胞浆异柠檬酸脱氢酶(ICDHc)活性检测试剂盒说明书 微量法

微量法肉桂醇脱氢酶（CAD）活性检测试剂盒说明书货号：UPLC-MS-4246规格：100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体120mL×1瓶4℃保存试剂一粉剂×1瓶-20℃保存试剂二液体×1瓶4℃保存试剂三液体25mL×1瓶4℃保存溶液的配制：1、提取液：内含不溶物，使用前摇匀。

2、试剂一：临用前加入5mL试剂三溶解。

可溶解后分装-20℃保存，避免反复冻融。

3、试剂二：液体置于试剂瓶内玻璃管中。

临用前加入15mL乙醇充分混匀，配好后4℃保存。

4、工作液的配制：将试剂一、试剂二、试剂三按1:1:2（V:V:V）的比例配制工作液，工作液现用现配。

产品说明：CAD是木质素生物合成途径中的关键酶之一，催化香豆醛、芥子醛以及松柏醛等生成与之相应的肉桂醇。

该酶多存在于高等植物、酵母、菌类中，研究该酶可以探讨多种生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机理，为减少水果石细胞含量提高其品质提供依据。

CAD催化肉桂醛和NADPH生成肉桂醇和NADP+，在340nm下测定NADPH消耗速率，即可反映CAD活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰、乙醇和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃，离心10min，取上清，置冰上待测。

2、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；10000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

琥珀酸脱氢酶（SDH）活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号：BC0955规格：100T/96S产品内容：试剂一：液体110mL×1瓶，-20℃保存；试剂二：液体1mL×1瓶，-20℃保存；试剂三：液体18mL×1瓶，4℃保存；试剂四：粉剂×1支，4℃保存；临用前加入到试剂三中溶解待用；试剂五：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入4mL双蒸水，用不完的试剂仍4℃保存；试剂六：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入3.333mL双蒸水，用不完的试剂4℃保存。

产品说明：SDH（EC 1.3.5.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。

SDH是线粒体的一种标志酶，位于线粒体内膜上的一种膜结合酶，是连接呼吸电子传递和氧化磷酸化的枢纽之一。

此外，为多种原核细胞产能的呼吸链提供电子。

SDH催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸，脱下的氢通过吩嗪二甲酯硫酸（PMS）传递还原2,6-二氯酚靛酚（DCPIP），并且在600nm处具有特征吸收峰，通过600nm吸光度的变化，测定2．6-DPIP的还原速度，代表SDH酶活性。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、SDH的提取准确称取0.1g组织或收集500万细胞，加入1mL试剂一和10uL试剂二，用冰浴匀浆器或研钵匀浆充分研磨，4℃11000g离心10min，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤和加样表1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至600nm，蒸馏水调零。

2、样本测定试剂名称（μL）测定管空白管试剂三168168试剂五121237℃(哺乳动物)或25℃（其它物种）保温10min左右样本10蒸馏水10试剂六1010将试剂三和试剂五依次加入到1.5mLEP管中，37℃(哺乳动物)或25℃（其它物种）保温10min后加入到微量比色皿或96孔板再按表格依次加入各试剂，在600nm波长下记录20秒时的初始吸光度A1和1分20秒时的吸光度A2，计算ΔA=A1-A2，得到ΔA测定，ΔA空白。

果胶酶活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号：BC2635规格：100T/48S产品内容：提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体25mL×1瓶，4℃保存。

若溶液中有不溶解物质，可以50℃水浴溶解。

试剂二：液体20mL×1瓶，4℃避光保存。

标准品：粉剂×1支，10mg半乳糖醛酸。

临用前加入0.943mL蒸馏水，配成50μmol/mL的标准液产品说明：果胶酶（pectinase）是分解果胶的酶类，包括原果胶酶，果胶酯酶，多聚半乳糖醛酸酶和果胶裂解酶四大类，广泛存在于高等植物果实和微生物中，是水果加工中最重要的酶。

果胶酶水解果胶生成半乳糖醛酸，半乳糖醛酸与DNS试剂反应生成在540nm有特征吸收峰的棕红色物质，测定540nm处吸光值变化可计算得果胶酶活性。

试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、粗酶液提取：组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

菌类：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

液体：直接检测。

二、测定步骤：1、分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。

2、将50μmol/mL标准液用蒸馏水稀释为10、8、6、4、2、1μmol/mL的标准溶液备用。

3、取40μL样本沸水浴10min备用。

4、操作表：(在1.5mL离心管中)对照管测定管标准管空白管试剂一（µL）20020020020050℃水浴温育5min标准溶液（µL）--40-样本（µL）-40--蒸馏水（µL）---40煮沸样本（µL）40---混匀，50℃水浴反应30min，马上沸水浴5min，冷却后8000g，常温离心10min，取上清。

