常用培养基概念及配方复习课程
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培养基的配制-PPT
摆斜面：
◇ 成扎摆放，不需将每支试管单独摆放 ◇ 最好待培养基冷至60℃时摆斜面，以免形 成大量冷凝水
无菌检查：
将灭菌的培养基放在37℃温箱中培养24-48小 时，以检查灭菌是否彻底。
二 消毒与灭菌
实验目的
1、了解掌握常用消毒、灭菌方法的原理。 2、学习掌握干热灭菌和压力蒸汽灭菌操作步骤。
实验原理 干热法
压力蒸汽灭菌
实验内容及实验步骤 (continued)
1、检查水位，放入物品。
2、加盖、拧紧 对称用力 3、加热升温 4、排冷空气 等压力升至0.5kg/cm2时，打开排气 阀，排净冷空气。
5、升温、保压 等锅内压力升至所需数值（通常为
1.03kg/cm2），保持压力20-30分钟。
6、降压、取物
硝酸钾
1g
磷酸氢二钾 0.5 g
NaCl
0.5 g
硫酸镁
0.5g
硫酸亚铁 0.01克
琼脂
15-20g
水
ml
pH
7.2-7.4
马铃薯蔗糖琼脂培养基：
把马铃薯洗净去皮，取200克切成小 块，加水1000毫升，煮沸半小时后， 补足水分。在滤液中加入15克琼脂， 煮沸溶解后加蔗糖20克补足水分 pH值调到7.2～7.4
99 mL无菌水 装三角瓶 6 瓶 9 mL无菌水 试管装 12 支 1 mL 吸管 15 支 牛肉膏蛋白胨固体培养基 斜面 5支
牛肉膏蛋白胨培养基配方：
牛肉膏 蛋白胨 NaCl 琼脂 水 pH
3g 10g 5g 15-20g 1000ml 7.4-7.6
淀粉琼脂培养基（高氏培养基） ：
可溶性淀粉 20 g
分装：
操作步骤 (continued)
生产工艺第三章 培养基制备 第三节培养基的配制
第三节 培养基的配制
3．渗透压 配制培养基时，应注意营养物质要有合适的浓度。营 养物质的浓度太低，不仅不能满足微生物生长对营养物质 的需求，而且也不利于提高发酵产物的产量和提高设备的 利用率。但是，培养基中营养物质的浓度过高时，由于培 养基的渗透压太大，会抑制微生物的生长。此外培养基中 的各种离子的浓度比例也会影响到培养基的渗透压和微生 物的代谢活动，因此，培养基中各种离子的比例需求要平 衡。在发酵生产过程中，在不影响微生物的生理特性和代 谢转化率的情况下，通常趋向在较高浓度下进行发酵，以 提高产物产量，并尽可能选育高渗透压的生产菌珠。当然， 培养基浓度太大会使培养基黏度增加和溶氧量降低。
第三节 培养基的配制
1．根据微生物的培养需要 不同的微生物所需要的培养基成分是不同的，要确 定一个合适的培养基，就需要了解生产用菌种的来源、 生理生化特性和一般的营养要求，根据不同生产菌种的 培养条件、生物合成的代谢途径、代谢产物的化学性质 等确定培养基。
第三节 培养基的配制
2．营养成分比例恰当 微生物所需的营养物质之间应有适当的比例，培养基 中的碳氮的比例（C/N）在发酵工业中尤其重要。如培养 基中氮肥源过多，会引起微生物生长过于旺盛，而不利于 产物的积累；氮源不足，则微生物菌体生长过于缓慢。当 培养基中的碳源供应不足时，容易引起微生物菌体的衰老 和自溶。培养基的碳氮比不仅会影响微生物菌体的生长， 同时也会影响到发酵的代谢途径。不同的微生物菌种、不 同的发酵产物所要求的碳氮比是不同的。即使是同一微生 物在不同的培养阶段，对培养基的碳氮比的要求也是不一 样的。
第三节 培养基的配制
为了减少实验次数，可考虑用“正交试验设计”等数 学方法来确定培养基给分和浓度，它可以通过比较少的实 验次数而得到较满意的结果，另处，还可通过方差分析， 确定哪些因素影响较大，以引起人们的注意。
常用细菌培养基配方
常用抗生素氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml）溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml）溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
甲氧西林（methicillin）（100mg/ml）溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。
卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml）溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml）溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
链霉素（streptomycin）（50mg/ml）溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml）溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。
