胡萝卜肉质根愈伤组织的诱导及继代增值培养实验报告
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小新家里有些品相很好的胡萝卜,想大量繁殖,设计实验
小新家里有些品相很好的胡萝卜，想大量繁殖，设计
实验
一．实验设计
实验序号实验一实验名称胡萝卜肉质根愈伤组织诱导、继代增殖、细胞悬
浮及体细胞胚胎发生培养实验
实验时间20XX年X月到X月实验室325
实验内容：
实验1—1MS培养基母液的配制与保存
实验1—2MS固体培养基配制
实验1—3胡萝卜肉质根愈伤组织诱导培养（初代培养）
实验1—4胡萝卜愈伤组织培养
实验1—5胡萝卜愈伤组织继代增殖培养
实验1—6胡萝卜细胞悬浮培养
实验1—7胡萝卜愈伤组织器官分化培养
一．实验目的
（1）：使学生能熟练准确配制MS培养基母液和组培室常用的化学试剂，巩固相关理论基础知识。
（2）：通过MS固体培养基的配制，掌握配制培养基的基本技能。
（3）：使同学能够熟练掌握外植体的表面消毒技术和无菌操作技术，并且基本掌握愈伤组织的诱导培养。
（4）：使同学熟练掌握愈伤组织培养的基本操作技术，进一步熟悉、规范无菌操作技术。
（5）：使同学熟练掌握愈伤组织继代增殖培养的基本操作技术，进一步熟悉、规范无菌操作技术。
（6）：使同学熟练掌握胡萝卜细胞悬浮培养的基本操作技术，进一步熟悉、规范无菌操作技术。
（7）：使同学了解胡萝卜愈伤组织器官分化培养的基本操作技术。
红萝卜接种实验报告
一、实验目的1. 了解红萝卜组织培养的基本原理和方法。
2. 掌握红萝卜愈伤组织的诱导、继代培养和细胞悬浮培养技术。
3. 学习红萝卜体细胞胚胎发生培养的方法，为后续的遗传转化和育种研究奠定基础。
二、实验材料与试剂1. 红萝卜：选用新鲜、健康、无病虫害的胡萝卜肉质根。
2. 培养基：MS培养基、1/2MS培养基、胡萝卜培养基母液。
3. 试剂：70%乙醇、氯化汞、无菌水、滤纸、镊子、剪刀、培养皿、培养箱等。
三、实验步骤1. 红萝卜外植体消毒与切割- 将红萝卜肉质根表面消毒后，用剪刀切成1cm×1cm的小块。
- 将消毒后的外植体放入70%乙醇中浸泡30秒，然后用氯化汞溶液消毒5分钟，最后用无菌水冲洗3次。
2. 愈伤组织诱导- 将消毒后的外植体接种于诱导培养基（MS培养基+6-BA 1.0mg/L+NAA0.5mg/L）中。
- 将培养皿放入培养箱中，在25℃、光照12小时/天条件下培养。
3. 继代培养- 当愈伤组织形成后，将其转移到继代培养基（1/2MS培养基+6-BA0.5mg/L+NAA 0.1mg/L）中。
- 每20天更换一次培养基，以保持愈伤组织的生长和增殖。
4. 细胞悬浮培养- 将继代培养的愈伤组织转移到细胞悬浮培养基（MS培养基+6-BA0.5mg/L+NAA 0.1mg/L）中。
- 在摇床上培养，转速为100r/min，光照条件同继代培养。
5. 体细胞胚胎发生培养- 将细胞悬浮培养的愈伤组织转移到体细胞胚胎发生培养基（MS培养基+2,4-D 0.5mg/L+KT 1.0mg/L）中。
- 在光照条件下培养，待愈伤组织形成胚胎后，将其转移到固体培养基上培养。
四、实验结果与分析1. 愈伤组织诱导- 在诱导培养基中，红萝卜外植体在5-7天内开始产生愈伤组织，愈伤组织呈白色、半透明状。
2. 继代培养- 在继代培养基中，愈伤组织增殖速度较快，每20天可增殖1倍。
3. 细胞悬浮培养- 在细胞悬浮培养基中，愈伤组织逐渐形成细胞悬浮液，细胞悬浮液呈白色、半透明状。
实验2-3 胡萝卜愈伤组织继代培养基的配制
（2）植物材料的表面灭菌和接种
①操作人员洗手消毒
②装材料的容器及玻璃棒用酒精表面消毒
③将待消毒的材料浸入75％的酒精中10秒， 取出用无菌水冲洗干净。 ④倒入消毒剂（ 0.1%HgCl2 ）并计时
⑤到预定时间（20分钟）后倒出消毒液并 用无菌水清洗干净。
⑥将材料切块后接种到诱导培养基上。
