单克隆抗体和基因工程抗体的制备
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红细胞血型单克隆抗体及基因工程抗体的制备的开
题报告
1. 研究背景
血型是人体基因组中的重要表型,血型分类系统多种多样,主要有ABO血型系统和Rh血型系统。
血型抗原是血细胞表面的特定蛋白质和糖类成分,在输血和器官移植等医学实践中具有非常重要的意义。
因此,
对于血型抗原和抗体的研究和制备具有重要的意义。
目前,红细胞血型单克隆抗体及基因工程抗体成为了研究的热点,
这些抗体的制备可通过某些特异性标志物筛选肝炎病毒抗体、瘤细胞表
面分子抗体、药物代谢酶等。
由于这些抗体具有很高的特异性、敏感性
和稳定性,因此已被广泛用于诊断、治疗以及实验室研究等领域。
2. 研究目的
本研究旨在制备红细胞血型单克隆抗体及基因工程抗体,探究不同
制备方法以及对不同固定的红细胞抗原的适用性,为医学实践提供支持。
3. 研究方法
(1)红细胞血型单克隆抗体的制备
提取出兔、鼠或小鼠等动物的淋巴细胞后,与牛红细胞或猪红细胞
等固定红细胞进行融合,制备出单克隆抗体。
(2)基因工程抗体的制备
采用重组DNA技术合成特定的单克隆抗体,通过细胞处理和分离纯化,制备出基因工程抗体。
4. 研究进展和计划
目前,我们已经完成了红细胞血型单克隆抗体的制备,同时对基因
工程抗体的制备进行了初步实验。
下一步,我们将在不断实验和分析的
基础上,优化制备方法和条件,进一步探究两种抗体对不同血型固定红细胞的适用性差异,完善有关的研究成果。
临床医学检验技师初级(师)临床免疫学及检验(单克隆抗体与基因工程抗体制备技术)-试卷1(总分:60.00,做题时间:90分钟)一、 A1型题(总题数:17,分数:34.00)1.下列关于杂交瘤细胞特点的错误描述是(分数:2.00)A.具备了双亲细胞的特点B.分泌人源性单克隆抗体√C.分泌鼠源性单克隆抗体D.体外繁殖快速E.能分泌抗体解析:解析:杂交瘤细胞是两个不同特性的细胞融合成一个异型核细胞,这两种细胞分别是小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞,分泌鼠源性单克隆抗体。
2.杂交瘤技术中最常用的骨髓瘤细胞株是(分数:2.00)A.NS-1和SP2/0细胞株√B.NS-2株C.SP5株D.HPG-2E.HAILA解析:解析:杂交瘤技术中最常用的骨髓瘤细胞株是NS一1和SP2/0细胞株。
3.HAT培养基中三种关键成分为(分数:2.00)A.次黄嘌岭、氨基蝶呤、胸腺嘧啶核苷√B.黄嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶核苷C.氨基嘌岭、氨基蝶呤、胸腺嘧啶核苷D.腺嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶核苷E.鸟嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶核苷解析:解析:HAT系次黄嘌呤(hypoxantin)、氨基蝶呤 (aminopterin)和胸腺嘧啶脱氧核苷(thymidin)三种物质各英文首字之缀列,HAT培养基也就是指含有这三种物质的细胞培养基。
4.阳性杂交瘤细胞的克隆化培养方法不包括(分数:2.00)A.有限稀释法B.无限稀释法√C.显微操作法D.荧光激活细胞分选仪E.软琼脂平板法解析:解析:阳性杂交瘤细胞的克隆化(单个细胞培养)方法包括有限稀释法、显微操作法、荧光激活细胞分选仪、软琼脂平板法。
