆土选择质地疏松、排水良好的培养土。

可以将培养土轻轻湿润，但避免过于湿润，以免引发根部腐烂。

2.2 播种将拟南芥种子均匀撒在培养土表面上，并轻轻压实，不要完全覆盖种子。

拟南芥种子较小，所以要小心操作，以确保均匀分散。

2.3 浇水使用喷壶或水壶从顶部轻轻喷洒水，保持培养土湿润。

避免使用喷头过大或水流过大的工具，以免种子被冲走。

2.4 光照与温度控制拟南芥适宜在温度适宜、充足的光照下生长。

将盆栽置于明亮的窗户旁或人工照明设备下。

室温保持在20-25摄氏度之间。

2.5 生长环境调节拟南芥对于光照的要求较高，因此要经常转动盆栽，以保证植株各个方向都能得到充足的光照。

如果环境光线不足，可以补充使用植物专用灯。

2.6 浇水与施肥保持培养土湿润，但避免过度浇水，以免引发根系病害。

约每周浇水一次，根据环境湿度和季节的变化做适当调整。

在生长过程中可以适时施加适量的植物营养液，以促进拟南芥的生长和发育。

3. 生长管理3.1 害虫防治定期检查拟南芥植株，如发现害虫如蚜虫、螨虫等，可以使用适量的杀虫剂进行处理，但要遵循产品说明。

3.2 避免拥挤随着拟南芥生长，植株之间可能会产生拥挤。

在植株茁壮成长后，适当间隔并摘除较弱的植株，以保证光照和营养的充足供给。

3.3 测量和记录生长数据观察拟南芥的生长情况，使用尺子或其它测量工具记录植株的高度、叶片数量等数据，以便后续分析比较。

[转载]拟南芥培养一、拟南芥播种种子装入dorf管内，20μl种子加1ml 75% 乙醇消毒1分钟；吸去乙醇，加入1ml 50%次氯酸钠：50%无菌水：0.05%吐温（or 5%漂白粉），震荡洗涤15-20分钟；稍离心使种子沉于下部，吸去次氯酸钠或漂白粉，加入无菌蒸馏水清洗（清洗3次，每次洗完后稍离心，吸净水分）；将种子用接种环均匀铺于MS培养基上，用封口膜封口，放入4℃冰箱内冷处理2-3天（春化）。

MS培养基的用量：直径为9cm的培养皿用25ml，直径为6cm 的培养皿用12.5ml。

加培养基时先将凝固的培养基用微波炉高温5分钟左右至全部解冻，然后慢慢冷却至不太烫手时倒板，如要加潮霉素等抗生素也是在此次加，加入后摇匀然后倒板。

倒板后至自然冷却即可铺种，如水分较多或板不够硬，亦可于倒板后将培养皿盖打开晾10分钟左右（此时超净台要关闭）。

种子的杀菌、清洗、铺板等过程在超净工作台上无菌操作，操作者进入超净工作台要用酒精棉球擦拭手、器具、超净台，防止感染细菌、真菌。

二、MS固体培养基制备1．培养基母液的配制和保存MS培养基含有近30种营养成分，为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量，可将培养基中的各种成分，按原量的20倍或200倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。

这样每次使用时，取其总量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL)，加水稀释，制成培养液。

现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出，供配制时使用。

大量元素(母液Ⅰ，20×) mg／LNH4NO3 33 000KNO3 38 000CaCl2·2H2O 8 800MgSO4·7H2O 7 400KH2PO4 3 400微量元素(母液Ⅱ，200×) mg／LKI 166H3BO3 1 240MnSO4·4H2O 4 460ZnSO4·7H2O 1 720Na2MoO4·2H2O 50CuSO4·5H2O 5CoCl2·6H2O 5铁盐(母液Ⅲ，200×) mg／LFeSO4·7H2O 5 560Na2-EDTA·2H2O 7 460有机成分(母液Ⅳ，200×) mg／LⅣA肌醇 20 000ⅣB烟酸 100盐酸吡哆醇(维生素B6) 100盐酸硫胺素(维生素B1) 100甘氨酸 400上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。

拟南芥室内培养技术研究刘守伟１，刘士勇２（１．东北农业大学园艺学院，哈尔滨１５００３０；２．黑龙江省农业广播电视学校，哈尔滨１５００９０）摘要：拟南芥室内培养的方法有土培法、蛭石培养法、沙培法、ＭＳ培养基法、移栽法、基质培养法和水培法，文章对这些方法的优缺点进行讨论。