6 实验流程
（1）准备工作
① 外植体表面灭菌前的准备工作 a 接种室的清洁和消毒； b 超净工作台的开机和消毒；
c 消毒溶液、无菌水、装等的准备。
② 实验材料的准备
a 准备新鲜健康的胡萝卜肉质直根作实验 材料；
b 实验材料的修整、刷洗、冲洗； c 用洗衣粉水或肥皂水浸洗后再用自来水 冲净。
（2）胡萝卜愈伤组织增殖培养基的配制
配方：MS基本培养基＋ 2mg/L NAA＋ 0.1mg/L 6-BA＋200mg/L水解酪蛋白＋ 0.7 ％琼脂＋3％蔗糖 配制流程：同胡萝卜愈伤组织诱导培养基 的配制
作业
详细写出胡萝卜愈伤组织诱导培养的操作 步骤。
实验2-2 胡萝卜愈伤组织的诱导
1 实验目的
通过本次实验，使同学能够熟练掌握外植 体的表面消毒技术和无菌操作技术。 2 实验原理 将胡萝卜的贮藏根（根的变态）表面消毒 后切割成小块接种于愈伤组织诱导培养基 上，诱导外植体脱分化产生愈伤组织。
3 主要实验用具和仪器
用具：酒精棉球、小块纱布、已灭菌滤纸、 枪状镊子、手术剪、解剖刀、已灭菌培养 皿、酒精灯等。 仪器：超净工作台、恒温培养箱 4 药品和试剂 胡萝卜愈伤组织诱导培养基、无菌水、75 ％酒精、0.1%HgCl2。 5 实验材料：胡萝卜肉质直根
胡萝卜愈伤组织诱导实验报告
南昌大学实验报告胡萝卜愈伤组织诱导姓名：学院：专业：班级：学号：胡萝卜愈伤组织诱导实验一母液的配制与保存一、实验目的1.学习母夜的配制方法和母液的保存方式。
2.熟悉掌握制备母液的操作。
二、实验原理培养基中提供植物生长所需的营养成分，才能满足植物正常的生长发育的需求。
主要包括水分、有机物质、盐类，而配制母液时将其分为大量、微量、钙盐、镁盐、铁盐、有机和肌醇分别配制。
配臵培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配臵，即按培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量分别先配制成一系列的母液臵于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配臵即可。
三、实验材料、试剂和仪器设备1．试剂NH4NO3,KNO3,KH2PO4,CaCl2〃2H2O,MgSO4〃7H2O,FeSO4〃7H2O Na2-EDTA, MnSO4〃4H2O,ZnSO4〃7H2O,H3BO3,KI,Na2MoO4〃2H2OCuSO4〃5H2O,CoCl2〃6H2O,肌醇，甘氨酸，盐酸硫胺素，盐酸吡哆醇，烟酸，蒸馏水。
2.仪器设备电子天平，烧杯（50ml、100ml、500ml）量筒（1000ml、100ml、25ml），容量瓶(1000ml、500ml、100ml)，移液管（10ml，5ml，1ml）试剂瓶，玻璃棒数支，药芍，称量纸等。
四、实验步骤 1 、计算：计算各化学成分所需要的量。
大量、微量和盐类按扩大50倍，定容500ml的配制计算。
有机和肌醇按扩大100倍，定容200ml的配制计算。
计算后制成配方表。
2、制定标签：裁取7张适当大小的牛皮纸，用铅笔写上MS，种类，并标明此类母液所含物质，质量，定容体积，扩大倍数吸取量，制备人，制备日期。
3、大量元素母液的配制：先用量筒量取300ml蒸馏水放入500ml 烧杯中，按照配方表中用量依次分别称取：NH4NO3 ,KNO3 , KH2PO4 , 待第一种化合物完全溶解后再加入第二种化合物，溶解过程用玻璃棒搅拌，当最后一种化合物完全溶解后，将溶液转移至500ml 容量瓶中，并用蒸馏水将烧杯和玻璃棒洗涤3次，每次约50ml，而后用蒸馏水定容至500ml，然后转移至细口试剂瓶中，贴上标签，并臵于冰箱中低温保存备用。
胡萝卜愈伤组织诱导培养实验
