叶绿体色素定量测定及性质实验报告

一、实验目的1. 了解叶绿素在植物中的重要作用。

2. 掌握叶绿素含量的测定方法。

3. 学会运用分光光度计测定叶绿素的含量。

二、实验原理叶绿素是植物体内的一种绿色色素，是植物进行光合作用的重要物质。

叶绿素含量是衡量植物生长状况的一个重要指标。

本实验采用分光光度法测定叶绿素含量，依据朗伯-比尔定律，即某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比。

叶绿素在特定波长下具有最大吸收峰，通过测定其吸光度，可以计算出叶绿素的含量。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜植物叶片（如菠菜、水稻等）2. 实验仪器：分光光度计、研钵、剪刀、电子天平、移液管、量筒、试管、滤纸、吸水纸、比色杯、蒸馏水、95%乙醇、石英砂、碳酸钙粉四、实验步骤1. 样品处理（1）称取新鲜植物叶片0.1g左右，放入研钵中。

（2）加入少量石英砂和碳酸钙粉，再加入3-5ml 95%乙醇，研磨至组织变白。

（3）静置3-5分钟，使研磨充分。

2. 滤液制备（1）取一张滤纸，放入漏斗中，用乙醇湿润。

（2）沿玻棒将提取液倒入漏斗中，过滤至10ml试管中。

（3）用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。

（4）用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入漏斗中，直至滤纸和残渣中无绿色为止。

（5）最后用乙醇定容至10ml，摇匀。

3. 吸光度测定（1）将叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内。

（2）以95%乙醇为空白，在波长663nm、645nm下或652nm测定吸光度。

4. 数据处理（1）根据实验数据，绘制吸光度-浓度曲线。

（2）根据曲线，计算叶绿素的含量。

五、实验结果与分析1. 实验结果（1）绘制吸光度-浓度曲线。

（2）计算叶绿素的含量。

2. 结果分析（1）根据吸光度-浓度曲线，可以看出叶绿素在特定波长下的最大吸收峰。

（2）根据计算，可以得出样品中叶绿素的含量。

六、实验结论通过本次实验，我们掌握了叶绿素含量的测定方法，了解了叶绿素在植物中的重要作用。

一、实验目的1. 学习叶绿体色素提取和分离的方法。

2. 掌握叶绿体色素的理化性质和定量分析方法。

3. 了解叶绿素在植物光合作用中的作用。

二、实验原理叶绿体是植物细胞中进行光合作用的细胞器，其中含有多种色素，包括叶绿素、类胡萝卜素等。

叶绿素主要吸收红光和蓝紫光，类胡萝卜素主要吸收蓝紫光。

通过测定叶绿体色素的吸收光谱，可以了解叶绿素的含量和种类。

本实验采用分光光度法，利用95%乙醇提取植物叶片中的叶绿体色素，然后通过层析法分离叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素，最后测定各色素的浓度，以了解叶绿素的含量和种类。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜菠菜叶片、番茄叶片2. 实验仪器：分光光度计、研钵、漏斗、100ml三角瓶、玻璃棒、层析柱、层析板、毛细管、剪刀、镊子、滤纸、吸水纸、移液管、量筒、电子天平四、实验步骤1. 提取叶绿体色素（1）将新鲜菠菜叶片和番茄叶片分别洗净、晾干，剪成小块。

（2）将菠菜叶片和番茄叶片分别称取0.1g，放入研钵中。

（3）加入少量石英砂和碳酸钙粉，再加入3～5ml 95%乙醇。

（4）研磨至组织变白，继续研磨3～5min。

（5）将提取液倒入100ml三角瓶中，用玻璃棒搅拌均匀。

2. 分离叶绿体色素（1）将层析板固定在层析柱上，将滤纸剪成适当大小，覆盖在层析板上。

（2）用移液管吸取少量提取液，用毛细管滴加在层析板上，形成一条细线。

（3）将层析柱置于黑暗环境中，用移液管加入适量无水乙醇，使层析板上的色素溶解并开始分离。

（4）观察层析板上的色素带，分别收集叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素。

3. 测定叶绿体色素浓度（1）将收集到的叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素分别置于100ml容量瓶中。

（2）用移液管加入适量95%乙醇，定容至刻度线。

（3）将溶液倒入比色杯中，用分光光度计在特定波长下测定吸光度。

（4）根据吸光度计算叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素的浓度。

五、实验结果与分析1. 叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素的吸收光谱图根据实验结果，绘制叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素的吸收光谱图，分析各色素的吸收特性。