关键词：拟南芥；室内培养；培养技术中图分类号：Ｑ９４－３３１文献标识码：Ａ收稿日期：２００５－０９－１２作者简介：刘守伟（１９７４－），女，黑龙江人，讲师，博士，主要从事蔬菜栽培生理和设施园艺方面的研究与教学工作。

Ｅ－ｍａｉｌ：Ｌｉｕｌｉｕ＿０９５＠１６３．ｃｏｍ拟南芥（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｔｈａｌｉａｎａ）是十字花科拟南芥属植物，具有生育期短，植株个体小及基因组小等特点，因而长期以来一直被用来作为分子生物学和传统遗传学研究的模式实验材料，尤其在植物发育生物学研究中扮演了十分重要的角色，为了与国际接轨，近年来国内已引入了拟南芥作为实验材料。

但是，拟南芥种子特别小，幼苗很弱，易夭折，给它的培养带来一定的困难。

目前，国内很少有实验室具备国外人工气候室培养拟南芥的全方位调控条件，在拟南芥培养方面存在成活率低、培养周期长等问题［１］。

因此，掌握拟南芥的培养技术非常重要。

目前，各个实验室常用的拟南芥培养方法主要有两种，一种土培法，另一种是移栽法。

其实，只要实验室条件具备，在室内成功培养拟南芥的方法很多。

本文依据多年在拟南芥培养方面的实践经验，结合目前的文献报道，对拟南芥的室内培养技术进行简述。

１拟南芥的室内培养技术１．１土培法把营养土和蛭石按４：６［１］，１：２［２］或１：１［３］的比例混合均匀，预先放入通气良好的花盆内，用自来水浇透，待水完全渗入后１５ｍｉｎ，将经过春化处理的种子均匀地播在介质表面，不盖土，用塑料保鲜膜罩住花盆，并在上面扎几个小孔，薄膜既保证小苗所需要的湿度又保证了温度。

播种后３ｄ就可以发芽，发芽后，及时把膜揭去，发芽后发现表土干了可以浇水，此时小苗比较脆弱，浇水时，最好用尖嘴洗瓶接近介质表面轻轻地浇，以免把小苗冲倒，不要浇得过多，以免把小苗淹死，把握少量多次的原则。

实验目的：拟南芥无菌培养。

实验仪器：光照培养箱,盆.培养皿,超净台,灭菌锅.实验试剂：营养土,蛭石,MS培养基实验步骤：1、配制MS培养基（一般装在三角瓶里，最好只装最大体积的70％以内），高温灭菌（115度15分钟）在未固化情况下，（固化的话可以在微波炉里融化再使用）在超净台里倒入培养皿（一般一个培养皿内装25ml左右培养基，培养皿也是要灭菌的，一般用报纸或者牛皮纸包一排，十几个吧），待充分凝固之后平放密封保存（倒好之后最好静置15－20分钟，然后放在塑料袋里，保存在4度）2、将拟南芥种子用10％消毒水（洗洁精体积分数）浸泡15分钟左右（要保证每粒种子都浸透），无菌水冲洗3遍，加入适量0.12%的琼脂溶液（要灭菌的）用蓝枪头播在之前准备的灭菌MS固体培养基上(要在超净台中操作)，点种子大概的确有点难以想象，下次你来拿种子和苗的时候我可以给你演示一下；3、４℃春化2天后转到光照培养间，温度２２℃／１８℃（日／夜），1６ｈ／８ｈ光周期，白炽灯光照培养，光照强度五千Lx。

（也不用这么严格的，一般22－25度，5000－7000lx，差不多就行了）4、大约7－10天后，拟南芥根须和芽均已长出，长到3至4片叶后可以移入土中培养（平板里长太久的话似乎会影响植物以后的生长）。

