实验一显微镜油镜的使用及微生物基本实验技术

实验一微生物制片及形态观察一、显微镜油镜的使用显微技术是微生物检验技术中最常用的技术之一。

显微镜的种类很多，在实验室中常用的有：普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等。

1. 结构光学显微镜是由光学放大系统和机械装置两部分组成。

光学系统一般包括目镜、物镜、聚光器、光源等；机械系统一般包括镜筒、物镜转换器、镜台、镜臂和底座等（图1－1）。

图1－1 光学显微镜结构图标本的放大主要由物镜完成，物镜放大倍数越大，它的焦距越短。

焦距越小，物镜的透镜和玻片间距离（工作距离）也小。

油镜的工作距离很短，使用时需格外注意。

目镜只起放大作用，不能提高分辨率，标准目镜的放大倍数是十倍。

聚光镜能使光线照射标本后进入物镜，形成一个大角度的锥形光柱，因而对提高物镜分辨率是很重要的。

聚光镜可以上下移动，以调节光的明暗，可变光栏可以调节入射光束的大小。

显微镜用光源，自然光和灯光都可以，以灯光较好，因光色和强度都容易控制。

一般的显微镜可用普通的灯光，质量高的显微镜要用显微镜灯，才能充分发挥其性能。

有些需要很强照明，如暗视野照明、摄影等，常常使用卤素灯作为光源。

2. 原理显微镜的放大效能（分辨率）是由所用光波长短和物镜数值口径决定，缩短使用的光波波长或增加数值口径可以提高分辨率，可见光的光波幅度比较窄，紫外光波长短可以提高分辨率，但不能用肉眼直接观察。

所以利用减小光波长来提高光学显微镜分辨率是有限的，提高数值口径是提高分辨率的理想措施。

要增加数值口径，可以提高介质折射率，当空气为介质时折射率为1，而香柏油的折射率为1.51，和载片玻璃的折射率（1.52）相近，这样光线可以不发生折射而直接通过载片、香柏油进入物镜，从而提高分辨率。

显微镜总的放大倍数是目镜和物镜放大倍数的乘积，而物镜的放大倍数越高，分辨率越高。

3. 使用方法1）低倍镜观察先将低倍物镜的位置固定好，然后放置标本片，转动反光镜，调好光线，将物镜提高，向下调至看到标本，再用细调对准焦距进行观察。

实验一显微镜油镜的使用和细菌的革兰氏染色陈宝莲2010级生态学040212010002一、实验目的1 学习显微镜油镜的使用方法2 学习微生物的无菌操作技术3 学习细菌的革兰氏染色法二、实验原理1 显微镜及油镜物镜的使用原理1) 油镜头的标志油镜头上常刻有OI（oil immersion）或HI（homogeous immersion）字样，有的还刻有一圈红线或黑线标记。

在低倍物镜、高被物镜和油镜3种物镜中，油镜的放大倍数和数值孔径（numerical aperture）最大，而工作距离最短。

2 ) 显微镜的分辨率显微镜性能的优劣不单是看它的总放大倍数，更重要的是看它的分辨率的大小。

分瓣率是指显微镜能分辨出物体两点间最小距离（D）的能力。

D值愈小表明分辨率愈高。

D值与光线的波长（λ）成正比，与物镜的数值孔径（NA）成反比：D=λ/2NA从上式可看出，缩短光波长和增大数值孔径都可提高分辨率。

数值孔径指光线投射到物镜上的最大角度（称镜口角，α）的一半正弦与介质折射率（n）的乘积：NA=n×Sinα/2影响数值孔径大小的因素－是镜口角，二倍介质的折射率。

当物镜与玻片之间的介质为空气时，由于空气（n=1.0）与玻璃（n=1.52）的折射率不同，光线会发生折射，不仅使进入物镜的光线减少，降低了视野的照明度，而且会减少镜口角。