分装成小份于-20℃贮存。
常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
四环素（tetracyyline）（10mg/ml）溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。
分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。
常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。
常用培养基配方汇总
常用培养基配方汇总培养基是微生物学研究和实验室工作中常用的一种培养微生物的基础环境，其主要组成包括碳源、氮源、无机盐、生长因子等。
下面是一些常用的培养基配方汇总。
1.琼脂培养基琼脂培养基是最常用的固体培养基之一，其主要成分为琼脂、蔗糖、牛肉膏粉和无机盐。
其配方如下：-琼脂：15g-蔗糖：10g-牛肉膏粉：3g-磷酸二氢钾：1g-氯化钠：5g-氯化镁：0.5g-氯化钾：0.2g-高锰酸钾：0.0001g-蛋白胨：3g-酵母提取物：3g- 菜子油：0.5ml- 蒸馏水：1000ml2.肉汤培养基肉汤培养基是一种常用的液体培养基，其主要成分为牛肉膏粉和蛋白胨。
其配方如下：-牛肉膏粉：3g-蛋白胨：5g-葡萄糖：2g-氯化钠：5g-磷酸二氢钾：2g-氯化镁：0.5g- 蒸馏水：1000ml3.紫砂培养基紫砂培养基是一种用于真菌培养的培养基，其主要成分为紫砂和蔗糖。
其配方如下：-紫砂：15g-蔗糖：30g-蛋白胨：2g-磷酸二氢钾：1g-氯化钠：5g-氯化钙：0.1g4.麦芽培养基麦芽培养基是一种用于酵母和酵母菌类培养的培养基，其主要成分为麦芽粉和蔗糖。
其配方如下：-麦芽粉：10g-蔗糖：30g-蛋白胨：5g-氯化钠：5g-氯化钙：0.1g- 蒸馏水：1000ml5.铁蛋白培养基铁蛋白培养基是一种用于菌类和细菌培养的培养基，其主要成分为铁蛋白和蔗糖。
其配方如下：-铁蛋白：10g-蔗糖：10g-蛋白胨：2g-氯化钠：5g-磷酸二氢钾：1g-氯化钙：0.1g这些常用的培养基配方可根据实验需要进行适当调整和改良，以提高微生物的生长和培养效果。
同时，在制备培养基的过程中要注意消毒和无菌操作，以避免试验的污染和杂质的干扰。
常用培养基配方汇总
常用培养基配方汇总培养基是微生物学和生物技术中常用的一种实验工具，用于培养和繁殖微生物。
不同的微生物需要不同的培养基来满足其生长和繁殖的需求。
以下是一些常用的培养基配方汇总。
1. LB培养基（Luria-Bertani培养基）LB培养基是最常用的培养基之一，适用于大多数细菌的培养。
其成分包括植物蛋白胨、酵母提取物、氯化钠和琼脂。
它提供了细菌所需的氨基酸、碳源和能量源。
配方：-植物蛋白胨：10g-酵母提取物：5g-氯化钠：10g-琼脂：15g-加水至1L，调节pH至7.02. 紫砂培养基（Sabouraud培养基）紫砂培养基是一种适用于真菌培养的培养基。
其成分包括葡萄糖、酵母提取物和琼脂。
它提供了真菌所需的碳源和能量源。
配方：-葡萄糖：40g-酵母提取物：10g-加水至1L，调节pH至5.63. TSB培养基（Tryptic Soy Broth培养基）TSB培养基是一种适用于多种微生物的通用培养基。
其成分包括植物蛋白胨、胨肽、大豆胨和琼脂。
它提供了微生物所需的氨基酸、碳源和能量源。
配方：-植物蛋白胨：17g-胨肽：3g-大豆胨：5g-琼脂：15g-加水至1L，调节pH至7.34. MRS培养基（De Man, Rogosa and Sharpe培养基）MRS培养基是一种适用于乳酸菌培养的培养基。
其成分包括蔗糖、氯化镁、氯化钠、蛋白胨、酵母提取物和琼脂。
它提供了乳酸菌所需的碳源、氮源和能量源。
配方：-蔗糖：50g-氯化镁：0.2g-氯化钠：5g-酵母提取物：10g-琼脂：15g-加水至1L，调节pH至6.25.R2A培养基R2A培养基是一种适用于水样中微生物培养的培养基。
其成分包括胨肽、葡萄糖、酵母提取物、琼脂和微量元素。
它提供了水样中微生物所需的氮源、碳源和能量源。
配方：-胨肽：0.5g-葡萄糖：0.5g-酵母提取物：0.5g-琼脂：15g-微量元素：1mL-加水至1L，调节pH至7.2以上是一些常用的培养基配方汇总，适用于不同类型的微生物培养。
常用培养基概念及配方
常⽤培养基概念及配⽅LB培养基：是微⽣物学实验中最常⽤的培养基，⽤于⼀般细菌培养，特别⽤于分⼦⽣物学试验中⼤肠杆菌的保存和培养。
⽤于培养⼤肠杆菌、枯草杆菌等细菌，分为液态培养基和加⼊琼脂制成的固态培养基。
加⼊抗⽣素的 LB 培养基可⽤于筛选以⼤肠杆菌为宿主的克隆。
PDA培养基：马铃薯葡萄糖琼脂培养基，即Potato Dextrose Agar （Medium），依次对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英⽂。
