G418详细信息

G418是一种氨基糖苷类抗生素 ,在分子遗传试验中，是稳定转染最常用的抗性筛选试剂。

它通过抑制转座子Tn601，Tn5 的基因,干扰核糖体功能而阻断蛋白质合成，对原核和真核等细胞产生毒素 ,包括细菌、酵母、植物和哺乳动物细胞 ,也包括原生动物和蠕虫。

当neo 基因被整合进真核细胞DNA后,则能启动neo基因编码的序列转录为mRNA ,从而获得抗性产物氨基糖苷磷酸转移酶的高效表达,使细胞获得抗性而能在含有G418的选择性培养基中生长。

G418的这一选择特性,已在基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面得以广泛应用。

418使用方法室温下运输, 干粉在室温下储存，溶于水、甲醇，溶液于-20℃储存由于各真核细胞系对G418敏感度不同,各新细胞系或株稳定转染时杀死非稳定转染细胞所需用量需要通过实验优化。

最适用量通过建立细胞死亡曲线获得。

将细胞稀释至1000cell/ml，每孔100ul加入有培养基的24孔板，将每孔中的G418浓度稀释至0,100,200,300,400,500,600,700,800,900,1000,1100ug/ml等12个级别, 培养10-14天，以细胞全部死亡最低浓度为基准，一般400-800左右，筛选时比该浓度再高一个级别，维持时使用筛选浓度的一半即可。

G418选择浓度范围细胞系或机体G418浓度（ug/ml）中国仓鼠卵巢细胞700～800Madin－Darby犬肾细胞500人上皮A431细胞400猿CV-1细胞500盘基网柄菌属10～35植物10酵母125～500加药时间由于基因转染到细胞内之后要一段时间才能表达出蛋白质。

所以筛选不能太早；但是也不能太晚，因为转染了外源基因的细胞代谢负荷较大，增值较慢，时间长了就会被没有外源基因转入的细胞所淹没，最终导致筛选不出阳性克隆，一般要在转染24小时之后才开始加G418筛选。

随着细胞的代谢G418的浓度和活性都会下降，所以每3~5天都要更换一次含有G418的筛选液。

G418的用途及配制方法G418 ：白色粉末，融点138～144℃，溶于水、甲醇。

CAS No.：分子式：C20H40N4O10 •2H2SO4 分子量：比旋：+104o～+121o 水分：≤10%吸光值：≤ (280nm,1mg/ml), ≤ (570nm,100mg/ml)G418是一种氨基糖类抗生素，其结构与新霉素、庆大霉素、卡那霉素相似，它通过影响80S核糖体功能而阻断蛋白质合成,对原核和真核等细胞都有毒性 ,包括细菌、酵母、植物和哺乳动物细胞 ,也包括原生动物和蠕虫。

是稳定转染最常用的选择试剂。

当neo基因被整合进真核细胞基因组合适的地方后 ,则能启动neo基因编码的序列转录为mRNA,从而获得抗性产物氨基糖苷磷酸转移酶的高效表达 ,使细胞获得抗性而能在含有Ｇ418的选择性培养基中生长。

Ｇ41 8的这一选择特性 ,已在基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面得以广泛应用。

加药时间由于基因转染到细胞内之后要一段时间才能表达出蛋白质。

所以筛选不能太早；但是也不能太晚，因为转染了外源基因的细胞代谢负荷较大，增值较慢，时间长了就会被没有外源基因转入的细胞所淹没，最终导致筛选不出阳性克隆，一般要在转染24小时之后才开始加G418筛选。

随着细胞的代谢G418的浓度和活性都会下降，所以每3~5天都要更换一次含有G418的筛选液。

这时药物浓度可以降至200ug/ml。

培养液加药筛选约6天左右，细胞会大量死亡，孔中只剩下的细胞寥寥无几。

这时会出现两个问题：1.死亡的细胞会裂解释放出有害物质，导致那些有neo表达的阳性细胞死亡，即非选择性死亡。

2.孔中细胞数目很少，细胞之间的信号会变得很弱，也会导致阳性细胞的状态不佳甚至死亡。

这个时候需要一种特殊的培养液：假如你要转染3T3细胞，在3T3细胞汇合度达到80%的时候，换液，培养过夜之后收集培养液，通过滤器消毒，和新鲜的培养液按1：1混合备用。

再转染后筛选过程中就可以应用这种培养基。

保存于运输说明：2-8℃详细信息：G418 sulfate (Geneticin) 现货供应说明：真核表达筛选用抗生素，可以用于筛选表达特定抗性基因的稳定细胞株。