医疗器械产品技术要求编号：精浆柠檬酸定量检测试剂盒（酶法）2.性能指标2.1外观性状a）试剂盒标签应印制清晰、无错误；包装应清洁干净、无泄漏液体；组份组装应正确无误。

b）A 液应为棕色澄清透明，无絮状物、无肉眼可见颗粒的液体，为悬浊液。

c）B 液（冻干粉）复溶后应为澄清透明，无絮状物、无肉眼可见颗粒的液体。

d）缓冲液应为应为澄清透明，无絮状物、无肉眼可见颗粒的液体。

e）冻干粉溶解液应为澄清透明，无絮状物、无肉眼可见颗粒的液体。

f）柠檬酸校准液应为澄清透明，无絮状物、无肉眼可见颗粒的液体。

g）标本稀释液应为澄清透明，无絮状物、无肉眼可见颗粒的液体。

2.2装量试剂盒液体组份装量不小于组份标签标示装量。

2.3试剂酸碱度试剂盒组份缓冲液pH值范围6.5±0.1。

2.4精密度a)试剂盒重复性CV%≤10%。

b)试剂盒批间相对偏差R≤15%。

2.5准确度参考物质测试值相对偏差R不超过±15%。

2.6特异性干扰试验干扰率不超过±10%。

2.7线性范围a)在线性范围0～80umol/mL内,回归系数r≥0.990。

b)线性偏差X1～X3不超过±10%,X4、X5不超过±20%。

2.8最低检出限不高于0.1umol/mL。

2.9空白吸光度不高于0.050。

2.10分析灵敏度介于0.050 OD～0.150 OD/(10umol/mL)单位浓度。

2.11批内瓶间差试剂盒批内瓶间差的变异系数CV%≤10%。

线粒体复合体Ⅲ活性检测试剂盒使用说明微量法正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定货号:BC3245规格：100管/96样产品内容：试剂一：液体100mL×1瓶，-20℃保存；试剂二：液体20mL×1瓶，-20℃保存；试剂三：液体1.5mL×1支，-20℃保存；试剂四：液体20mL×1瓶，4℃保存；试剂五：粉剂×1支，-20℃保存；试剂六：液体2.5mL×1瓶，-20℃保存；产品简介：线粒体复合体Ⅲ（EC1.10.2.2）又称CoQ-细胞色素C还原酶，广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，是线粒体呼吸电子传递链主路和支路的共有成分，负责把还原型CoQ的氢传递给细胞色素C，生成还原型细胞色素C。

与氧化型细胞色素C不同，还原型细胞色素C在550nm有特征光吸收，因此550nm光吸收增加速率能够反映线粒体复合体Ⅲ酶活性。

试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本的前处理：组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：(1)准确称取0.1g组织或收集500万细胞，加入1mL试剂一和10uL试剂三，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

(2)将匀浆600g，4℃离心5min。

(3)弃沉淀，将上清液转移至另一离心管中，11000g4℃离心10min。

(4)上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白，可用于测定从线粒体泄露的复合体Ⅲ（此步可选做）。

(5)步骤（4）中的沉淀即为线粒体，加入200uL试剂二和2uL试剂三，超声波破碎（冰浴，功率20%或200W，超声3秒，间歇10秒，重复30次），用于复合体Ⅲ酶活性测定。

二、测定步骤：1.分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至550nm，蒸馏水调零。

2.样本测定（1）工作液的配制：临用前把试剂五转移到试剂四中混合溶解，置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）孵育5min；用不完的试剂4℃可保存一周；（2）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本、25μL试剂六和200μL工作液，立即混匀，记录550nm处初始吸光值A1和2min后的吸光值A2，计算ΔA=A2-A1。

线粒体异柠檬酸脱氢酶（ICDHm ）活性检测试剂盒说明书微量法货号: BC2165规格: 100T/48S 产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液一液体60 mL×1瓶4℃保存提取液二液体600 μL×2支-20℃保存提取液三液体40 mL×1瓶4℃保存试剂一粉剂×1瓶4℃保存试剂二粉剂×1瓶常温保存试剂三液体10 mL×1瓶4℃保存试剂四粉剂×2支-20℃保存试剂五液体5 mL×1瓶常温保存试剂六液体15 mL×1瓶常温保存标准品粉剂×1支4℃保存溶液的配制：1、提取液二：易挥发试剂，用完后盖紧盖儿后及时放回-20℃保存；2、试剂一：临用前加入5 mL 试剂三，充分溶解待用；3、试剂二：临用前加入5 mL 试剂三，充分溶解待用；4、试剂四：临用前加入0.375 mL 双蒸水，充分溶解待用；5、标准品：10 mg α-酮戊二酸。

