常见园艺植物组织培养培养基配方

培养基培养基是植物组织培养的重要基质。

在离体培养条件下，不同种植物的组织对营养有不同的要求，甚至同一种植物不同部位的组织对营养的要求也不相同，只有满足了它们各自的特殊要求，它们才能很好地生长。

因此，没有一种培养基能够适合一切类型的植物组织或器官，在建立一项新的培养系统时，首先必须找到一合适的培养基，培养才有可能成功。

一主要培养基配方:1．CC培养基(mg/L)2．NB培养基3．N6培养基是1974年朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培养而设计的。

其特点是成分较简单，KNO3和（NH4）2SO4含量高。

在国内已广泛应用于小麦、水稻及其他植物的花药培养和其他组织培养。

4．MS培养基是1962年由Murashige和Skoog为培养烟草细胞而设计的。

特点是无机盐和离子浓度较高，为较稳定的平衡溶液。

其养分的数量和比例较合适，可满足植物的营养和生理需要。

它的硝酸盐含量较其他培养基为高，广泛地用于植物的器官、花药、细胞和原生质体培养，效果良好。

有些培养基是由它演变而来的。

5．MSM培养基6.改良怀特培养基是1943年由White为培养番茄根尖而设计的。

1963年又作了改良，称作White改良培养基，提高了MsSO4的浓度和增加了硼素。

其特点是无机机盐数量较低，适于生根培养。

二培养基的配置在植物组织培养工作中，配制培养基是日常必备的工作。

为简便起见，通常先配制一系列母液，即贮备液。

所谓母液是欲配制液的浓缩液，这样不但可以保证各物质成分的准确性及配制时的快速移取，而且还便于低温保藏。

一般母液配成比所需浓度高10-100倍。

母液配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等。

配制时注意一些离子之间易发生沉淀，如Ca2+和S042+，Ca2+、Mg2+和PO43-一起溶解后，会产生沉淀，一定要充分溶解再放入母液中。

配制母液时要用蒸馏水或重蒸馏水。

药品应选取等级较高的化学纯或分析纯。

药品的称量及定容都要准确。

植物组织培养MS培养基配方（一）母液配制与保存配制培养基时，如果每次配制都要按着杨成分表依次称量，既费时，又增加了多次称量误差。

为了提高配制培养基的工作效率，一般将常用的基本培养基配制成10～200倍，甚至1000倍的浓缩贮备液，即母液。

母液贮存于冰箱中，使用时，将它们按一定的比例进行稀释混合，可多次使用，并在配制较多数量的培养基时，降低工作强度，也提高试验的精度。

基本培养基的母液有四种：大量元素（浓缩20倍），微量元素（浓缩100倍），铁盐（浓缩200倍），除蔗糖之外的有机物质（浓缩100倍）1大量元素配制大量元素母液时要分别称量，分别溶解，在定容时按表1中的序号依次加入容量瓶中，以防出现沉淀。

倒入磨口试剂瓶中，贴好标签和做好记录后，可常温保存或放入冰箱内保存。

2微量元素母液在配制微量元素母液时，也应分别称量和分别溶解，定溶时不分先后次序，可随意加入溶量瓶中定容（表2），一般不会出现沉淀现象。

倒入磨口试剂瓶中，贴好标签和做好记录后，可常温保存或放入冰箱内保有存。

3铁盐母液由于铁盐无机化合物不易被植物吸收利用，只有基螯合物才能被植物吸收利用，因此需要单独配成螯合物母液表3）。

配制方法：称取5.56g硫酸亚铁和7.46g乙二胺乙酸二钠，分别用450ml的去离子水溶解，分别适当加热不停搅拌，分别溶解后将硫酸亚铁溶液缓缓加入到乙二胺四乙酸二钠溶液中，将两种溶液混合在一起，最后用去离子水定溶于1000mL，倒入棕色贮液瓶中，贴好标签和做好记录后放入冰箱内保存。