5.实验室最常用的阳性杂交瘤细胞的克隆化方法是(分数:2.00)A.无限稀释法B.有限稀释法√C.荧光激活细胞分选仪D.软琼脂平板法E.显微操作法解析:解析:阳性杂交瘤细胞的克隆化(单个细胞培养)方法包括有限稀释法、显微操作法、荧光激活细胞分选仪、软琼脂平板法。
第四章单克隆抗体与基因工程抗体的制备将单个B细胞分离出来加以增殖形成一个克隆群落,该B细胞克隆产生出针对单一表位、结构相同、功能均一的抗体,称为单克隆抗体。
第一节杂交瘤技术的基本原理杂交瘤技术的原理是利用聚乙二醇(PEG)为细胞融合剂,使免疫的小鼠脾细胞与具有体外长期繁殖能力的小鼠骨髓瘤细胞融为一体,在HAT选择性培养基的作用下,只让融合成功的杂交瘤细胞生长,经过反复的免疫学检测、筛选和单个细胞培养(克隆化),最终获得既能产生所需单克隆抗体,又能长期繁殖的杂交瘤细胞系。
将这种杂交瘤细胞扩大培养,接种于小鼠腹腔,在小鼠腹腔积液中即可得到高效价的单克隆抗体。
杂交瘤技术是一项周期长和高度连续性的实验技术,涉及大量的细胞培养、免疫化学等方法。
具体包括两种亲本细胞的选择与制备,细胞融合,杂交瘤细胞的筛选与克隆化等。
一、杂交瘤技术(一)小鼠骨髓瘤细胞1.细胞株稳定,易于传代培养。
2.细胞株自身不会产生免疫球蛋白或细胞因子。
3.该细胞是次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转化酶(HGPRT)或胸腺嘧啶激酶(TK)的缺陷株。
4.目前最常用的骨髓瘤细胞是NS-1和SP2/O细胞株。
(二)免疫脾细胞免疫时选用与骨髓瘤细胞同源的BALB/c小鼠,鼠龄8~12周,体重约20g,雌雄均可,但必须分笼。
免疫用抗原尽量提高其纯度和活性,免疫途径多用腹腔内或皮内多点注射法。
如为珍贵微量抗原,可用脾脏内直接注射法进行免疫。
(三)细胞融合细胞融合是产生杂交瘤细胞的中心环节。
PEG(聚乙二醇)有助于细胞融合。
(四)杂交瘤细胞的选择性培养将经过融合的细胞置于含有次黄嘌呤、甲氨蝶呤和胸腺嘧啶核苷的HAT培养基中。
1.脾细胞:在一般培养基中不能生长繁殖。
2.骨髓瘤细胞:采用的小鼠骨髓瘤细胞都是HGPRT或TK代谢缺陷型细胞,在HAT培养基中,不仅合成DNA的主要途径被氨基蝶呤阻断,又因缺乏HGPRT或TK而不能利用次黄嘌呤,虽有TK可利用胸腺嘧啶核苷,但终因缺乏嘌呤不能完整合成DNA,而使骨髓瘤细胞在HAT培养基中不能增殖而死亡。
基因工程抗体名词解释
基因工程抗体是由人工合成或修改的基因来产生的抗体,也称为重组抗体。
与传统的抗体不同,基因工程抗体不受限于动物来源,可以通过人工合成的方式来获得。
基因工程抗体的制备过程包括选择目标抗原、构建重组抗体基因、转染宿主细胞、高效表达和纯化等步骤。
因为基因工程抗体可以定制化地设计和制备,具有高度特异性和亲和力,因此在生物医学研究、临床诊断和治疗等方面具有广泛的应用前景。
常见的基因工程抗体包括单克隆抗体、人源化抗体、嵌合抗体和重组抗体等。
其中,单克隆抗体是指由单一克隆细胞产生的抗体,具有高度特异性和一致性;人源化抗体是将动物源的抗体人源化,避免了人体免疫系统对异种抗体的攻击;嵌合抗体是将两种或以上不同来源的抗体结合起来产生的新型抗体,具有更广泛的抗原覆盖范围和高亲和力;重组抗体则是根据目标抗原的结构和性质,设计并合成新的抗体基因来产生新型抗体,具有更高的特异性和亲和力。
基因工程抗体的发展将会在生物医学领域带来更多的应用和发展机会,同时也将推动基础研究和药物研发的进步。
生物制药的创新技术随着科技的不断进步和人们对健康的关注度增加,生物制药行业迎来了快速发展的时代。
生物制药是利用生物技术生产药物的一种方法,相比传统的化学合成药物,生物制药具有更高的效果和更少的副作用。