筛选哺乳动物细胞，推荐起始筛选浓度为400微克/毫升；筛选植物细胞，推荐起始筛选浓度为10微克/毫升；筛选酵母，推荐起始浓度为500微克/毫升。

根据起始浓度的效果可以再适当升高或降低G-418的使用浓度。

分子式：C20H 40N4O10·2H2SO4分子量：692.71CAS＃：108321-42-2外观：白色粉末特性：溶解性：可溶于水、甲醇、缓冲液和培养基。

溶解后，0.22μm过滤除菌，分成小包装，4℃可保存12个月，-20℃保存时间更长。

最常用的储存液使用100mM HEPES(pH7.3)配制，浓度为50mg/ml。

使用HEPES配制的好处是：加入储存液不会改变培养体系的pH值。

储存条件：2-8℃Ordering InformationDescription Quantity Price(RMB)Cat. no.产地G418 sulfate 1g45011811-023 Invitrogen 5g200011811-023 Invitrogen其他公司产品：产地货号规格促销价赠送Gibco11811-0231G450(元)单道计时器一个Gibco11811-0235G2000元送4G优盘一个Amresco E5891G380元单道计时器一个Amresco E5895G1250元送4G优盘一个Merck3458101G400元单道计时器一个Merck3458105G1610元送4G优盘一个Promega V79831G420元单道计时器一个Promega V79835G1700元送4G优盘一个G418溶液的配制配的时候就是用配好的HEPES溶G418，然后过滤，不用高压灭菌了，配好后分装，-20度保存，用的时候取一管放4度。

g41芯片G41芯片是英特尔公司推出的一款桌面计算机芯片组，于2009年面世。

它是英特尔搭载在奔腾和Celeron处理器上的芯片组，代号为Eaglelake。

G41芯片的主要特点是支持LGA 775接口的处理器和DDR3内存，可满足一般办公和家庭娱乐等日常使用需求。

下面将详细介绍G41芯片的特点和性能。

首先，G41芯片支持LGA 775接口的处理器。

这个接口是英特尔公司用于桌面计算机处理器的规格，代表Land Grid Array 775，表示芯片上有775个插针，用于与主板上的插孔配合。

通过这个接口，G41芯片可以支持Intel奔腾和Celeron系列的处理器，包括奔腾双核和Celeron双核处理器。

这些处理器具有较高的性价比，并且在一般办公和日常使用时具备足够的性能。

其次，G41芯片支持DDR3内存。

DDR3是一种高速的双倍数据率随机存储器技术，与传统的DDR2内存相比，它具有更高的频率和更低的功耗。

G41芯片支持最高800MHz的DDR3内存频率，最大支持8GB的内存容量。

这使得计算机具备了更好的多任务处理和大容量数据处理能力，且能够更好地应对较为复杂的应用程序和游戏。

此外，G41芯片提供了丰富的扩展接口和功能。

它包含了一个PCI Express x16（PCIe x16）插槽和两个PCI插槽，可支持高性能的独立显卡和其他扩展卡。

此外，它还支持多个USB 2.0接口和SATA 3.0接口，使得计算机具备更高的数据传输速度和扩展能力。

这些接口和功能为用户提供了更多的选择和扩展空间，能够满足不同需求的用户。

最后，G41芯片还拥有良好的节能性能。

它采用了英特尔的节能技术，包括Dynamic Power Management（动态功耗管理）和Enhanced Intel Speedstep Technology（增强型英特尔速度调整技术）。

这些技术可以根据计算机的使用情况自动调整处理器的频率和电压，以达到最佳的性能和功耗平衡。

产品简介：pCMV-C-Flag是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达C端和Flag tag(Flag标签)融合的目的蛋白的表达质粒。

含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达；在多克隆位点的3'端含有一个可以编码Flag标签的序列，因此可以表达出含有Flag标签的融合蛋白，可以方便地使用抗Flag的抗体来识别目的蛋白，有利于目的蛋白检测和分离纯化。