先取一种置容量瓶（烧杯）中，然后将另一种成分逐加逐剧烈震荡，至产生深黄色溶液，最后定容，保存在棕色试剂瓶中。

4有机物母液按表4中的量分别称取各种有机物，分别溶解后，用蒸馏水或去离子水定容于1000mL，放入细口瓶配成1 mg/ml 。

各100 ml。

6-苄基腺嘌呤（6-BA）用0.5 N的HCl加热溶解。

萘乙酸（NAA）用少量无水乙醇溶解，再加蒸馏水。

植物组织培养MS培养基配方MS培养基主要包括两部分：无机盐和有机物。

无机盐部分的配方如下：1.氮源：氮源通常由硝酸铵（NH4NO3）、硝酸钾（KNO3）和硫酸铵（（NH4）2SO4）组成。

氮源的浓度通常为20-30mM。

2.磷酸盐：磷酸盐通常由二氢二钠磷酸盐（NaH2PO4）组成，浓度为10mM。

3.钠盐：MS培养基中含有钠盐，通常由硝酸钠（NaNO3）和硝酸钾（KNO3）组成。

钙盐的浓度为2.0mM，钾盐的浓度为1.0mM。

4.钠盐：MS培养基中含有钠盐，通常由硝酸钠（NaNO3）和硝酸钾（KNO3）组成。

钙盐的浓度为2.0mM，钾盐的浓度为1.0mM。

5.硫酸镁：硫酸镁（MgSO4）的浓度为1.0mM。

6.磷酸铵铁：磷酸铵铁（FeSO4·(NH4)2SO4）的浓度为27.8μM。

7.各种微量元素：包括锌、铜、锰、硼、钼、钴和镍等微量元素。

这些微量元素的浓度通常在微摩尔（μM）级别。

有机物部分的配方如下：1.蔗糖：蔗糖是植物培养基中最常用的碳源，浓度通常为30g/L。

2. 维生素：通常使用的维生素有二硝基地巴泼甲素（2,4-D）和吲哚-3-乙酸（IAA）。

它们的浓度通常在0.1-2.0 mg/L之间。

3. 激素：常用的激素包括植物生长素（BA）和乙烯利（2,4-D）。

它们的浓度通常在1.0-10.0 mg/L之间。

4.混合物：还可以加入一些有机物混合物，如胆固醇、烟酸和核酸酸等。

值得注意的是，这只是MS培养基的一个基本配方，根据具体的研究目的和植物种类的不同，还可以对该配方进行一些调整和优化。

总结起来，MS培养基是一种常用的植物组织培养基，主要用于植物生长和增殖。

其配方包括无机盐和有机物两部分，无机盐包括氮源、磷酸盐、钙盐、镁盐、磷酸铵铁和微量元素等；有机物包括蔗糖、维生素和激素等。

通过适当调整这些配方的浓度和比例，可以实现不同植物的生长和增殖需求。

★★★★★实验二植物组织培养培养基的配制与灭菌一、实验目的1.培养基能够提供植物生长、繁殖所必须的各类营养物质，以及生长因子，是开展植物组织培养研究的基础和前提。

植物的种类不同，研究的目的不同，所需要的培养基的种类也各不相同。

2.学习并掌握植物组织常用培养基的组成、配制与灭菌方法。

二、实验用具和药品1. 实验用具：电子天平（1/10、1/1000）、烧杯（100ml、1000ml）、量筒（50ml、100ml）三角瓶或培养瓶、移液管、药匙、玻棒、pH试纸、吸耳球、牛皮纸、皮筋等。