叶绿素含量的测定叶绿素的含量与植物光合作用及氮素营养有密切的关系，在科学施肥、育种及植物病理研究上常有测定的需要。

方法Ⅰ一、目的掌握叶绿素含量测定的基本原理和方法。

二、原理叶绿素与其他显色物质一样，在溶液中如液层厚度不变则其吸光度与它的浓度成一定的比例关系。

已知叶绿素a 、b在652 nm波长处有相同的比吸收系数（均为34.5）。

因此，在此波长下测定叶绿素溶液的吸光度，即可计算出叶绿素a 、b的总量。

三、材料、仪器设备及试剂1. 材料：菠菜叶；芥菜叶或其他植物叶片。

2. 仪器设备：电子分析天平；分光光度计；漏斗；25ml容量瓶；剪刀；滤纸；玻棒等。

3. 试剂：95﹪乙醇、石英砂、碳酸钙粉。

四、实验步骤1. 叶绿素的提取称取植物鲜叶0.20g（可视叶片叶绿素含量增减用量），剪碎放入研钵中，加少量碳酸钙粉和石英砂及3～5ml95﹪乙醇研成匀浆，再加约10ml 95﹪乙醇稀释研磨后，用滤纸过滤入25ml容量瓶中，然后用95﹪乙醇滴洗研磨及滤纸至无绿色为止，最后定容至刻度，摇匀，即得叶绿素提取液。

2. 测定取光径为1cm的比色杯，倒入叶绿素提取液距杯口1cm处，以95﹪乙醇为空白对照，在652 nm波长下读取吸光度（A）值。

五、计算值代入公式(1), 即可求得提取液中叶绿素浓度。

所得结将测得的吸光度A652果再代入公式(2)，即可得出样品中叶绿素含量（mg ·g－1Fw）。

A652C ( mg .ml－1 ) = ———— (1)34.5公式中： C —叶绿素（a 和b ）的总浓度( mg ·ml－1 )—表示在652nm 波长下测得叶绿素提取液的吸光度A65234.5为叶绿素a和b混合溶液在652nm波长的比吸收系数（比色杯光径为1cm, 样品浓度为1g·L－1时的吸光度）。

C（mg.ml－1）×提取液总量（ml）叶绿素含量（mg .g－1Fw）= ———————————————— (2)样品鲜重（g）方法Ⅱ一、目的掌握叶绿素a、b含量测定的基本原理和方法。

叶绿体色素的提取实验报告叶绿体色素的提取、分离、定量及理化性质的鉴定生命科学学院09生科基朱文杰实验目的：掌握提取和分离叶绿体色素的方法；掌握测定叶绿体色素含量的方法；熟悉叶绿体色素的理化性质及吸光特性；了解植物叶绿体色素组成及其与生境的相关性。

实验原理：叶绿体色素是吸收光能的重要物质，包括叶绿素和类胡萝卜。

利用不同色素的极性不同可以用色谱分离法将其分离。

不同的色素对光的吸收范围不同，因此我们也可以测量不同色素在不同波长光下的吸光值，即可用公式计算出其中各色素的含量。

光对叶绿体色素有破坏作用，将叶绿体色素暴露于强光下，可以发现叶绿素被破坏，溶液颜色变化。

叶绿体色素分子吸收光后变为激发态，如能量不被光合作用利用，激发态变回到基态，放出波长较长的红光。

叶绿素分子中卟啉环上的Mg处于不稳定的状态，可被H、Cu、Zn离子取代。

叶绿素不溶于水，能溶于有机溶剂，且各色素的脂溶性不同，故可利用乙醇或丙酮提取，用不同的有机溶剂萃取或用色谱法进行分离。

实验步骤：分别选取2g左右新鲜菠菜和0.2g左右玉米幼株的叶片剪碎放入研钵中。

在研钵中加入5ml丙酮以及少量的石英砂和氯化钙，充分研磨至无纤维装组织。

过滤并转移动至量筒中，再用3ml丙酮冲洗研钵，最后加入丙酮定容至10ml 作为备用提取液。

实验一：吸光值测定：取0.1 ml色素提取液，用80％丙酮稀释到3 ml ，测定663、645 nm 处的吸光值，根据公式计算叶绿素a、叶绿素b的含量。

Chla（μg /ml）=12.7 OD663－2.69OD645，Chlb （μg /ml）=22.9 OD645－4.68 OD663。

实验二：光破坏：取少量色素提取液并稀释3到5倍，分为2份，一份至于暗处，一份正对观察透射光，反身观察反射光，最后放在培养箱中的强光下放置2H。

实验三：铜带反应：取少量色素提取液少许于试管中，一滴一滴加浓盐酸，直至溶液颜色出现褐绿色。

然后加醋酸铜晶体少许，慢慢用水浴加热溶液，则又产生鲜亮的绿色。

实验 8 叶绿体色素的定量测定一、原理根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长下测定其消光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。

