兽医采样、保存和送检技术

浅谈动物疫病监测样品采集、运送、保存应注意的问题近年来，实验室监测在重大动物疫病的诊断及防控中发挥了不可取代的重要作用。

而实验室监测结果的准确性、有效性除受实验方法、实验设备、监测试剂、实验操作等因素影响外，还要受到样品的采集、运输、保存等因素的影响。

样品的采集、运输、保存是监测工作顺利开展的基础，决定了实验结果的可靠性，检验结果能否反映疾病的主要病原、病因、一定程度上依赖于样品的代表性和质量。

实验室监测结果的准确性、有效性，是否能够反映出疫病的真实情况，都与检测样品的采集有重要关系。

笔者通过自己从事动物疫病监测工作多年的做法和体会，动物疫病监测样品采集、运送、保存应注意以下几方面的问题：1.样品采集要有代表性、合理性开展疫病监测工作采样时，要根据监测方案的整体要求、目的、方法和措施，结合当地区域分布，选择具有代表性的点或养殖场（户），做到采样布局合理，应尽可能全面、充分地反映总体的特征。

同时，还要考虑动物的日龄、饲养密度、体质强弱，地势特点、交通特点等因素。

只有这样采集样品，通过监测结果，才能综合评估出总体疫病流行、分布趋势。

2.样品采集要有时效性、适量性由于监测对象和监测项目的不同，样品采集是有时间要求的，应严格按监测对象和项目所要求的时间及时采样。

目前疫病监测主要通过检测抗体和病原两种方法。

但是，疫苗免疫或病原感染后，机体内的抗体或病原浓度在不同时期是不同的，往往监测到的数值是不一样的。

所以要根据监测的目的选取不同的时间采取样品，如果检测疫苗的保护效价，一般在免疫后10～15d采集。

监测病原时，由于感染初期病原在机体内存在较少，并在各组织内分布不均，所以要根据不同时期，采集不同部位的组织进行监测。

病死后的动物要立即采集样品，尤其夏季不应超过6h，冬季不能超过24h，拖延过久，则组织变性、腐败，影响监测结果。

另外，采集样品的数量要满足诊断监测的需要，并留有余地，以备必要的复检使用。

3.样品采集要有典型性、针对性动物疫病监测采集样品时，要根据检测的目的，以及实验室监测方法的不同，进行有针对性的采集样品。

动物疫病采样技术规范1范围本标准规定了动物疫病检验样品采集、器械准备、包装及废弃物处置、记录、保存、运送等技术。

本标准适用于动物疫病病原学、病理组织学、血清学、免疫学等实验室检验所需样品的采集。

2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款，凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究可以使用这些文件的最新版本。

凡是不注明日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB 16548 畜禽病害肉尸及其产品无害化处理规程GB 16550 新城疫检验技术规范GB/T 18635 动物防疫基本术语GB/T 18935 口蹄疫诊断技术GB/T 18936 高致病性禽流感诊断技术NY/T 541 动物疫病实验室检验采样方法《中华人民共和国动物防疫法》《病原微生物实验室生物安全管理条例》《兽医实验室生物安全技术管理规范》《高致病性动物病原微生物菌（毒）种或者样本运输包装规范》3术语和定义下列术语和定义适用于本规范。

3.1 样品取自动物或环境、拟通过检验反映动物个体、群体或环境有关状况的材料或物品。

本标准所称样品，系待进行实验室检验的材料。

3.2 病料来自患病或可疑患病动物的被（待）检材料。

3.3 采集通过一定的方法，按照特定的程序和要求，对样品进行收集、处理及整理的过程。

4样品采集原则4.1 动物疫病样品采集遵循适时、典型、无菌、适量和生物统计的原则。

4.2 发现疑似炭疽，禁止解剖。

4.3 根据不同的检验要求进行样品采集，采取包括相应的组织器官、内容物、分泌物、排泄物或其他材料。

4.4 进行流行病学调查、抗体监测、动物群体健康评估或环境卫生检测时，样品数量应满足生物统计学的要求。

4.5 无法估计病因时，可对组织器官、分泌物和排泄物进行系统全面的的采集。

4.6 如患畜（禽）已死亡，应尽快采集样品，死亡时间夏天不得超过6h，冬天不超过24h.5器械准备5.1器械的选择根据采集样品的需要，分别选择不同的器械、容器等器材。

