银屑灵片中药提取液对肿瘤坏死省略朊细胞分泌细胞因子IL_8的影响_卢传坚
- 格式:pdf
- 大小:114.59 KB
- 文档页数:2
清银方治疗寻常型银屑病60例疗效观察及对血清IL-8的影响赵云夕;芦红伟;王根会;冯兰珍【期刊名称】《河北中医》【年(卷),期】2010(032)003【摘要】目的观察自拟清银方治疗寻常型银屑病的临床疗效及对血清白细胞介素8(IL-8)的影响.方法将120例寻常型银屑病患者随机分为2组,治疗组60例子自拟清银方,日1剂口服,对照组60例予以复方青黛胶囊口服.2组均连续治疗2个月.2组治疗前后进行PASI评分,计算病情改善率,评价疗效;采用放射免疫-饱和液相竞争法检测血清中IL-8水平.结果治疗组总有效率为83.3%,对照组总有效率为61.7%,2组总有效率比较差异有统计学意义(P<0.05).2组治疗后与本组治疗前比较IL-8均明显降低(P<0.01);且治疗组较对照组降低明显(P<0.05).结论自拟清银方对寻常型银屑病的疗效确切,且有显著的降低血清IL-8的作用.【总页数】2页(P333-334)【作者】赵云夕;芦红伟;王根会;冯兰珍【作者单位】河北省中医院皮肤科,河北,石家庄,050011;河北医科大学附属以岭医院儿科,河北,石家庄,050091;河北省中医院皮肤科,河北,石家庄,050011;河北省中医院皮肤科,河北,石家庄,050011【正文语种】中文【中图分类】R758.630.5;R289.5【相关文献】1.自拟清银方治疗寻常型银屑病的疗效观察及对血清IL-2、IL-8的影响 [J], 赵云夕;刘焕强;冯兰珍2.清银方治疗寻常型银屑病30例疗效观察 [J], 赵云夕;王根会;冯兰珍3.清肺透表祛湿解毒法治疗寻常型银屑病及血清IL-8水平检测 [J], 林海;马彦红4.田七清银汤治疗寻常型银屑病疗效观察 [J], 欧柏生;李淑莉;官胜;毛峰5.加味清银方、复方氨肽素联合中药药浴治疗寻常型银屑病疗效及患者生活质量评价 [J], 宋淑红;王岩军;左慧娟因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
32种中草药提取物体外抗骨肉瘤作用的筛选王晋;尹军强;沈靖南;贾强;黄纲;靳松;邹昌业【期刊名称】《南方医科大学学报》【年(卷),期】2006(26)9【摘要】目的对32种中草药进行初步抗骨肉瘤的体外筛选实验,为中药标准化和治疗骨肉瘤提供依据.方法应用MTT法测定各中药提取物对U2OS细胞株增殖活性的影响,检测其抑制骨肉瘤细胞的剂量效应关系;应用形态学观察、FCM及Annexin V法测定筛选出的中药水提取物对U2OS细胞的凋亡作用.结果 32种中草药提取物中蟾酥、牛胆粉等对骨肉瘤U2OS细胞株具有增殖抑制作用,深入研究表明蟾酥、牛胆粉水提取物对U2OS细胞具有促进凋亡作用,其中以蟾酥促进凋亡作用最为明显.结论通过对32种中草药进行筛选,发现蟾酥、牛胆粉等对骨肉瘤细胞株U2OS的增殖有抑制作用,为进一步开展抗骨肉瘤中草药有效成分的筛选及体内动物研究提供实验依据.【总页数】4页(P1293-1296)【作者】王晋;尹军强;沈靖南;贾强;黄纲;靳松;邹昌业【作者单位】中山大学附属第一医院骨肿瘤科,广东,广州,510080;中山大学附属第一医院骨肿瘤科,广东,广州,510080;中山大学附属第一医院骨肿瘤科,广东,广州,510080;中山大学附属第一医院骨肿瘤科,广东,广州,510080;中山大学附属第一医院骨肿瘤科,广东,广州,510080;中山大学附属第一医院骨肿瘤科,广东,广州,510080;中山大学附属第一医院骨肿瘤科,广东,广州,510080【正文语种】中文【中图分类】R282.7;R738.1【相关文献】1.中草药提取物复配对烟草黑胫病菌抑制作用增效组合筛选 [J], 张新强;桑维钧;苏凯;王慧2.10种中草药提取物体外抗铜绿假单胞菌作用研究 [J], 谢俊杰;韩峻;左国营;王宁;程子梦3.47种中草药提取物的体外抗菌活性筛选研究 [J], 左国营;韩峻;余巍;徐贵丽;王根春4.中草药提取物体外抗乙型肝炎病毒活性的筛选 [J], 张玉强;郑超;杨?n;刘敏;徐麟;符小发5.20种中草药提取物的体外抗菌作用研究 [J], 傅瑞春;左国营;王根春;韩峻;张学辉因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