宜培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌。
改良MC培养基：⽤于乳酸菌饮料中乳酸菌的菌落计数；原理：⼤⾖蛋⽩胨、⽜⾁膏粉和酵母膏粉提供氮源、维⽣素和⽣长因⼦；葡萄糖和乳糖为可发酵糖类提供碳源；乳酸菌发酵糖产酸使菌落周围碳酸钙溶解，以辨别乳酸菌；琼脂是培养基的凝固剂；中性红为pH指⽰剂。
MRS培养基：乳酸菌培养基，由多种成分组成，适⽤于乳酸菌的⽣长，⽤来分离培养乳酸菌的⼀类培养基，⼀种常⽤的培养基，宜培养分离乳酸菌。
由于该培养基⼗分适于乳酸菌的⽣长，⽽且抑制其他菌的⽣长，因此具有分离乳酸菌的功能。
当乳酸菌长成后在培养基上显黄⾊，之后会变淡⿊⾊。
以此分离乳酸菌。
乳酸菌：凡是能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产⽣乳酸的细菌统称为乳酸菌。
这是⼀群相当庞杂的细菌，⽬前⾄少可分为18个属，共有200多种。
除极少数外，其中绝⼤部分都是⼈体内必不可少的且具有重要⽣理功能的菌群，其⼴泛存在于⼈体的肠道中。
⽬前已被国内外⽣物学家所证实，肠内乳酸菌与健康长寿有着⾮常密切的关系。
乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的⼀类⽆芽孢、⾰兰⽒染⾊阳性细菌的总称。
常见菌种有双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌和嗜酸乳杆菌等⾃配⾼浓度污⽔：葡萄糖5550 mg／L+(NH4)2SO4,1170 mg／L+KH2PO4，170 mg／L+COD为5000 mg／L。
⾃配污⽔：葡萄糖555 mg／L+(NH4)2SO4，117mg／L+KH2PO417 mg／L+CaC12 0，08 mg／L+MgSO4，1，534 mg／L+NaHCO3 550．8 mg／L+FeC13·6H2O 0．25 mg／L+C0D 500 mg／L+氨氮为30 mg／L．⼀、LB培养基配制1升LB培养培养基需：蛋⽩胨10g/L；酵母粉5 g/L、Nacl10 g/L、单/双去离⼦⽔、琼脂15~20g/L（配制液体培养基不需要加，配制固体培养基时加⼊）。
培养基成分及配制课件
2
硼酸
3
硫酸锰
4
硫酸锌
5
钼酸钠
6
硫酸铜
7
氯化钾
KI H3BO3 MnSO4.4H2O ZnSO4.7H2O Na2MoO4.2H2O CuSO4.5H2O CoCL2.6H2O
用量（mg/L)
0.83 6.2 22.3 8.6 0.25 0.025 0.025
培养基成分及配制课件
1.大量元素
2021/8/25 培养基成分及配制课件
29
2021/8/25 培养基成分及配制课件
3. 肌醇（环己六醇）
促进糖类物质的相互转化和活性物质作用的发挥 促进愈伤组织生长以及胚状体和芽的形成 对组织细胞繁殖、分化的促进作用 使用浓度100 mg/L
注：用量过多则促褐变
30
2021/8/25 培养基成分及配制课件
4. 氨基酸
是很好的有机氮源，可直接被细胞吸收利用。 培养基中最常用的氨基酸是甘氨酸，其他的如精氨酸、
在离体培养条件下，不同种植物的组织对营养有不 同的要求，甚至同一种植物不同部位的组织对营养 的要求也不相同，只有满足了它们各自的特殊要求， 它们才能很好地生长。因此，没有一种培养基能够 适合一切类型的植物组织或器官。
3
2021/8/25 培养基成分及配制课件
在建立一项新的培养系统时，首先必须找 到一合适的培养基，培养才有可能成功。在植 物组织培养历史进程中，事实上也紧密地伴随 着培养基的研制史。
谷氨酸、谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等也常 用。
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2021/8/25 培养基成分及配制课件
5. 天然复合物
为了特殊的培养目的，在一部分培养基中还添加了 一些特殊成分，如水解酪蛋白，水解乳蛋白，酵母提取 物，胰蛋白胨，椰乳，西红柿汁，香蕉粉，橘子汁，可 可汁等天然复合物以及活性炭，渗透调节剂等。
实验室常用培养基的配制方法
实验室常用培养基的配制方法实验室中常用的培养基有很多种，包括通用培养基、选择性培养基、富集培养基等。
下面以常用的LB培养基和M9培养基为例，介绍它们的配制方法。
1. LB培养基（Luria-Bertani agar）LB培养基是一种通用培养基，适用于许多不同类型的细菌。
它由三种主要成分组成：蛋白胨、酵母提取物和氯化钠。
配方如下：-蛋白胨：10克-酵母提取物：5克-NaCl：10克-精制水：1000毫升步骤如下：1)在一个大容量烧杯中加入蛋白胨、酵母提取物和NaCl。
2)加入适量的精制水，搅拌溶解。
3) 将溶液移至一个继续器中，并用精制水补足至1000ml。
4)蓄满培养基的瓶子，盖上盖子，并使用自动压力灭菌器进行高压灭菌，或者将瓶子放入高压灭菌器中，将压力调至15磅（每平方英寸）。