实验二病料的采集、保存及送检一、目的掌握被检病料的采取、保存、送检的方法。

二、材料实验动物（鸡）、瓷盘、剪子、镊子、酒精灯、酒精、接种环、载玻片、火柴棒等。

三、病料的采取1.采取病料的基本原则(1)采集最适病料理想的病料，应是无菌采取的含病原微生物量高的血液、器官组织或分泌物和排泄物。

因此要根据疾病的病性采取合适的病料，如无法估计是何种疾病时，应根据临床症状和病理变化采集病料或全面采取病料。

取材时应注意病原微生物感染所致疾病的类型(如呼吸道感染疾病、胃肠道感染疾病、皮肤和粘膜性疾病、败血性疾病等)、病原微生物的侵入部位、病原微生物感染的靶器官等。

细菌检验病料应当是采自未经抗菌药物治疗的患病动物，并且应多做几张涂片。

(2)适时采集采集病料的时间一般在疾病流行早期、典型病急性期，此时病原微生物的检出率高；后期由于体内免疫力的产生，病原微生物减少，检测病原微生物比较困难，同时可能出现交叉感染，增加判断的困难性。

在采集供抗体测定用的血清时，可适时地采集急性期和恢复期的两份血清样品，一般两份血清的间隔时间为14～2ld。

内脏病料的采取，须于动物死后立即进行；夏季最迟不超过4～6h，冬天不超过24h，否则时间过长，由肠内侵入其他细菌，致使尸体腐败，有碍于病原菌的检出。

供做切片的样品采取后必须立即投入固定液，否则时间过长，会使细菌和组织细胞死亡、溶解，影响检验结果。

有条件做现场培养时，剖开尸体后应进行接种培养，然后采样，最后剖检。

(3)无菌操作采集病料所用的器械及容器要进行严格的消毒：刀、剪、镊子等金属用具可煮沸消毒30min，使用前最好用酒精擦拭，并在火焰上烧一下；器皿（玻制、陶制及珐琅制等）在高压灭菌器或干烤箱内灭菌；软木塞和橡皮塞应高压灭菌；载玻片用2%～5%碳酸钠煮沸消毒5～10min，煮沸后用清水冲洗干净，拭干保存或浸泡于95%酒精中以备使用；注射器和针头放于清洁水中煮沸30min即可，或用一次性注射器。

病料采集、保存和运输猪病的种类很多，有点是常病和多发病,，如白痢、黄痢等，比较容易诊断，有的表现出特异性的症状和病变，如水肿、气喘等，可以一目了然，但在更多的情况下疾病是缺乏特征性的病变，甚至肉眼看不到明显的病变，有的出现两种以上不同疾病的复杂病变，而小区有缺发实验室诊断做进一步的检验。

现将细菌、病毒、寄生虫、毒物和病理组织学的检查材料的采集、保存和运输方法，做一简要介绍。

一、细菌和病毒学检查材料1、取料时间的要求，在患畜死后即行采取，一般情况下最好不超过6小时，但炎热夏天越快越好。

剖开腹腔后，首先取材料再做检查，因时间拖长后肠道和空气中的微生物都可能污染病料；2、采集病料是应进行无菌操作，新用的容器和器械都要经过消毒，刀、剪、镊子用火焰消毒或煮沸（100℃，15-20分钟）；玻璃器皿（试管、吸管、注射器及针头）要洗干净，用纸包好高压灭菌（1.5kg/平方厘米，121℃,20-30分钟）或干热灭菌（160℃，2小时）。

3、采病料要有目的地进行，首先要怀疑是什么病，就采什么病料，如果不能确定是什么病时，则尽可能的全面采集病料，取料方法如下：一是实质器官(肝、脾、肾、淋巴结)：先用废刀（新刀火烧后易损坏），在酒精灯上烧灼后，用灭菌的刀、剪、镊子从组织深部取病料（约1-2平方厘米大小）放在灭菌的容器内。

二是血液、胆汁、浓汁等流汁病料。

心、胆囊病变，用灭菌注射器插入器官或病变内抽取，再注入灭菌的试管或小瓶内。

猪死后不久血液就凝固，无法采血样但从心室内尚可取出少量（多数为血浆）。

若死于败血症或某些毒物中毒则血液凝固不良。

三是采血，是指加抗凝剂的血液，用无菌操作从耳静脉采血3-5毫升，盛于灭菌的小瓶内，瓶内先加抗凝剂（20%枸椽酸钠）2-3滴于5毫升血液中，轻轻振摇。

四是血清，同上方法才出3-5毫升血液，置于干燥的灭菌试管内，经1-2小时后即自然凝固析出血清，必要时可进行离心，再将血清液置于另一个灭菌的小管内，冰冻保存。

兽医实验室样品的抽取和处置管理程序1 目的检测样品的代表性、有效性和完整性将直接影响检测结果的准确度,因此,必须对样品的接收、流转、贮存、处置以及样品的识别等各个环节实施有效的质量控制。