云南大学生命科学学院本科教学实验教学中心细胞工程实验实验报告胡萝卜愈伤组织诱导培养实验摘要：以胡萝卜为实验材料，利用直根形成层为外植体诱导出愈伤组织，探讨了不同激素比例对胡萝卜愈伤组织诱导的影响，然后在诱导后的愈伤组织多次继代培养获得生长旺盛的分化组织，接着进行再分化，在胡萝卜培养过程中掌握诱导培养技术还有细胞培养所要求的无菌技术。
关键字：胡萝卜；愈伤组织；继代培养；再分化；组织培养胡萝卜(Daucus carota L)为伞形科两年生草本植物，因其营养丰富、又具药用价值，且耐运输、易栽培、病虫害少和耐贮藏，而成为人们常食蔬菜。
同时又作为生物技术研究的理想材料，因此建立一个高效的、实用的组织培养快速繁殖体系则是研究植物遗传转化的基础。
本文对胡萝卜愈伤组织诱导的最佳培养基进行探讨，研究了激素对胡萝卜愈伤组织诱导的影响，为其高效生产次生代谢产物α-胡萝卜素、β-胡萝卜素以及将来组织培养的工厂化和分子生物学研究打下基础【1】。
1.材料和方法1.1材料来源：胡萝卜根，长10~20cm，直径1cm以上。
1.2方法：1.2.1愈伤组织的诱导培养（1）培养基的配制：MS +2，4-D 2mg/L + KT 0.5mg/L+3%（30g/L）白砂糖+0.95%（9.5g/L）琼脂，pH5.8（2）胡萝卜的选材、修剪和清洗：选择新鲜较粗的萝卜，先用自来水冲洗，再2％洗涤剂浸泡20分钟，清水冲洗（注意材料损伤）（3）对材料进行灭菌：在超净工作台上用75％乙醇30-60s；0.1%升汞8-10分钟; 无菌水冲洗3-5次；（4）无菌修剪：用解剖刀进一步去除两端1cm，将中断切成0.5cm厚的薄圆片，然后再切去外壁2—3mm厚的皮，选取中间的部分移至无菌的部分，用刀通过形成层切成1cm2的小块；（5）接种：无菌操作将处理好的材料接种于培养基上，2-3个材料/瓶（6）培养及观察记录：25 ℃，光照培养，定期观察污染情况，生长状况1.2.2继代培养从培养瓶中取出愈伤组织，置于无菌培养皿内，用解剖刀将愈伤组织坏死部分剔除并将愈伤组织切成黄豆大小颗粒，放在无激素的新鲜培养基表面，用镊子轻轻压实，每个培养瓶接种2~3个切块。
胡萝卜愈伤组织培养及继代培养要点
本科学生综合性实验报告
学号：104120265 姓名：段昌福
学院：生命科学学院专业、班级：10应用生物教育B班实验课程名称：胡萝卜肉质根愈伤组织诱导、继代增殖、细胞悬浮及体细胞胚胎发生培养实验
教师：杨世忠
开课学期：2013 至2014 学年第二学期填报时间：2013 年 6 月日
云南师范大学教务处编印
）无菌操作流程：
二．实验报告
书中横卧着整个过去的灵魂——卡莱尔
人的影响短暂而微弱，书的影响则广泛而深远——普希金
人离开了书，如同离开空气一样不能生活——科洛廖夫
书不仅是生活，而且是现在、过去和未来文化生活的源泉——库法耶夫
书籍把我们引入最美好的社会，使我们认识各个时代的伟大智者———史美尔斯
书籍便是这种改造灵魂的工具。
人类所需要的，是富有启发性的养料。
而阅读，则正是这种养料———雨果。
胡萝卜肉质根愈伤组织的诱导与继代增值培养实验报告
综合性实验报告胡萝卜肉质根愈伤组织诱导及继代增殖培养一、实验原理及目的（一）实验目的1、通过MS培养基母液的配制和保存，掌握配制于保存培养基母液的基本技能。
2、通过MS固体培养基的配制，掌握培养基的制备基本技能。
3、学会和掌握诱导愈伤组织的基本技术。
4、初步掌握组织培养的无菌操作技术。
5、初步掌握外植体的消毒技术。
6、掌握组培室常用的化学试剂。
7、学会和掌握愈伤组织继代培养的基本操作技术。
（二）实验原理1、配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。
2、在自然情况下，根主要为植物吸收和固定的重要器官，同时，有些植物的根亦具有繁殖的功能。
植物根生长快、代谢能力强、变异小，使得其在研究根的营养吸收、生长和代谢的变化规律、器官分化、形态建成规律等方面具有重大的理论与实践意义。
