布鲁氏菌病

布鲁氏菌病的诊断与防控摘要：布鲁氏菌病（简称布病）是世界上常见的一种人畜共患传染病。

由于近几年有急骤回升的势头。

笔者叙述布病现阶段的诊断方法和防控措施进展，以期对防控有所帮助。

关键词：布病；诊断；防控布鲁氏菌病（Bucellosis）由布鲁氏菌（Bucella，俗称布氏菌）引起的传染-变态反应性的人畜共患传染病。

羊、牛、猪多发，其他动物也有感染，患羊对人威胁最大。

据中国CDC报告，2005-2008年全国布病新发病人分别为18416、19013、21901、30002例，人布病感染严重，形势严峻[1]。

国际上将该病列为B 类生物恐怖战剂和农业生物恐怖战剂。

中国将其列为二类动物疫病[2]。

布病主要在畜间传播，也可以传染人。

1.病原学1.1布鲁氏菌的发现史1860年，英国医生马斯登（Marston）首次提出“热病”的报告，起名为“地中海热”。

1887年Bruce又在马耳他岛的病人脾脏分离出此菌，证明患本病的小羊是本菌宿主，主要传染绵羊，山羊；人称马尔他布鲁氏菌（B.melitensis），我国称羊种布鲁氏菌。

此后不久，1897年Bang分离出牛种布鲁氏菌（B.abortus），主要传染牛。

1914年Jraum分离到猪种布鲁氏菌（B.suis），主要传染猪。

1953年Buddle分离出绵羊附睾种布鲁氏菌（B.ovis）。

1956年Stoenner分离出沙林鼠布鲁氏菌（B.neotomae）。

1966年Carmichael发现犬种布鲁氏菌（B.canis）。

1994年Foster发现不同于上述6个种的布鲁氏菌称为海洋哺乳动物种布氏菌（B.maris）。

最近又鉴定到3个新种型，田鼠型（B.microti），鳍型(B.pinnipediae)，鲸型(B.ceti) [3]。

2008年和2009年先后又报道了一类新的布氏菌种B.inopinata sp.nov.这个种目前发现两株感染人（典型菌株BO1和不典型株Brucella-like strain BO2）[4-5],但关于这个种地位还未得到布氏菌分类小组委员会的承认。

1.2布氏菌的特征根据《伯吉氏系统细菌手册》，布氏菌属于古生菌域，变形杆菌门，根瘤菌目，布氏菌科，布氏菌属。

布氏菌属于兼性胞内寄生的革兰氏阴性球杆菌，无荚膜，不形成芽孢，不运动，但是除了趋化系统外他们却带有所有的与鞭毛合成相关的基因[6]。

大小在0.3~1.5微米，宽0.5~0.7微米。

本菌姬姆萨染色呈紫色。

2.布病新流行趋势布病分布广泛，全世界有170多个国家和地区出现布病疫情。

我国畜间布病地区分布明显呈现“北高”、“南低”的特点，即东北、西北和华北地区阳性率高，华东、中原地区阳性率次之，南方省份阳性率较低。

据任洪林等统计，中国在1952-1981年，动物布病阳性率检出率高达41.27%；1982-1990年检出率为0.55%；1991-1998年检出率为0.06%~0.9%；2001-2004年，每年有24-28个省份报告检出阳性牲畜，平均血检阳性率为0.4%[7]。

据不完全统计，2006年全国报告畜间布病疫点1178个，报告发病7123头[8]。

羊和奶牛为主要传染源。

由于牛羊饲养量增加，导致发病风险加大。

犬数量激增，而且布病疫苗免疫率低（农村犬尤为突出），成为导致传播的危险因素。

2006年全国人间布病报告19013例，远远超过历史（1963年的最多发病数12097例），截至2007年9月低全国报告18116例，较2006年同期上升了2.68%[7]。

据中国疾控中心疾控应急办统计，全国人间布病2008-2009年报告发病数、发病率居前五位的依次为内蒙古、山西、黑龙江、吉林、河北，部分地区呈现流行之势，防治形势十分严峻。