当以香柏油（n=1.515）为介质时，由于它的折射率与玻璃的相近，光线经过玻片后可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射，不仅增加了视野的照明度，更重要的是通过增加数值孔径达到提高分辨率的目的。

2 细菌的革兰氏染色原理革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram创立的。

作为细菌学上最常用最重要的鉴别染色法，革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G－）两大类.G－菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经番红复染后就成红色。

实验一油镜的使用及细菌形态的观察普通光学显微镜是一种精密的光学仪器。

以往最简单的显微镜仅由几块透镜组成,而当前使用的显微镜由一套透镜组成。

普通光学显微镜通常能将物体放大1500?2000倍。

一显微镜的构造普通光学显微镜的构造可分为两大部分:一为机械装置,一为光学系统,这两部分很好的配合,才能发挥显微镜的作用。

1、显微镜的机械装置显微镜的机械装置包括镜座、镜筒、物镜转换器、载物台、推动器、粗动螺旋、微动螺旋等部件1镜座 ?镜座是显微镜的基本支架,它由底座和镜臂两部分组成。

在它上面连接有载物台和镜筒,它是用来安装光学放大系统部件的基础。

2镜筒 ?镜筒上接接目镜,下接转换器,形成接目镜与接物镜装在转换器下间的暗室。

从物镜的后缘到镜筒尾端的距离称为机械筒长。

因为物镜的放大率是对一定的镜筒长度而言的。

镜筒长度的变化,不仅放大倍率随之变化,而且成像质量也受到影响。

因此,使用显微镜时,不能任意改变镜筒长度。

国际上将显微镜的标准筒长定为160mm,此数字标在物镜的外壳上。

3物镜转换器 ?物镜转换器上可安装3?4个接物镜,一般是三个接物镜低倍、高倍、油镜。

Nikon显微镜装有四个物镜。

转动转换器,可以按需要将其中的任何一个接物镜和镜筒接通,与镜筒上面的接目镜构成一个放大系统。

4载物台? 载物台中央有一孔,为光线通路。

在台上装有弹簧标本夹和推动器,其作用为固定或移动标本的位置,使得镜检对象恰好位于视野中心。

5推动器? 是移动标本的机械装置,它是由一横一纵两个推进齿轴的金属架构成的,好的显微镜在纵横架杆上刻有刻度标尺,构成很精密的平面座标系。

如果我们须重复观察已检查标本的某一部分,在第一次检查时,可记下纵横标尺的数值,以后按数值移动推动器,就可以找到原来标本的位置。

6粗动螺旋 ?粗动螺旋是移动镜筒调节接物镜和标本间距离的机件,老式显微镜粗螺旋向前扭,镜头下降接近标本。

新近出产的显微镜如Nikon显微镜镜检时,右手向前扭载物台上升,让标本接近物镜,反之则下降,标本脱离物镜。

实验一光学显微镜的使用与微生物观察第一节普通光学显微镜的使用一、实验目的1、了解普通光学显微镜的基本构造和工作原理。

2、学习并掌握普通光学显微镜，重点是油镜的使用技术和维护知识。

3、在油镜下观察微生物的几种基本形态。

二、基本原理（一）普通光学显微镜的构造普通光学显微镜由机械系统和光学系统两部分组成（图1-1）。

1、机械系统机械系统包括镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、调节器等。

