黄曲霉毒素检测法

２０１９．２０科学技术创新黄曲霉素的检测方法及预防措施陈靖文（四川大学华西公共卫生学院，四川成都610061）黄曲霉素所引起的污染事件频频出现，食品安全已成为当今社会上消费者们关心的热点问题，各类有关部门对食品安全及人体健康问题越发重视。

因此各国对食品及农产品内黄曲霉素含量进行限量设定。

在我国制定出了严格规范的食品中黄曲霉素含量限量标准（ＧＢ－２７６１－２０１１）。

１黄曲霉素的基本概述黄曲霉素（ａｆｌａｔｏｘｉｎ，ＡＦＴ）为毒性极强的剧毒物质，是一种由黄曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｆｌａｖｕｓ）、寄生曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｐａｒａｓｉｔｉｃｕｓ）和集峰曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｏｍｉｕｓ）通过聚酮方法产生的次生代谢产物。

已知种类包括：Ｂ１、Ｂ２、Ｇ１、Ｇ２、Ｇ２ａ、Ｍ１、Ｍ２、Ｐ１等十几种。

其中Ｂ１是毒性为最强，根据研究结果中实验数据显示黄曲霉素Ｂ１毒性为氰化钾毒性的１０倍，相当于砒霜毒性的６８倍，其致癌性是奶油黄的９００倍，二甲基亚硝酸铵的７５倍，苯并芘的４０００倍，并且在天然食物中最为常见。

黄曲霉毒素是一种毒性极强的剧毒物质，世界卫生组织（ＷＨＯ）划定为１类致癌物。

黄曲霉素含量标准在３０～５０ｍｇ／ｋｇ为低毒，而５０～１００ｍｇ／ｋｇ为中毒，１００～１０００ｍｇ／ｋｇ为高毒，１０００ｍｇ／ｋｇ以上为极毒。

２黄曲霉素的检测方法２．１薄层分析法（ＴＬＣ）薄层分析法，该方法是测黄曲霉毒素最为经典的方法，在早前的检测中最为常见———是我国黄曲霉素检测的国标方法之一，并且中外检测机构至今仍使用这种方法进行检测。

该方法原理为：在一定条件下，黄曲霉素可以被符合条件并适宜用量的萃取剂从各种不同试样中萃取出来，通过柱层析将被萃取分离出来的黄曲霉素进行净化，在薄板上展开从而进行分离并分析。

利用试样的荧光斑点颜色强弱程度与试样含量呈线性正相关，可与标准品中荧光斑点颜色强弱进行比较从而确定出试样中黄曲霉素的含量（可利用双向展开对组分复杂的试样进行分析），从而提高灵敏度。