2. 药品：蔗糖、琼脂、0.1mol/L NaOH、 0.1mol/L HCl、各种培养基母液、激素母液三、实验内容与步骤（一）分组配制培养基。

各类培养基组成如下：1. 水琼培养基。

2. MS0培养基。

3. 1/2MS培养基。

4. MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.5mg/L。

5. MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 1.0mg/L。

6. MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 2.0mg/L。

7. MS+KT 0.5mg/L+6-BA0.5mg/L。

8. MS+NAA 1.0mg/L+2,4-D 1.0mg/L。

（二）湿热灭菌培养基1.称取规定数量的琼脂，加水到培养基最终容积的3/4，水浴或电炉使之加热溶解。

2.根据配方要求，把按顺序量取的各种母液以及称取的蔗糖，都加入煮好的琼脂中，然后加水定容。

3.用0.1mol/L的NaOH或者HCl调pH。

4.分装培养基，包好或盖好，标明编号。

5.121℃(103kPa)灭菌15-20min。

（三）作好植物组织培养的各项准备工作1. 制备无菌水：121℃(103kPa)灭菌40min 。

2. 配制 0.1%HgCl2溶液（放置棕色瓶中）。

3. 准备接种用培养皿、金属器械等用具。

四、注意事项1. 实验中所用的各种容器一定要洗净、烘干。

2. 用电子天平称量药品时，一定要用称量纸，对于有腐蚀性的药品，应将其放置在小烧杯中称量。

培养基的配制植物组织培养中常用的一种培养基是MS培养基。

MS培养基的配制包括以下步骤。

培养基母液的配制和保存MS培养基含有近30种营养成分，为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量，可将培养基中的各种成分，按原量的20倍或200倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。

这样每次使用时，取其总量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL)，加水稀释，制成培养液。

现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出，供配制时使用。

大量元素(母液Ⅰ) mg／LNH4NO3 33 000KNO3 38 000CaCl2·2H2O 8 800MgSO4·7H2O 7 400KH2PO4 3 400微量元素(母液Ⅱ)KI 166H3BO3 1 240MnSO4·4H2O 4 460ZnSO4·7H2O 1 720Na2MoO4·2H2O 50CuSO4·5H2O 5CoCl2·6H2O 5铁盐(母液Ⅲ)FeSO4·7H2O 5 560Na2-EDTA·2H2O 7 460有机成分(母液Ⅳ)ⅣA肌醇20 000ⅣB烟酸100盐酸吡哆醇(维生素B6) 100盐酸硫胺素(维生素B1) 100甘氨酸400以上各种营养成分的用量，除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外，其余的均为200倍浓缩液。

上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。

其中，母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到1 L。

母液Ⅲ的配制方法是：将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O 分别放到450 mL蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将pH调至5.5，最后定容到1 L，保存在棕色玻璃瓶中。

各种母液配完后，分别用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。

植物组织培养基的配制一、母液的配制和保存在植物组织培养工作中，配制培养基是日常必备的工作。

为简便起见，通常先配制一系列母液(stockso1utlon)，即贮备液。

所谓母液是欲配制液的浓缩液，这样不但刊以侏让各物质成分的精确性及配制时的迅速移取，而且还便于低温收藏。

普通母液配成比所需浓度高10～100倍。

母液配制时可分离配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等。

配制时注重一些离子之间易发生沉淀，如Ca2+和S042-、Ca2+、Mg2+和PO43-一起溶解后，会产生沉淀，一定要充分溶解再放入母液中。

配制母液时要用蒸馏水或重蒸馏水。

药品应选职等级较高的化学纯或分析纯。

药品的称量及定容都要精确。

各种药品先以少量水让其充分溶解，然后依次混合。

普通配成大量元素、微量元素、铁盐、维生索等母液，其中维生素、氨基酸类可以分离配制，也可以混在一起。

母液配好后放入冰箱内低温保存，用时再按比例稀释。

下面以MS培养基制备为例，概述其制备办法，为MS基本培养基4种母液成分配制。

(1)大量元素母液可配成浓度10倍母液。

用分析天平按表25称取药品，分离加100mL左右蒸馏水溶解后，再用磁力搅拌器搅拌，促进溶解。

注重Ca2+和PO3-4易发生沉淀。

然后倒入1000mL定容瓶中，再加水定容至刻度，成为10倍母液。

(2)微量元素母液可配成100倍的母液。

用分析天平按表精确称取药品后，分离溶解，混合后加水定容至1000mL。

(3)铁盐母液可配成100倍的母液，按表称取药品，可加热溶解，混合后加水定容至1000mL。

(4)有机物母液可配成l00倍的母液。

按表分离称取药品，溶解，混合后加水定容至1000mL。

(5)激素母液每种激素必需单独配成母液，浓度普通配成1mg／mL。

用时按照需要取用。

由于激素用量较少，一次可配成50mL或100mL。

另外，多数激素难溶于水，要先溶于可溶物质，然后才干加水定容。

激素的配法如下：将IAA、IBA、GA等先溶于少量的95％的酒精中，再加水定容至一定浓度。

培养基的配制植物组织培养中常用的一种培养基是MS培养基。

MS培养基的配制包括以下步骤。

培养基母液的配制和保存MS培养基含有近30种营养成分，为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量，可将培养基中的各种成分，按原量的20倍或200倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。