依据细胞全能性原理，即指任何具有完整细胞核的细胞（动物、植物等），都拥有形成一个完整个体所必需的全部遗传信息（DNA）。
就胡萝卜根来说，其肉质根细胞同样具有形成完整再生植株的能力。
这种由单个根衍生而来并经继代培养而保存的，在遗传上具有一致的根的培养物，称为离体根无性系。
利用这些离体根的无性系可以进行器官再生体系、苗木无性系快速繁殖和其他方面的实验研究。
3、愈伤组织（callus）原指植物体的局部受到创伤刺激后，在伤口表面新生的组织。
它由活的薄壁细胞组成，可起源于植物体任何器官内各种组织的活细胞。
在植物体的创伤部分，愈伤组织可帮助伤口愈合；在嫁接中，可促使砧木于接穗愈合，并由新生的维管组织使砧木与接穗沟通。
在植物器官、组织、细胞离体培养时，条件适宜也可以长出愈伤组织。
其发生过程是：外植体的活细胞经诱导，恢复其潜在的全能性，转变为分生细胞，继而其衍生的细胞分化为薄壁细胞组织而形成愈伤组织。
胡萝卜愈伤组织实验报告
北京师范大学珠海分校实验报告姓名：实验名称：胡萝卜愈伤组织的诱导学院（系、所）：工程技术学院学科专业：生物技术导师姓名：报告时间：2012.2.15—2012.3.20实验序号01实验名称胡萝卜愈伤组织的诱导实验时间2012.2.15—2012.3.20实验室工程技术学院1206 1209 1．研究背景1.1 胡萝卜胡萝卜（Daucus carrot），属于十字花科植物，是一种十分重要的蔬菜植物。
由于其营养价值高,及其适于生食、加工、烹调等多种用途,在世界范围内广泛栽培。
中国是农业大国,胡萝卜作为蔬菜作物在人们生活中起着重要的作用.因此,加快我国胡萝卜育种研究以成为迫切需要。
近些年来,随着生物技术与分子生物学技术的快速发展，作为生物技术研究的理想材料，许多国家对胡萝卜体细胞杂交技术、遗传转化与再生技术、分子标记与基因克隆技术进行了广泛深入的研究。
我国科研工作者在胡萝卜的生物技术与分子生物学研究上也取得了一定进展，特别是在组织培养、原生质体融合、遗传转化及再生等方面。
但是在胡萝卜细胞培养方面并不是太多。
因此继续深入研究还是很有必要的。
此外，由于市面上的胡萝卜价格比较便宜，材料易得，而且在组织培养方面容易诱导发生，我们可以通过这个实验熟悉植物组培。
1.2 组织培养植物组织培养概念（广义）又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织。
器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。
植物组织培养概念（狭义）指用植物各部分组织，如形成层。
薄壁组织。
叶肉组织。
胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。
2．实验设备与材料2.1 实验设备冰箱、普通天平、分子天平、试剂瓶（棕色和白色）、量筒、烧杯、容量瓶、药勺、称量纸、玻棒、标签纸、三角瓶、吸管、玻璃棒、精密pH试纸（5.4～7.0）、PH试纸（5.4～7.0）、封口膜、橡皮筋、微波炉、高压蒸汽灭菌锅、已灭菌滤纸、手术剪、解剖刀、已灭菌培养皿、酒精灯、大烧杯、小烧杯、50ml三角瓶、50ml 量筒、100ml量筒、10ml和5ml还有2ml吸管、200ml定容瓶。
胡萝卜愈伤组织的诱导与继代培养实验报告
3)为了保证灭菌彻底，在蒸气灭菌锅增压前应先将灭菌锅内的冷空气放尽。
4)培养基消毒灭菌时间不宜过长，也不可超过灭菌锅规定的压力范围；否则，培养基中的蔗糖、有机物质，特别是维生素类物质就会分解，导致培养基变质、变色，甚至难以凝固。
5)当灭菌完成后，应切断电源或热源，待灭菌锅内气压接近“0”时，方可打开放气阀，拧开灭菌锅盖取出培养基。切勿为急于取出培养基而打开放气阀放气，否则锅内气压下降太快会引起减压沸腾，导致灭菌锅内各容器中的培养基溢出，造成浪费或污染，甚至烫伤工作人员。
A继代培养前准备工作
a)接种室的清洁和消毒；
