模拟感染家蚕微粒子病的PCR分子诊断技术演示试验

模拟感染家蚕微粒子病的PCR分子诊断技术研究刘吉平;曹阳;Smith J.E.;徐兴耀【期刊名称】《中国农业科学》【年(卷),期】2004(037)012【摘要】家蚕微粒子病病原为桑蚕微孢子虫(Nosema bombycis Nageli, N.b).本文根据文献报道,选用了一对根据N.b孢子及其相近种属微孢子虫的SSU-rRNA保守区段设计的有效引物VIF/530R,从模拟感染不同浓度N.b孢子(3×101-7/ml)的蚕蛾、蚕卵的角度,较系统地研究了PCR诊断技术的可检测灵敏度和对模拟感染家蚕微粒子病的诊断效果,为PCR分子诊断家蚕微粒子病的实用化研究提供参考.在本实验的DNA制备方法和PCR反应条件下,分别对由不同浓度N.b纯孢子抽提的DNA模板和不同浓度N.b纯孢子(3×101～7·ml-1)分别与蚕卵、蚕蛾混合抽提的DNA模板进行PCR扩增检测.结果表明:(1)对N.b纯孢子DNA模板,PCR可检测灵敏度为3×104N.b·ml-1(弱检测信号可到3×102～3N.b·ml-1),对模拟染毒N.b 孢子的蚕蛾DNA模板,PCR可检测灵敏度为3×105N.b·ml-1,两者分别已超过或达到目前生产上用显微镜的检毒水平;(2)对模拟染毒N.b孢子的蚕卵DNA模板,VIF/530R引物不能有效地检出蚕卵中染毒的N.b孢子DNA信号,推测在蚕卵DNA抽提物里可能含有抑制PCR扩增的未明因素,而蚕蛾DNA抽提物里则无此抑制因素.【总页数】7页(P1925-1931)【作者】刘吉平;曹阳;Smith J.E.;徐兴耀【作者单位】华南农业大学蚕学分子生物学与生物技术实验室,广州,510642;华南农业大学蚕学分子生物学与生物技术实验室,广州,510642;Leeds大学生物学院,英国利兹市,LS2 9JT;华南农业大学蚕学分子生物学与生物技术实验室,广州,510642【正文语种】中文【中图分类】S8【相关文献】1.不同感染时期和感染量对家蚕微粒子病胚种传染率的影响 [J], 徐杰;陈灵方;林宝义;鲁兴萌2.家蚕微粒子病PCR快速检测技术研究及诊断试剂盒的研制 [J], 刘骏;钱科;沈中元3.家蚕微粒子病的PCR诊断技术研究 [J], 陈秀;黄可威;沈中元;王红林;黄君霆;庄敏;冯晓黎;陆长德4.模拟感染家蚕微粒子病的蚕卵、蚕蛾PCR检测的初步研究 [J], 刘吉平;曹阳;Smith J E;徐兴耀5.多引物PCR检测家蚕卵微粒子病的新方法 [J], 徐凤霞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

家蚕微孢子虫病检疫技术规范编制说明出入境检验检疫行业标准编制说明1 基本信息1.1 标准名称中文桑蚕微粒子病检疫技术规范英文Quarantine protocol for pebrine1.2 与国际标准和国外先进标准一致程度情况□等同□修改□非等效标准号 ??英文名称??中文名称??说明(适用于修改和非等效)1.3 任务来源批准文号国认科[ 2012 ] 36号计划编号 2012B0391.4 制(修)订情况■制订□修订替代的标准编号??1.5 起止时间2012年01月~ 2013年 12月1.6 主要起草单位浙江出入境检验检疫局1.7 主要起草人何永强、吴姗、曹琛福、鲁兴萌、黎昊雁、帅江冰、张晓峰、朱振江、戴云通、王素华、李晓军1.8 专业类别□管理;■动物检疫;□植物检疫;□食品检验;□卫生检疫;□化矿金;□机电;□轻工;□纺织;□包装与危化;□鉴定1.9 标准体系表代码2204.3.1741.10 调整情况无2 背景情况2.1 国内外现行法律法规要求,国际贸易、疫病疫情、质量安全等检验检疫业务需求情况桑蚕微粒子病(Pebrine)是由蚕微孢子虫(Nosema bombycis)引起的能致蚕业生产毁灭性破坏的疫病。