黄曲霉的检测方法黄曲霉是一种常见的真菌，它能够在多种环境中生存并繁殖，包括食物、土壤和空气中。

黄曲霉产生的黄曲霉毒素对人体健康有一定的威胁，因此对黄曲霉的检测非常重要。

下面将介绍几种常用的黄曲霉检测方法。

1. 气相色谱法：气相色谱法是一种常用的检测黄曲霉毒素的方法。

该方法将样品中的黄曲霉毒素提取出来，然后使用气相色谱仪进行分析。

由于不同的黄曲霉毒素具有不同的化学性质，所以可以通过检测毒素的特定化合物来确定样品中是否存在黄曲霉毒素。

2. 高效液相色谱法：高效液相色谱法也是一种常用的检测黄曲霉毒素的方法。

该方法将样品中的黄曲霉毒素提取出来，然后使用高效液相色谱仪进行分析。

与气相色谱法相比，高效液相色谱法对样品的处理过程相对简单，分离效果较好。

3. 免疫学方法：免疫学方法是一种常用的检测黄曲霉的方法。

该方法使用特异性抗体与样品中的黄曲霉结合，然后通过标记物的信号来检测黄曲霉的存在。

常见的免疫学方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫荧光法。

免疫学方法具有操作简单、灵敏度高的特点，可以用于大规模的样品检测。

4. PCR法：PCR（聚合酶链式反应）是一种常用的检测黄曲霉的方法。

该方法利用黄曲霉的DNA进行扩增，并通过特定的引物和探针进行检测。

PCR法具有高灵敏度、高特异性和高快速性的特点，可以快速检测出样品中的黄曲霉。

5. 传统培养法：传统培养法是一种直接检测黄曲霉的方法。

该方法将样品培养在含有特定营养物质的培养基上，然后通过观察菌落形态、颜色和特点来确定是否存在黄曲霉。

尽管传统培养法操作相对简单，但其结果需要较长时间才能得到。

除了以上提到的方法，还有其他一些新兴的检测黄曲霉的方法，如纳米技术、蛋白质质谱法等。

这些方法在样品处理、快速性、灵敏度和特异性等方面都有所改进和突破，可以更好地用于黄曲霉的检测。

总之，对于黄曲霉的检测，可以选择适合的方法进行，根据需要和实际情况选择不同的方法。

不同的方法有其优缺点，需要根据实际应用需求进行选择。

一、目的规范实验室检验方法。

二、内容（一）试验准备1、标定荧光计。

（1）、将仪器后的电源开关打开。

（2）、按SELECTTEST键，直至显示出AflaTest，按ENTER。

（3）、荧光计显示：START CALBRATION…OPEN THE LIDINSERT RED VIAL打开仪器盖，将红色的真菌毒素标定管放入。

一定要确认标定管是否已放到了仪器的底部。

（4）、仪器显示：HIGHCAL 22PPB如果这个值正好是所选分析方法规定的设定值，请按ENTER键。

否则，从键盘上所规定的设定值，确认准确无误后，按ENTER键。

（5）、仪器显示：READING HIGH CAL…SA VING HIGH INENSTTYOPEN THE LIDINSERT GREEN VIAL打开仪器盖取出红色的标定管，插入绿色的真菌毒素标定管。

一定要确认标定管是否已充分插入仪器的底部。

（6）、仪器显示：LOW CAL 1.0PPB如果这个值正好是所选分析方法规定的设定值,请按ENTER键.否则,从键盘上所规定的设定值,确认准确无误后,按ENTER键。

（7）、仪器显示：READING LIW CAL…SA VING HIGH INTENSITJY 接着显示：OPEN THE LIDINSERT GREEN VIAL打开仪器盖取出绿色的标定管。

（8）、仪器显示：VICAM V1.3 READY按SELECT TEST键,仪器显示: AFLATEST, 按ENTER键。

（9）、仪器显示：START RUN TEST OPEN THE LID （10）、插入黄色的真菌毒素标定管，其读数应该在分析方法的测定范围内。

（11）、荧光屏计标定工作完毕，可经进行样品分析了。

荧光计每周需要标定一次。

如果需要重新标定，请按STOP键，再按OPIONS 键，直至仪器显示：CALIBRATE TEST然后按ENTER键，仪器显示：AFLATEST如果不是这样，按SELECT TEST键，直至仪器显示：AFLATEST，按ENTER键。

黄曲霉毒素检测方法有什么现如今，人们的生活水平提高了，黄曲霉毒素在我们日常的生活中非常的常见，它是一组化学构造相似的化合物，黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用，严重时可导致肝癌甚至死亡。

那么，黄曲霉毒素检测方法有什么？黄曲霉毒素的检测方法：1.生物鉴定法其特点是待检样品不需很纯，主要用于定性，共有10种:(1)抑菌试验;(2)对微生物遗传因子影响试验;(3)细菌发光试验;(4)荧光反应;(5)组织培养检测法;(6)鸡胚试验;(7)鸭胚试验;(8)鳟鱼试验;(9)植物试验;(10)饲喂实验动物试验。

生物鉴定法是利用AFT能影响微生物、水生动物、家禽等生物体的细胞代谢，来鉴定AFT的存在。

其方法专一性差，灵敏度低，一般只作为化学分析法的佐证。

2.化学分析法最常用的为薄层层析法(TLC)，适用于粮食及其制品、调味品等AFB 1 的检测，主要是半定量。

利用AFB 1 具有荧光性的特点，提取和浓缩样品中的AFB 1 ，用单向或双向展开法在薄层上分离后，在365nm紫外光照射下产生蓝紫色荧光，根据在薄层上显示荧光的最低检出量定量，其灵敏度为5μg/kg。

由于薄层层析法测定AFB 1 不是很专一，因此样品中其他荧光物质的干扰造成测定误差。

可以用以下方法进行确定:一是用多种溶剂系统展开，可将AFB 1 、G 1 及各种AFT类似物分开;二是采用层析斑点的化学试验，将样品提取物用甲酸亚硫酰氨或三氟醋酸处理，用衍生化的方法将AFB 1 与其类似物分开;三是层析斑点的物理试验，可根据紫外吸收光谱，红外吸收光谱和荧光屏光谱的差别，将非黄曲霉毒素和AFT分开。

3.仪器分析法高效液相色谱法(HPLC)是20世纪70年代初发展起来的一种以液体为流行相的新型色谱技术。

是分离分析各种AFT的好方法，如配以荧光检测器，则该法具有灵敏度高、分离能力强、特异性好、测定结果准确可靠等优点。

在国外己广泛地用于食品中AFT的测定。

黄曲霉毒素检测方法
一、黄曲霉毒素检测方法二、黄曲霉毒素的临床特征三、黄曲霉毒素中毒的急救措施
黄曲霉毒素检测方法1、生物鉴定法可检测黄曲霉素
其特点是待检样品不需很纯,主要用于定性,共有10种:抑菌试验;对微生物遗传因子影响试验;细菌发光试验;荧光反应;组织培养检测法;鸡胚试验;鸭胚试验;鳟鱼试验;植物试验;饲喂实验动物试验。