中药联合心理干预对临床治愈银屑病患者血清中IL-6、IL-8及TNF-α水平的影响赵云夕;刘焕强;石林【期刊名称】《河北中医药学报》【年(卷),期】2014(029)004【摘要】目的:探究中药联合心理干预降低银屑病复发率是否与血清中IL-6、IL-8及TNF-α的表达水平有关.方法:将60例临床治愈的银屑病患者随机分成治疗组与对照组两组,分别检测两组患者治疗前、治疗18、36个月后血清中IL-6、IL-8及TNF-α的表达水平.结果:两组在治疗前,血清中IL-6、IL-8及TNF-α的表达水平差异无显著性;治疗18个月、36个月后,治疗组血清中IL-6、IL-8及TNF-α的表达水平差异无显著性;而对照组,血清中IL-6、IL-8及TNF-α的表达水平显著增高,且随时间推移,其表达水平越高.结论:中药联合心理干预能有效的维持银屑病患者血清中IL-6、IL-8及TNF-α表达水平,从而降低银屑病复发率.【总页数】2页(P18-19)【作者】赵云夕;刘焕强;石林【作者单位】河北省中医院皮肤科石家庄050011;河北省中医院皮肤科石家庄050011;河北省中医院皮肤科石家庄050011【正文语种】中文【中图分类】R275.9【相关文献】1.光量子血疗对寻常型银屑病患者血清TNF-α、IL-6及IL-8的影响 [J], 杨道秋;于军;田勇;张媛2.牙周组织再生术联合口腔正畸对牙周炎患者牙周状态及血清IL-8、IL-6、TNF-α水平的影响 [J], 赵飞3.依达拉奉联合胞二磷胆碱对急性脑梗死患者氧化应激反应及血清TNF-α、IL-6、IL-8水平的影响 [J], 郭城4.无创呼吸机联合高流量氧疗对AECOPD合并呼吸衰竭患者呼吸功能及血清IL-6、IL-8、TNF-α水平的影响 [J], 王春霞5.超分子水杨酸联合中药外敷对银屑病患者疗效以及血清IL-8、IL-2、NO、NOS 及TNF-α的影响 [J], 汤园园;张怡;刘颖;赵倩;董岱岱;王海蔓;杨洁因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
全书发挥》曰:“膈者左胸膈胃口之间,或痰或瘀血或食积阻滞不通,食物入胃不得下达而呕出,渐至食下即吐而反胃矣”。
所以在治疗上应疏肝和胃,健脾燥湿化痰。
方用柴胡疏肝散合二陈汤加减。
方中柴胡、白芍疏肝和胃;茯苓、半夏、生姜、陈皮燥湿健脾化痰。
若口干口苦,胃脘痞胀伴灼热感则加黄芩、黄连类;若嗳腐吞酸,矢气臭,酌加山楂、神曲、莱菔子以消食和胃;若气短乏力,加黄芪、党参健脾益气。
3清热散结,滋阴和胃三阳热结,癌毒炽盛,灼伤津液,三门干枯,水谷出入之道不的流通,胃脘干枯,故食下即吐而复出。
《医宗金鉴·杂病心法要诀》曰:“贲门干枯,则纳入水谷之道路狭隘,故食不能下,为噎塞也。
幽门干枯,则放入腐化之道路狭隘,故食入反出为翻胃也。
留连日久,则大肠传导之路狭隘,故魄门自应燥涩难行也。
胸痛如刺,胃脘伤也,便如羊粪,津液枯也,吐沫呕血,血液不行,皆死证也。
”故在治疗上应清热散结,养阴润燥,方用玉女煎加减。
药用生石膏清解胃热;熟地黄、麦冬、知母滋阴润燥。
若胃脘胀痛,气血不和者加木香、大腹皮、延胡索;大便干结者加生大黄。
4益气扶正,活血化瘀胃癌患者久病耗伤气血,正气亏虚,使中焦虚弱失于运化,导致气滞血瘀与痰浊食积共同为患。
故在治收稿日期:2013-01-06作者简介:曾娜(1985-),女,四川遂宁人,硕士研究生,研究方向:中医药信息数字化与利用。