为了满足市场需求和提高药物疗效,生物制药领域不断涌现出创新技术。
本文将介绍几种当前应用广泛的生物制药创新技术。
一、基因工程技术基因工程技术是生物制药领域最重要的创新技术之一。
通过基因工程技术,科学家可以将外源基因导入到宿主细胞中,使其产生特定的蛋白质。
这种方法被广泛应用于生产重组蛋白药物,如重组人胰岛素、重组人生长激素等。
基因工程技术的应用不仅提高了药物的纯度和效果,还大大降低了生产成本,使得这些药物更加普及和可及。
二、单克隆抗体技术单克隆抗体技术是一种通过克隆和表达单一抗体的方法。
传统的抗体制备方法需要从动物体内提取抗体,而单克隆抗体技术可以通过基因工程技术直接合成特定的抗体。
这种技术不仅提高了抗体的纯度和效果,还可以根据需要定制特定的抗体,用于治疗各种疾病,如癌症、自身免疫性疾病等。
单克隆抗体技术的应用为生物制药领域带来了巨大的突破和发展。
三、基因编辑技术基因编辑技术是一种通过改变生物体的基因组来实现特定功能的方法。
最著名的基因编辑技术是CRISPR-Cas9系统,它可以精确地编辑生物体的基因序列。
在生物制药领域,基因编辑技术可以用于改变细胞的基因组,使其产生特定的蛋白质,用于生产药物。
此外,基因编辑技术还可以用于治疗遗传性疾病,如囊性纤维化、血友病等。
基因编辑技术的出现为生物制药领域带来了更多的可能性和机会。
四、细胞培养技术细胞培养技术是生物制药领域中常用的一种技术。
通过细胞培养技术,科学家可以将特定的细胞培养在体外,使其产生特定的蛋白质。
这种方法被广泛应用于生产重组蛋白药物和细胞疗法。
细胞培养技术的应用不仅提高了药物的产量和纯度,还可以避免使用动物体内提取药物,减少了对动物的伤害,符合人道主义的原则。
单克隆抗体制备流程首先,在单克隆抗体制备之前,需要选择一个适当的抗原。
抗原可以是蛋白质、多肽、糖类或其他小分子。
选取抗原时,需要考虑抗原的表达水平、抗原的免疫原性以及抗原的稳定性等因素。
接下来,选择一个合适的实验动物进行免疫。
常用的实验动物有兔子和小鼠。
在免疫之前,需要先给实验动物注射适量的佐剂,以增强免疫效果。
通常,实验动物会被多次免疫,每次免疫之间有一段时间的间隔。
在实验动物免疫一段时间后,可以进行细胞融合以产生混杂瘤细胞。
混杂瘤细胞通常是由B细胞和骨髓瘤细胞融合而成,对于小鼠骨髓瘤细胞,常用的有SP2/0和NS0细胞系。
融合的方法主要有两种:一种是将免疫细胞和骨髓瘤细胞混合,然后使用聚乙二醇(PEG)进行融合;另一种是使用电击脉冲进行细胞融合。
融合细胞会经过适当的培养条件进行筛选和扩增。
在融合细胞扩增过程中,会进行筛选以保证融合细胞是产生单克隆抗体的。
最常用的筛选方法是酶联免疫吸附测定(ELISA)。
抗原会被固定在微孔板上,然后将培养液中的细胞涂覆在孔中。
如果其中一孔中有抗体分泌,则抗原会被结合,并且可以通过添加辣根过氧化物酶(HRP)标记的二抗和基质来检测抗体的存在。
经过筛选和鉴定后,选择一个或多个产生单克隆抗体的细胞进行单克隆扩增。
单克隆扩增时,可以通过细胞有限稀释法以及酵母酶聚合酶链式反应(YAC-PCR)等方法进行。
最后,可以通过收集上述单克隆细胞的上清液或细胞提取物来得到单克隆抗体。
上清液或细胞提取物中的抗体可以通过纯化方法,如蛋白A/G 亲和层析或蛋白L亲和层析等,得到纯化的单克隆抗体。
综上所述,单克隆抗体的制备流程包括抗原选择、免疫动物、细胞融合、筛选和克隆等步骤。
通过这些步骤,可以获得单克隆抗体用于科学研究和临床应用。
简述单克隆抗体制备原理。
单克隆抗体是一种通过人工合成而获得的高度特异性的抗体,通常用于检测、诊断和治疗各种疾病。