蚕微孢子虫属原生动物界微孢子虫门、微孢子虫目、微孢子虫属,呈椭圆形,大小约为 3~4μm×1.5~2μm,可全身性感染蚕,在蚕卵、幼虫、茧和蛾(成虫)四个虫态中均可寄生,能经蚕卵胚胎垂直传染和食下传染。

病原广泛存在于病蚕、病蛹、病蛾、蚕粪、蚕尿、肠液、蚕皮、蛹皮、鳞毛以及脱落物卵壳中。

该病最早于19世纪中叶发生于法国,法国、意大利等欧洲主要养蚕国家曾因该病的暴发而导致蚕丝业的毁灭。

在亚洲的日本、印度以及我国等均广泛流行,危害大,难以防治。

我国近几年每年因微粒子病而淘汰的各级原种约300万张之多,直接经济损失达数亿元之巨。

鉴于此,家蚕微粒子病是蚕病监控和防治的重点,在《中华人民共和国进境动物一、二类传染病、寄生虫病名录》中被列为二类传染病,也是目前进出境蚕唯一的检疫性疫病。

多引物PCR检测家蚕卵微粒子病的新方法
徐凤霞
【期刊名称】《广东蚕业》
【年(卷),期】2005(39)2
【摘要】利用几种PCR引物的混合物，评估多引物PCR是否可以实际应用于同时感染几种能导致家蚕微孢子病的微孢子虫的早期检测。

从感染了家蚕微粒子病原虫（BmNb）的蚕卵中抽提的基因组DNA，并以此作为DNA模板，用多引物PCR扩增这种特异的DNA序列。

此外，从感染了BmNb的家蚕中获得的基因组DNA作为DNA模板，也获得了相同的结果。

这些发现表明用本研究设计的多引物PCR对蚕卵微孢子病的检查具有实用价值。

【总页数】1页(P18-18)
【关键词】PCR引物;PCR检测;家蚕卵;微粒子病;基因组DNA;DNA模板;微孢子虫;家蚕微孢子;家蚕微粒子
【作者】徐凤霞
【作者单位】
【正文语种】中文
【中图分类】S512.1;S858.28
【相关文献】
1.建立一种 EGFR 突变检测的凸环引物荧光 PCR 新方法 [J], 黄铭珊;费政芳★;金霆
2.基于EB1基因的环介导等温扩增(LAMP)法检测感染家蚕微粒子病的蚕卵 [J], 刘吉平;程伟;晏育伟;魏建影;杨吉龙
3.多重PCR检测猪瘟病毒、猪细小病毒和猪伪狂犬病病毒的研究--猪瘟病毒、猪细小病毒和猪伪狂犬病病毒多重PCR引物设计 [J], 余丽芸;刘建柱;侯喜林;崔玉东;朴范泽
4.模拟感染家蚕微粒子病的蚕卵、蚕蛾PCR检测的初步研究 [J], 刘吉平;曹
阳;Smith J E;徐兴耀
5.多引物PCR法检测蚕卵的微粒子病的新方法 [J], 冯真珍（译）
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家蚕微孢子虫原位杂交诊断技术研究
韦亚东;张国政;陆长德
【期刊名称】《蚕业科学》
【年(卷),期】2005(31)1
【摘要】根据家蚕微孢子虫rRNA基因高度保守的特点,设计合成了1对PCR引物,从家蚕微孢子虫基因组DNA上扩增出1个12kb片段,用同位素标记后作为检测家蚕微孢子虫的特异性探针。