疗上理应固本培元,活血祛瘀,药用八珍汤合膈下逐瘀汤加减。
药用人参、白术、茯苓、甘草、熟地黄、当归、川芎、白芍以气血双补,固本培元;药用五灵脂、桃仁、红花、赤芍、牡丹皮、延胡索、香附、枳壳以理气活血化瘀。
若服药后泛恶纳减,加神曲、藿香等;若畏寒肢冷,加熟附子;面浮肢肿加猪苓、泽泻、生姜皮等。
临床对胃癌晚期呕吐的治疗甚为棘手,而西药治疗往往效果不理想[2]。
西医学认为胃癌所致呕吐属于一种容受性呕吐,即胃源性呕吐。
由于癌肿的侵犯,使胃的容受性扩张减弱,正常舒缩功能受限,不能很好地将胃内容物排入肠道而出现呕吐,部分病例也不排除神经反射因素,因此西药治疗效果不理想,可能是西药的作用机理主要是抑制呕吐中枢,达到止吐作用,对胃本身的作用较弱。
消疕汤对血热风燥型银屑病患者血清IL-8、IL-10水平的影响文昌晖;张硕;贾敏;吴然【摘要】目的观察消疕汤治疗寻常性银屑病(中医辨证为血热风燥型)患者的临床疗效及对血清白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-10(IL-10)水平的影响.方法将76例寻常性银屑病患者随机分为治疗组与对照组,各38例,对照组予口服阿维A胶囊治疗,治疗组予口服消疕汤治疗.治疗4周后,观察并记录临床疗效、PASI评分及血清IL-8、IL-10水平的变化.结果治疗4周后,治疗组总有效率(89.47%)优于对照组(78.94%),差异有统计学意义(P<0.05);两组PASI积分均较治疗前有明显下降,治疗组较对照组下降更明显,差异均有统计学意义(P<0.05);两组患者血清IL-8水平较治疗前明显下降(P<0.05),治疗组较对照组下降更明显,差异均有统计学意义(P<0.05);血清IL-10水平较治疗前明显升高(P<0.05),治疗组较对照组升高更明显,差异均有统计学意义(P<0.05).结论消疕汤可明显改善寻常型银屑病患者PASI评分,可降低患者血清IL-8水平,升高血清IL-10水平,有效改善临床症状,疗效确切.【期刊名称】《贵州医药》【年(卷),期】2019(043)002【总页数】3页(P196-198)【关键词】消疕汤;银屑病;IL-8;IL-10【作者】文昌晖;张硕;贾敏;吴然【作者单位】贵阳中医学院第一附属医院,贵州贵阳550002;贵阳中医学院第一附属医院,贵州贵阳550002;贵阳中医学院第一附属医院,贵州贵阳550002;贵阳中医学院第一附属医院,贵州贵阳550002【正文语种】中文【中图分类】R751银屑病是一种以机体免疫反应异常,药物治疗包括维A酸、甲氨蝶呤、环孢素、糖皮质激素等免疫抑制剂及生物制剂等疗法,但均有各自的适用范围和副作用等局限性[1-4]。
本病的临床治疗尚处于不断探索期。
本研究选择寻常型银屑病,经中医辨证为血热风燥型患者为研究对象,予消疕汤治疗,收获较好临床疗效。
在凋亡的概念引进之前,抗癌药物杀伤肿瘤细胞的机制一直被认为是通过影响细胞增殖周期的不同时相,从而最终导致肿瘤细胞的坏死。
事实上,肿瘤细胞的死亡可以通过凋亡和坏死两个途径。
细胞凋亡与肿瘤的发生、发展紧密相关。
越来越多的研究证实,许多中草药具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用。
本文试从凋亡概念的形成、凋亡的机制、现代医学对凋亡的检测手段、以及中草药诱导肿瘤细胞凋亡的研究进展作一综述。
1 现代医学和中医学对肿瘤细胞凋亡的认识 1965年发育生物学家Lockshin和Willianms首先提出了PCD(Programmed Cell Death,程序化细胞死亡)一词,用于描述蛾幼虫的生理性死亡。
1972年Kerr等从形态学的角度描述细胞的生理死亡,并将这种细胞死亡命名为凋亡(apoptosis)[1]。
细胞凋亡又称程序性死亡(PCD)。
细胞凋亡为形态术语,程序性死亡为功能术语[2],目前文献中多倾向于细胞凋亡这一术语,认为这种死亡是因外来因素触发了细胞内在的死亡机制,最终导致了细胞自身的死亡。
