第四章__化学物质成份的鉴定方法

第四章糖类物质的测定第四章糖类物质的测定第⼀节概述⼀、定义和分类碳⽔化合物统称为糖类，是由碳、氢、氧三种元素组成的⼀⼤类化合物，①碳⽔化合物在有机体中的重要作⽤。

糖蛋⽩糖脂－－⽣理功能物质核糖和脱氧核糖－－遗传物质能量来源、结构成分②作为⾷品⼯业的主要原料和辅助材料。

③⼯业发酵的主要碳源，如淀粉、糊精、双糖、单糖。

⼯业发酵过程可以根据糖量的变化判断发酵是否正常；可以根据残糖量确定发酵终点。

糖的分类有效碳⽔化合物——⼈体能消化利⽤的单糖、双糖、多糖(淀粉)。

⽆效碳⽔化合物——不能被⼈体消化利⽤的纤维素、半纤维素、果胶等多糖。

这些⽆效碳⽔化合物能改善消化系统功能，对维持⼈体健康有重要作⽤；纤维素类原料的有效利⽤是⽣物技术中具有挑战性的研究⽅向。

⼆. 糖类物质的分布和含量葡萄糖、果糖: ⽔果，蔬菜：0.96-5.82％，0.85-6.53％蔗糖：⽢蔗，甜菜：10-15％，15-20％；西⽠，菠萝：4％，8％乳糖：动物乳汁，⽜乳～4.7％麦芽低聚糖：异麦芽低聚糖在⾃然界不存在，⽽由淀粉⽔解产⽣低聚果糖、低聚半乳糖、低聚⽊糖：⾃然界少，多由⼈⼯酶法合成淀粉，纤维素，果胶在植物普遍存在三. 糖类物质的测定⽅法分类：直接法：指根据糖的物理化学性质作为分析原理的分析⽅法间接法：根据其它物质含量，⽤差减法计算出来，以总碳⽔化合物或⽆N 抽提物表⽰糖的化学性质—还原性单糖的羰基、酮基、羟基具有不同强度的还原能⼒：醛糖：与弱氧化剂溴⽔：形成糖酸；与较强氧化剂硝酸：醛基和伯醇基都被氧化为羧基，⽣成葡萄糖⼆酸；有时只有伯醇基被氧化成羧酸，形成糖醛酸。

酮糖：酮糖对溴的氧化作⽤没有反应，以此可将酮糖与醛糖分开；在强氧化剂作⽤下，酮糖在羰基处断裂，形成两个酸。

单糖在碱性溶液中，醛基和酮基都可烯醇化为活泼的烯⼆醇，⽽烯⼆醇有还原性，普通酮类则不能。

各种化学分析法⽤于测定可溶性糖总量对各种糖分别定量分析的⽅法⾊谱法：纸⾊谱、薄层⾊谱、GC、HPLC酶电极法、酶⽐⾊法：半乳糖脱氢酶：测半乳糖、乳糖葡萄糖氧化酶：测葡萄糖、蔗糖酶⽔解法：测淀粉含量糖类物质测定的其它⽅法：电泳法：对可溶性糖的分离、定量⽑细管电泳法对低聚糖、活性多糖测定本章重点介绍国内外标准分析⽅法，⼀些有影响的参考⽅法第⼆节可溶性糖类的测定⼀、可溶性糖类的提取和澄清可溶性糖类通常是指葡萄糖、果糖等游离单糖及蔗糖等低聚糖。

化学物质的鉴别
化学物质的鉴别是指通过一系列的化学和物理性质测试，确定未知物质的组成和特征，以将其与已知的化学物质进行区分和识别的过程。

化学物质的鉴别通常包括以下几个方面：
一、物理性质测试：包括颜色、形状、密度、溶解性、熔点、沸点等物质的常规物理性质测试，这些测试能够提供一些关于物质的基本特征。

二、化学反应测试：通过与已知试剂或物质发生特定的化学反应，检测未知物质的化学性质。

例如，酸碱中和试验、气体生成反应、还原性和氧化性反应等。

三、光谱分析：使用光谱技术如红外光谱、紫外-可见光谱、质谱等，检测物质的分子结构和化学键信息，从而确定其组成和结构。

四、色谱分析：包括气相色谱、液相色谱等技术，通过物质在不同相分离和移动的特性，进行物质的分离和鉴别。

五、其他特殊测试：根据需要，还可以进行其他特殊的化学分析和测试，如热分析、电化学分析、放射性分析等。

通过以上一系列的测试和分析，可以获得关于化学物质的各种性质和特征信息，从而确定其组成和特征，并将其与其他已知化学物质进行区分和识别。

第1课时 蛋白质的分离与提取学习导航明目标、知重点难点掌握电泳法分离大分子的原理。

(重点) 运用常用的方法提取和分离蛋白质。

(重、难点)[学生用书P48]一、阅读教材P 71～72分析蛋白质的分离与纯化 1．生物细胞中的蛋白质提取(1)在提取蛋白质时，可以采用研磨与超声波结合的方法将生物组织或细胞完全破碎，使蛋白质从细胞中释放出来，并使其溶解在适当的抽提液中。