生物鉴定法是利用AFT能影响微生物、水生动物、家禽等生物体的细胞代谢,来鉴定AFT的存在。

其方法专一性差,灵敏度低,一般只作为化学分析法的佐证。

2、化学分析法可检测黄曲霉素
最常用的为薄层层析法(TLC),适用于粮食及其制品、调味品等AFB1的检测,主要是半定量。

利用AFB1具有荧光性的特点,提取和浓缩样品中的AFB1,用单向或双向展开法在薄层上分离后,在365nm紫外光照射下产生蓝紫色荧光,根据在薄层上显示荧光的最低检出量定量,其灵敏度为5μg/kg。

由于薄层层析法测定AFB1不是很专一,因此样品中其他荧光物质的干扰造成测定误差。

3、仪器分析法可检测黄曲霉素
高效液相色谱法(HPLC)是20世纪70年代初发展起来的一种以液体为流行相的新型色谱技术。

是分离分析各种AFT的好方法,如配以荧光检测器,则该法具有灵敏度高、分离能力强、特异性好、测定结果准确可靠等优点。

在国外己广泛地用于食品中AFT的测定。

但由于食物样品成分复杂,在进行液相色谱分离分析前,需对样品作彻底有效的净化处理。

常用的净化方法是柱色谱法,该法操作繁琐,且需使用大量有机溶剂。

流动相的梯度变化表（GBT 5009.23-2006 食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定）
标准方法检出限（GBT 23212-2008）
次氯酸钠溶液（消毒用）：
取100g漂白粉，加入500ml水，搅拌均匀。

另将80g工业用碳酸钠（Na2CO3·10H2O）溶于500ml温水中，再将两液混合、搅拌、澄清后过滤。

此滤液含次氯酸浓度约为25g/L。

若用漂粉精制备，则碳酸钠的量可以加倍。

所得溶液的浓度约为50g/L。

污染的玻璃仪器用10g/L次氯酸钠溶液浸泡半天或用50g/L次氯酸钠溶液浸泡片刻后，即可达到去毒效果。

（GBT 5009.22-2003 食品中黄曲霉毒素B1的测定）
AFT B1标准溶液配制
1 仪器校正，测定重铬酸钾溶液的摩尔消光系数，以求出使用仪器的校正因素f
2 标准溶液配制，配制AFT B1标准溶液，用紫外分光光度计测此溶液最大吸收峰的波长及该波长的吸光度值，计算AFT B1标准液浓度，后用苯-乙腈混合液调到标准液为10.0ug/ml，并用分光光度计核对浓度。

（GBT 5009.22-2003 食品中黄曲霉毒素B1的测定）。

黄曲霉毒素检测方法国标
黄曲霉毒素检测方法国标是指按照中国国家标准制定的黄曲霉毒素检测方法。

目前，中国国家标准中规定的黄曲霉毒素检测方法主要有两种：液相色谱-质谱联用法和酶联免疫吸附测定法。

这两种方法都是目前应用较广泛且效果较好的检测方法。

液相色谱-质谱联用法是一种高灵敏度、高选择性的方法，能够同时检测多种黄曲霉毒素，包括黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2等。