外来因素可能是生理性的,也可能是非生理性的,在组织中凋亡的发生是不同步的。
在体内,凋亡小体一旦形成就被临近的上皮细胞、巨噬细胞或肿瘤细胞吞噬,并在溶酶体内被降解。
这一过程中没有细胞内容物的释放,不引起炎症反应,同坏死有明显的区别。
凋亡和坏死可以认为是细胞死亡的两个不同的途径[3,4]。
通过相差显微镜观察细胞凋亡时发现,细胞从发生凋亡,到形成凋亡小体,整个过程在几分钟内完成[5]。
凋亡不但存在于正常组织,也存在于肿瘤组织。
目前大多数人认为,肿瘤的发生发展不仅是细胞增殖失控的结果,也可能是由于细胞凋亡受阻,或者说是应该发生凋亡的细胞群未发生凋亡的结果。
但是研究也发现许多未经治疗的肿瘤组织中存在着自发性的细胞凋亡,推测其机制可能和肿瘤组织的轻度缺血,细胞毒T淋巴细胞浸润,巨噬细胞释放TNF α及内在的凋亡机制被启动等有关[6]。
近年来的研究表明,在控制肿瘤的生长和调节肿瘤对各种治疗如放疗和化疗的反应中,凋亡都充当重要的角色。
银屑病患儿血清中肿瘤坏死因子α、白介素6、白介素8的检测刘晓雁;鲁杰;卢竞;刘冰;刘卫红;赵小元【期刊名称】《临床皮肤科杂志》【年(卷),期】2001(30)5【摘要】为探讨外周血细胞因子的变化与儿童寻常型银屑病发病机理的关系,采用放射免疫分析法检测儿童寻常型银屑病患儿血清中TNFα和IL6水平,采用ELISA 法检测IL8的水平,对其相关性进行研究。
儿童银屑病组血清中TNFα、IL6、IL8含量均明显高于正常对照组,经t检验分析,两组间具有统计学意义(P<0.01。
儿童寻常型银屑病组患儿血清中TNFα与IL6、IL8含量的升高均呈正相关。
提示在儿童寻常型银屑病发病中TNFα可能是IL6、IL8升高的重要促进因素,它们有可能互相诱导或存在某种协同作用共同参与了银屑病的炎症性免疫病理过程。
【总页数】2页(P304-305)【关键词】银屑病;肿瘤坏死因子α;白介素6;白介素8【作者】刘晓雁;鲁杰;卢竞;刘冰;刘卫红;赵小元【作者单位】首都儿科研究所附属儿童医院【正文语种】中文【中图分类】R758.630.3【相关文献】1.病毒性心肌炎患儿血清肿瘤坏死因子-α及白介素-10水平检测 [J], 于侠;孙景辉;吕民;张金鑫2.泛发性脓疱性银屑病患者血清白介素-1、-6和肿瘤坏死因子α的检测 [J], 余炳前;骆志成;王文菊;葛玮3.银杏石榴煎治疗银屑病疗效观察及患者血清中肿瘤坏死因子-α、白介素-6及白介素-8表达水平的变化 [J], 羌建峰;曹双林;陈威;姚登福;傅琳玲;符梅4.银屑病患者血清肿瘤坏死因子α和白介素6水平检测 [J], 秦建中;钱玉昆5.银屑病患儿血清肿瘤坏死因子α、白介素6、白介素8的检测 [J], 贾伟因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
万方数据万方数据中药新药与临床药理2010年5月第21卷第3期・233・图1各组病理照片HE染色X400“松皮癣”、“蛇风”、“狗皮癣”等,对本病的病因病机古人有深刻的认识,《医宗金鉴.夕}、科心法要诀》:“白疙,此证俗名蛇虱,生于皮肤,形如疹疥,色白而痒,搔起白皮。
由风邪客于皮肤,血燥不能荣养所致。
”提出了血燥的内在发病原因;《外科证治全书》则提出了血虚致病的观点“白疙,因岁金太过,至秋深燥金用事,乃得此证。
多患于血虚体瘦之人,生血润肤饮主之。
”近代医家亦多从血分论治本病,银屑灵片应用于临床治疗银屑病已近十年,收到了较好的临床效果。
榻国维教授认为顽固性银屑病必有脏腑受损、血气失和、营卫不畅、久病人络等诸多病理因素,终致邪毒遏伏肌表、新血无以充养,瘀毒难以宣泄、药力不达病所,以致内外之邪留滞肌表,内不得疏泄,外不得透达。
故治疗时应在辨证的基础上从燥毒瘀立论,以养血润燥、凉血解毒为主,佐以化瘀通络之品。