根据朗伯–比尔定律，某有色溶液的消光度 D 与其中溶质浓度 C 和液层厚度 L 成正比，即：D = kCL （ 17 – 1 ）式中： k 为比例常数。

当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为 1cm 时， k 为该物质的比吸收系数。

各种有色物质溶液在不同波长下的比吸收系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的消光度而求得。

如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总消光度等于各组分在相应波长下消光度的总和，这就是消光度的加和性。

今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素 a 、 b 和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在 3 个特定波长下的消光度 D ，并根据叶绿素 a 、 b 及类胡萝卜素在该波长下的比吸收系数即可求出其浓度。

在测定叶绿素 a 、 b 时，为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。

已知叶绿素 a 、 b 的 80 ％丙酮提取液在红光区的最大吸收峰分别为 663nm 和 645nm ，又知在波长 663nm 下，叶绿素 a 、 b 在该溶液中的比吸收系数分别为 82.04 和 9.27 ，在波长 645nm 下分别为 16.75 和 45.60 ，可根据加和性原则列出以下关系式：D 663 = 82.04C a +9.27C b （ 17- – 2 ）D 645 = 16.75C a +45.60C b （ 17 – 3 ）式中： D 663 、 D 645 ——叶绿素溶液在波长 663nm 和 645nm 时的消光度；C a 、 C b ——叶绿素 a 和 b 的浓度， mg/L 。

解方程组 17 – 2 、 17 – 3 得：C a = 12.72D 663 – 2.59D 645 （ 17 – 4 ）C b = 22.88D 645 – 4.67D 663 （ 17 – 5 ）将 C a 与 C b 相加即得叶绿素总量 C T ：C T = C a +C b =20.29D 645 + 8.05D 663 （ 17 – 6 ）另外，由于叶绿素 a 、 b 在 652mn 的吸收峰相交，两者有相同的比吸收系数（均为 34.5 ），也可以在此波长下测定一次消光度（ D 652 ）而求出叶绿素 a 、 b 总量：C T = （D 652 × 1000 ）／ 34.5 （ 17 – 7 ）在有叶绿素存在的条件下，用分光光度法也可以同时测定出溶液中类胡萝卜素的含量。

一、实验目的1. 了解叶绿素的提取和鉴定方法。

2. 掌握薄层色谱法在叶绿素鉴定中的应用。

3. 分析叶绿素在不同植物中的含量差异。

二、实验原理叶绿素是植物体内的一种绿色色素，是光合作用的重要色素。

叶绿素主要包括叶绿素a和叶绿素b，它们在植物体内具有不同的吸收光谱。

叶绿素可以溶于有机溶剂，如丙酮、乙醇等，通过薄层色谱法可以将叶绿素与其他色素分离，进而鉴定叶绿素。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜菠菜、胡萝卜、玉米叶等植物。

2. 试剂：丙酮、无水乙醇、无水乙醚、碳酸钙、硅胶G、氯仿、甲醇、氨水等。

3. 仪器：研钵、漏斗、烧杯、分液漏斗、色谱柱、紫外灯、电子天平、紫外分光光度计等。

四、实验步骤1. 提取叶绿素（1）将新鲜植物材料洗净，用剪刀剪碎，称取一定量（如0.5g）放入研钵中。

（2）加入少量碳酸钙，防止研磨过程中叶绿素被破坏。

（3）加入适量丙酮，用研杵研磨至匀浆状。

（4）将匀浆状样品倒入漏斗中，用滤纸过滤，收集滤液。

2. 薄层色谱分离（1）取一块硅胶G薄层板，用铅笔在板上划一条起始线。

（2）用毛细管吸取叶绿素提取液，沿起始线点样，重复3次，每次点样量约为5μl。

（3）将点样后的薄层板放入盛有氯仿的层析缸中，使溶剂前沿距离起始线约1cm。

（4）取出薄层板，晾干后，用紫外灯观察叶绿素斑点位置。

3. 鉴定叶绿素（1）根据薄层板上叶绿素斑点的位置，用铅笔标记。

（2）将标记好的薄层板放入紫外分光光度计中，测定叶绿素斑点的吸光度。

（3）根据吸光度计算叶绿素含量。

4. 数据分析（1）将不同植物样品的叶绿素含量进行比较，分析叶绿素在不同植物中的含量差异。

（2）分析实验过程中可能出现的误差，并提出改进措施。

五、实验结果与分析1. 实验结果通过实验，成功提取了菠菜、胡萝卜、玉米叶等植物中的叶绿素，并在薄层板上分离出叶绿素斑点。

根据紫外分光光度计测得的吸光度，计算出不同植物样品中叶绿素的含量。

2. 结果分析（1）菠菜、胡萝卜、玉米叶等植物中叶绿素的含量存在差异，这与植物的种类和生长环境有关。

实验名称：叶绿体色素的提取、分离、理化性质系别：机械工程系班级：机械11实验者：潘霖学号：2011010389同组姓名：肖鹤翀实验日期：2011.10.22Ⅰ提取与分离一、实验目的：1.学习应用薄层色谱法分离叶绿体色素的实验方法。