该方法通过液相色谱分离，再通过质谱联用技术进行鉴定和定量，具有高精确度和准确性。

酶联免疫吸附测定法是一种简便快速的检测方法，该方法通过将黄曲霉毒素与特异性抗体结合，然后通过酶标记的二抗或底物发生染色反应来检测黄曲霉毒素的存在。

该方法速度快、操作简便，适用于快速筛查和初步定量。

需要强调的是，具体的黄曲霉毒素检测方法国标可能会因地区和标准的变化而有所差异，建议使用时查阅当地的相关标准或咨询专业机构进行确定。

黄曲霉毒素检测方法
黄曲霉毒素是引起动物和人类食物中毒的常见真菌毒素之一。

为了确保食品的安全和质量，需要对食品样品中的黄曲霉毒素进行检测。

下面介绍几种常用的黄曲霉毒素检测方法。

1. 高效液相色谱法（HPLC）：HPLC是一种常用的分离、鉴定和测定食品中黄曲霉毒素的方法。

该方法使用高效液相色谱仪通过不同的分离柱，将样品中的黄曲霉毒素与其他组分分离开来，并根据其唯一的吸收特性进行检测和定量测定。

2. 气相色谱法（GC）：GC是一种基于样品中物质的挥发性的分离和检测方法，可以用于测定黄曲霉毒素B1和黄曲霉毒素B2。

该方法需要将样品进行预处理，如萃取、净化等，然后通过气相色谱仪进行分离和检测。

3. 免疫测定法：免疫测定法是一种基于抗原与抗体特异性结合的原理进行黄曲霉毒素检测的方法。

常见的免疫测定法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）和放射免疫测定法（RIA）。

这些方法操作简便、快速，可以实现对大量样品的高通量检测。

4. 质谱法：质谱法是一种可靠的黄曲霉毒素检测方法。

质谱法主要包括质量光谱（MS）和质谱联用技术（LC-MS/MS）。

这些方法通过样品中黄曲霉毒素的特征峰进行检测和定量，并具有高灵敏度和高选择性的优势。

以上是几种常用的黄曲霉毒素检测方法，每种方法都有其优缺点，选用合适的方法应根据样品特性、设备条件、经济性和检
测需求来决定。

为了确保食品的安全，建议将不同的检测方法结合使用，以提高检测的准确性和可靠性。

食品中黄曲霉毒素检测方法概述1. 引言1.1 食品中黄曲霉毒素检测方法概述黄曲霉毒素是一种常见的食品毒素，常常存在于谷物、豆类、坚果等食品中。

它是由黄曲霉菌产生的，对人体健康造成严重危害。

为了保障食品安全，必须对食品中的黄曲霉毒素进行检测。

目前，常见的黄曲霉毒素检测方法包括高效液相色谱检测法和酶联免疫吸附法。

高效液相色谱检测法是一种高灵敏度、高准确度的检测方法，适用于各类食品样品。

通过该方法可以快速、准确地检测出食品中的黄曲霉毒素含量。

食品中黄曲霉毒素的检测方法多样，可以根据实际情况选择适合的方法进行检测，以确保食品安全。

加强食品安全意识，持续改进检测方法也是非常重要的。

2. 正文2.1 黄曲霉毒素的概念黄曲霉毒素是由霉菌产生的一种有毒物质，在食品中存在可能会对人体健康造成危害。

黄曲霉毒素主要包括黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1和黄曲霉毒素G2四种类型。

这些毒素在食品加工、贮藏和运输过程中容易产生，常见于玉米、小麦、大米、杂粮、豆类、坚果等食品中。

黄曲霉毒素不仅在食品中出现，也会在饲料和环境中存在，对动物和人类健康都有潜在危害。

黄曲霉毒素的摄入可能导致急性中毒或长期积累，严重影响人体的健康。

急性中毒症状包括恶心、呕吐、腹泻、发热、头痛等，严重时甚至会导致死亡。

长期摄入则可能导致免疫功能下降、肝肾损伤、癌症等严重后果。

及时检测食品中的黄曲霉毒素含量对保障食品安全和人体健康非常重要。

为了有效检测食品中的黄曲霉毒素含量，科研人员开发了多种检测方法，其中包括高效液相色谱检测法和酶联免疫吸附法等。

通过这些先进的技术手段，可以快速准确地检测食品中的黄曲霉毒素，为食品安全提供有力保障。

2.2 黄曲霉毒素的危害黄曲霉毒素是一种由黄曲霉菌产生的毒素，对人体健康造成严重危害。

黄曲霉毒素对肝脏的损害是最为明显的，会导致肝细胞受损、肝功能异常甚至肝硬化等严重疾病。

黄曲霉毒素还会对免疫系统造成损害，降低机体的抵抗力，使人更容易感染疾病。

食品中黄曲霉毒素的测定
食品中黄曲霉毒素的测定方法主要有以下几种：
1. 同位素稀释液相色谱-串联质谱法（ID-LC-MS/MS法）：该方法是目前测定食品中黄曲霉毒素的主要方法之一，具有灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点。

该方法使用同位素稀释液对样品进行稀释，然后通过液相色谱-串联质谱法进行分离和检测。

2. 高效液相色谱-柱前衍生法（HPLC-FLD法）：该方法是一种传统的测定方法，具有操作简便、成本低等优点。

该方法使用高效液相色谱进行分离，然后通过柱前衍生法进行检测。

3. 气相色谱-质谱法（GC-MS法）：该方法也是一种常用的测定方法，具有灵敏度高、准确性高等优点。

该方法使用气相色谱进行分离，然后通过质谱法进行检测。

4. 酶联免疫吸附试验（ELISA）法：该方法是一种快速、简便、经济的测定方法，具有灵敏度高、特异性强、操作简单等优点。

该方法使用特异性抗体进行检测。

以上是常见的几种食品中黄曲霉毒素的测定方法，具体选择哪种方法需要根据实际情况进行考虑。

2351 黄曲霉毒素测定法第一法1 本法系用高效液相色谱法(通则 0512)测定药材、饮片及制剂中的黄曲霉毒素(以黄曲霉 毒素 B1、黄曲霉毒素 B2、黄曲霉毒素 G1 和黄曲霉毒素 G2 总量计)，除另有规定外，按下 列方法测定。

当测定结果不符合规定时，以第二法测定结果为准。

色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-水 (40∶18∶42)为流动相；采用柱后衍生法检测，（1）碘衍生法：衍生溶液为 0.05％的碘溶液 (取碘 0.5g，加入甲醇 100ml 使溶解，用水稀释至 1000ml 制成)，衍生化泵流速每分钟 0.3ml， 衍生化温度 70℃；（2）光化学衍生法：光化学衍生器（254nm）；以荧光检测器检测，激发 波长 λex=360nm(或 365nm)，发射波长 λem=450nm。