采用原位杂交的方法,对家蚕卵及感染家蚕微孢子虫4、6、10d的幼虫进行原位杂交检测。

实验结果表明,该方法可以从家蚕单粒卵内检测到296粒孢子,对感染家蚕微孢子虫4、6、10d的幼虫均有阳性杂交信号出现。

【总页数】5页(P64-68)
【关键词】家蚕微孢子虫;家蚕卵;家蚕幼虫;原位杂交;诊断
【作者】韦亚东;张国政;陆长德
【作者单位】中国农业科学院蚕业研究所;中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所
【正文语种】中文
【中图分类】S884.21
【相关文献】
1.家蚕微孢子虫诊断方法研究进展 [J], 曹琛福;林彦星;吕建强;花群义
2.我国家蚕微孢子虫病检测与防治新技术研究与应用进展 [J], 张建平;张霄;张金亮;
宣瑜;林本青;黄玲珑;符明星;韩锦雄;赵博光
3.家蚕微孢子虫诊断方法研究进展 [J], 芦琨;党晓群;潘国庆;周泽扬
4.家蚕微孢子虫诊断新技术的研究 [J], 邱宝利[1];徐兴耀[2];卢铿明[3];周鹏[4]
5.单抗免疫金银染色法诊断家蚕微孢子虫的研究 [J], 刘吉平;卢铿明;徐兴耀;严海峰;宁波
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“家蚕微粒子病新病原鉴定和理化防控新技术研发与应用”获
神农中华农业科技奖二等奖
廖森泰
【期刊名称】《蚕学通讯》
【年(卷),期】2022(42)1
【摘要】由国家蚕桑产业技术体系蚕蛹加工岗位科学家廖森泰研究员主持完成的科研成果“家蚕微粒子病新病原鉴定和理化防控新技术研发与应用”获2020-2021年度神农中华农业科技奖二等奖。