b)超净工作台的开机和消毒；
c)剪刀、镊子、已灭菌培养皿和滤纸、待用培养基等的准备；
d)实验材料的准备（选择装有无污染的已分化出愈伤组织的外植体的三角瓶摆放于净工作台上）
B愈伤组织继代培养
a)将上次接种在愈伤组织诱导培养基中的无污染的外植体产生的愈伤组织在已灭菌的培养皿中剥离
每组1~2根胡萝卜，用试管刷和肥皂洗净，进行初次表面清洁；洗净后用干净的烧杯盛放，用小刀切成合适大小的4段（每人1段），转入超净台待用。
（4）植物材料的表面灭菌和接种
A.操作人员洗手消毒
B.装材料的容器及玻璃棒用酒精表面消毒
C.将待消毒的材料浸入75％的酒精中10秒，取出转入无菌水冲洗干净。（酒精单独一个杯子装，消毒完毕转下一组使用）
D.培养基的分装
配制好的培养基要趁热分装，培养基分装完后，用封口膜封严瓶口，并用棉线扎紧。本次实验中500ml分装到20个三角瓶，每人5瓶。
E.培养基的灭菌
培养基分装后应立即置于高压蒸气灭菌锅内进行灭菌。消毒灭菌时，压力表读数约为1.06kgf·cm-2或0.105 MPa（可在0.105～0.12MPa间，但不得超过0.14 MPa），温度121℃时保持15～30 min左右即可。
4)培养基消毒灭菌时间不宜过长，也不可超过灭菌锅规定的压力范围；否则，培养基中的蔗糖、有机物质，特别是维生素类物质就会分解，导致培养基变质、变色，甚至难以凝固。
5)当灭菌完成后，应切断电源或热源，待灭菌锅内气压接近“0”时，方可打开放气阀，拧开灭菌锅盖取出培养基。切勿为急于取出培养基而打开放气阀放气，否则锅内气压下降太快会引起减压沸腾，导致灭菌锅内各容器中的培养基溢出，造成浪费或污染，甚至烫伤工作人员。
A继代培养前准备工作
a)接种室的清洁和消毒；
b)超净工作台的开机和消毒；
c)剪刀、镊子、已灭菌培养皿和滤纸、待用培养基等的准备；
d)实验材料的准备（选择装有无污染的已分化出愈伤组织的外植体的三角瓶摆放于净工作台上）
B愈伤组织继代培养
a)将上次接种在愈伤组织诱导培养基中的无污染的外植体产生的愈伤组织在已灭菌的培养皿中剥离
每组1~2根胡萝卜，用试管刷和肥皂洗净，进行初次表面清洁；洗净后用干净的烧杯盛放，用小刀切成合适大小的4段（每人1段），转入超净台待用。
（4）植物材料的表面灭菌和接种
A.操作人员洗手消毒
B.装材料的容器及玻璃棒用酒精表面消毒
C.将待消毒的材料浸入75％的酒精中10秒，取出转入无菌水冲洗干净。（酒精单独一个杯子装，消毒完毕转下一组使用）
D.培养基的分装
配制好的培养基要趁热分装，培养基分装完后，用封口膜封严瓶口，并用棉线扎紧。本次实验中500ml分装到20个三角瓶，每人5瓶。
E.培养基的灭菌
培养基分装后应立即置于高压蒸气灭菌锅内进行灭菌。消毒灭菌时，压力表读数约为1.06kgf·cm-2或0.105 MPa（可在0.105～0.12MPa间，但不得超过0.14 MPa），温度121℃时保持15～30 min左右即可。
胡萝卜愈伤组织诱导
3、接种：左手拿装有培养基的三角瓶，接 近酒精灯，用右手揭去盖，将瓶外部在灯 焰上燎数秒钟，并旋转使充分灼烧灭菌， 右手用镊子夹取材料小片送入瓶内，平放 于培养基表面，轻按一下，使其紧密接触 培养基。每瓶3块，均匀分布，封好瓶口。 4、培养：放入25℃温箱中暗下培养一个月。
实验结果
记录时间 污染数量 外植体形态变化 愈伤组织分化情况
2、外植体材料消毒：取6—8cm长的胡萝卜一段进行以下
操作： 1）清洗：（流水冲洗）以下各步在超净台上进行； 2）将材料转入无菌烧杯或罐头瓶，加入75%酒精浸泡1—2min； 3）倒去酒精用0.1%升汞浸泡10—15min，不断搅拌； 4）倒去升汞用无菌水洗涤3—5次； 5）转入吸水纸上； 6）用解剖刀切去两端各1cm部分，将中断切成0.7cm厚的薄圆 片； 7）将圆片移至无菌的部分，用刀切去外皮和中柱部分，将形 成层切成1cm2的小片。