2.M9培养基M9培养基是一种无机盐培养基，常用于细菌的生长和培养。
它的配方相对简单，由无机盐、葡萄糖和维生素B1组成。
配方如下：-Na2HPO4：6克-KH2PO4：3克-NaCl：0.5克-NH4Cl：1克-葡萄糖：0.4克-维生素B1：0.1克-精制水：1000毫升步骤如下：1)在一个大容量烧杯中加入Na2HPO4、KH2PO4、NaCl和NH4Cl。
2)加入一部分的精制水，搅拌溶解。
3)加入葡萄糖和维生素B1，搅拌均匀。
4) 将溶液移至一个继续器中，并用精制水补足至1000ml。
5)蓄满培养基的瓶子，盖上盖子，并使用自动压力灭菌器进行高压灭菌，或者将瓶子放入高压灭菌器中，将压力调至15磅（每平方英寸）。
以上是LB培养基和M9培养基的配制方法的简要介绍。
当然，实验室中还有很多其他种类的培养基，它们的配制方法也各有不同，需要根据具体的实验目的和细菌类型进行调整。
在培养基配制过程中，应当注意严格按照配方比例配制，保持清洁卫生，避免污染，并注意高压灭菌的操作安全。
实验室常用培养基配方
实验室常用培养基配方1. 营养琼脂培养基（Nutrient Agar）营养琼脂培养基是最为常用的一种培养基，用于微生物的一般培养、分离和鉴定，其配方如下：-水：1000mL-肉浸膏或胨：三到五克-水解酪蛋白：五克-氯化钠：五克-琼脂：十五克2. 培养基ONE（BHI Agar）培养基ONE用于灭菌后的微生物收集、保存和复苏，配方如下：-砂糖：十五克-胨：二十克-水：1000mL-酵母膏：二十克-酵母蛋白胨：十克-溶血素：十克-十％NaCl：五百毫升-甘油：百毫升3. 霍乱弧菌选择性琼脂培养基（TCBS Agar）TCBS Agar用于霍乱弧菌的分离和检测，配方如下：-水：1000mL-TCBS粉：一百克4. MacConkey琼脂培养基（MacConkey Agar）MacConkey琼脂培养基是一种选择性琼脂培养基，用于大肠杆菌的分离和检测，配方如下：-水：1000mL-肉浸膏：十七克-水解酪蛋白：十五克-氯化钠：五克-紫蘑菇素：六十毫克-琼脂：十五克5. Sabouraud琼脂培养基（Sabouraud Agar）Sabouraud琼脂培养基用于真菌的分离和培养-水：1000mL-葡萄糖：四十克-琼脂：十五克-氯化钠：五克-氯已二维硫酸钾：二十克这些仅仅是一些常见的培养基配方，实验室常根据不同微生物的要求而有所调整。
此外，还有许多特殊的培养基用于特殊微生物的培养和分离，如MRS培养基用于乳酸菌、EC培养基用于大肠杆菌O157:H7等。
在使用培养基时，需要注意权威的文献和生产厂家的指导。
微生物常用的培养基配方
微生物常用的培养基配方1、用于细菌培养——LB(Luria-Bertani)培养基LB培养基分为液体及固体两种形态的培养基，主要在分子生物学中应用。
(1) LB液体培养基，在90mL双蒸馏水中加入：胰蛋白胨1g氯化钠1g酵母提取物0.5g摇动容器直至溶质溶解后，用1当量NaOH调节pH至7.0，再用双蒸馏水定容至100mL。
而后进行高压蒸汽灭菌。
(2) LB固体培养基在100mL液体培养基的基础上，加入1.5g琼脂粉。
2、用于细菌培养——牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏 1.5g蛋白胨5g氯化钠 2.5g水500mL，pH调至7.4~7.6。
3、用于霉菌或酵母菌培养——马铃薯培养基(PDA)马铃薯（去皮）200g蔗糖（葡萄糖）20g水1000mL将马铃薯去皮切成小块放入锅中，加水至1000mL，煮至沸腾后维持20-30min，注意不时用玻璃棒搅拌防止糊底。
用可用2层纱布趁热在量杯上过滤，弃去滤渣。
取滤液加糖（培养霉菌用加蔗糖，培养酵母菌用加葡萄糖），补充水至1000mL，自然pH。
4、用于V.P.反应和甲基红试验——葡萄糖蛋白胨水培养基蛋白胨0.5g葡萄糖0.5g磷酸氢二甲0.2g水100mL，调节pH至7.2~7.4，115℃湿热灭菌20min。
5、用于吲哚实验——蛋白胨水培养基蛋白胨10g氯化钠5g水1000mL，调节pH至7.2~7.4，121℃湿热灭菌20min。
6、用于厌氧菌培养——RCM培养基（强化梭菌培养基）酵母粉3g牛肉膏10g蛋白胨10g可溶性淀粉1g葡萄糖5gL-半胱氨酸盐酸盐0.5g氯化钠5g醋酸钠3g琼脂0.5水1000mL，调节pH至6.8±0.1，121℃高压灭菌15min。
培养基配制方法
培养基配制方法1.1了解并掌握培养基的配制、分装方法1.2掌握各种实验室灭菌方法及技术。
2原理培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。
由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。
另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。
琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶体物质，是应用最广的凝固剂。
加琼脂制成的培养基在98～100℃下融化，于45℃以下凝固。
但多次反复融化，其凝固性降低。
任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用。
一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。
3材料3.1器皿及材料天平、称量纸、牛角匙、精密pH试纸、量筒、刻度搪瓷杯、试管、三角瓶、漏斗、分装架、移液管及移液管筒、培养皿及培养皿盒、玻璃棒、烧杯、试管架、铁丝筐、剪刀、酒精灯、棉花、线绳、牛皮纸或报纸、纱布、乳胶管、电炉、灭菌锅、干燥箱。
3.2药品试剂蛋白胨、牛肉膏、NaCl、K2HPO4、琼脂、NaNO3、KCl、MgSO4、FeSO4、蔗糖、麦芽糖、木糖、葡萄糖、半乳糖、乳糖、土豆汁、豆芽计、磷酸铵、5%NaOH溶液、5%HCl溶液。
4流程称药品→溶解→调pH值→融化琼脂→过滤分装→包扎标记→灭菌→摆斜面或倒平板。
5步骤5.1培养基的制备5.1.1称量药品根据培养基配方依次准确称取各种药品，放入适当大小的烧杯中，琼脂不要加入。
蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。
5.1.2溶解用量筒取一定量(约占总量的1/2)蒸馏水倒入烧杯中，在放有石棉网的电炉上小火加热，并用玻棒搅拌，以防液体溢出。
待各种药品完全溶解后，停止加热，补足水分。
如果配方中有淀粉，则先将淀粉用少量冷水调成糊状，并在火上加热搅拌，然后加足水分及其它原料，待完全溶化后，补足水分。
常用培养基的配置课件
培养基的优化与改进
优化培养基的成分
通过调整培养基中的营养成分、激素、生长因子等成分，提高细胞的生长速度、存活率和 功能。
优化培养基的pH值和气体环境
适当的pH值和气体环境（如氧气和二氧化碳浓度）对细胞的生长和分化至关重要，因此 需要针对不同细胞类型进行优化。
优化培养基的成本
降低培养基的成本是优化的重要方向之一，通过选择廉价的替代成分或提高培养基的利用 率，可以降低实验成本。
了解培养基的配方
熟悉培养基所需的成分和浓度， 确保准确配制。
01
02
清洁和消毒
03
确保所有使用的器具都经过清洁 和消毒，以避免污染。
04
准备所需试剂和器材
根据培养基配方，准备所需的各 种试剂和器材，如玻璃器皿、称 量纸、天平、量筒等。
校准仪器
确保使用的天平、量筒等计量工 具准确无误，以避免误差。
配置步骤
计算所需各成分的量
根据培养基配方，计算出所需 的各成分的量。
称量和溶解
使用天平准确称量各成分，并 加入适量的水或其他溶剂进行 溶解。
调节PH值
使用酸或碱调节培养基的PH值 ，确保符合要求。
灭菌
将配置好的培养基进行灭菌处 理，以杀死其中的微生物。
配置注意事项
01
注意安全
在配置过程中，要注 意安全，避免直接接 触化学试剂或高温液 体。
培养基的作用
为微生物提供适宜的生长环境， 支持其生长繁殖，并促进其表现 出特定的生理生化特征。
培养基的分类
根据用途分类
根据培养基的用途，可分为选择培养 基、鉴别培养基、计数培养基等。
根据成分分类
根据培养基的成分，可分为天然培养 基、合成培养基和半合成培养基。
培养基配方及配制方法
培养基配方及配制方法一、培养基配方常用的培养基是复合培养基，包含有机成分和无机成分两部分。
其中，有机成分提供微生物所需的碳源、氮源和能源等，无机成分提供微生物所需的无机盐和微量元素等。
以下是一个典型的复合培养基配方：有机成分：1.蛋白胨：提供氮源和碳源；2.葡萄糖：提供碳源和能源；3.酵母提取物：提供维生素和微量元素。
无机成分：1.磷酸盐缓冲液：提供pH缓冲效果；2.硝酸盐：提供氮源和无机盐；3.氯化钠：提供无机盐；4.磷酸氢二钾：提供缓冲效果和无机盐；5.硫酸镁：提供镁离子。
二、培养基配制方法1.准备容器：使用无菌烧瓶、试管、培养皿等容器，并用高压蒸汽灭菌器进行灭菌处理。
2.称量成分：按照配方中的比例，准确称量有机成分和无机成分。
3.溶解有机成分：将蛋白胨、葡萄糖和酵母提取物分别加入适量的蒸馏水中，通过搅拌或加热溶解均匀。
4.准备无机成分溶液：将磷酸盐缓冲液、硝酸盐、氯化钠、磷酸氢二钾和硫酸镁按照配方中的比例加入适量的蒸馏水中，通过搅拌溶解均匀。
5.校正pH值：使用pH计测定培养基的pH值，如有需要，可以用盐酸或氢氧化钠调节pH值至合适的范围。
6.加入蛋白胨溶液：将溶解好的蛋白胨溶液加入无机成分溶液中，并通过搅拌均匀。
7.加入葡萄糖溶液：将溶解好的葡萄糖溶液加入已配制好的培养基中，并通过搅拌均匀。
8.加入酵母提取物：将酵母提取物溶液加入培养基中，并通过搅拌均匀。
9.调节体积：根据实验需要，可以添加蒸馏水或其他添加剂来调节培养基的体积和浓度。
10.灭菌处理：将配制好的培养基进行高压蒸汽灭菌处理，保证培养基的无菌状态。
以上就是一个典型的培养基配方及配制方法的示例，只是其中的一个例子，不同的微生物可能需要不同的培养基配方和配制方法。