两个相邻色谱峰的分离度应大于 1.5。

混合对照品溶液的制备 精密量取黄曲霉毒素混合标准品(黄曲霉毒素 B1、黄曲霉毒素 B2、黄曲霉毒素 G1、黄曲霉毒素 G2 标示浓度分别为 1.0μg／ml、0.3μg／ml、1.0μg／ml、 0.3μg／m1)0.5ml，置 10ml 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为储备液。

精密量取储备液 1ml， 置 25ml 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。

供试品溶液的制备 取供试品粉末约 15g(过二号筛)，精密称定，加入氯化钠 3g，置于 均质瓶中，精密加入 70％甲醇溶液 75ml，高速搅拌 2 分钟(搅拌速度大于 11000 转／分钟)， 离心 5 分钟(离心速度 2500 转／分钟)，精密量取上清液 15ml，置 50ml 量瓶中，用水稀释至 刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，量取续滤液 20.0ml，通过免疫亲合柱，流速每分钟 3ml，用水 20ml 洗脱，洗脱液弃去，使空气进入柱子，将水挤出柱子，再用适量甲醇洗脱， 收集洗脱液，置 2ml 量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

黄曲霉毒素检测方法国标【原创实用版3篇】目录（篇1）1.黄曲霉毒素的危害性2.黄曲霉毒素的检测方法2.1 薄层分析法2.2 酶联免疫法2.3 液相色谱法2.4 生物鉴定法2.5 试剂盒法正文（篇1）黄曲霉毒素是一种致癌物质，长期接触可使人的抵抗力下降，急性中毒可引起恶心、呕吐，发烧、黄疸等肝炎症状，长期接触可引起致癌、致畸。

致癌的话主要导致消化道肿瘤，比如食道癌、胆管癌。

因此，对黄曲霉毒素的检测显得尤为重要。

目前，黄曲霉毒素的检测方法主要有以下几种：1.薄层分析法：此方法操作简单、费用低廉，是国内外用的最多的一种测量方法。

2.酶联免疫法：这是近年来研发出了一种新颖的测量方法。

3.液相色谱法：可准确分离黄曲霉素的各种毒素，检测准确度高。

4.生物鉴定法：其特点是待检样品不需很纯，主要用于定性，共有 10 种。

5.试剂盒法：现在检测粮食，饲料里面霉菌毒素主要就是试剂盒（ELISA) 法。

目录（篇2）1.黄曲霉毒素的危害性2.黄曲霉毒素的检测方法2.1 薄层分析法2.2 酶联免疫法2.3 液相色谱法2.4 生物鉴定法2.5 试剂盒法正文（篇2）黄曲霉毒素是一种致癌物质，长期接触可以使人的抵抗力下降，急性中毒可引起恶心、呕吐，发烧、黄疸等肝炎症状，长期接触可引起致癌、致畸。

致癌的话主要导致消化道肿瘤，比如食道癌、胆管癌。

因此，对黄曲霉毒素的检测显得尤为重要。

目前，黄曲霉毒素的检测方法主要有以下几种：1.薄层分析法：此方法操作简单、费用低廉，是国内外用的最多的一种测量方法。

2.酶联免疫法：这是近年来研发出了一种新颖的测量方法。

3.液相色谱法：可准确分离黄曲霉素的各种毒素，检测准确度高。

4.生物鉴定法：其特点是待检样品不需很纯，主要用于定性，共有 10 种。

5.试剂盒法：这是目前检测粮食，饲料里面霉菌毒素主要采用的方法。

目录（篇3）1.黄曲霉毒素的危害性2.黄曲霉毒素的检测方法2.1 薄层分析法2.2 酶联免疫法2.3 液相色谱法2.4 生物鉴定法2.5 试剂盒法3.检测黄曲霉毒素的重要性正文（篇3）黄曲霉毒素是一种致癌物质，长期接触可以使人的抵抗力下降，急性中毒可引起恶心、呕吐，发烧、黄疸等肝炎症状，长期接触可引起致癌、致畸。

黄曲霉快速检测方法
黄曲霉是一种常见的霉菌，能够产生毒素对人体健康造成危害。

为了快速检测黄曲霉，在实验室中可以采用以下方法：
1. PCR检测：PCR（聚合酶链反应）是一种快速、敏感的分子生物学技术，可以检测黄曲霉DNA。

首先，从样品中提取DNA，并使用引物将目标DNA扩增，然后通过凝胶电泳和荧光染料进行检测。

PCR检测能够快速确定黄曲霉是否存在，并且可以定量估计污染程度。

2. 免疫测定法：免疫测定法是利用抗体和抗原的特异性反应来检测和定量特定物质的方法。

通过使用特异性抗体，可以快速识别和测定黄曲霉。

免疫测定法常用的技术包括酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫层析试验（immunochromatography assay）等。