临用前加入684 μL 蒸馏水，配成100 μmol/m L 标准液；6、工作液的配制：临用前根据用量将试剂一、试剂二按1:1比例混合，现配现用。

产品说明：线粒体异柠檬酸脱氢酶（isocitrate dehydrogenase ，ICDHm ），广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，与线粒体基因表达及线粒体其他的功能有关。

异柠檬酸脱氢酶在生物体内有两种存在形式，以NAD 为辅酶的NAD-依赖型异柠檬酸脱氢酶，和以NADP 为辅酶的NADP-依赖型异柠檬酸脱氢酶。

异柠檬酸脱氢酶的主要功能，是在体内三羧酸循环中，催化异柠檬酸生成α-酮戊二酸，将NAD 还原成NADH ，通过测定α-酮戊二酸的生成量，可以计算出线粒体异柠檬酸脱氢酶活力高低。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

货号: QS1103 规格：50管/48样胞浆异柠檬酸脱氢酶（ICDHc）试剂盒说明书紫外分光光度法正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：ICDHc（EC 1.1.1.42）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化异柠檬酸脱氢脱羧生成α-酮戊二酸，同时还原NADP+生成NADPH。

ICDHc是细胞质中除了磷酸戊糖途径外又一种NADPH重要来源，在逆境中该酶活性通常会发生显著变化。

测定原理：利用ICDHc催化NADP+还原成NADPH反应，在340 nm下测定NADPH浓度的增加。

自备实验用品及仪器:紫外分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制：提取液：60mL×1瓶，4℃保存；试剂一：液体50 mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1支，4℃保存；试剂三：粉剂×1支，4℃保存；试剂四：粉剂×1支，-20℃保存；样本的前处理：1、细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。

8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2、将试剂二转移至试剂一中充分溶解，置于37℃(哺乳动物)或25℃（其它物种）水浴中预热10min左右；用不完的试剂4℃保存。

NADP-苹果酸脱氢酶（NADP-MDH）活性检测试剂盒说明书微量法NADP-苹果酸脱氢酶（NADP-MDH）活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号:BC1055规格:100T/96S产品内容：提取液：液体100mL×1瓶，在4℃保存；试剂一：液体20mL×1瓶，在4℃保存；试剂二：粉剂×1支，-20℃保存；临用前加入500μL双蒸水，用不完的试剂仍-20℃保存；试剂三：粉剂×1支，-20℃保存；临用前加入600μL双蒸水，用不完的试剂仍-20℃保存。

产品说明：MDH（EC1.1.1.37）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，线粒体中MDH是TCA循环的关键酶之一，催化苹果酸形成草酰乙酸；相反，胞浆中MDH催化草酰乙酸形成苹果酸。

草酰乙酸是重要的中间产物，连接多条重要的代谢途径。

因此，MDH在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色，包括线粒体的能量代谢、苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。

根据不同的辅酶特异性，MDH 分为NAD-依赖的MDH和NADP-依赖的MDH，NADP-MDH主要存在于真核细胞中。

NADP-MDH催化NADPH还原草酰乙酸生成苹果酸，导致340nm处光吸收下降。

试验中所需的仪器和试剂：紫外分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）和蒸馏水操作步骤：一、粗酶液提取：细菌或培养细胞：收集细菌或细胞到离心管内，弃上清，按照每200万细菌或细胞加入400μL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次），8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

血清（浆）样品：直接检测。

二、测定步骤：1、酶标仪/紫外分光光度计调节波长至340nm，蒸馏水调零。

NADP—苹果酸脱氢酶（NADP—MDH）试剂盒说明书NADP苹果酸脱氢酶（NADPMDH）试剂盒说明书微量法100管/96样注意：正式测定前务必取23个预期差异较大的样本做推测定测定意义：MDH（EC1.1.1.37）广泛存在于动物、植物、微生物和培育细胞中，线粒体中MDH是TCA循环的关键酶之一，催化苹果酸形成草酰乙酸；相反，胞浆中MDH催化草酰乙酸形成苹果酸。

草酰乙酸是紧要的中心产物，连接多条紧要的代谢途径。

因此，MDH在细胞多种生理活动中扮演侧紧要的角色，包括线粒体的能量代谢、苹果酸天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。

依据不同的辅酶特异性，MDH分为NAD倚靠的MDH和NADP倚靠的MDH，NADPMDH重要存在于真核细胞中。

测定原理：NADPMDH催化NADPH还原草酰乙酸生成苹果酸，导致340nm处光汲取下降。

需自备的仪器和用品：紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。

试剂的构成和配制：试剂一、提取液100mL×1瓶，在4℃保存；试剂二、液体20mL×1瓶，在4℃保存；试剂三、粉剂×1瓶，20℃保存；样本测定的准备：1、细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培育细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；依照细菌或细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500～1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一），超声波碎裂细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：依照组织质量（g）：试剂一体积（mL）为1：5～10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一），进行冰浴匀浆。

8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤：1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调整波长至340nm，蒸馏水调零。