在实验中，根据具体的需求调整培养基的配方，确保能满足微生物的生长需求，并通过灭菌处理保证培养基的无菌状态。
最新培养基和其配制专业知识讲座
无机营养成分
有机营养成分 植物生长调节物质 附加物和天然的有机添加物质 琼脂 pH值
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（一）无机营养成分 仿。文档如有不当之处，请联系本人或网站删除。
无机营养又叫矿质营养，指植物在生长发 育时所需要的各种维持其正常生理活动的 化学元素。
主要有： 大量元素： ＞0.5mmol／L 微量元素络，文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模 仿。文档如有不当之处，请联系本人或网站删除。
N：
作用：是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核酸、磷脂、生物碱等的组成成 分 形式：NO3—N和NH4—N
or callus.
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3、GA (赤霉素)： 仿。文档如有不当之处，请联系本人或网站删除。
作用： 有20多种，生理活性及作用的种类、部位、效应等各 有不同。 培养基中添加的是GA3，主要作用是促进幼苗茎的伸 长生长，促进不定胚发育成小植株； 赤霉素还用于打破休眠，促进种子、块茎、鳞茎等提 前萌发。 一般在器官形成后，添加赤霉素可促进器官或胚状体 的生长。
MS salts reduced to 0.47 g. l-1
Some root growth but reduced development of shoots
MS salts increased to 9.52 g. l-1
Shoots developed on upper surface of explant. No roots
用量为2～3mg/L
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有机营养成分 植物生长调节物质 附加物和天然的有机添加物质 琼脂 pH值
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无机营养又叫矿质营养，指植物在生长发 育时所需要的各种维持其正常生理活动的 化学元素。
主要有： 大量元素： ＞0.5mmol／L 微量元素络，文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模 仿。文档如有不当之处，请联系本人或网站删除。
N：
作用：是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核酸、磷脂、生物碱等的组成成 分 形式：NO3—N和NH4—N
or callus.
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3、GA (赤霉素)： 仿。文档如有不当之处，请联系本人或网站删除。
作用： 有20多种，生理活性及作用的种类、部位、效应等各 有不同。 培养基中添加的是GA3，主要作用是促进幼苗茎的伸 长生长，促进不定胚发育成小植株； 赤霉素还用于打破休眠，促进种子、块茎、鳞茎等提 前萌发。 一般在器官形成后，添加赤霉素可促进器官或胚状体 的生长。
MS salts reduced to 0.47 g. l-1
Some root growth but reduced development of shoots
MS salts increased to 9.52 g. l-1
Shoots developed on upper surface of explant. No roots
用量为2～3mg/L
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常用培养基的制备PPT课件
包扎好，直立放入内筒中， 在121.3℃灭菌20-30min。
灭菌完毕后，将平板培养基 拿出平放于桌面，凝固前勿 动；将试管培养基摆成斜面 ，凝固前勿动。
精选PPT课件
11
6．无菌检验：
随机抽取几个平板或试管培养基于温箱中培养24 小时，若无菌 生长则为合格。
7．备用：
将合格的培养基放入冰箱， 在0-4℃中保存备用。
精选PPT课件
7
3．溶化：
将营养琼脂粉和蒸馏水倒入搪瓷缸中，于电炉上加热溶 化，边加热边搅拌，沸腾时立即从电炉上拿下，等泡沫 消失后再放在电炉上加热，注意不能让琼脂溢出，煮沸 2—3次。
精选PPT课件
8
4．分装：倒平板或倒试管
• 若做平板培养基应倒于培养皿中，每板约15ml左右， 以刚好覆盖平皿底为易。
2．制法 将牛肉膏、蛋白胨、氯化钠加蒸馏水后，加热 溶解。矫正pH至7.4～7.6，过滤分装。置高压蒸气灭 菌器内，121.3℃灭菌20min即成。