质粒为卡那霉素抗性。

转染细胞后，可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。

pCMV-C-Flag质粒的主要信息如下：FeatureNucleotidePositionCMVpromoter1–602T3 promoter and T3 primer binding site 620–6 39multiple cloning site680-740c-Flagtag741-764 T7 promoter and T7 primer binding site 817–8 38SV40 polyA signal850–1233f1 origin of ss-DNA replication1371–1677blapromoter1702–182 6SV40promoter1846–2184 neomycin/kanamycin resistance ORF2219–3010HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal 3011–3469pUCorigin3598–4 265pCMV-C-Flag质粒的图谱如下：pCMV-C-Flag的多克隆位点的详细图谱如下：XmaIPstISacISmall BamHI HindIII651 GAGCTCCACC GCGGTGGCGG CCGCTCTAGC CCGGGCGGAT CCAAGCTTCTCTCGAGGTGG CGCCACCGCC GGCGAGATCG GGCCCGCCTA GGTTCGAAGAFlagEcoRI EcoRV SacI BglII XhoI XbaI D Y K D701 GCAGGAATTC GATATCGTCG ACAGATCTCT CGAGTCTAGA GATTACAAGGCGTCCTTAAG CTATAGCAGC TGTCTAGAGA GCTCAGATCT CTAATGTTCCtagD D D K ApaI751 ATGACGACGA TAAGTAAGGG CCCGGTACCT TAATTAATTA AGGTACCAGGTACTGCTGCT ATTCATTCCC GGGCCATGGA ATTAATTAAT TCCATGGTCCpCMV-C-Flag中没有的酶切位点(Restriction enzymes that do not cut pCMV-C-Flag)包括：Afl II Age I Ahd I Asc I Bbs I Bbv II Blp IBsg I BsiW I BsmB I BspM II BsrG I BssH II Bst1107 IBstE II Ear I Eco47 III Eco72 I EcoN I Esp I Fse INru I PflM I Pme I Pml I PpuM I Psp1406 I Sap ISca I Spe IpCMV-C-Flag中的单酶切位点(Restriction enzymes that cut pCMV-C-Flag once)包括：NdeI CA`TA,TG241SnaBI TAC|GTA347Nhe PvuI CG,AT`CG851BclI T`GATC,A1005MunI G`CTAG,C 598 SacI G,AGCT`C 656 SacII CC,GC`GG 663 BstX ICCAN,NNNN`NTGG 664 NotI GC`GGCC,GC 669 PspAI C`CCGG,G 681 XmaI C`CCGG,G I C`AATT,G 1098 HpaI GTT|AAC 1111 MluI A`CGCG,T 1234 DraIII CAC,NNN`GTG1464 SfiI GGCCN,NNN`NGGCC 2123 BseRIGAGGAG16/14 2166 StuI AGG|CCT2169681SrfI GCCC|GGGC683SmaI CCC|GGG683BamHI G`GATC,C688HindIII A`AGCT,T694PstI C,TGCA`G704EcoRI G`AATT,C706 ClaI AT`CG,AT2188KasI G`GCGC,C2347NarI GG`CG,CC2348EheI GGC|GCC2349BbeI G,GCGC`C2351MscI TGG|CCA2430Tth111EcoRV GAT|ATC714SalI G`TCGA,C718AccI GT`MK,AC719BglII A`GATC,T724PaeR7I C`TCGA,G730XhoI C`TCGA,G730Xba I GACN`N,NGTC2466BsrD I GCAATG, 8 2581Bsp1286I G,DGCH`C2651RsrII CG`GWC,CG2864BsiCI TT`CG,AA3030BstBI TT`CG,AA3030Bsa I GGTCTC 7/11 3337HgiEI T`CTAG,A736Bsp120I G`GGCC,C769ApaI G,GGCC`C773II ACCNNNNNNGGT-1/13 3 677ApaLI G`TGCA,C3952pCMV-C-Flag质粒中推荐使用的测序引物序列如下：T3 primer(620–639): 5′AATTAACCCTCACTAAAGGG 3′T7 primer(817-838): 5′GTAATACGACTCACTATAGGGC 3′pCMV-C-Flag的全序列信息：D2632产品简介：pCMV-C-Myc是碧云天自行研发的用于在哺乳动物细胞中表达C端和Myc tag(Myc标签)融合的目的蛋白的表达质粒。

《技术协议》附录规格书编号：主板部件规格书REV：1.0（此版本号随变更升级）（以下简称“本规格书”）本规格书确认双方甲方：方正科技集团苏州制造有限公司地址：苏州工业园区苏虹东路188号乙方：XX电脑股份有限公司地址：XX市XX区XX路XX号本规格书为《购销合同》附件A《技术协议》不可分割的部分，双方经协商一致签订、确认内容如下：一、本规格书适用产品及型号本规格书适用于甲方向乙方采购主板类产品的下述具体型号：G41M08F2二、本规格书目的及产品技术要求本规格书主要针对采购产品的技术参数、产品安全、产品标牌等事项提出技术要求。

乙方提供产品应同下述要求一致（如有修改或更新应按照《技术协议》要求变更）：2.后I/O挡片机构图：IOA-01924-S0承認書.pdf3.芯片组散热器机构图：北桥：頁面擷取自 02-002955_A-1.pdf頁面擷取自 02-002955_A-2.pdf南桥：KG_1014-0024R_DS.pdf4.5.产品在安全、电磁兼容方面通过的认证证书：PCB厂商A IRIS WORLDUL證書.pdfPCB厂商B TRUSTECHUL.pdf6.有毒有害物质含量要求：7.故障率承诺：乙方承诺该型号的故障率（包括3个月、1年和3年）符合与品质管理部签订的《品质保障协议》中涉及的公司对故障率考核的指标甲方公司名称（公章）：乙方公司名称（公章）：方正科技集团苏州制造有限公司XX电脑股份有限公司授权代表：授权代表：XXXX XXXX签字日期：签字日期：。