论病之由,乃“久病人络而致瘀;论病之本,乃“淤血不去,新血不荣”;论病之治,乃“治风先治血,血行风自灭”。
故银屑灵片组方以四物汤为底,佐以化瘀通络之品,方中生地滋阴凉血、填精为主药,赤芍清热凉血,当归补血养血,川芎活血行滞,全方补中有通,补而不滞,养血润燥,且能活血通络,使营血恢复而周流无阻,肌肤得养而病自愈。
从西医学的观点来看,银屑病的病理特征主要表现在角化不全和角化过度两方面,一般认为是角质形成细胞异常增殖和凋亡引起的病理变化。
目前发现在银屑病患者的皮损区,角质形成细胞过表达19],与角质形成细胞相关的成纤维细胞㈣、Caspase-3、bcl—xL[nl、P物质【12】等均异常表达,推测可能是因为这些物质引起角质形成细胞的过度增殖与凋亡,从而引起银屑病的发病。
成年小鼠尾部鳞片表皮呈不全角化,其在组织学上相似于人类银屑病时的角化不全【l习。
国外学者17--Sl提出利用鼠尾鳞片表皮天然的角化形式模拟银屑病表皮角化不全的特点,建立实验模型,评价药物促进颗粒层形成的作用。
酶系统都有调节作用。
有研究表明大黄素可降低Ang -II诱导KFBI型胶原的表达及PA I-1的活性,促进F N的降解,能拮抗TGF-B1刺激的MC分泌FN[7]。
水蛭也可以活化纤溶酶、抑制胶原合成,减少细胞外基质的产生,具有增强免疫与延缓肾脏病理进程的作用。
本实验的研究结果表明,虫草肾茶胶囊能够明显降低5/6肾切除大鼠的血清S C r、BUN水平,减少尿蛋白,升高血清总蛋白、白蛋白水平,降低Cho l、LDL水平。
虫草肾茶治疗组、福辛普利对照组均增加了残肾组织MM P-2的表达,下调了T I M P-1的表达。
ACEI 对肾脏具有确切的保护作用,能够抑制肾小管间质单核-巨噬细胞及成纤维细胞积聚,促进EC M蛋白酶活性,并降低其抑制物的活性,从而促进基质降解[8]。
ACEI可以通过对基质金属蛋白酶及其抑制系统等(MM P s/T I M P s)的调节作用完成对EC M的降解。
而收稿日期:2009-04-16基金项目:广东省自然科学基金(04010055,T004847)作者简介:卢传坚(1964-),女,教授、主任医师,博士研究生导师,博士,主要从事皮肤病性病的临床、教学及科研。
本研究观察到,虫草肾茶胶囊也可对肾组织基质金属蛋白酶系统产生明显的调节作用,与这可能是其减少EC M的积聚,延缓肾脏纤维化进展的主要机制之一。
参考文献[1]徐艳秋,宋立群.虫草肾茶方治疗慢性肾脏病不同阶段的临床疗效观察[J].中国中西医结合肾病杂志,2007,8(7):415-416. [2]于思明,郭丹丹,宋立群.虫草肾茶方治疗慢性肾衰竭42例临床观察[J].中医药学报,2007,35(6):44-46.[3]宋立群,代丽娟.虫草肾茶方对慢性肾衰竭非透析患者微炎症状态的改善作用[J].中国中西医结合肾病杂志,2008,9(9):829-831. [4]刘必成,John H ay l or,EL Nah as A M.小管间质肌成纤维细胞激活对大鼠残余肾硬化的影响[J].中国病理生理杂志,1999,15(8): 720-722.[5]韩子明,张贺.洛伐他汀对肾小球硬化大鼠基质金属蛋白酶抑制因子-1表达的影响[J].中国中西医结合肾病杂志,2006,7(9): 506-508.[6]徐方云.冬虫夏草及其发酵菌丝体的药理药效学研究[J].药品评价,2005,2(5):334-339.[7]秦建华,陈明.大黄素抗肾间质纤维化研究进展[J].中国中西医结合肾病杂志,2006,7(3):184-186.[8]林善琰,吴永贵,马骥.实用内科学[M].11版.北京:人民卫生出版社,2001:1929-1948./银屑灵片0中药提取液对肿瘤坏死因子-A刺激后角朊细胞分泌细胞因子IL-8的影响卢传坚1,刘凤年2(11广东省中医院皮肤科,广东广州510120;21东莞市中医院,广东广州510120)摘要:目的:观察不同剂量的/银屑灵片0对TNF-A刺激产生的IL-8的抑制作用。