3．用途 可供一般细菌生长，同时也是制作一般培养基 的基础原料。供营养要求较高的细菌分离培养，亦可 供溶血性的观察和保存菌种。
精选PPT课件
5
（二）固体琼脂培养基 1．计算：
精选PPT课件
14
课后作业
1.写出实习报告； 2.掌握普通营养琼脂培养基的制备过程
精选PPT课件
15
精选PPT课件
3
制备培养基 方法步骤
• 计算 • 称量 • 溶化 • 调PH • 分装 • 灭菌 • 无菌检验 • 备用
（一）肉汤培养基 （二）琼脂培养基 （三）半固体培养基 （四）血液琼脂培养基
精选PPT课件
4
（一）肉汤培养基
1．成分 牛肉膏3～5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，蒸馏水 1000ml。
灭菌完毕后，将平板培养基 拿出平放于桌面，凝固前勿 动；将试管培养基摆成斜面 ，凝固前勿动。
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11
6．无菌检验：
随机抽取几个平板或试管培养基于温箱中培养24 小时，若无菌 生长则为合格。
7．备用：
将合格的培养基放入冰箱， 在0-4℃中保存备用。
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7
3．溶化：
将营养琼脂粉和蒸馏水倒入搪瓷缸中，于电炉上加热溶 化，边加热边搅拌，沸腾时立即从电炉上拿下，等泡沫 消失后再放在电炉上加热，注意不能让琼脂溢出，煮沸 2—3次。
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8
4．分装：倒平板或倒试管
• 若做平板培养基应倒于培养皿中，每板约15ml左右， 以刚好覆盖平皿底为易。
2．制法 将牛肉膏、蛋白胨、氯化钠加蒸馏水后，加热 溶解。矫正pH至7.4～7.6，过滤分装。置高压蒸气灭 菌器内，121.3℃灭菌20min即成。
3．用途 可供一般细菌生长，同时也是制作一般培养基 的基础原料。供营养要求较高的细菌分离培养，亦可 供溶血性的观察和保存菌种。
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5
（二）固体琼脂培养基 1．计算：
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制备培养基 方法步骤
• 计算 • 称量 • 溶化 • 调PH • 分装 • 灭菌 • 无菌检验 • 备用
（一）肉汤培养基 （二）琼脂培养基 （三）半固体培养基 （四）血液琼脂培养基
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（一）肉汤培养基
1．成分 牛肉膏3～5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，蒸馏水 1000ml。
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常用培养基概念及配
方
LB培养基：是微生物学实验中最常用的培养基，用于一般细菌培养，特别用于分子生物学试验中大肠杆菌的保存和培养。
用于培养大肠杆菌、枯草杆菌等细菌，分为液态培养基和加入琼脂制成的固态培养基。
加入抗生素的 LB 培养基可用于筛选以大肠杆菌为宿主的克隆。
PDA培养基：马铃薯葡萄糖琼脂培养基，即Potato Dextrose Agar （Medium），依次对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。
宜培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌。
改良MC培养基：用于乳酸菌饮料中乳酸菌的菌落计数；原理：大豆蛋白胨、牛肉膏粉和酵母膏粉提供氮源、维生素和生长因子；葡萄糖和乳糖为可发酵糖类提供碳源；乳酸菌发酵糖产酸使菌落周围碳酸钙溶解，以辨别乳酸菌；琼脂是培养基的凝固剂；中性红为pH指示剂。
MRS培养基：乳酸菌培养基，由多种成分组成，适用于乳酸菌的生长，用来分离培养乳酸菌的一类培养基，一种常用的培养基，宜培养分离乳酸菌。
由于该培养基十分适于乳酸菌的生长，而且抑制其他菌的生长，因此具有分离乳酸菌的功能。
当乳酸菌长成后在培养基上显黄色，之后会变淡黑色。
以此分离乳酸菌。
乳酸菌：凡是能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产生乳酸的细菌统称为乳酸菌。
这是一群相当庞杂的细菌，目前至少可分为18个属，共有200多种。
除极少数外，其中绝大部分都是人体内必不可少的且具有重要生理功能的菌群，其广泛存在于人体的肠道中。
目前已被国内外生物学家所证实，肠内乳酸菌与健康长寿有着非常密切的关系。
乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总