G418的用途及配制方法G418 ：白色粉末，融点138～144℃，溶于水、甲醇。

CAS No.：108321-42-2分子式：C20H40N4O10 •2H2SO4分子量：692.71比旋：+104o～+121o 水分：≤10%吸光值：≤0.015 (280nm,1mg/ml), ≤0.1 (570nm, 100mg/ml)选是必不可少的。

只有经过2次以上的筛选之后才能找到那种我们想要的强分泌目的蛋白的，遗传稳定的细胞克隆。

1.G418的配制：取1g G418溶于1ml 1M的HEPES液中，加蒸馏水至10ml，过滤消毒，4度保存。

2.细胞培养：取待测培养细胞，制备成细胞悬液，按等量接种入多孔培养板中，培养6小时左右开始加药。

3.制备筛选培养基：在100ug/ml～1000ug/ml范围内确定几个梯度，比如先做个100ug/ml、400ug/ml、800ug/ml、1000ug/ml，按梯度浓度用培养基稀释G418制成筛选培养基。

4.加G418筛选: 吸除培养孔中培养基，PBS洗涤一次，每孔中加入不同浓度的筛选培养基。

5.换液：根据培养基的颜色和细胞生长情况，每3~5天更换一次筛选培养基。

方法同4。

6.确定最佳筛选浓度：在筛选10～14天内能够杀死所有细胞的最小G418浓度即为最佳筛选浓度。

在第一轮就筛选出最佳G418浓度的可能性不大，最有可能的是出现这种情况：用某一浓度G418的量在筛选14天后还不能杀死细胞，而用下一个梯度的G418的量在10天前就看不到活细胞了。

假如是400ug/ml不能杀死细胞，而800ug/ml在第5天就把所有细胞都杀死了，则可以再用500ug/ml、600ug/ml、700ug/ml进一步筛选，以确定最佳筛选浓度！心得：由于特性明确的细胞系G418的最佳用量还是比较稳定的，所以有时候不需要在这么大范围内进行筛选。

比如说你要转染NIH3T3细胞，现在我告诉你我测试过NIH3T3细胞对G418的敏感性，我用的筛选浓度是200 ug/ml。

G418简介是一种氨基糖苷类抗生素 ,在分子遗传试验中常被用作抗性筛选。

它通过抑制转座子Tn601，Tn5的基因对原核和真核等细胞产生毒素 ,包括细菌、酵母、植物和哺乳动物细胞 ,也包括原生动物和蠕虫。

当neo基因被整合进真核细胞DNA后 ,则能启动neo基因编码的序列转录为ｍＲＮＡ ,从而获得抗性产物的高效表达 ,使细胞获得抗性而能在含有Ｇ41 8的选择性培养基中生长。

Ｇ41 8的这一选择特性 ,已在基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面得以广泛应用。

氨基糖苷类抗生素作用机制氨基糖苷类抗生素具有强大的杀细胞作用，主要作用于细胞的核糖体，抑制蛋白质的合成。

作用过程为：1、氨基糖苷类分子吸附于细胞表面，造成细胞膜轻度损伤；2、少数氨基糖苷类分子进入细胞，与核糖体结合，影响正在进行的肽链延长过程，造成遗传密码错读，全盛异常蛋白质；3、异常蛋白质结合进细胞膜，导致细胞膜渗漏；4、大量氨基糖苷类分子进入细胞，形成更多的异常蛋白质，加重了细胞膜渗漏和药物摄入量；5、进入菌体的氨基糖苷类分子显著超过核糖体数时，使核糖体内进行的蛋白质合成起始阶段全部停止，此作用系不可逆的，因此导致细菌迅速死亡。

由于氨基糖苷类抗生素作用的结果，细胞内钾离子、腺嘌吟、核苷酸等重要物质外漏，细胞呼吸抑制、DNA 和RNA的合成也受到抑制。

G418质量指标G418 ：白色粉末，融点138～144℃，溶于水、甲醇。

CAS No.：108321-42-2分子式： C２0H 40N4 O10·2H2 SO4分子量：692.71结构式：比旋： +104°― +121°水分：≤10%吸光值：≤0.015 (280nm,1mg/ml), ≤0.1 (570nm, 100mg/ml)效价： >700 ug/mg储运室温下运输, 干粉在室温下储存，溶于水、甲醇，溶液于-20℃储存。

G418使用方法由于各真核细胞系对G418敏感度不同,各新细胞系或株稳定转染时杀死非稳定转染细胞所需用量需要通过实验优化。