这样每次使用时，取其总量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL)，加水稀释，制成培养液。

现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出，供配制时使用。

大量元素(母液Ⅰ) mg／LNH4NO3 33 000KNO3 38 000CaCl2·2H2O 8 800MgSO4·7H2O 7 400KH2PO4 3 400微量元素(母液Ⅱ)KI 166H3BO3 1 240MnSO4·4H2O 4 460ZnSO4·7H2O 1 720Na2MoO4·2H2O 50CuSO4·5H2O 5CoCl2·6H2O 5铁盐(母液Ⅲ)FeSO4·7H2O 5 560Na2-EDTA·2H2O 7 460有机成分(母液Ⅳ)ⅣA肌醇20 000ⅣB烟酸100盐酸吡哆醇(维生素B6) 100盐酸硫胺素(维生素B1) 100甘氨酸400以上各种营养成分的用量，除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外，其余的均为200倍浓缩液。

上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。

其中，母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到1 L。

母液Ⅲ的配制方法是：将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O 分别放到450 mL蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将pH调至5.5，最后定容到1 L，保存在棕色玻璃瓶中。

各种母液配完后，分别用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。

各种培养基的配方培养基是科学研究中用于培养和繁殖细胞、组织和微生物的基础性工具。

不同类型的细胞和微生物需要不同的培养基来提供适宜的环境和营养物质。

下面将介绍几种常用的培养基的配方。

1. LB培养基（Luria-Bertani培养基）：成分：-蛋白胨：10g-酵母提取物：5g-NaCl：10g-纯水：1L2.硫酸亚铁葡萄糖培养基：成分：-硫酸亚铁：0.2g-葡萄糖：1g-磷酸二氢钠：0.5g-硫酸镁：0.1g-硫酸铵：0.5g-氯化钠：5g-纯水：1L3.TSB培养基（液体肉汤培养基）：成分：-蛋白胨：17g-酵母提取物：3g-NaCl：5g-纯水：1L4.TSB培养基（固体肉汤培养基）：成分：-蛋白胨：30g-酵母提取物：5g-NaCl：5g-琼脂：15g-纯水：1L5.M9盐基培养基：成分：-Na2HPO4：6g-KH2PO4：3g-NaCl：0.5g-NH4Cl：1g-MgSO4：0.1g-纯水：1L6.YPD培养基（酵母精蛋白培养基）：成分：-蛋白胨：10g-酵母提取物：20g-葡萄糖：20g-纯水：1L7. DMEM培养基（Dulbecco's修改Eagle's培养基）：成分：-高糖DMEM：950mL-胎牛血清：50mL- L-谷氨酰胺：2 mmol/L-纯水：1L8.RPMI-1640培养基：成分：-RPMI-1640培养基：950mL-胎牛血清：50mL- L-谷氨酰胺：2 mmol/L-纯水：1L9.MRS培养基（乳酸杆菌选择性培养基）：成分：-蛋白胨：10g-肉汤：10g-葡萄糖：20g-红茶提取物：1g-醋酸钠：5g-硫酸锌：0.5g-纯水：1L10.TSA培养基（肉汤琼脂培养基）：成分：-肉汤：30g-琼脂：15g-纯水：1L这些是常用的一些培养基的配方，不同细胞和微生物所需的培养基配方可能会有所不同。