5、用营养土和蛭石以1：1的比例混合拌匀配制，以保证营养及透气性。

用高温杀菌以杀死土中的害虫。

（我们现在种得多，土都不灭菌的，注意拔拔杂草就行了）6、用镊子小心夹住培养皿中的拟南芥茎处，取出放在土上，卷起根须塞入土中。

避免将叶片带入土里。

放在光照培养间，条件和长平板一样就行了7、在托盘中浇水，通过毛细作用由底部的孔吸收上去，保证土壤湿润。

刚移植的前两天可以用基本上透明的盖子盖住盆顶。

MS培养基的配方是对的单位mg/L大量元素：NH4NO3 1 650KNO3 1 900CaCl２·2H2O 440MgSO4·7H2O 370KH2PO4 700微量元素：KI 0.83H3BO3 6.2MnSO4·4H2O 22.3ZnSO4·7H2O 8.6Na2MnO4·2H2O 0.25CuSO4·5H2O 0.025CoCl2·6H2O 0.025FeSO4·7H2O（27.8）+Na2-EDTA·2H2O（37.3）有机成分：肌醇100烟酸0.5盐酸吡哆醇（维生素B6）0.5盐酸硫胺素（维生素B1）0.5甘氨酸2注意：肌醇一般是要另外分开来独自配成浓缩液，因为它比较难溶，一般配成100倍，而除去肌醇后的有机，还是可以配成1000倍的。