造成疫情反弹的可能原因有：人口的增加，引种入境数增加，各地畜种间交流机会增加，未经检疫牲畜的自由流行，乳、肉等畜类产品监督力度的减弱，综合性防治措施不力，国际贸易和旅游发展，以及环境气候的改变等。

3.临床症状临床上主要以生殖器官和胎膜发炎，母畜流产，不孕和公畜睾丸炎为特征。

流产可发生于妊娠的任何时期，但牛主要发生在怀孕6-8个月，羊怀孕3-4个月，猪怀孕1-3个月。

流产前2-3天母畜不安，阴道水肿，阴道流出分泌物，流产的胎儿有死胎，快到产期流产胎儿可能是弱胎，产后1-2天死亡，不死亡者，长期带菌，易死亡。

多数流产牛能再次怀孕，但流产后可能发生胎衣滞留和子宫内膜炎。

公畜还可能发生关节炎、粘液囊炎、跛行和持续高温等。

人感染布病后，临床症状各异。

主要表现为长期低热，反复发热，多数病例表现为不规则热型和弛张热。

有关节痛、肝脾肿大及泌尿系统症状。

4.病理变化主要表现流产特征。

子宫粘膜呈卡他性炎或化脓性内膜炎，以及脓肿病变；在绒毛叶上有多数出血点和淡灰色不洁渗出物，并覆有坏死组织。

胎儿胃底腺有淡黄色粘液样絮状或块状物。

胎衣上绒毛充血、水肿或伴有小出血点，或为灰棕色渗出物所覆盖；距流产或分娩前较久死亡的胎儿，可成为木乃伊。

没有怀孕的猪子宫深层粘膜，也可见到灰黄色针头大乃至粟粒大的结节，此即所谓子宫颗粒性布氏菌病[9]。

这是猪布病的特征。

患病母畜常常有输卵管炎、卵巢炎或乳房炎。

公畜患本病时，精囊常有出血和坏死病灶。

囊壁和输精管的壶部变厚或变硬。

睾丸和附睾肿大，有的出现脓性病灶，坏死病灶或整个睾丸坏死。

皮下组织和肌肉间结缔组织呈出血性浆液性浸润，淋巴结、肝、脾明显肿胀。

犬一般隐性感染见不到明显病理变化，仅见到淋巴结炎性肿胀。

也可见流产犬猫。

5诊断本病的临床症状、剖检变化常缺乏明显特征，确诊需进行实验室检查。

5.1病原学诊断分细菌学，分子生物学（PCR）5.1.1细菌学采取流产胎儿、胎盘、阴道分泌物或母畜子宫绒毛膜，抹片，革兰氏或姬姆萨染色后显微镜观察，阳性病例可见大量革兰氏阴性或姬姆萨染色呈紫色的球杆状短小杆菌。

分离布氏菌的阳性率很大程度上取决于分离的方法，同样细菌分离与取材、血清学反应有密切关系，同时存在地区分布。

5.1.2分子生物学近年来，快速、特异、灵敏的PCR检测方法应用到布病诊断中。

Bricker等针对牛、羊、猪种布鲁氏菌存在种间反复差异的IS711保守基因单元，设计不同的引物，利用PCR技术成功区别鉴定布氏菌的各个种[10]，区分人工免疫S19或RB51与自然感染动物，但鉴定疫苗种类限为S19或RB51[11]。

Dorsh等（1989）发表了牛布病16SrRNA基因序列，该基因也可作为布病鉴定的特异性基因[12]，2001年，Cloeckaert等又发现利用omp2基因的多态性也可以将海洋种与其他布氏菌区分开[13]，Whatmore等利用PCR扩增产物长度多态性可以将布氏菌牛种、羊种、沙林鼠种、犬种、猪种、绵羊附睾种以及海洋布氏菌区别开来[14]。

随着分子生物学的发展，布氏菌基因组测序的完成，越来越多的布氏菌基因得以应用到鉴定诊断工作中。

5.2免疫学中国采用的血清诊断方法包括筛选试验：虎红平板凝集试验（RBPT）、缓冲平板试验（PT），确诊试验：试管凝集试验（SAT）、补体结合试验（CFT）,监测试验：乳环试验（MRT）。