在实验室中，根据研究的需要，可以根据具体要求对培养基进行调整和改良。

70种常用培养基配方培养基是用于菌种的生长、繁殖和实验研究的一种基质。

常用培养基种类繁多，各有不同的配方和用途。

下面介绍70种常用的培养基配方，供参考。

1.通用培养基：-营养琼脂培养基：牛肉浸提出液、酵母浸提出液、葡萄糖、琼脂。

-营养蚕豆琼脂培养基：蚕豆提取物、酵母浸提出液、葡萄糖、琼脂。

2.富集培养基：-甘露醇富集培养基：菌落提取物、氯化钠、甘露醇。

-马铃薯富集培养基：马铃薯提取物、氯化钠、琼脂。

3.选择性培养基：-MAC寄生虫选择性琼脂培养基：大肠杆菌寄生虫选择因子、大肠杆菌不可吸收糖、蓝膏染色剂、琼脂。

-SS培养基：硫酸镁、琼脂、碳酸氢钠、硫酸铁。

4.染色选择培养基：-LB琼脂培养基：牛肉浸提出液、酵母浸提出液、葡萄糖、琼脂。

-LB琼脂平板培养基：LB琼脂培养基、琼脂。

5.少培养基：-惠普顿可溶性培养基：肉浸膏、番茄汁、酵母浸提物、葡萄糖。

-惠普顿可溶性培养基+90%乙醇：肉浸膏、番茄汁、酵母浸提物、葡萄糖、乙醇。

6.杂类培养基：-牛血琼脂培养基：立克次体病原质、灭菌牛血、琼脂。

-葡萄酒琼脂培养基：葡萄酒、肉浸膏、酵母提取物、琼脂。

7.病毒培养基：-293改良培养基：DMEM/F-12培养基、胎儿牛血清、L-谷胺酰胺、嘌呤鸟苷、角鲨烷醇。

- Vero细胞培养基：EMEM培养基、羊脑提取物、牛胎儿血清。

8.食品微生物培养基：-SA培养基：牛肉浸取物、蛋葵况乳、葡萄糖、卵巢葡萄糖。

-TCBS琼脂培养基：钠氯化物、蛋黄粉、蔗糖、蓝膏染色剂。

9.植物组织培养基：-MS培养基：硝酸铵、硝酸钾、硫酸镁、硫酸锌。

-B5培养基：硝酸铵、硝酸钙、硫酸镁、硫酸钾。

10.真菌培养基：-SD培养基：蔗糖、酵母氮碱基、L-谷胺酸、琼脂。

-YPD培养基：酵母提取物、葡萄糖、琼脂。

以上是常用的70种培养基配方，涵盖了各种通用、富集、选择性、染色选择、少培养、杂类、病毒、食品微生物、植物组织和真菌培养基。

这些培养基适用于不同类型的实验研究和菌种培养。

★植物组织培养培养基的主要成分 1.无机营养物无机营养物主要由大量元素和微量元素两部分组成大量元素主要包括氮、磷、钾、钙、镁和硫六种氮源通常有硝态氮或铵态氮但在培养基中用硝态氮的较多也有将硝态氮和铵态氮混合使用的。