并且根据客户要求做好样品的保密安全工作.2 适用范围本程序适用于本实验室各类检测业务中检验样品的接收、流转、贮存、处置、识别等项的管理。

本程序不适用于标准样品的管理。

3 职责3.1 办公室负责对检验样品的完整性和对应于检验要求的适应性进行验收，记录接收样品状态，建立样品唯一性识别标识,登记入库、留样贮存、退还样品,并负责将检测样品及其他技术资料传递到检验室。

3.2 检验室负责验收检测样品的状态，检测样品制备、以及样品在检验、流转过程中的质量控制。

3。

3 抽样人员负责抽样样品的包装及发运。

并应严格遵守本程序的规定，对其抽样全过程负责。

4. 抽样工作程序4.1 办公室组织对参加抽样人员的培训，内容包括法律、法规、抽样方案、抽样技术、工作纪律等。

4.2 由办公室负责准备抽样所需的物品，包括：办理抽样通知书、介绍信或上级计划任务书等正式文件；准备抽样用品如采样单、封条、标签、样品袋以及其他所需的一切用品等。

4.3 根据各类检验的工作要求,由办公室负责拟定抽样方案，此方案内容一般包括：样品类别、抽样地点、抽样人员、抽样方法、抽样数量、完成时间、封样及留样要求等.4。

4 抽样人员到达被检单位后，先向被检单位提交抽样通知书或任务书以及抽样人员的工作证等有效证件，为保证抽样工作的质量和公正性，实施产品抽样过程中，不得事先告知被抽企业,一律采取突击抽样。

每个抽样小组不得少于2人.4.5 抽样人员到达现场后立即进行抽样工作,避免出现“特制样品”。

抽样过程中要仔细、认真填写抽样单，有特殊要求者，还应补记天气、环境、贮运、包装等情况。

4。

6 抽样应严格按照农业部规定的抽样程序或产品采样标准的规定进行抽样，以保证样品的随机性和代表性.抽取带回检验样品的数量应严格按规定要求，以保证满足检验需要。

动物疫病检测样品送检要求1样品采集1.1春秋两防样品采集1.1.1畜禽血清样品采集用真空采血管或者注射器采集动物血液3—5mL，倾斜放置到血液凝固后方可装袋（冬天最好在温和环境下放置以便血清的析出），然后在2000—3000转/分，5—10分钟即可分离到血清，将血清用1.5mL离心管分装，每管血清样品：家畜1～1.5 mL，家禽0.5～1.0 mL。

每个场（户）的样品用一个单独的采样袋进行包装，需在采样袋上注明乡镇名称、养殖场名称、样品种类和数量、采样时间等。

例如老鹰山街道办、大丰养殖场、猪血清30份、2017年4月20日。

1.1.2禽双棉拭子采集取无菌棉签2颗，分别插入禽喉头内/泄殖腔内转动3圈，取出放入2mL的无菌离心管中，去掉高出管壁部分，盖紧管盖，做好标记。

放入低温样品保存箱。

1.2疑似重大动物疫病样品采集1.2.1高致病性禽流感样品采集1.2.1.1活禽病料应包括气管和泄殖腔拭子10份，采集方法同1.1.2。

1.2.1.2采集病死禽或发病症状明显禽（不得少于5只）的气管、脾、肺、肝、肾和脑等组织样品。

1.2.1.3采集10份症状明显禽的血清样品，采集方法同1.1.1。

所有样品应密封于塑料袋或瓶中，置于有制冷剂的容器中运输，容器必须密封，防止渗漏。

样品若能在24小时内送到实验室，冷藏运输。

否则，应冷冻运输。

1.2.2口蹄疫样品采集1.新鲜水泡皮或组织样品（淋巴结、肌肉等）用装有50%甘油-磷酸盐缓冲液（PH7.4）2mL离心管密封保存。

1.2.3小反刍兽疫样品采集1.2.3.1无菌采集病羊眼棉试子、口棉拭子、鼻棉拭子，放入2mL的无菌离心管中，去掉高出管壁部分，盖紧管盖，做好标记。

放入低温样品保存箱。

1.2.3.2采集被扑杀或刚死亡病畜的脾、肠系膜和支气管淋巴结、肠黏膜、肺等组织。

1.2.3.3无菌采集全血，用常规方法分离血清。

样品采集后，置冰上冷藏尽快送至实验室。

1.3注意事项1.3.1疑似炭疽的病例禁止解剖炭疽病常呈地方性散发性流行，干旱或多雨，洪水涝积，吸血昆虫多等都是炭疽爆发的因素。