大量元素、微量元素、铁盐、有机物、植物激素
1）从母液中取出（移液管）所需的大量元素、微量元素、铁盐、有 机成分，注意计算清楚各种物质在所须配制总体积下的加入量，将其放 入小烧杯中； 2）在洁净的搪瓷缸里加入一定量的水（3/4）及所需要的琼脂，加热 并不时搅拌，注意防止琼脂沉底焦糊； 3）待琼脂溶解（呈透明状，即无固体条状或丝状物，均匀而透亮） 后，加入（1）中所取的各种母液及糖，并不断搅动使其混合均匀。 4）用1N HCl or NaOH 调整PH值到所须值（一般为5.8） 5）加水至所须刻度； 6）趁热将培养基分装到培养用的容器（三角瓶等）中，注意不要把 培养基黏附到瓶口或瓶口附近的内壁上，以免今后引起污染； 7）将分装好培养基的容器盖上盖子； 8）高压灭菌后取出，放于室温中冷却备用。 培养基及无菌用品的灭菌，121℃，30min。
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综合性实验报告胡萝卜肉质根愈伤组织诱导及继代增殖培养一、实验原理及目的（一）实验目的1、通过MS培养基母液的配制和保存，掌握配制于保存培养基母液的基本技能。
2、通过MS固体培养基的配制，掌握培养基的制备基本技能。
3、学会和掌握诱导愈伤组织的基本技术。
4、初步掌握组织培养的无菌操作技术。
5、初步掌握外植体的消毒技术。
6、掌握组培室常用的化学试剂。
7、学会和掌握愈伤组织继代培养的基本操作技术。
（二）实验原理1、配制培养基时，为了使用方便和用量准确，通常采用母液法进行配制，即将所选培养基配方中各试剂的用量，扩大若干倍后再准确称量，分别先配制成一系列母液置于冰箱中保存，使用时按比例吸取母液进行稀释配制即可。
2、在自然情况下，根主要为植物吸收和固定的重要器官，同时，有些植物的根亦具有繁殖的功能。
植物根生长快、代能力强、变异小，使得其在研究根的营养吸收、生长和代的变化规律、器官分化、形态建成规律等方面具有重大的理论与实践意义。
依据细胞全能性原理，即指任何具有完整细胞核的细胞（动物、植物等），都拥有形成一个完整个体所必需的全部遗传信息（DNA）。
就胡萝卜根来说，其肉质根细胞同样具有形成完整再生植株的能力。
这种由单个根衍生而来并经继代培养而保存的，在遗传上具有一致的根的培养物，称为离体根无性系。
利用这些离体根的无性系可以进行器官再生体系、苗木无性系快速繁殖和其他方面的实验研究。
3、愈伤组织（callus）原指植物体的局部受到创伤刺激后，在伤口表面新生的组织。
它由活的薄壁细胞组成，可起源于植物体任何器官各种组织的活细胞。
在植物体的创伤部分，愈伤组织可帮助伤口愈合；在嫁接中，可促使砧木于接穗愈合，并由新生的维管组织使砧木与接穗沟通。
在植物器官、组织、细胞离体培养时，条件适宜也可以长出愈伤组织。
其发生过程是：外植体的活细胞经诱导，恢复其潜在的全能性，转变为分生细胞，继而其衍生的细胞分化为薄壁细胞组织而形成愈伤组织。
愈伤组织诱导的成败关键主要不是外植体的来源种类，而是培养条件，其中激素的种类和浓度最为重要。
诱导愈伤组织常用的生长素是2,4-D，IAA和NAA，常用的细胞分裂素是KT和6-BA。
愈伤组织形成的过程分为3个时期：诱导期、分裂期和分化期（形成期），愈伤组织的生长是发生在不与琼脂培养基接触的表面。
4、调节培养基的酸碱性至PH=5.8左右。
由于培养基的PH值直接影响到培养物对离子的吸收，因而过酸或过碱都会对植物材料的生长有很大的影响。
此外，PH还影响到琼脂培养基的凝固情况。
所以，当培养基配制好后应立即进行PH的调整。
培养基若偏酸时用氢氧化钠（1mol/L）来调节，若过碱就用盐酸（1mol/L）来调节。
当PH值高于6.0时，培养基将会变硬；当PH值低于5.0时，琼脂不能很好地凝固。
5、植物组织培养的优点：①研究材料来源单一，无性系遗传背景一致；②经济、方便、效率高；③条件可控、误差小；④生长快、周期短、重复性强；⑤可全年试验或生长。