方法:将COLO-16传代,二氧化碳培养箱中培养,取培养良好的CO LO-16细胞,分为10组,空白对照组,TNF-A对照组,其余分别为TN F-A加不同浓度的/银屑灵片0中药提取液组,培养4h后用酶标仪测量各组OD值,建立标准曲线,用ELISA法测定各组IL-8的含量。
结果:/银屑灵片0的药液浓度越高,对TNF-A刺激产生的IL-8的抑制作用就越明显。
结论:/银屑灵片0对IL-8具有抑制作用,这可能是其治疗银屑病的免疫作用机制之一。
关键词:银屑病;银屑灵片;IL-8;TNF-A中图分类号:R758163文献标识码:A文章编号:1000-1719(2009)11-1862-02银屑病是一种常见的慢性皮肤病,亦是难治病之一。
其病理机制至今尚未完全阐明。
目前证实在其发病过程中,有多种免疫因子参与了其反应,有关TNF-A和IL-8在其发病过程中发挥的作用方向的研究日益增多。
研究认为TNF-A可诱导I L-8的生成,从而加重炎症反应,加重病情[1]。
因此,减少I L-8的生成可成为药物治疗作用之一。
/银屑灵片0是本院名老中医禤国维教授的经验方,应用于临床治疗银屑病已5年余,收到了较好的临床效果。
本研究利用TNF -A诱导I L-8的生成,同时加用/银屑灵片0中药提取液干预,通过对I L-8剂量的测定来探讨/银屑灵片0治疗银屑病的免疫作用机制。
1材料和方法111中药提取液将/银屑灵片0的中药水煎、萃取,放至冰箱-20e保存。
112细胞角质形成细胞株COL O-16购自北京医科大学,中国医学科学院中国协和医科大学皮肤病研究所保存,复苏后应用。
113药物及试剂人T NF-A液购自Pepr o tech公司,ED50< 0105ng/m L。
I L-8试剂盒购自上海森雄科技公司。
RP M I-1640培养液、胎牛血清、胰蛋白酶、MTT(噻唑蓝)、二甲基亚砜(D M S O)(晶美生物有限公司)。
114仪器流式细胞仪(美国COULTER公司,EP I CS ELI TE 型)孵箱(H arris HS O301T-UB A)(美国)115实验方法11511细胞传代及加药角质形成细胞株在含10%的胎牛血清的完全RP M I-1640培养液中以1B4的传代密度传代,置于37e、5%二氧化碳培养箱中贴壁生长48h。
在显微镜下观察4瓶COLO-16细胞贴壁生长情况良好,已长满瓶壁的70%~80%,取生长状态良好的COLO-16细胞,按5@104/m L密度、100L L/孔接种到96孔板中,使细胞密度达到5@104/孔。
置于37e、5%二氧化碳培养箱中贴壁生长48h。
显微镜下观察细胞贴壁生长良好,达到50%~60%融合,吸#1862#辽宁中医杂志2009年第36卷第11期DOI:10.13192/j.ljtcm.2009.11.43.luchj.062出各孔上清及未贴壁细胞,将第1、2列孔设为空白对照组,每孔加入100L L DME M培养液;将第3、4列孔设为加T NF-A刺激组,每孔加入含100L L T NF-A 的DME M培养液100L L;将第5~12列孔设为TNF-A+中药组,每列中药浓度为5m g/m L(1组)、10m g/ mL(2组)、25m g/mL(3组)、50m g/m L(4组)、80m g/ mL(5组)、100m g/mL(6组)、160m g/m L(7组)、200m g/mL(8组),继续培养24h。
收集各孔细胞液, -20e保存。
用D-H anks液将中药液组各孔洗1次,除去色素,各孔加100L L DME M培养液和20L L MTT(5L g/m L),继续培养4h,吸去各孔上清,每孔加100L L D M S O,20m i n后用酶标仪测定各孔OD值。
11512测定IL-8建立标准曲线,设标准孔7孔,每孔中加样品稀释液100L L(AB),第1孔加标注品100L L,混匀后用加样器吸出100L L加至第2孔(A2),如此反复作加倍稀释至第7孔(A7),最后从第7孔中吸出100L L弃去,使各孔体积均为100L L。