2.了解叶绿素的组成、性质和测定叶绿素有助于理解光合作用的本质。

二、实验原理:叶绿体是进行光合作用的细胞器。

叶绿体中的叶绿素a，叶绿素b，胡萝卜素和叶黄素与类囊体膜结合成为色素蛋白复合体。

这些色素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇等有机溶剂提取。

提取液可用薄层色谱法加以分离和鉴别。

薄层层析色谱法是将吸附剂均匀地涂在玻璃板上成一薄层，将此吸附剂薄层作为固定相，把待分离的样品溶液点在薄层板的下端，然后用一定量的溶剂作流动相，将薄层板的下端浸入到展开剂当中。

由于吸附剂对不同物质的吸附能力大小不同，吸附力强的物质相对移动慢一些，而吸附力弱的物质则相对移动快一些，从而使各组分有不同的移动速度而彼此分开。

植物活性成分的分离常用薄层层析法和柱层析法，其中柱层析适用于大量制备。

本实验采用薄层层析色谱法，其中固定相用硅胶预制板。

三、实验材料与试剂:1.新鲜的菠菜叶片。

2.体积分数为95%的乙醇，碳酸钙粉末，展开剂（石油醚：丙酮：苯=7:5:1，体积比）。

3.研钵，漏斗，三角瓶，剪刀，点样毛细管，层析缸，硅胶预制板，滤纸。

四、实验步骤:（一）色素提取液的制备1.取新鲜叶片4~5片，洗净，擦干叶表面，去除中脉剪碎，放入研钵中。

2.向研钵中加入少量CaCO3粉末，再加2~3ml体积分数为95%的乙醇，充分研磨至糊状，再加10~15ml体积分数为95%的乙醇，上清液用漏斗过滤出，残渣再用10ml体积分数为95%的乙醇冲洗一次，一同过滤于三角瓶中，即制成叶绿体色素提取液。

提取液应避光保存，因提取量较大，可用于其他相关实验（如后面的叶绿素理化性质的验证）。

（二）叶绿体色素的分离1.取硅胶预制板一个，用点样毛细管吸取上述提取液，平行于硅胶板的短边，距下边缘1cm处用毛细管划线，保证划线细直。

第1篇一、实验目的1. 了解叶绿体的基本结构、功能和生理特性。

2. 掌握叶绿体色素的提取、分离和鉴定方法。

3. 学习使用显微镜观察叶绿体的形态和分布。

二、实验原理叶绿体是植物细胞中的一种重要细胞器，负责光合作用，将光能转化为化学能，为植物生长提供能量。

叶绿体主要由类囊体、基质和基质蛋白组成，其中类囊体是光合作用的主要场所。

叶绿体中含有多种色素，如叶绿素、类胡萝卜素等，这些色素对光的吸收和传递起着重要作用。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜植物叶片（如菠菜、甘蓝等）、酒精、碳酸钙、石英砂、蒸馏水、滤纸、剪刀、研钵、漏斗、三角瓶、烧杯、显微镜、载玻片、盖玻片、滴管等。

2. 实验仪器：显微镜、研钵、漏斗、三角瓶、烧杯、剪刀、研钵、滤纸、载玻片、盖玻片、滴管等。

四、实验步骤1. 叶绿体色素的提取与分离（1）取新鲜植物叶片1克，洗净、擦干，去掉中脉，剪碎，放入研钵中。

（2）加入少量石英砂、碳酸钙粉和2-3 mL 95%乙醇，研磨至糊状。

（3）再加入2-3 mL 95%乙醇，继续研磨，直至形成均匀的糊状物。

（4）将糊状物倒入漏斗中，用滤纸过滤，收集滤液。

（5）将滤液倒入三角瓶中，加入少量碳酸钙粉，充分搅拌，静置一段时间。

（6）取少量滤液，滴在滤纸上，用铅笔轻轻画出滤液滴的形状，作为色素带的标记。

2. 叶绿体色素的鉴定（1）观察滤纸上的色素带，记录各色素带的颜色、宽度和位置。

（2）将滤纸上的色素带与标准色素带进行对比，确定各色素带的成分。

3. 叶绿体的观察（1）取新鲜植物叶片，制作临时装片。

（2）将装片置于显微镜下，观察叶绿体的形态、大小、分布和数量。

五、实验结果与分析1. 叶绿体色素的提取与分离实验中，从新鲜植物叶片中成功提取了叶绿体色素，并分离出叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素等色素。

2. 叶绿体色素的鉴定通过观察滤纸上的色素带，并与标准色素带进行对比，确定各色素带的成分。

实验结果与理论相符。

3. 叶绿体的观察在显微镜下观察到叶绿体呈椭球状，分布在细胞质基质中，数量较多。