称。
常见菌种有双歧杆菌、保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌和嗜酸乳杆菌等
自配高浓度污水：葡萄糖5550 mg／L+(NH4)2SO4,1170 mg／L+KH2PO4，170 mg／L+COD为5000 mg／L。
自配污水：葡萄糖555 mg／L+(NH4)2SO4，117mg／L+KH2PO4 17 mg／
L+CaC12 0，08 mg／L+MgSO4，1，534 mg／L+NaHCO3 550．8 mg／
L+FeC13·6H2O
0．25 mg／L+C0D 500 mg／L+氨氮为30 mg／L．
一、LB培养基配制
1升LB培养培养基需：蛋白胨10g/L；酵母粉5 g/L、Nacl10 g/L、单/双去离子水、琼脂15~20g/L（配制液体培养基不需要加，配制固体培养基时加入）。
pH值用5mol/L NaOH溶液调至7.2-7.4（用精密pH试纸测定）。
配置完后在高压锅内高压灭菌21min。
二、YPD培养基配制（酵母菌培养基）
1）溶解酵母膏/酵母粉（yeast extract）10g/L、蛋白胨（peptone）20g/L于单/双去离子水中，如制平板加入20g/L琼脂粉(配制固体培养基)；
2）高压灭菌121°C 20min；
3 加入20g/L葡萄糖 (dextrose或glucose，葡糖糖溶液灭菌后加入、防止与蛋白胨反应)；
注：葡萄糖、酵母粉、蛋白胨溶液混合后在高温下可能会发生化学反应，导致培养基成分变化，所以要分别灭菌后再混合。
葡萄糖可以过滤除菌，也可以115℃15min灭菌。
三、MRS培养基配制（乳酸菌培养基）
蛋白胨（peptone）10g/L、牛肉膏(beef extract)10g/L、酵母菌粉(yeast extract)5g/L、醋酸钠（乙酸钠）5g/L、磷酸氢二钾2g/L、柠檬酸铵2g/L、硫酸镁0.2g/L、硫酸锰0.2g/L、琼脂20g/L、吐温80 1ml/L、葡萄糖20g/L（因葡萄糖与蛋白胨发生反应因此需单独配制）、pH值用冰乙酸调至6.2~6.6（用pH试纸、仪器均可）250微升/L。
四、琼脂糖凝胶配制
凝胶板大孔为60ml,两小孔为30ml，梳子有5微升、10微升等
琼脂糖粉10g~12g/L，TBE0.5×（Tris硼酸，是一种PCR技术中用到的缓冲液。
成分及终浓度（5×） [最终pH=8.25或8.3]用蒸馏水稀释至0.5×）
1）琼脂糖凝胶的制备：称取0.3g琼脂糖，置于三角瓶中，加入30ml TBE或TAE缓液，置于三角瓶中，加入30ml TBE或TAE缓液，置于三角瓶中，加入30ml TBE或TAE缓液，将该三角瓶置于微波炉加热至琼脂糖溶解。
将冷却至65℃左右的琼脂糖凝胶液，加入溴化乙锭（凝胶染料），充分混匀。
2）胶板的制备：
①取有机玻璃内槽，洗净、晾干；②将有机玻璃内槽置于一水平位置模具上，安好挡板，放好梳子。
吸取少量琼脂糖溶液封固胶膜边缘，任其凝固，在距离底板0.5～1.0mm的位置上放置梳子，以便加入琼脂糖后可以形成完好的加样孔。
如果梳子距离玻璃板再近，则拔出梳子时孔底将有破裂的危险，破裂后将使样品在凝胶与玻璃板之间渗漏；
③将剩余的温热琼脂糖溶液倒入胶膜中，使胶液缓慢地展开，直到在整个有机玻璃板表面形成均匀的胶层。
凝胶的厚度在3～5mm之间，检查一下梳子的齿下或齿间是否有气泡；④室温下静置30min左右，待凝固完全后，轻轻拔出梳子，在胶板上即形成相互隔开的上样孔。
制好胶后将铺胶的有机玻璃内槽放在含有0.5～1×TAE（Tris-乙酸）或TBE（Tris-硼酸）工作液的电泳槽中使用，没过胶面1mm以上。
五、培养基是人们对马铃薯葡萄糖琼脂培养基的简称，即Potato Dextrose Agar （Medium），依次对应马铃薯、葡萄糖、琼脂的英文。
一种常用的培养基，宜培养酵母菌、霉菌、蘑菇等真菌。
配制配方：马铃薯200克、葡萄糖20克、琼脂15~20克、自来水1000毫升、自然PH。
配制步骤：其做法是称取200g马铃薯，洗净去皮切成小块，加水煮烂（煮沸20~30分钟，能被玻璃棒戳破即可），用四层纱布过滤，再据实际实验需要加葡萄糖和琼脂，继续加热搅拌混匀，稍冷却后再补足水分至1000毫升，分装试管，加塞、包扎，灭菌（121℃）20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。
其他事项：
1.培养基经灭菌后，必须放在37C温箱培养24h，无菌生长者方可使用。
2.PDA培养基一般不需要调pH。
对于要调节pH的培养基，一般用pH试纸测定其pH。
如果培养基偏酸或偏碱时，可用lmol／LNaOH或lmol／LHCL溶液进行调节。
调节时应逐滴加入NaOH或HCl溶液，防止局部过酸或过碱破坏培养基成分。
3.培养基在使用时也可以做成不含琼脂的液体培养基，用于菌类的震荡培养。
4.培养基也可以加入氯霉素或土霉素，加入量为0.1g/L培养基，主要是为了抑制细菌的生长，减少干扰性。