磷和硫则常用磷酸盐和硫酸盐来提供。

钾是培养基中主要的阳离子在近代的培养基中其数量有逐渐提高的趋势。

而钙、钠、镁的需要则较少。

培养基所需的钠和氯化物由钙盐、磷酸盐或微量营养物提供。

微量元素包括碘、锰、锌、钼、铜、钴和铁这些元素有的对生命活动的某个过程十分有用有的对蛋白质或酶的生物活性十分重要有的是参与某些生物过程的调节。

培养基中的铁离子大多以螯合铁的形式存在即FeSO4与Na2—EDTA螯合剂的混合。

2.碳源培养的植物组织或细胞它们的光合作用较弱。

因此需要在培养基中附加一些碳水化合物以供需要。

培养基中的碳水化合物通常是蔗糖或D-葡萄糖用量通常为2-4高者可达5亦可用市售的白糖所代替但一般应增加用量而且最好用比较固定的厂家生产的产品以保证实验的稳定性。

3.有机营养成分包括人工合成或天然的有机附加物包括维生素氨基酸及其它有机物质等。

最常用的有酪朊水解物水解乳蛋白、水解酪蛋白CH、酵母提取物、玉米胚乳、麦芽浸出物、西红柿汁、椰子汁CM及各种氨基酸如甘氨酸氨基乙酸等。

维生素在培养基中加入维生素常有利于外植体的发育。

培养基中的维生素属于B族维生素其中效果最佳的有硫氨素维生素B1、盐酸吡哆醇维生素B6和维生素H生物素、泛酸钙等、肌醇环己六醇、烟酸。

在部分培养基中还添加维生素BX氨酰苯甲酸、维生素C抗坏血酸、维生素E生育酚、、维生素B12氰钴胺酸、维生素BC叶酸、维生素B2核黄素和氯化胆碱等维生素。

这些可能对某些植物或植物的某些代谢过程有重要作用如肌醇主要以磷酸肌醇和磷脂酰肌醇的形式参与由Ca介导的信号转导。

4.生长调节物质常称为激素常用的生长调节物质大致包括以下三类1植物生长素类。

主要作用是诱导愈伤组织的产生促进细胞脱分化促进细胞的伸长促进生根。

注：
（1）MS为高盐成分培养基，其中硝酸盐、铵盐、钾盐含量均较高，微量元素种类齐全，养分均衡，在组织培养中应用最广。

B5和N6培养基含较高的硝酸盐、较低的铵盐，其中B5含较高的盐酸硫胺素，适合培养葡萄、豆科植物及十字花科植物；N6培养基适用于单子叶植物和柑橘类植物的花药培养。

SH培养基矿物盐含量较高，而NN培养基中大量元素约为MS培养基的一半，维生素种类增加，适于花药培养。

White培养基也是低盐培养基，多用于生根培养。

（2）本表所列为基本培养基，不包含植物激素及生长调节物质。

这些物质的加入量须根据培养目的而定，可参考有关书籍或通过实验确定。

（3）MS出自M urashige& Skoog（1968）；B5出自Gamborg（1962）；N6出自朱自清（1975）；SH出自Schenk & Hilde-brandt（1972）；NN出自Nitsch,JP & Nitsch,C（1969）；White出自White（1963）。

主要参考文献
1 赵世杰等主编. 植物生理学实验指导. 北京：中国农业科技出版社，1998
2 邹琦主编. 植物生理学实验指导. 北京：中国农业出版社，2000
3 西北农业大学植物生理生化教研室编. 植物生理学实验指导，西安：陕西科学技术出
版社，1987。

植物组培培养基及其配制培养基好比土壤，是组织培养中离体材料赖以生存和发展的基地。

因此，在组织培养基的各个环节中，应着重掌握培养基，了解它的组成和配制方法。

一、组成培养基的五类成分目前，大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成的。

1.无机营养物无机营养物主要由大量元素和微量元素两部分组成，大量元素中，氮源通常有硝态氮或铵态氮，但在培养基中用硝态氮的较多，也有将硝态氮和铵态氮混合使用的。

磷和硫则常用磷酸盐和硫酸盐来提供。

钾是培养基中主要的阳离子，在近代的培养基中，其数量有逐渐提高的趋势。

而钙、钠、镁的需要则较少。

培养基所需的钠和氯化物，由钙盐、磷酸盐或微量营养物提供。

微量元素包括碘、锰、锌、钼、铜、钴和铁。

培养基中的铁离子，大多以螯合铁的形式存在，即FeSO4与Na2—EDTA(螯合剂)的混合。

2.碳源培养的植物组织或细胞，它们的光合作用较弱。

因此，需要在培养基中附加一些碳水化合物以供需要。

培养基中的碳水化合物通常是蔗糖。

蔗糖除作为培养基内的碳源和能源外，对维持培养基的渗透压也起重要作用。

3.维生素在培养基中加入维生素，常有利于外植体的发育。

培养基中的维生素属于B 族维生素，其中效果最佳的有维生素B1、维生素B6、生物素、泛酸钙和肌醇等。

4.有机附加物包括人工合成或天然的有机附加物。

最常用的有酪朊水解物、酵母提取物、椰子汁及各种氨基酸等。

另外，琼脂也是最常用的有机附加物，它主要是作为培养基的支持物，使培养基呈固体状态，以利于各种外植体的培养。

5.生长调节物质常用的生长调节物质大致包括以下三类：(1)植物生长素类。

如吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)、2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)。

(2)细胞分裂素。

如玉米素(Zt)、6-苄基嘌呤(6-BA或BAP)和激动素(Kt)。

(3)赤霉素。

组织培养中使用的赤霉素只有一种，即赤霉酸(GA3)。

二、常用培养基配方及其特点1.常用培养基配方组织培养是否成功，在很大程度上取决于对培养基的选择。

2015-4-16常见培养基的制备LB；G AUSE I;P AD培养基[]LB培养基LB（lysogeny broth）培养基是微生物学实验中最常用的培养基，用于培养大肠杆菌等细菌，其分为液态或是加入琼脂制成的固态培养基。