福建农林大学学报(自然科学版)第34卷第2期Journa l o f Fu jian A gr icu lt ure and Fo restry U nivers it y(N atura l Sc ience Edition)2005年6月拟南芥室内简易栽培和田间大规模种植的方法王爱荣,刘 丽,周 洁,鲁国东,王宗华*(福建农林大学教育部生物农药与化学生物学重点实验室,福建福州350002)摘要:采用菜园土、草木灰、锯木屑体积比为4 2 1的培养基质,用1g L-1琼脂水悬浮种子直播培养拟南芥,根据其生物学特性在温度、空气相对湿度、土壤水分、光照以及病虫害防治等方面进行管理,培养出生长健壮、充分满足实验要求的拟南芥植株.用同样基质,适当遮荫,可以在田间大规模种植拟南芥.在月均温为11-14 ,日最低气温为2.1-4.7 的自然条件下,夜间覆盖塑料薄膜,拟南芥仍能正常生长.关键词:拟南芥;栽培技术;田间种植;突变体库中图分类号:Q94-331文献标识码:A文章编号:1006-7817(2005)02-0252-03I ndoor culture and large scale field cultivation of A rabidopsis thalianaWANG A-i rong,LI U L,i Z HOU Ji e,LU Guo-dong,WANG Zong-hua(K ey L aboratory for B i opesticide and Che m i ca l B io l ogy o f M i n istry of Educati on,Fu jian Ag ricu lture and F orestry U n i v ers it y, Fuzhou,Fuji an350002,Chi na)Abstrac t:The so i,l p l ant ash and w ood ch i ps at the propo rti on o f4 2 1we re used as m ed i u m to treat t he seeds o f A rabi dop sis t hali-ana,and to suspend the m i n1g L-1aga r w ater so l ution a t4 for2-4days and directl y sow the m onto those prepared pots to m ake t he m ger m i nate and gro w at the i ndoo r or outdoo r cond i tions w it h regu l ar temperature m anagement,w ater i ng,fertilization,and pest contro.l A.t haliana was still grow i ng we ll i n t he fi e l d even when the ave rage monthly te m pe ra t ure w as a round11.0-14.0 and the da ily m ini m u m te m pera t ure decli ned to2.1-4.7 i n w i nter as l ong as covered w it h p l astic fil m.The result prov i des a ne w w ay to g row A.t haliana a t l arge sca le but w ith l ow co st wh ich may facilita te the p l ant f unc ti ona l geno m ics.K ey word s:A rabi dop sis thali ana;culture technique;fi e l d planti ng;m utant base拟南芥(Arabidop sis t h aliana)属十字花科拟南芥属植物,具有显花植物的全部特征,且还具有基因组小、结构简单、形体小、生长周期短、繁殖系数高、自花授粉等优点[1],这些特点使它成为 植物界的果蝇 ,分子生物学、发育生物学和遗传学研究的模式物种.2000年,其基因组全序列测定工作的完成更加激发了人们对其基因结构与功能进行更为详尽研究的兴趣[2].现在,我国越来越多的实验室以拟南芥为试验材料.但拟南芥种子小,幼苗弱,对生长环境又有一定要求,这给它的培育带来了一定困难.目前,拟南芥的栽培方法主要有2种:一种是移栽法,即先将种子种在无菌培养基上,1周后再移栽到土壤中;另一种是土壤培养法,即直接把种子种在土壤中[3].国际上,已有很成熟的拟南芥栽培方法和材料[4],但是国内的条件往往达不到规范的要求,为此,已有一些改进方法的报道[3,5-7],但这些方法对设施依赖性很强,成本高,难以大规模种植.本研究摸索了一套简便易行的室内和田间栽培方法,为大规模、低成本栽培拟南芥提供参考.1 材料与方法供试拟南芥为Co lu m b ia-4、Co lu m b ia-0、g l、W s等生态型.根据福州市的取材情况和拟南芥的生长特点配制了多种基质.各基质不同组分的体积比为:菜园土 沙子=1 1、菜园土 花土=1 1、菜园土 椰糠=1 1、椰糠 沙子=1 1、菜园土 椰糠 沙子=1 1 1、菜园土 泥炭土=1 1、菜园土 草木灰 锯木屑=4 2 1.观察拟南芥在不同基质的生长情况.将混合均匀的培养基质装入培养盆中,培养盆放置于托盘上,一个托盘可放置多个培养盆.播种前向收稿日期:2005-01-14 修回日期:2005-03-25基金项目:国家自然科学基金资助项目(30471178);福建自然科学基金资助项目(B0210018);福建省科技厅资助项目(2003F008).作者简介:王爱荣(1975-),女,硕士.研究方向:分子植物病理学.*通讯作者.托盘内加水待培养基质表面湿润后,便可播种.种子熏蒸消毒后,用无菌水浸泡置于4 冰箱内低温处理2-4d 后播种.为使种子播得均匀并提高播种速度,将种子用1g L -1琼脂水悬浮,用滴管把种子点播在基质表面,直径10c m 的培养盆播5-6点,每点播2-3粒种子,播后用扎有小眼的塑料薄膜覆盖.置于21-23 、人工光照(白色荧光灯,16h 光照/8h 黑暗交替,光照度为4000l x )和空气相对湿度为70%左右的培养室生长,或置于田间塑料大棚中生长.根据拟南芥生长特点进行水肥管理和病虫害防治.2 结果与分析2.1 不同基质对拟南芥生长的影响本试验结果表明,拟南芥在菜园土、椰糠和沙子的体积比为1 1 1及菜园土、草木灰和锯木屑的体积比为4 2 1两种基质上生长最好.