（1）镜座：它是显微镜的基座，可使显微镜平稳地放置在平台上。

（2）镜臂：用以支持镜筒，也是移动显微镜时手握的部位。

（3）镜筒：它是连接接目镜（简称目镜）和接物镜（简称物镜）的金属圆筒。

镜筒上端插入目镜，下端与物镜转换器相接。

镜筒长度一般固定，通常是160mm。

有些显微镜的镜筒长度可以调节。

（4）物镜转换器：它是一个用于安装物镜的圆盘，位于镜筒下端，其上装有3～5个不同放大倍数的物镜。

为了使用方便，物镜一般按由低倍到高倍的顺序安装。

转动物镜转换器可以选用合适的物镜。

转换物镜时，必须用手旋转圆盘，切勿用手推动物镜，以免松脱物镜而招致损坏。

（5）载物台：载物台又称镜台，是放置标本的地方，呈方形或圆形。

载物台上装有压片夹，可以固定被检标本；有标本移动器，转动螺旋可以使标本前后和左右移动。

有些标本移动器上刻有标尺，可指示标本的位置，便于重复观察。

（6）调节器：调节器又称调焦装置，由粗调螺旋和细调螺旋组成，用于调节物镜与标本间的距离，使物像更清晰。

粗调螺旋转动一圈可使镜筒升降约10mm，细调螺旋转动一圈可使镜筒升降约0.1mm。

图1-1 普通光学显微镜的构造1. 镜座2. 镜臂3. 镜筒4. 转换器5. 载物台6. 压片夹7. 标本移动器8. 粗调螺旋9. 细调螺旋10. 目镜11. 物镜12. 虹彩光阑（光圈） 13. 聚光器 14. 反光镜2、光学系统光学系统包括目镜、物镜、聚光器、反光镜等。

（1）目镜：它的功能是把物镜放大的物像再次放大。

实验一显微镜油浸系的使用及细菌基本形态观察一、几点说明（五个方面）1、点名、分组、确定每组的负责人。

第一次微生物实验，点名认一下人，点到谁的名字，举手答一个到。

每人有一个实验编号，编号都写在桌子上，是几号就坐在几号座位上。

分发实验物品时由每组的负责人分发。

另外一共30个人，共分成五组，分组情况写在黑板上。

2、值日安排。

实验结束后值日的组打扫卫生，一次轮一组，今天是第一组值日。

3、预习实验内容：上课前预习实验内容，要求至少提前十分钟到实验室，抄写板书（实验内容和作业），并为上课做准备。

4、本学期的微生物学试验的内容：共分七次试验分别为：实验一（油镜使用及细菌基本形态观察），实验二：细菌抹片染色。

实验三：培养基制备。

实验四、五：细菌分离培养、结果观察。

实验六：青贮料微生物或病料采集、包装和运送。

实验七：主要病原菌的认识。

5、交实验报告：学习委员每次收作业的时间是实验后的第二天，确认在第二天下午上班时间交到畜牧楼212许老师办公室，如果办公室没有人，就放在门头上，稍微露出一点儿以便老师及时发现。

二、实验须知。

1、防病原微生物传播。

咱们这间实验室有一点儿是跟其它实验室是不同的，就是安全要求特别严格，咱们这里是微生物实验室，由于实验需求，里面存在一定的病原微生物是难免的，也是必要的，所以同学们每次上课都要穿上白大褂，进入实验室以后，不要吃东西，不要用手揉眼，有咬笔杆儿习惯的同学在这里头也要控制一下自己。

这不是对咱同学们要求苛刻，而是为同学们自身的安全着想。

（1）实验室中宜着工作衣帽，如沾有可传染的材料，应脱下浸于消毒药水中（如5%石炭酸等）过夜或高压灭菌后再进行清洗。

如果出现菌液污染实验台的情况，也要用四层次5%石炭酸纱布盖住过夜。

（2）沾有病原微生物的器皿及废弃培养物，应置于指定的地点，先消毒后再进行洗涤；检查用过的动物尸体、脏器、血液等，应严加高压灭菌消毒、掩埋处理，防止病原微生物的散播。