加入抗生素的 LB 培养基可用于筛选以大肠杆菌为宿主的克隆。

LB培养基的配制：成分：胰蛋白胨(tryptone) 10g酵母提取物(yeast extract) 5g氯化钠(NaCl) 10g固体培养基另加琼脂粉(15-20)g加双蒸水至1000mL, 用5mol/L NaOH（约0.2ml）调pH至7.2，121℃灭菌30min。

配制方法：✓称量分别称取所需量的胰化蛋白胨、酵母提取物和NaCl，置于烧杯中。

✓溶化加入所需水量2/3的蒸馏水于烧杯中，用玻棒搅拌，使药品全部溶化。

✓调pH 用1mol/L NaOH溶液调pH至7.2。

✓定容将溶液倒入量筒中，加水至所需体积.✓加琼脂加入所需量琼脂，加热融化，补足失水。

✓分装、加塞、包扎。

✓高压蒸汽灭菌100Pa灭菌20min。

培养细菌：大肠埃希氏菌(Escherichia coli)天然培养基；Gause′s Synthetic Agar （高氏合成一号琼脂）成分：✓KNO3 1g✓Soluble starch（可溶性淀粉）20g✓K2HPO40.5g✓MgSO4 .7H2O 0.5g✓NaCl 0.5g✓FeSO40.01g✓Agar （琼脂）20g✓water （水） 1000ml✓pH 7.2-7.4方法：加入蒸馏水或去离子水，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装试管或三角瓶，121℃高压灭菌20分钟备用.。

性状：干燥粉末，易吸潮。

PDA培养基制作PDA培养基是马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称，即Potato Dextrose Agar (Medium)，分别对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。

它属于固体培养基、半合成培养基。

PDA 培养基宜于微生物生长发育、节省原料等优势，一般在培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌方面应用广泛。

培养基的配‎制植物组织培‎养中常用的‎一种培养基‎是MS培养‎基。

MS培养基‎的配制包括‎以下步骤。

培养基母液‎的配制和保‎存MS培养基‎含有近30‎种营养成分‎，为了避免每‎次配制培养‎基都要对这‎几十种成分‎进行称量，可将培养基‎中的各种成‎分，按原量的2‎0倍或20‎0倍分别称‎量，配成浓缩液‎，这种浓缩液‎叫做培养基‎母液。

这样每次使‎用时，取其总量的‎1/20(50 mL)或1/200(5 mL)，加水稀释，制成培养液‎。

现将制备培‎养基母液所‎需的各类物‎质的量列出‎，供配制时使‎用。

大量元素(母液Ⅰ) mg／LNH4NO‎333 000KNO3 38 000CaCl2‎·2H2O 8 800MgSO4‎·7H2O 7 400KH2PO‎4 3 400微量元素(母液Ⅱ)KI 166H3BO3‎ 1 240MnSO4‎·4H2O 4 460ZnSO4‎·7H2O 1 720Na2Mo‎O4·2H2O 50CuSO4‎·5H2O 5CoCl2‎·6H2O 5铁盐(母液Ⅲ)FeSO4‎·7H2O 5 560Na2-EDTA·2H2O 7 460有机成分(母液Ⅳ)ⅣA肌醇20 000ⅣB烟酸100盐酸吡哆醇‎(维生素B6‎)100盐酸硫胺素‎(维生素B1‎)100甘氨酸400以上各种营‎养成分的用‎量，除了母液Ⅰ为20倍浓‎缩液外，其余的均为‎200倍浓‎缩液。

上述几种母‎液都要单独‎配成1 L的贮备液‎。

其中，母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法‎是：每种母液中‎的几种成分‎称量完毕后‎，分别用少量‎的蒸馏水彻‎底溶解，然后再将它‎们混溶，最后定容到‎1 L。

母液Ⅲ的配制方法‎是：将称好的F‎e SO4·7H2O和‎N a2-EDTA·2H2O 分‎别放到45‎0 mL蒸馏水‎中，边加热边不‎断搅拌使它‎们溶解，然后将两种‎溶液混合，并将pH调‎至5.5，最后定容到‎1 L，保存在棕色‎玻璃瓶中。