3. 现场检测法：现场检测法是利用便携式仪器和试纸对黄曲霉进行快速检测的方法。

这些方法通常简单易行，操作方便，可以在实地迅速确定是否存在黄曲霉。

一些常用的现场检测方法包括光纤光谱技术、纸基检测试纸和便携式PCR仪。

需要注意的是，以上方法仅能快速检测是否存在黄曲霉，但无法判断是否有毒素产生。

因此，对于确定食品是否安全，还需要结合毒素检测等方法进行综合评估。

黄曲霉毒素检测方法介绍黄曲霉毒素（AFT）是一类化学结构类似的化合物，均为二氢呋喃香豆素的衍生物。

黄曲霉毒素是主要由黄曲霉(aspergillus flavus) 寄生曲霉(a.parasiticus)产生的次生代谢产物，在湿热地区食品和饲料中出现黄曲霉毒素的机率最高。

B1是最危险的致癌物，经常在玉米，花生，棉花种子，一些干果中常能检测到。

它们在紫外线照射下能产生荧光，根据荧光颜色不同，将其分为B族和G族两大类及其衍生物。

AFT目前已发现20余种。

AFT主要污染粮油食品、动植物食品等；如花生、玉米，大米、小麦、豆类、坚果类、肉类、乳及乳制品、水产品等均有黄曲霉毒素污染。

其中以花生和玉米污染最严重。

家庭自制发酵食品也能检出黄曲霉毒素，尤其是高温高湿地区的粮油及制品种捡出率更高。

主要的几种检验检疫方法:1,薄层层析法薄层层析(Thin-Layer Chromatography,TLC)是在黄曲霉毒素研究方面应用最广的分离技术.自1990年,它被列为AOAC(Association of Official Agricultural Chemists)标准方法,该方法同时具有定性和定量分析黄曲霉毒素的功能.2,液相色谱法液相色谱(LiquidChromatography,LC)与薄层层析在许多方面具有相似性,二者互相补充.通常用TLC进行前期的条件设定,选择适宜的分离条件后,再用LC进行黄曲霉毒素的定量测定.3,免疫化学分析方法利用具有高度专一性的单克隆抗体或多克隆抗体设计的黄曲霉毒素的免疫分析方法,也是最常用的黄曲霉毒素检测方法.这类方法通常包括放射免疫分析方法(Radioimmunoassay,RIA),酶联免疫法(Enzyme-linked of Immunosorbent Assay,ELISA)和免疫层析法(Immunoaflinity Column Assay,ICA).它们均可以对黄曲霉毒素进行定量测定.(1) 免疫亲和柱-荧光分光光度法和免疫亲和术-HPLC法免疫亲和柱法和酶联免疫吸附法虽然都可达到速简便效果,但酶联免疫吸附法仅能检测单一毒素(如黄曲霉毒素B1)含量,而且易出现假阳性结果,难以控制.免疫亲和柱法(包括荧光光度法和HPLC法)却能达到既定量准确又快速简便的要求.免疫亲和柱的使用可以避免传统TLC和HPLC的缺点,同时免疫亲和柱与TLC和HPLC法结合可以大大提高工作效率,提高灵敏度和准确度.黄曲霉毒素免疫亲和柱-荧光光度计法是以单克隆免疫亲和柱为分离手段,用荧光计,紫外灯作为检测工具的快速分析方法.它克服了TLC和HPLC法在操作过程中使用剧毒的真菌毒素作为标定标准物和在样品预处理过程中使用多种有毒,异味的有机溶剂,毒害操作人员和污染环境的缺点.同时黄曲霉毒素免疫亲和柱-荧光光度计法分析速度快,一个样品只需10-15min,比传统方法快几个小时甚至几天时间;仪器设备轻便容易携带,自动化程度高,操作简单,直接读出测试结果,可以在小型实验或现场使用.可以进行黄曲霉毒素总量(B1B2G1G2)的测定,检测限可达到1ug/kg,达到黄曲霉毒素标准限量值以下测定范围为1-300ug/kg.黄曲霉毒素免疫亲和柱-高效液相色谱法比传统的HPLC法更加安全,可靠,灵敏度和准确度高.它采用单克隆抗体免疫技术,可以特效性地将黄曲霉毒素或其他真菌毒素分离出来,分离效率和回收率高.分析原理试样中的黄曲霉毒素用一定比例的甲醇/水提取液经过过滤,稀释后,用免疫亲和柱净化,以甲醇将亲和柱上的黄曲霉毒素淋洗下来,在淋洗液中加入溴溶液衍生,以提高测定灵敏度,然后用荧光分光光度计进行定量.也可以将甲醇-黄曲霉毒素淋洗液的一部分注入HPLC中,对黄曲霉毒素B1,B2,G1,B2分别进行定量分析.免疫亲和柱是用大剂量的黄曲霉毒素单克隆抗体固化在水不溶性的载体上,然后装柱而成.该方法的测定范围0-300ug/kg.(2) 酶联免疫吸附法:1996年,Nakane建立了辣根过氧化物酶标记抗体的测定技术.由于该方法简便,敏感,特异,可作为多种抗原或抗体的测定,20世纪70年代后期,该方法引入真菌毒素的检测中,下面介绍的是竞争性酶联免疫吸附间接法检测黄曲霉毒素B1.原理:将已知抗原吸附在固态载体表面,洗除末吸附抗原,加入一定量抗体与待测样品(含有抗原)提取液的混合液,竞争培养后,在固相载体表面形成抗原抗体复合物.洗除多余抗体成分,然后加入酶标记的抗球蛋白的第二抗体结合物,与吸附在固体表面的抗原抗体结合物相结合,再加入酶底物.在酶的催化作用下,底物发生降解反应,产生有色物质,通过酶标检测仪测出酶底物的降解量,从而推知被测样品中的抗原量.(3) 微柱筛选法可以用来半定量测定各种食品中黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2的总量.原理:样品提取液中的黄曲霉毒素被微柱管风硅镁型吸附层吸附后,在波长365nm紫外光灯下显示蓝紫色荧光环,其荧光强度与黄曲霉毒素在一定的光密度范围内成正比例关系.若硅镁型吸附剂层未出现蓝紫色荧光,则样品为阴性(方法灵敏度为5-10ug/kg).由于在微柱上不能分离黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2,所以测得结果为总的黄曲霉毒素含量.(4) 一步式黄曲霉毒素检测金标试纸法一步式黄曲霉毒素检测金标试纸法是利用单克隆抗体而设计的固相免疫分析法.由此产生的一步式黄曲霉毒素快速检测试纸可在5-10分钟完成对样品中黄曲霉毒素的定性测定.借助黄曲霉毒素标准样品,这种方法能估算黄曲霉毒素的含量,非常适用于现场测试和进行大量样品的初选.一步式黄曲霉毒素检测金标试纸法是利用单克隆抗体而设计的固相免疫分析法.由此产生的一步式黄曲霉毒素快速检测试纸可在5-10分钟完成对样品中黄曲霉毒素的定性测定.借助黄曲霉毒素标准样品,这种方法能估算黄曲霉毒素的含量,非常适用于现场测试和进行大量样品的初选.检测方法分析薄膜层析法和液相色谱法是目前国内绝大多数检测机构都在使用的方法,由于其检测周期长,程序复杂,所需试剂繁多等缺点已远远不能满足现代检测要求.随着现代科学技术的不断发展,特别是免疫学,生物化学,分子生物学的不断发展,人们已创建了不少快速,简便,特异,敏感,低耗且适用的黄曲霉毒素检测方法.而且以金标试纸为代表的这些方法已经被先进国家所广泛使用,引进和消化这些先进的方法是我们检测领域的当务之急.免疫亲和柱法优点很多,但由于检测费用过高,而无法普及.而一步式黄曲霉毒素检测金标试纸法似乎更适用于我国,值得推广.。