以同样方式将B孔至B7孔也设为标准孔;以A14孔和B14孔作为空白对照组,各加入100L L样品稀释液。
将收集到的细胞培养上清液稀释100倍,加入酶标板中,每孔100L L。
C7为DM E M培养液空白对照组,C8为100L L TNF-A组,C9为TNF-A+中药浓度5m g/ mL,C10为TNF-A+中药浓度10m g/mL,C11为TNF -A+中药浓度25m g/mL,C12为TNF-A+中药浓度50m g/m L,C13为TNF-A+中药浓度80m g/m L,C14为T NF-A+中药浓度100m g/m L,D7为TNF-A+中药浓度160m g/mL,D8为TNF-A+中药浓度160m g/ mL,D9为TNF-A+中药浓度200m g/m L。
将反应板置于37e120m in;用洗涤液将反应板充分洗涤4~6次,在滤纸上印干,每孔中加入第一抗体工作液50L L,将反应板充分混匀后置37e60m in,用洗涤液将反应板充分洗涤4~6次,在滤纸上印干,每孔加酶标抗体工作液100L L,将反应板充分混匀后置37e60m in,用洗涤液将反应板充分洗涤4~6次,在滤纸上印干,每孔加底物工作液100L L,置37e避光反应5~10m i n,每孔加入1滴终止液混匀,在492n m处测OD值。
所有OD值应扣除空白值后再行计算。
11513统计方法采用SPSS1115统计软件包进行数据处理和统计分析,组间比较采用t检验。
2结果及结论(1)未加样品液时各组OD值,见表1。
表1未加样品液时各组OD值(x?s)D MEM培养液组w100L LT N F-A组w1组*w2组*w3组*w1.497?0.0881.506?0.0771.235?0.0691.312?1.1440.078?0.0664组*w5组*w6组*w7组* 8组*0.813?0.1080.603?0.0480.627?0.0620.367?0.3290.064?0.049注:表示100L L TNF-A加中药提取液各组OD值与D M EM培养液组、100L L TNF-A空白组比较,*P<0101,其差异具有统计学意义。
表示100L L T N F-A加中药提取液200mg/mL 组与其余各组比较,w P<0101,其差异具有统计学意义。
(2)各组OD值扣除空白值后,见表2。
(3)在半对数作图,绘出标准曲线,样品OD值在扣除空白值后从曲线图上查出相应I L-8含量,见表3。
3讨论¹目前大多数学者认为银屑病是多基因遗传背景表2OD值扣除空白值后1组2组3组4组5组6组7组8组标准品(pg/m L)100050025012562.531.2515.6250平均OD值 2.941 2.4251.5350.8630.4780.3490.1390.009减去空白后的OD值2.8512.3351.4450.7730.3880.2590.0490注:表2数据表示随中药提取液浓度的增加,各组OD值下降。
表3样品OD值在扣除空白值后从曲线图上查出相应IL-8含量样品扣除空白后OD值IL-8含量(pg/m L)D M EM组0.13217.0100L LTNF-A组1.124170TNF-A+中药浓度5m g/m L组1.252200TNF-A+中药浓度10m g/m L组1.226190TNF-A+中药浓度25m g/m L组1.202180TNF-A+中药浓度50m g/m L组1.199178TNF-A+中药浓度80m g/m L组1.019140TNF-A+中药浓度100mg/m L组1.008138TNF-A+中药浓度160mg/m L组0.36056TNF-A+中药浓度200mg/m L组0.23329注:表3数据表示随各组中药提取液浓度增加,各组IL-8含量降低,提示中药浓度越高,对T NF-A分泌IL-8的抑制越强。