单克隆抗体的制备原理主要涉及以下几个步骤:
1. 细胞培养:选择适当的细胞系,如B细胞或T细胞等,将其培养在适宜条件下。
2. 分子标记:使用一定的技术和分子标记技术,如荧光标记、放射性标记等,将目标分子或目标分子的基因编码序列引入细胞中。
3. 基因重组:利用基因工程技术,如基因重组载体、基因编辑工具等,将目标分子的基因与相应的单克隆抗体基因进行重组。
4. 表达和处理:将重组后的单克隆抗体基因导入细胞中,使其表达目标分子。
随后,对表达后的单克隆抗体进行筛选和纯化。
5. 扩增和制备:利用适当的扩增技术和设备,如PCR、冻存技术等,将筛选得到的单克隆抗体进行扩增,并制备成所需的浓度和规模。
单克隆抗体制备的原理是基于人工合成抗体的概念,通过分子标记和基因工程技术,将目标分子的基因与单克隆抗体基因进行重组,
使其在细胞中表达并产生高特异性的抗体。
随后,通过筛选、纯化和扩增等技术,获得所需的单克隆抗体。
单抗:过程:单克隆抗体技术(monoclonal antibody technique):一种免疫学技术,将产生抗体的单个B淋巴细胞同骨髓肿瘤细胞杂交,获得既能产生抗体,又能无限增殖的杂种细胞,并以此生产抗体。
是仅由一种类型的细胞制造出来的抗体,对应于多克隆抗体、多株抗体——由多种类型的细胞制造出来的一种抗体。
制备过程:1、免疫动物免疫动物是用目的抗原免疫小鼠,使小鼠产生致敏B淋巴细胞的过程。
一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠,按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。
抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官,刺激相应B淋巴细胞克隆,使其活化、增殖,并分化成为致敏B淋巴细胞。
(1)抗原制备。
(2) 免疫动物的选择。
(3)免疫程序的确定。
(免疫途径常用体内免疫法包括皮下注射、腹腔或静脉注射,也采用足垫、皮内、滴鼻或点眼。
最后一次加强免疫多采用腹腔或静脉注射,目前尤其推崇后者,因为可使抗原对脾细胞作用更迅速而充分。
在最后一次加强免疫后第3天取脾融合为好,许多实验室的结果表明,初次免疫和再次免疫应答反应中,取脾细胞与骨髓瘤细胞融合,特异性杂交瘤的形成高峰分别为第4天和第22天,在初次免疫应答时获得的杂交瘤主要分泌IgM抗体,再次免疫应答时获得的杂交瘤主要分泌IgG抗体。
)2、细胞融合采用二氧化碳气体处死小鼠,无菌操作取出脾脏,在平皿内挤压研磨,制备脾细胞悬液。
将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合,并加入促融合剂聚乙二醇。
在聚乙二醇作用下,各种淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合,形成杂交瘤细胞。
3、选择性培养选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞,一般采用HAT选择性培养基。
在HAT培养基中,未融合的骨髓瘤细胞因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶,不能利用补救途径合成DNA而死亡。
未融合的淋巴细胞虽具有次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶,但其本身不能在体外长期存活也逐渐死亡。