食品中黄曲霉毒素的检测方法，现状及发展方向1 食用油中黄曲霉毒素的分析检测方法目前检测黄曲霉毒素的方法主要有薄层色谱法 (TLC)、高效液相色谱法(HPLC)、以酶联免疫为基础的免疫分析、免疫亲和分析法如微孔板酶联免疫吸附分析法(EusA)以及生物传感器法等。

1．1薄层色谱法(TLC)TLC法是传统的检测AFB 最常用方法，是应用最早、最广的分离、分析技术，曾是我国测定食品及饲料中AFB．的国家标准方法之一，其原理是：样品经提取、浓缩、薄层分离后，在365 Bin波长的紫外光照射下，黄曲霉毒素B】、B2产生紫色荧光，G 、G2产生绿色荧光，然后根据其在薄层板上显示的荧光的最低检出量来定量。

其优点是：所用的试剂、设备简单，费用低廉，容易掌握，适用大量样品的分离、筛选，一般的实验室均可开展，属于定性和半定量的功能。

为了提高薄层层析法的精度，还建立薄层扫描等其他的方法来确定黄曲霉毒素，它是薄层层析法的仪器化，样品的处理和层析条件与薄层层析法相同，只是在标准品的设定和结果判定上有所不同。

如卢艳杰等介绍了一种简单、微型、低功率的光度检测器用于定量薄层板上的AFT，该装置简单、便宜可代替薄层扫描仪等其他测定AFT含量的设备，最低检测限可达1 rig，符合欧洲对AFT规定的限量。

卢艳杰等介绍了过压薄层色谱法(OPLC)结合光度计，成功地对多种食品中的黄曲霉毒素B】、B2、G】和G2 进行测定，同时该方法还适用于样品的提纯和分离，一次可对十个样品进行分析，做到快速、有效、低耗地定量食品中AFT[引。