（3）接种环、接种针用前用后必须置火焰中灼烧灭菌以免使用过程中的不同种细菌之间的混杂，导致试验操作的污染。

微生物学实验报告实验一普通光学显微镜的使用及细菌染色与形态观察第一部分：显微镜的使用一、目的要求1．熟悉普通光学显微镜的构造、油镜的使用原理和显微镜的维护方法。

2．学会正确使用油镜观察细菌的基本形态和特殊构造。

3．了解各种显微镜的主要特征。

二、实验原理（一）光学显微镜的构造微生物实验室中最常用的是普通光学显微镜，它的构造可分为机械部分和光学部分。

1、机械部分普通复式光学显微镜的机械部分通常包括以下几个部分：目镜、镜筒、基座回转器、物镜、载物台、光圈、聚光器、光源、镜臂、细调节器、粗调节器等。

2、光学部分：目镜、物镜、聚光器、光圈、光源。

（二）放大倍数标本首先经物镜放大，在目镜的焦距平面上形成一个实像，再经过目镜放大成最终的虚像。

总的放大倍数是物镜放大倍数与目镜放大倍数的乘积。

物镜的放大倍数愈大，其工作距离（物镜镜头到标本片之间的距离）愈短，这时光圈就要打开得愈大。

显微镜的性能受物镜的分辨距离或分辨力所限制。

分辨距离即透镜所能分辨的两个物点之间的最小距离，分辨距离愈小，透镜的分辨力愈高，物像也就愈清晰。

因此常以分辨距离来衡量显微镜的分辨力。

R=0.61λ/N.A式中：R-----分辨距离；λ------作用光的波长；N.A------数值口径。

一些介质的折射率介质折射率空气水玻璃香柏油1 13 55 1.56三、实验内容（一）材料：显微镜，香柏油，擦镜纸。

（二）方法：细菌很小，须使用油镜方可观察到。

油镜是显微镜上最重要的部件之一，观察时与玻片非常接近，稍不小心即可压碎玻片，更严重的是损坏镜头，故必须极其仔细地学习油镜的使用方法：1、为使低倍镜取得最适之光源，可将低倍镜头调节到离载物台约1cm的高度，将聚光器提高，光圈完全打开，然后调节电压旋钮至视野最合适。

2、滴一滴香柏油，固定于载物台上，用推动器调节到载物台正中。

在双目侧视下，下旋粗调节器，使油镜头浸入油中几乎与标本片相接触。

然后眼睛从目镜观察（如光线不足，可适当增大电源电压），徐徐上旋粗调节器至看到模糊物像之后，再用细调节器调节以使物像清晰。

显微镜油镜的使用实验报告(共3篇)
实验目的：学会使用显微镜油镜，观察显微图像。

实验原理：显微镜油镜是在显微镜物镜与被观察物之间加透镜的一种装置。

使用油镜时，将一滴油放在被观察物上，再将镜头放到油滴上方观察。

实验仪器：显微镜、油镜。

操作步骤：
1、调节显微镜至适当倍数。

2、在玻片上放置一滴油。

3、将显微镜物镜调至与油相邻。

4、将眼睛贴近目镜，调整焦距，观察显微图像。

实验结果：通过调节焦距，我们看到了比普通显微镜更清晰的图像。

实验二：显微镜油镜在生物学研究中的应用
实验原理：显微镜油镜的油滴可以缩短物镜和被观察物之间的距离，可以提高生物样品的透明度和分辨率，使细胞结构更清晰。

实验材料：细胞样品、油。

1、将细胞样品放在载玻片上。

实验结果：使用显微镜油镜观察细胞样品，可以看到更清晰的细胞结构。

实验三：显微镜油镜的维护和注意事项
实验原理：显微镜油镜在使用时应注意器材的保养和清洁。

1、使用前检查油镜是否干净，如有杂质应用棉签或纸巾清洁。

2、使用后应清洗，先用纸巾擦去多余油，再用棉签沾清洁剂轻轻擦拭油镜，清理干净后再擦干。

3、储存时应放置干燥、阴凉的地方，避免阳光直射和高温。

4、使用时应避免碰撞和重压。

实验结果：正确使用和维护油镜，可以延长器材寿命并提高显微镜观察质量。