只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶,并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性,因此能在HAT培养基中存活和增殖。
制备单克隆抗体的原理
单克隆抗体是一种高度特异性的抗体,可以识别并结合到特定的抗原上。
制备
单克隆抗体的原理主要包括抗原免疫、细胞融合、筛选和鉴定等步骤。
首先,制备单克隆抗体的第一步是抗原免疫。
通常选择小鼠或兔子等动物作为
免疫动物,将目标抗原注射到动物体内,激发动物产生特异性抗体。
在免疫过程中,抗原会激发动物体内的B细胞产生抗体,其中包括对抗原特异性的B细胞。
接下来是细胞融合。
将免疫动物体内的B细胞与骨髓瘤细胞进行融合,形成杂交瘤细胞。
这些杂交瘤细胞具有B细胞产生抗体的能力,同时又具有骨髓瘤细胞
的无限增殖能力,从而可以长期稳定地产生单克隆抗体。
随后是筛选和鉴定。
通过细胞培养和克隆技术,筛选出产生特定单克隆抗体的
杂交瘤细胞,并将其进行扩增。
接着,利用ELISA、Western blot等方法对单克隆
抗体进行鉴定,确定其对目标抗原的特异性和亲和力。
最后是大规模生产。
经过筛选和鉴定的单克隆抗体细胞株可以进行大规模的培
养和生产,以满足科研和临床的需求。
总的来说,制备单克隆抗体的原理是通过抗原免疫、细胞融合、筛选和鉴定等
步骤,最终获得特异性的单克隆抗体。
这种单克隆抗体在生物医学领域具有广泛的应用前景,可以用于疾病诊断、药物研发、免疫治疗等方面,对于促进医学科研和临床应用具有重要意义。
中级临床医学检验技术临床免疫学及检验(单克隆抗体与基因工程抗体的制备、凝集反应)模拟试卷1(题后含答案及解析) 题型有:1. A1型题 2. B1型题1.制备单克隆抗体常选用小鼠的哪类细胞作为饲养细胞A.中性粒细胞B.K细胞C.肥大细胞D.成纤维细胞E.腹腔细胞正确答案:E解析:小鼠腹腔细胞含有巨噬细胞,除具有饲养作用外,还可清除死亡破碎细胞及微生物。
知识模块:单克隆抗体与基因工程抗体的制备2.下列有关单克隆抗体特点的叙述中错误的是A.特异性强B.灵敏度高C.高度的均一性D.对pH、温度及盐类浓度耐受性强E.可重复性正确答案:D解析:单克隆抗体纯度高,与抗原结合的特异性强,理化性状高度均一,有效抗体含量高,但抗原抗体反应仍受pH、温度及盐类浓度的影响。
知识模块:单克隆抗体与基因工程抗体的制备3.B细胞杂交瘤技术中细胞融合的选择培养基是A.HAT培养基B.次黄嘌呤培养基C.甲氨蝶呤培养基D.嘧啶核苷培养基E.胸腺嘧啶核苷培养基正确答案:A解析:细胞杂交瘤技术中细胞融合的选择培养基含有三种关键成分:次黄嘌呤(H)、氨基蝶呤(A)、胸腺嘧啶核苷(T),缩写为HAT培养基。
知识模块:单克隆抗体与基因工程抗体的制备4.多发性骨髓瘤细胞是B淋巴细胞杂交瘤细胞的理想细胞,其原因不包括下列哪项A.稳定和易培养B.自身无分泌功能C.改变细胞恶性变化D.融合度高E.HGPRT缺陷正确答案:C解析:多发性骨髓瘤是浆细胞异常增生的恶性肿瘤,细胞有恶性变化。
知识模块:单克隆抗体与基因工程抗体的制备5.关于单克隆抗体特点的错误叙述A.理化性状高度均一B.生物活性单一C.来源容易D.特异性强E.针对多种抗原决定簇正确答案:E解析:杂交瘤细胞产生的单克隆抗体是针对抗原分子上某一单个抗原决定簇的抗体,其特点是理化性状高度均一、生物活性单一、来源容易和特异性强。
知识模块:单克隆抗体与基因工程抗体的制备6.杂交瘤细胞含有A.两亲本细胞各一半染色体B.两亲本细胞全部染色体C.两个染色体D.融合特有基因信息E.亲代某些特性基因正确答案:B解析:杂交瘤细胞由两个细胞融合而成,含有两亲本细胞全部染色体,同时具有两种细胞的特性。