该成果针对蚕业生产上家蚕微粒子病病原来源复杂、污染严重、防治难度增大、治疗手段缺乏等问题,取得了多项理论和技术突破:率先研发出国内唯一获兽药生产批文的家蚕微粒子病治疗药物防微灵,创制了阻断病原垂直传播的蚕种高温处理新技术.
【总页数】2页(P60-61)
【关键词】家蚕微粒子病;病原鉴定;蚕业生产;兽药生产;防治难度;垂直传播;产业技术体系;森泰
【作者】廖森泰
【作者单位】国家蚕桑产业技术体系蚕蛹加工岗位
【正文语种】中文
【中图分类】S85
【相关文献】
1.“青藏高原青稞与牧草害虫绿色防控技术研发及应用”成果获国家科技进步二等奖
2.“线虫生防菌淡紫拟青霉的研究与应用”成果获第二届神农福建农业科技奖二等奖
3.葫芦岛市家蚕微粒子病防控技术体系构建与应用
4."家蚕微粒子病新病原鉴评和理化防控新技术研发与应用"通过成果评价
5.“耐热Q优优质杂交水稻品种培育与应用”获2009年度神农中华农业科技奖
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应用PCR技术诊断家蚕核型多角体病毒病
涂纳新;张志芳;郭锡杰;吴祥甫
【期刊名称】《蚕业科学》
【年(卷),期】1994(20)2
【摘要】应用ＰＣＲ技术诊断家蚕核型多角体病毒病涂纳新，张志芳，郭锡杰，吴祥甫（中国科学院上海昆虫所）（中国农业科学院蚕研所）（中国科学院上海生化所）由家蚕核型多角体病毒（ＢｍＮＰＶ）感染引起的家蚕核型多角体病毒病（又称血液型脓病），是目前危害蚕业生产的主要病...
【总页数】2页(P124-125)
【关键词】PCR;家蚕;核型多角体病;病毒
【作者】涂纳新;张志芳;郭锡杰;吴祥甫
【作者单位】中国科学院上海昆虫所,中国农业科学院蚕研所,中国科学院上海生化所
【正文语种】中文
【中图分类】S884.5
【相关文献】
1.耐家蚕核型多角体病毒病蚕品种华康2号试养简报 [J], 李伦乾;邱茂慈;马迪娟
2.家蚕抗核型多角体病毒病研究进展 [J], 邢东旭
3.浅谈亚热带地区家蚕核型多角体病毒病的防治方法 [J], 罗平
4.家蚕抗核型多角体病毒病新品种对BmNPV抗性的鉴定 [J], 钱荷英;李刚;赵国栋;
刘明珠;孙平江;徐安英
5.养蚕环境泥土中家蚕核型多角体病毒的PCR检测技术研究 [J], 唐芬芬;张永红;李俊;邵榆岚;钟健;杨大平;白兴荣
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多重PCR快速检测四种蚕微粒子病原体
汪琳
【期刊名称】《检验检疫学刊》
【年(卷),期】2005(015)006
【摘要】@@ 1 前言rn蚕微粒子病(pebrine disease of chinese silkworm,PDS)又称为锈病、斑病、微孢子病等,是由原生动物孢子虫纲的微孢子虫(microsporidia)寄生引起的一类蚕的传染性原虫病.普遍发生的家蚕微粒子病的病原是属原生动物门,孢子虫纲,微孢子虫目,微孢子虫科,微孢子虫属:蚕微孢子虫(Nosema bombycis naegeli).微粒子病的第一次流行是1845年发生于法国,后来传遍意大利、西班牙、叙利亚及罗马尼亚.
【总页数】2页(P34-35)
【作者】汪琳
【作者单位】北京出入境检验检疫局,北京,100026
【正文语种】中文
【中图分类】S4
【相关文献】
1.单管多重PCR技术快速检测四种性传播疾病的病原菌 [J], 唐文志;周玉球;张永良;刘伟;蔡桂丰;戴小波;谭星蓉
2.多重荧光RT-PCR快速检测手足口病病原体的结果分析 [J], 沈伟锋;邵平扬;殷新光;邹洪兴;吕青山;杨清萍
3.实验动物四种病原体多重PCR方法的建立与应用 [J], 祝岩波;徐增年;魏世锦;郑
龙;尤红煜;孟钰榕;刘福英;梁晓亮;王俊霞
4.家蚕微粒子病PCR快速检测技术研究及诊断试剂盒的研制 [J], 刘骏;钱科;沈中元
5.多重PCR快速检测奶牛乳房炎3种主要病原体 [J], 谢志勤;谢芝勋;唐小飞;刘加波;庞耀珊;邓显文;朱贤龙
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应用单克隆抗体致敏胶乳进行家蚕微粒子病的诊断
三毛明人;陆有华
【期刊名称】《国外农学：蚕业》
【年(卷),期】1990(000)004
【摘要】在母蛾中检出的微孢子虫类的孢子,仅仅是根据其形状是不容易识别的,而且近年来又有形状类似但病原性不同的微孢子虫的报道,因此在母蛾检查现场急切地期待着开发并应用新的孢子判别技术。

【总页数】3页(P26-27,40)
【作者】三毛明人;陆有华
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】S884.21
【相关文献】
1.家蚕微粒子病化学疗法的研究：“原虫净”对家蚕微粒子病的治疗效果与预防效果 [J], 王裕兴;孙景晨
2.家蚕微粒子病PCR快速检测技术研究及诊断试剂盒的研制 [J], 刘骏;钱科;沈中元
3.广西现行生产应用的家蚕一代杂交种亲本品种对家蚕微粒子病抗性的研究 [J], 李标;王霞;潘志新;黄旭华;汤庆坤;蒋满贵;黄深惠;唐亮;罗梅兰;夏青;黄扬玉
4.应用炭素凝集反应进行家蚕原种补正检查的研究Ⅱ、——检出蛾区各发育阶段微粒子病发生规律调查 [J], 陈祖佩;潘敏慧;冯丽春;祝仁英;徐冰
5.抗家蚕浓核症病毒单克隆抗体的制备及其在诊断上的应用 [J], 陈建国;滕俊琳;胡萃;马可
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