6、继代培养是指愈伤组织在培养基上生长一段时间后，营养枯竭，水分散失，并已经积累了一些代产物，此时需要将这些组织转移到新的培养基上，这种转移称为继代培养。
实际上就是对来自于外植体所增殖的培养物（包括细胞、组织或其切段）通过更换新鲜培养基及不断切割或分立，进行连续多代的培养。
将诱导产生的芽、苗、愈伤组织、原球茎或胚状体等培养物重新分割，接种到新鲜培养基上进一步扩大培养的过程称为继代培养，也称为增殖培养。
该过程是植物组织培养中决定繁殖速度快慢、繁殖系数高低的关键阶段。
继代使用的培养基对于一种植物来说，每次几乎完全相同。
由于培养物在适宜的环境条件、充足的营养供应和生长调节剂作用下，排除了其他生物的竞争，繁殖速度大大加快。
二、实验所需仪器设备及其原理（一）冰箱用于长期贮存培养基母液、生化试剂及低温处理材料。
（二）培养箱用于少量植物材料的培养。
有条件的话，还可采用全自动的调温、调湿人工气候箱来进行植物组织培养和试管苗快繁。
（三）超净工作台超净工作台是为植物组织培养提供无菌操作环境，是最常用、最普及的无菌操作装置，和无菌室相比，超净工作台既方便又舒适，无菌效果又好。
超净工作台一般由鼓风机、过滤器、操作台、紫外灯和照明灯等部分组成。
它是将空气过滤后形成无菌的风，创造出一个无菌环境。
根据风幕形成的方式，超净工作台可分为水平式和垂直式两种。
在一般的植物组织培养中，两种都可以采用，而进行植物的遗传转化操作和农杆菌、大肠杆菌的接种时，最好采用垂直风幕式的超净工作台，这样可以避免细菌在空气中的扩散。
（四）高压蒸汽灭菌锅高压蒸汽灭菌锅主要用于培养基、蒸馏水和各种器械的灭菌消毒。
高压灭菌锅有大型、中型和小型三种。
实验室最常用的是中型立式全自动灭菌锅和小型便携式美景，大型卧底式高压灭菌锅在大型工厂化植物组织培养上使用。
（五）天平较常用的为普通天平（1/100g、1/10g），在微量元素、植物激素等的称量时，需要用分析天平（1/10000g）。
（六）蒸馏水制备装置有蒸馏型和离子交换型两种。
需要时，还可以进行重蒸馏来获得纯度更高的蒸馏水。
三、培养基及其机制（一）培养基是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工培植的养料，一般含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）以及维生素和水等。
（二）植物组织培养所用培养基——MS培养基MS培养基是Murashige和Skoog于1962年为烟草细胞设计的，其特点是：无机盐和离子浓度高，是较稳定的离子平衡溶液，它的硝酸盐含量高，其养分的数量和比例合适，能满足植物细胞的营养和生理需要，因而使用围较广，多数植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基。
MS培养基是目前使用最普遍的培养基。
其具有较高的无机盐浓度，能够保证组织生长所需的矿质营养，还能加速愈伤组织的生长，由于配方中的离子浓度较高，在配制、贮存和消毒等过程中，即使有些成分略有出入，也不会打破离子间的平衡。
MS固体培养基可用于诱导愈伤组织，也可用于胚、茎段、茎尖及花药的培养，其液体培养基用于细胞悬浮培养时能获得明显的成功。
MS培养基的无机养分的数量和比例比较合适，足以满足植物细胞在营养上和生理上的需要。
因此，一般情况下，不再用添加氨基酸、酪蛋白水解物、酵母提取物及椰子汁等有机附加成分。
和其它培养基基本成分相比，MS培养基中的系哦啊酸盐、钾和铵的含量高，这是它的显著特点。
