第4章 细菌药物敏感试验及其耐药表型检测

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8 10 12 14 18 20 22 24 26 28 30 32 34
不同国家的判定折点 －可能不同
原因：
用药剂量不同，服药的间隔不同 评价敏感时较保守 更强调检测出耐药株（即特定的耐药群） 技术因素：接种、培养基
在我国主要遵循临床实验室标准化委员会（Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI）制定的抗菌药物 选择原则。
合适的药物，避免产生或加重细菌的耐药； 监测细菌耐药性，分析耐药菌的变迁，掌握耐药菌感染
的流行病学，以控制和预防耐药菌感染的发生和流行。
药敏试验
MIC：在与微生物生长速率有关的特定时间间隔内， 通常是18～24小时，能够抑制被测菌生长的最低药 物浓度。
对倍稀释的优点：
操作容易 敏感株的MIC呈正态分布 区分异常(R)与敏感(S)的菌群
器将含药纸片紧贴于琼脂表面，各纸片中心距离应大于24mm， 纸片距平板内缘大于15mm。
纸片扩散法
7. 35℃孵育16～24小时量取抑 菌圈直径；
8. 根据抑菌环的直径，按照 CLSI标准判读，报告敏感、 中介、耐药。
纸片扩散法－影响因素
MIC 接种菌量 细菌生长率 抗生素含量、扩散性 平皿厚度 温度，预孵育时间
Hale Waihona Puke Baidu
红霉素类
万古霉素
克林霉素，万古霉素
氯霉素
庆大霉素
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常规测试并报告的药物分组
(3)
流感嗜血杆菌
一级 氨苄西林，青霉素
肺炎链球菌
青霉素，红霉素
复方磺胺
复方磺胺
二级 头孢呋肟，头孢噻肟 氧氟沙星，四环素
第4章 细菌药物敏感 试验及其耐药表型检测
抗菌药物敏感试验
测定抗菌药物在体外对病原微生物有无 抑菌或杀菌作用的方法称为抗菌药物敏 感性试验（Antimicrobial Susceptibility Test），简称药敏试验（AST）。
药敏试验的意义
预测抗菌治疗的效果； 指导抗菌药物的临床应用； 发现或提示细菌耐药机制的存在，能帮助临床医生选择
MIC接近血、体液中药物的浓度，治疗 反应率低于敏感株
药物生理浓集部位有效 (尿-FQ) 加大用药剂量可能有效
缓冲区：防止操作的系统误差造成重大 结果的判定错误
药敏试验的方法学
半定量…纸片扩散法 (抑菌圈直径) MIC法：
稀释法(肉汤、琼脂) 自动化仪法 抗生素连续梯度法 (Etest ) 流式细胞仪
药敏试验折点的建立
1. MIC的分布 2. 药代动力学和药效学 定 MIC的折点 3. 临床疗效和细菌清除率 4. 抑菌圈直径的分布 ………定抑菌圈折点
统计学的线性回归 计算错误率：尽可能减少极重要误差 (假敏感率)
MIC的分布
20 15 10 5 0
0.008 0.032 0.125
0.5
v I
S
耐药
中介 敏感
D 1 d2 抑菌圈直径（mm)
抑菌圈直径与MIC的关系
MIC (ug/ml)
>256
12
3
5
256 128
2 2 ÄÍ Ò©
2
22 1
С Îó ²î
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64
32
1
1
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16
8
4
2
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敏感性分类(CLSI的定义)
敏感（Susceptible）
用常规用量治疗有效 常规用药时达到的平均血药浓度超过细菌的MIC 5倍
以上。
耐药（Resistance）
用常规用量治疗不能抑制细菌的生长 MIC高于药物在血、体液中可能达到的浓度
敏感性分类（2）
中介 (Intermediate)
2
8
32 128 512
药代动力学和药效学
药代动力学：药物吸收，分布，代谢，排泄
药效学：药物对机体的作用
时间依赖型（％T>MIC〕：β-内酰胺类，大环内酯类 浓度依赖型（AUC/MIC比率〕：AGS, FQ
这些参数可用于计算具有最佳药效的给药方案
MIC与抑菌圈直径的线性关系
Log2. MIC R
四环素，氯霉素
绿脓和非肠杆菌科 头孢他啶，庆大霉素
替卡西林，哌拉西林 阿米卡星 头孢吡肟，头孢哌酮 氨曲南 环丙沙星，亚胺培南 替卡西林/克拉维酸 妥布霉素，复方磺胺
头孢曲松 氯霉素，奈替米星
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常规测试并报告的药物分组 (2)
一级 二级
三级
葡萄球菌
肠球菌
苯唑西林，青霉素 青霉素，氨苄西林
纸片扩散法（Kirby-Bauer法）
将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼 脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中水分溶解后 不断向纸片周围扩散形成递减的梯度浓度，在纸片周 围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成无 菌生长的透明圈即为抑菌圈。
抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度， 并与该药对测试菌的MIC呈负相关关系。
纸片扩散法
1. 水解酪蛋白（MH）培养基，pH7.2～7.4，做成琼脂厚度 4mm，直径90mm的平板；
2. 挑取孵育16 ～ 24小时已分纯菌落，置于生理盐水管中，振 荡混匀后校正浓度至0.5麦氏标准。
纸片扩散法
3. 用无菌棉拭子蘸取菌液，在试管内壁旋转挤去多余菌液； 4. 然后在MH琼脂表面均匀涂布接种3次，每次旋转平板60度； 5. 最后沿平板内缘涂抹1周； 6. 平板在室温下干燥3～5min，用无菌镊子或商品化的纸片分配
规定常规测试报告的抗生素； 不同的药判定标准不同； 不同的菌判定标准也不同。
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常规测试并报告的药物分组
(1)
一级 二级
三级
肠杆菌科 氨苄西林 头孢唑林，庆大霉素 阿米卡星 氨苄西林/舒巴坦 阿莫西林/克拉维酸 头孢呋肟，头霉素 头孢噻肟，头孢曲松 环丙沙星，亚胺培南 替卡西林，哌拉西林 氨曲南，头孢他啶 卡那霉素，奈替米星 妥布霉素
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纸片扩散法－标准化
CLSI：美国实验室标准化委员会(Clinical and Laboratory Standards Institute)
每年修订更改
包括质控 新药的判定标准 特殊耐药性的检测
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CLSI的法规
规定纸片含量、接种浓度、培养基、平皿厚度、判 定标准、质控；