分解纤维素的微生物的分离ppt课件(自制)

糖分解成葡萄糖。
纤维素
C1酶、Cx酶
葡萄糖苷酶 纤维二糖
葡萄糖
一.基础知识 ㈠.纤维素与纤维素酶
3.纤维素的分解：
能分解纤维素的微生物，有各种细 菌、真菌和少数放线菌。
一.基础知识 ㈡.纤维素分解细菌的筛选：
1.方法： 刚果红染色法。
一.基础知识 ㈡.纤维素分解细菌的筛选： 2.原理：
刚果红可以与纤维素形成红色复合物， 当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合 物无法形成，出现以纤维素分解菌为中 心的透明圈，我们可以通过是否产生透 明圈来筛选纤维素分解菌。
〖旁栏思考题〗本实验的流程与课题2中的 实验流程有哪些异同？
提示：课题2是将土样制成的菌悬液直 接涂布在以尿素为惟一氮源的选择性培 养基上，直接分离得到菌落。 本课题先通过选择培养，使纤维素分解 菌得到增殖后，再将菌液涂布在鉴别培 养基上。其他步骤基本一致。
㈡.操作过程：
1.土壤取样：
采集土样时，应选择富含纤维素的环境。若找不 到合适环境，可将滤纸埋在土壤中一个月左右，也会 有能分解纤维素的微生物生长。 〖旁栏思考题〗为什么要在富含纤维素的环境中寻找 纤维素分解菌？ 答：生物适应一定环境，环境对生物具有选择作用， 只有在纤维素含量丰富的环境中纤维素分解菌的含量 才会高于其它普通环境，从而提高获得目的微生物的 几率。 〖旁栏思考题〗将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认 为滤纸应该埋进土壤多深？ 答：人工设置适宜环境，使纤维素分解菌相对聚集。 将纸埋于深约10cm的腐殖土壤中。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
③实例：树林中多年落叶形成的腐殖 土，多年积累的枯枝败叶等。
④讨论:如果找不到合适的环境，可以将滤 纸埋在土壤中，将滤纸埋在土壤中有什么 作用？你认为滤纸应该埋在土壤中多深？
答：将滤纸埋在土壤中能使纤维素分 解菌相对集中，实际上是人工设置纤 维素分解菌生存的适宜环境。一般应 将滤纸埋于深约10cm左右的土壤中。
一.基础知识 ㈡.纤维素分解细菌的筛选：
3.优点： 该方法可以通过颜色反应直接筛选。
二.实验设计与操作 ㈠.实验设计：
土壤取样 选择培养 梯度稀释
将样品涂布到鉴别 纤维素分解菌的培
养基上
挑选产生透明圈 的菌落
操作步骤 1、土壤取样：
①分布环境 富含纤维素的环境中
②原因 由于生物适应一定的环境，环境对生物有选 择作用，在富含纤维素的环境中，纤维素分 解菌的含量相对提高，因此从这种土样中获 得目的微生物的几率要高于普通环境。
〖旁栏思考题〗为什么选择培养能够“浓缩” 所需的微生物？
提示：在选择培养的条件下，可以使那 些能够适应这种营养条件的微生物得到 迅速繁殖，而那些不适应这种营养条件 的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到 “浓缩”的作用。
3.梯度稀释
按照课题1的稀释操作方法，将 选择培养后的培养基进行等比稀 释101～107倍。
2.选择培养
⑴.选择培养的目的： 增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中
分离到所需要的微生物。
⑶选择培养： 将土样加入装有30ml选择培养基的锥形瓶
中，将锥形瓶固定在摇床上，在一定温度下震 荡培养1～2天，直至培养液变浑浊。也可重复 选择培养。
课题成果评价
（一）培养基的制作是否合格以及选择培养基是 否筛选出菌落：
〖旁栏思考题〗这两种方法各有哪些优点 与不足？
染色法
优点
缺点
颜色反应基本 操作繁琐 方法一 上是纤维素分 刚果红会使菌落之间发生
解菌的作用 混杂
方法二
操作简便不 存在菌落混
杂问题
1.产生淀粉酶的微生物也 产生模糊透明圈 2.有些微生物能降解色素， 形成明显的透明圈。
6、纯化培养
在产生明显的透明圈的菌落，挑取 并接种到纤维素分解菌的选择培养 基上，在300C－ 370C培养，可获得 纯化培养。
2、选择培养
①目的： 增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够
从样品中分离所需要的微生物。
阅读书本P29 纤维素分解菌的选择培养基 配方，回答问题。
2、选择培养 ②制备选择培养基：
A、旁栏中的配方是液体培养基还是固体培养基？为什么？
B、这个培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有， 是如何进行选择的？
C、你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用
答答答：：：是有用选液牛择体肉作培膏用养蛋，基白本，胨配原培方因养中是基以配与方纤之中维对素无照作凝。为固或剂 （唯者琼一将脂碳纤）源维，素只改有为能葡分萄解糖纤。维素的微生物可以 大量繁殖。
2、选择培养
③操作：
称取土样20 g，在无菌条件下加入装 有30 mL培养基的摇瓶中。将摇瓶置于 摇床上，在30 ℃下振荡培养1～2 d， 至培养基变混浊。吸取一定的培养液 （约5 mL），转移至另一瓶新鲜的选择 培养基中，以同样的方法培养到培养液 变浑浊。
纤维素能被土壤中某些微生物分解 利用，这是因为它们能够产生纤维素酶。
棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物。
一.基础知识 ㈠.纤维素与纤维素酶
2.纤维素酶
纤维素酶是一种复合酶，一般认为它
至少包括三种组分，即C1酶(外切酶)、CX 酶(内切酶)和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤
维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二
4.将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养 基上
⑴制备鉴别培养基:
配方见书本29页。操作过程见课题1
（2）涂布平板：将稀释度为104～106的菌悬 液各取0.1ml涂布到平板培养基上，30℃倒置 培养。
5.刚果红染色法 方法一：先 培养微生物 ，再加入刚果红进 行颜色反应。
方法二：在 倒平板 时就加入刚果红。
对照的培养基在培养过程中没有菌落生长则说 明培养基制作合格。如果观察到产生透明圈的菌落， 则说明可能获得了分解纤维素的微生物
（二）分离的结果是否一致： 由于在土壤中细菌的数量远远高于真菌和放线菌 的数量，因此最容易分离得到的是细菌。但由于所 取土样的环境不同，学生也可能得到真菌和放线菌 等不同的分离结果。
专题二微生物的培养与应用
课题3分解纤维素的微生物的 分离
一.基础知识 ㈠.纤维素与纤维素酶 1.纤维素
纤维素是一种由葡萄糖首尾相连而成 的高分子化合物，是含量最丰富的多糖 类物质。
思考：纤维素是地球上含量最丰富的 多糖类物质，植物每年产生的纤维素 超过70亿吨，但却不会在地球上大量 的积累，为什么？