1.配制MS母液培养基（1）所需仪器电子天平、烧杯、容量瓶、细口瓶、药勺、玻璃棒、电炉、量筒、称量纸、PH试纸、冰箱（2）所需药品NH4NO3、KNO3、CaCl2·2H2O、MgSO4·7H2O、KH2PO4、H3BO3、MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、Na2MoO4·2H2O、KI、CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、FeSO4·7H2O、Na2-EDTA·2H2O、肌醇、烟酸、盐酸吡哆醇（维生素B6）、盐酸硫胺素（维生素B1）、甘氨酸、蒸馏水.①大量元素的配制（CaCl2·2H2O要在最后单独加入）用量=放大倍数×体积×培养基中的浓度n=20 v=1L依次称取，分别溶解，依次混合，定容，倒入母液瓶中，贴标签，放入4℃冰箱。
②微量元素的配制（Fe单独配制）n=200 v=1L MnSO4·4H2O:22.3g或MnSO4·H2O：16.9g③铁盐母液配制n=200 配500ml螯合态的铁，混合煮沸，PH=5.8~6.2（用NaOH溶液调其PH）④有机物的配制（单一母液）肌醇（10mg/ml 配250ml）V B1（1mg/ml 配250ml）V B6（1mg/ml 配250ml）烟酸（1mg/ml 配250ml）甘氨酸（2mg/ml 配250ml）⑤生长调节物配制6-BA（1mg/ml 配100ml）2,4-D（1mg/ml 配100ml）NAA（1mg/ml 配100ml）注：6-BA先用少量1mol/L HCl溶解，2,4-D和NAA先用少量mol/LnaOH 或95﹪酒精溶解。
2.配制胡萝卜愈伤组织诱导培养基（MS固体培养基）（1）配方：MS基本培养基+2mg/L NAA+0.1 mg/L6-BA+200 mg/L水解酪蛋白+3﹪蔗糖+0.7﹪琼脂粉即：大量元素：50ml 微量元素：5 ml 有机物成分：5 ml 铁盐：5 ml 2mg/L NAA：2mg(ml) 0.1mg/L 6-BA：0.1mg(ml) 200mg/L水解酪蛋白：200mg蔗糖：30g 琼脂：7g注：由于配制减半，因此上述试剂均减半。
（2）要求：每小组配制500ml，分装为20瓶，每瓶25ml。
（3）步骤：①琼脂溶解（3.5g+350ml蒸馏水，加热煮沸2min以上）；②把蔗糖加入琼脂溶液中（15g蔗糖）；③把CH加入琼脂和蔗糖溶液中；④依次量取MS培养基母液及所需生长调剂物质母液于烧杯中，最后加入到相应的容器中；⑤PH调整为6.0~6.2，并定容到500ml；⑥培养基分装、封口；⑦灭菌（121℃ 1.1kg/cm2 ，15min）；⑧保存。
3.继代培养基的配制MS基本培养基+6-BA+ NAA+2,4-D+C+CH蔗糖15g；琼脂3g；大量元素2.5ml；微量元素2.5ml；铁盐0.5ml；肌醇5ml；V B1 0.5ml；V B6 0.25ml；烟酸0.25ml；甘氨酸0.5ml；CH 0.1g。
制500ml，分为22瓶，PH为5.8。
四、外植体消毒及无菌操作技术（一）外植体消毒在离体根培养中，首先芽解决外植体消毒问题，因为在自然条件下，根生长在土壤中，要进行彻底灭菌、消毒。
为了消灭这种污染源，在把植物组织接种到培养基上之前必须要进行彻底的表面消毒；部已受到真菌或细菌侵染的组织在组织培养研究中一般都淘汰不用。
胡萝卜的肉质根，其硬度较大，容易操作，可直接用灭菌剂进行处理。
①用自来水将胡萝卜冲洗干净，用解剖刀将其切成几个小段；②用70﹪~75﹪的酒精浸泡胡萝卜2min；③放入0.1﹪HgCl2中浸泡10min；④用无菌水洗4次；⑤备用：为胡萝卜愈伤组织的诱导作准备。
（二）无菌操作技术无菌操作技术室用于防止微生物进入实验室区的操作技术。
要求：①在进行无菌操作前将界面上的细菌和病毒等微生物杀灭；②操作过程中是界面与外界隔离，避免微生物的侵入。
目前，多数实验室都使用各种类型的超净工作台进行无菌操作。
步骤：①在实验之前30min将超净工作台的紫外灯打开，进行灭菌。
工作人员要避免紫外灯的照射，做实验时将紫外灯关闭。
②用酒精喷壶或酒精棉将超净工作台进行消毒（酒精浓度为70﹪）。