这两种基质松散性和通气性比较好,又有比较丰富的营养,有利于拟南芥萌发和幼苗生长.由于草木灰和锯木屑易得,因此在大规模种植拟南芥时,选用菜园土、草木灰和锯木屑的体积比为4 2 1的基质.用此基质培养,拟南芥不同生态型均生长良好.2.2 拟南芥各发育期的关键管理措施2.2.1 苗期 拟南芥苗期管理十分关键,否则极易死苗.拟南芥播种后2-4d 即可出苗,待子叶完全展开后揭开塑料薄膜.出苗后约1周,新叶长出时进行适当间苗,每穴留1株壮苗,未出苗的穴可以移苗补齐,保证每盆5-6株.间苗不宜太晚,否则易伤及临近的植株,且因养分、空间等的争夺减慢生长速度.拟南芥幼苗比较脆弱且根系不发达,需要较大的空气相对湿度和土壤湿度.因此,在揭去塑料薄膜后如果空气相对湿度低于70%,应在地面泼水并不定期喷雾小苗;土壤的含水量也要高,一般保持土壤表面潮湿即可,不宜过湿或过干.待出苗3周后,水与1/5M S 液体交替浇灌,以保证幼苗健壮.2.2.2 成株期 拟南芥成株期除正常的水肥管理外,关键是病虫害的防治.在种植拟南芥的过程中,真菌如菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum )和白粉病菌(E rysi p hae cichoracearum )及害虫如蚜虫(Myzus p ersicae )、小菜蛾(P l u tella xy llostella )和菜青虫(Artogeia rapae )常为害拟南芥,特别是大规模栽培时为害更大.对菌核病的防治,采取预防为主.用哈尔滨市农欢化工厂生产的 克枯星2号 20g 拌土100kg ,可达到很好的防治效果;若在幼苗期发病,则尽快将得病株拔掉,把病株的培养盆取出,浇灌1500-2500倍稀释液,可防止传染其它植株.白粉病易于传播,一旦发生,用福建龙岩市龙门化工发展有限公司生产的 粉锈星 (10g 兑水15kg)或用西安克胜新依达农药有限公司生产的 倾止 (稀释4000-6000倍)喷雾,严重时喷2-3次,效果甚好.蚜虫发生时喷雾上海宏邦化工有限公司生产的 大救星 (20g 兑水30L).小菜蛾和菜青虫发生时,使用单一农药往往效果较差,且使用几次后就失效,化学农药和生物农药混合使用效果很好,且药效持久.我们常将济南绿霸化学品有限责任公司生产的 毒死蜱 (稀释1500-2000倍)与海南正业农业化工有限公司生产的 吊死它 (稀释3000-4000倍)或湖北康欣农用药业有限公司生产的 生绿B t 可湿性粉剂 (稀释1000-1500倍)混合使用.2.2.3 花期 拟南芥属长日照植物,增加光照时间,可以提前开花.此外,如果将花序掐除,则可以促进营养生长,延迟花期.通常待花序长至10c m 左右时从基部掐掉,这样从花序基部会发出更多花序,同时可短暂抑制生殖生长,促进营养生长,长出的次生花序非常粗壮,不易倒伏.在塑料大棚中,天气好时白天要掀开部分塑料薄膜以通风除湿且防止棚内温度过高,下午太阳快落山时再将塑料薄膜盖好.2.3 拟南芥在培养室内的生长发育情况按照上述栽培方法,拟南芥各生态型均能旺盛生长,满足研究需要(图1A 、1B ).进一步观察拟南芥生态型Columb ia -4在室内的生长发育情况,拟南芥生长良好(表1).2.4 拟南芥在大棚中的生长情况用菜园土、草木灰和锯木屑体积比为4 2 1的培养基质在塑料大棚中培养Columb ia -4生态型的拟南芥,其生长情况非常好(图1C ).与室内栽培相比,拟南芥在塑料大棚中生长更健壮,可以结更多的种子,这可能与自然光较强有关.但拟南芥种在塑料大棚中更易受菌核病菌、小菜蛾和菜青虫等为害,而且受自然 253 第2期王爱荣等:拟南芥室内简易栽培和田间大规模种植的方法气候影响较大,福州夏天温度过高,室外难以种植.不过,拟南芥较耐低温,根据福建气象台资料,福州2003年12月份,2004年1、2月份平均气温分别为13、11和14 ,日最低气温分别为4.2、2.1和3.7 ,大棚内的拟南芥仍生长良好,但冬季光照时间短,花期会延迟.A.室内生长9周半的植株;B.室内生长情况;C.大棚内的生长情况.图1 拟南芥的生长情况Fi g .1 Gro w th stat us of A.t hali ana表1 拟南芥生态型Col um bia -4在培养室内的生长情况T able l G ro w t h stat u s of A.t ha li ana Colu m b i a -4at t h e grow th cha mb er成苗率/%始花时间/周开花时株高/c m 莲座直径/c m 果荚长度/c m 每荚种子数生活周期/周1004-58.5-11.08.5-10.5 1.2-1.442-5011-153 小结拟南芥作为重要的模式植物,是植物功能基因组学研究的重要材料.如何大规模栽培拟南芥是国内许多实验室面临的实际问题.我们通过试验摸索出一套直播育苗的管理措施,培养出生长健壮、结实率高的拟南芥,特别是首次研究了拟南芥室外大规模栽培技术,发现拟南芥在极端气温为2.1 下仍能正常生长,具有较大的参考价值.本研究摸索的方法与其他方法[3,5-7]相比,具有操作简单,基质易得等优点,且拟南芥生长健壮,是一种简便易行的方法.致谢:本试验得到美国加州大学洛杉矶分校分子细胞和发生生物学研究所林辰涛教授和中国农业科学院作物科学研究所刘旭研究员指导,特此致谢!参考文献:[1]陈璋.拟南芥:植物分子生物学研究的模式物种[J].植物学通报,1994,11(1):6-11.[2]DE NN IS C ,SURR IDGE C .A rab i dop sis t haliana genome [J].Na ture ,2000,792:150.[3]于政权,孙颖.拟南芥菜室内培养技术的改进[J].河北师范大学学报(自然科学版),1999,23(4):499-550.[4]W E I G EL D,GLAZEBROOK J .Arab idopsis :A L aboratory M anual [M ].北京:化学工业出版社,2004.7-17.[5]陈敏,白书农.拟南芥培养经验点滴[J].植物生理学通讯,1995,31(6):436-438.[6]王秀荣,沈宏,严小龙.拟南芥室内繁种技术研究[J].华南农业大学学报(自然科学版),2002,23(3):94.[7]李俊华,张艳春,徐云远,等.拟南芥室内培养技术[J].植物学通报,2004,21(2):201-204.(责任编辑:施晓棠) 254 福建农林大学学报(自然科学版)第34卷。