该法的局限性与不足之处在于薄层色谱法检测AFT的操作步骤多，样品前处理烦琐，并且提取和净化效果不够理想，提取液中杂质较多，因而在展开时影响斑点的荧光度，导致灵敏度下降。

灵敏度低、重现差、操作烦琐、时间长且安全性差等缺点，已越来越不适用现代分析的要求。

1．2高效液相色谱法(HPLC)高效液相色谱法具有高效、快速、准确性好、灵敏度高、重现性好、检测限低、定量准确的特点，可同时分离多种黄曲霉毒素，操作简便，适于大批量样品的分析。

2351本法适用于药材、饮片及中药制剂中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、赭曲霉毒素A、呕吐毒素、玉米赤霉烯酮、展青霉素、伏马毒素B1、B2及T-2毒素的测定。

除另有规定外，按下列方法测定。

度大于11000转/分钟），离心5分钟（离心速度2500 4000转/分钟），精密量取上清液15ml，置50ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μｍ）滤过，量取续滤液20.0ml离心10分钟（离心速度4000转/分钟），精密量取上清液20ml，通过免疫亲合柱，流速每分钟3ml，用水20ml洗脱（必要时可以先用淋洗缓冲液10ml洗脱，再用水10ml洗脱），弃去洗脱液弃去，使空气进入柱子，将水挤出柱子，再用适量甲醇洗脱，收集洗脱液，置2ml量瓶中，并用加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.22μm）滤过，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取上述混合对照品溶液5μl、10μl、15μl、20μl、25μl，注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准以三重四极杆串联质谱仪检测；电喷雾离子源（ESI），采集模式为正离子模式；各化合物监测离子对和碰撞电压（CE）见下表。

黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2对照品的监测离子对、碰撞电压（CE）参考值编号中文名英文名母离子子离子CE（V）检出限（μg/kg）定量限（μg/kg）1 黄曲霉毒素G2Aflatoxin G2331.1 313.1 330.10.3 331.1 245.1 402 黄曲霉毒素G1Aflatoxin G1329.1 243.1 350.10.3 329.1 311.1 30315.1 259.1 35钠8.0g、氯化钾0.2g，加水溶解并稀释至1000ml。

（4）酶标抗原稀释液在（1）中加入8mg牛血清白蛋白，即得。

（5）洗涤工作液在（1）中加入0.5ml吐温-20，即得。

（6）底物缓冲液称取柠檬酸21.0g，加水溶解并稀释至1000ml，作为甲液；称取十二水合磷酸氢二钠28.4g，加水溶解并稀释至1000ml，作为乙液；量取甲液24.3ml，乙液25.7ml，加水稀释至100ml。

黄曲霉毒素分析方法——-免疫亲和净化柱/UVE法一、免疫亲和净化柱/UVE法简介：利用德国LCTech品牌AflaCLEAN 净化柱可以将黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2专一分离出来，然后用HPLC/FLD分别测定黄曲霉毒素 B1、B2、G1、G2。

二、免疫亲和净化柱/UVE法特点：专用AflaCLEAN 净化柱使得样品制备与提取简单快速，成本低灵敏—HPLC可至30ppt—200ppt(黄曲霉毒素B1)。

简便实用，衍生化没有衍生试剂消耗（通常柱后衍生均需要使用衍生试剂，分析成本高，操作麻烦，仪器故障率较高）回收率高三、免疫亲和净化柱/UVE法操作步骤简介：1、提取样品：研磨、称重50g样品；用甲醇/水（80/20 V/V）混合物将样品高速混匀 1 分钟。

2、过滤：将提取的样品滤膜过滤，然后再过0.4 μm滤膜。

3、吸附、淋洗：将滤液2 ml加到 8ml PBS 缓冲液（pH 7.2）后，通过AflaCLEAN 净化柱，流速不大于1 mL/min；用10ml水清洗亲合柱；用甲醇1ml 两次将黄曲霉毒素从亲合柱上淋洗下来，并收集于HPLC进样小瓶中。

4、测定：HPLC直接进样，在经过柱分离后，被UVE衍生化，被荧光检测器记录各种黄曲霉毒素的浓度。

四、UVE™和 HPLC参数UVE™波长：254 nmHPLC-柱： 150 x 4.6 mm; C-18洗提液: 水 / 乙腈 / 甲醇 (60 / 15 / 30 // v / v / v)流量：1.0 mL/min柱温： 30 °C进样体积： 20 – 100 μLλ-激发波长： 365 nmλ-发射波长： 440 nm五、主机配置德国LCTech公司 UVE™主机，配有1ml反应池，9v 紫外灯254nlUVE™主机黄曲霉素免疫亲和AflaCLEAN净化柱黄曲霉素 ELISA试剂盒以下为德国LCTech公司黄曲霉素相关产品订购信息：以下为德国LCTech公司黄曲霉素相关产品订购信息：。