(2)抽提液的选择需要根据蛋白质的特性而定，一般酸性蛋白质用偏碱性溶液抽提，碱性蛋白质用偏酸性溶液抽提，脂蛋白等则可用有机溶剂抽提。

2．蛋白质的分离方法(1)离心沉降法：通过控制离心速度，使分子大小、密度不同的蛋白质发生沉降分层。

(2)薄膜透析法：利用蛋白质分子不能透过半透膜的特性，使蛋白质与其他小分子化合物分离的方法。

(3)凝胶色谱法①概念：根据蛋白质分子量的大小差异对其进行有效分离的方法。

②原理a ．凝胶⎩⎪⎨⎪⎧形态：微小的多孔球体组成：大多由多糖类化合物构成结构：内部具有很细微的多孔网状结构b ．分离的过程进入凝胶颗粒内 部的难易程度路程移动速度小分子 蛋白质 容易较长 较慢大分子 蛋白质无法进入 较短 较快二、阅读教材P73～77完成血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及凝胶色谱法分离血红蛋白的操作1．血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳配制试剂→准备器材→架滤纸桥→浸泡薄膜→细心点样→平悬薄膜→实施电泳→染色→漂洗→脱色。

2．凝胶色谱法分离血红蛋白样品处理→血红蛋白的释放、分离和透析→凝胶的制备→色谱柱的装填→样品的加入→洗脱与收集。

判一判(1)酸性蛋白质用酸性溶液抽提，水溶性蛋白质用透析液抽提，脂溶性蛋白质用稀碱性溶液抽提。

(×)(2)电泳是指带电粒子在电场的作用下向着与其电性相反的电极移动的过程。

(√)(3)电泳时泳动速度取决于带电颗粒的大小、形状、所带静电荷多少。

(√)(4)离心沉降法和薄膜透析法分离蛋白质的原理是一样的。

(×)(5)凝胶色谱法是根据蛋白质分子量的大小而对其进行有效分离的方法。

第四章 药品检验方法《中国药典》附录收载的药品检验方法:附录Ⅲ 一般鉴别试验附录Ⅳ 分光光度法：紫外、红外、原子吸收、荧光、火焰光度法；附录Ⅴ 色谱法：纸、薄层、柱、高效、气相、电泳、毛细管电泳、分子排阻、离子色谱法； 附录Ⅵ 物理常数测定方法：熔点测定法、旋光度测定法、折光率测定法； 附录Ⅶ 官能团测定方法：氮测定法、脂肪和脂肪油测定法； 附录 Ⅷ 一般杂质检查方法：氯化物、干燥失重；附录 Ⅸ 物理测定方法：溶液颜色、澄清度、X 射线衍射法、质谱法 附录 Ⅹ 制剂的检查方法：崩解时限、溶出度；附录 Ⅺ 生物学测定方法：抗生素微生物检定法、热原；附录 Ⅻ 生物化学测定方法：细胞色素C 活力测定法、胰岛素生物测定法。

二、分光光度法分光光度法: 是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内的吸光度或发光强度，对该物质进行定性、定量分析的方法。

基本原理：定量分析的基础是光的吸收定律。

E 为吸收系数，在药品检验中使用的是比吸收系数。

（一）紫外-可见分光光度法紫外分光光度法是根据药物对紫外-可见光的特征吸收对药物进行定性和定量的分析方法。

紫外分光光度法灵敏、简便，准确度比较高，是药物鉴别、检查和含量测定的常用方法。

1. 仪器的校正和检定 （1）波长的校正利用仪器汞灯或氘灯的较强谱线或钬玻璃的尖锐吸收峰进行校正；也可以用高氯酸钬溶液的吸收峰进行校正。

仪器波长的允许误差：紫外区：±1n m ; 500n m 附近：±2n mECl I IT A =-=-=0lglg（2）吸光度的准确度用重铬酸钾的硫酸溶液检定。

（3）杂散光的检查杂散光是一些不在谱带范围内且与所需波长相隔较远的光，一般来自光学仪器表面的瑕疵。

检查方法：配制碘化钠和亚硝酸钠溶液，在规定波长处测定透光率，应小于规定值。

2. 对溶剂的要求溶剂的使用范围不能小于截至波长；溶剂在不同波长范围内的吸光度应小于规定值。

3. 吸光度的测定方法（1）使用空白校正的方法 用同批溶剂作为空白。