5.2.1 RBPT特点：敏感性高，特异性相对差些。

适用于筛选。

注意要点是抗原0.03+血清0.03（关键是等量）、反应4分钟。

5.2.2 SAT特点：敏感性、特异性却不是很好，根据官方确定其定位使用。

试验注意要点是结果观察，注意人为差异，防止震动，按要求观察上清，观察上清比沉淀准确些。

借助工具，如比浊管、比色卡、分光光度仪。

5.2.3 CFT特点：特异性好，敏感性较差，是个体诊断的“金标准”，官方普遍采用。

主要用于个体判定，对群体不宜。

5.2.4 ELISA特点：操作方便，既可作为确定检测，又可作为筛选和鉴定别用。

但只有用于牛布病的ELISA是国际贸易指定的。

这种方法不仅用于血清学诊断，还用于乳汁检查。

ELISA用于研究布病检测是热点。

Fel’dsherova 等应用鼠抗流产布氏菌脂多糖（LPS）的单克隆抗体建立了用于牛种、羊种和猪种布氏菌鉴定的ELISA[15]方法具有高度特异和敏感，同时又不与小肠炎耶尔森氏菌O:3、O:9及鼠伤寒沙门氏菌和土拉热弗朗西斯氏菌反应。

Cakan等应用商品的布病IgG ELISA和IgG ELISA试剂盒对人布病进行检测表明，对于疾病诊断具有很高的敏感性[16]。

5.2.5 MRT：特别是用于检查泌乳期的牛，也用于泌乳期的绵羊，山羊等家畜。

IgA、IgM和IgG的抗体参与此反应，与凝集试验和CFT相比检出率略低，MRT 与SAT结果不完全一致。

5.2.6水解素变态反应：利用变态反应诊断人、畜布病是一项行之有效的方法，此法特异、敏感且简便易行，是国家颁布的布病诊断中的一项，主要用于布病特异性诊断，流行病学调查及菌苗接种的免疫反应的观察。

美国和欧盟有时采用，以羊诊断多见，作为补充实验，有时作为犬的布病实验室检查[17]。

5.2.7胶体金免疫层析检测技术（GICA）：朱东明通过测试病牛血清，用量10ul，敏感性和特异性分别达到91.3%、97.3%，Youden指数为0.886[18]表明GICA诊断牛布病，不仅试剂敏感、特异且血清用量少，操作简便，适用于布病诊断、流行病学调查及现场检测。

GICA检测不同疫区之间人群抗体阳性率差异有统计学意义（p＜0.01），说明能及时发现患者，可监测疫情，反应流行程度，在布病不同流行区具有较好的推广应用前景。

5.2.8淋巴细胞转化试验（LTT），E玖瑰花形成试验(RFCT)细胞移动抑制试验（MIT）等，仍处在实验研究阶段，大多数免疫细胞学方法尚未在实际中应用。

6防治6.1防控措施6.1.1加强对养殖场科学管理的同时，加强布病防控基本知识的宣传和技术推广，尤其针对高危人群的防治技术知识的普及宣传，防患于未然。

6.1.2增加动物性食品中布病病原体检测项目，是患病动物及其产品在市场中逐渐消失，促进患病动物的淘汰处理。

6.1.3启动重点疫区动物普遍检疫，在淘汰阳性动物的基础上进行全群免疫接种，阻止疫情在动物群中继续扩散和蔓延。

6.1.4加快建立或优化布病简便快速的检验诊断方法，使基层人员能够及时快速的识别转运中的阳性动物，能立即实施就地处理措施。

6.1.5加速布氏菌标记疫苗的研究开发，使疫苗免疫动物在获得免疫保护作用的同时又能与感染患病动物进行区别，有利于临床患病动物的检疫淘汰，保护人们的健康和安全。

6.1.6国家或地方制订切实可行的动物布病防控的长远规划和短期计划，并在实践中不断总结完善，使布病防控纳入政府工作计划之中。

6.2免疫接种我国研制的羊种五号弱毒菌苗（简称M5菌苗）剩余毒力低，安全，稳定，对牛、山羊、绵羊、鹿有免疫力。

猪种二号弱毒苗（简称S2菌苗），独立稳定、安全、对牛、羊、猪都有良好的免疫力，已广泛在生产中应用。