下载文档原格式
一、实验目的本研究旨在通过实验方法提取和鉴定灵芝中的多糖成分，探究灵芝多糖的提取工艺，并对提取得到的灵芝多糖进行初步的生物活性分析。
二、实验材料与仪器1. 实验材料：- 灵芝子实体（赤芝或紫芝）- 乙醇、水、硫酸、蒽酮等化学试剂- 蒸馏水、无水乙醇、丙酮等溶剂- 蛋白酶、DNase等酶类- 小鼠、细胞等实验动物和细胞系2. 实验仪器：- 电子天平- 超声波清洗器- 烘箱- 离心机- 恒温水浴锅- 分光光度计- 高效液相色谱仪- 荧光显微镜等三、实验方法1. 灵芝多糖的提取：- 将灵芝子实体洗净、晾干，粉碎成粉末。
- 采用乙醇提取法，将灵芝粉末与95%乙醇按一定比例混合，在超声波清洗器中提取2小时。
- 将提取液过滤，滤液在烘箱中浓缩至一定浓度。
- 将浓缩液用无水乙醇沉淀，离心分离，收集沉淀物。
2. 灵芝多糖的鉴定：- 采用硫酸-蒽酮法对提取得到的沉淀物进行含量测定。
- 采用高效液相色谱法对提取得到的灵芝多糖进行结构分析。
3. 灵芝多糖的生物活性分析：- 采用小鼠腹腔巨细胞吞噬实验，检测灵芝多糖的免疫调节活性。
- 采用细胞实验，检测灵芝多糖对肿瘤细胞的抑制作用。
四、实验结果1. 灵芝多糖的提取：- 采用乙醇提取法，从灵芝子实体中提取得到多糖含量为10%左右。
2. 灵芝多糖的鉴定：- 硫酸-蒽酮法检测结果显示，提取得到的灵芝多糖含量较高。
- 高效液相色谱法分析结果显示，提取得到的灵芝多糖主要由葡萄糖、阿拉伯糖、木糖、岩藻糖、鼠李糖、半乳糖等单糖组成。
3. 灵芝多糖的生物活性分析：- 小鼠腹腔巨细胞吞噬实验结果显示，灵芝多糖能够显著提高小鼠腹腔巨细胞的吞噬功能。
- 细胞实验结果显示，灵芝多糖对肿瘤细胞具有抑制作用。
五、实验讨论1. 灵芝多糖的提取工艺：- 本实验采用乙醇提取法，结果表明该方法能够有效地提取灵芝中的多糖成分。
- 在实验过程中，提取溶剂的浓度、提取时间、料液比等因素对提取率有显著影响，需要进一步优化。
灵芝粗多糖的提取工艺
灵芝多糖的提取工艺主要包括以下几个步骤：
1. 材料准备：选择新鲜的灵芝或者灵芝干燥品作为原料，将其进行切碎或研磨，以增加提取效果。
2. 提取溶剂的选择：常用的提取溶剂有水、乙醇、甲醇等。
具体选择溶剂需要根据灵芝多糖的性质和应用需求来确定。
3. 提取方法：常用的提取方法有水煮提取法、连续提取法、酸提取法、超声波提取法等。
不同的提取方法对灵芝多糖的提取效果有所差异。
4. 温度和时间控制：提取温度和时间对灵芝多糖的提取效果也有影响。
一般来说，较高的温度和较长的提取时间可提高灵芝多糖的提取率，但同时也可能损失一部分活性成分。
5. 过滤和浓缩：将提取好的液体进行过滤去杂质，然后使用浓缩设备，如旋转蒸发器、真空浓缩器等，将溶剂去除或浓缩。
6. 干燥和粉碎：将浓缩后的灵芝多糖进行干燥，使其转化为粉末或颗粒状。
7. 质量控制：对提取得到的灵芝多糖进行质量检测，包括测定灵芝多糖的含量、
分子量、结构等。
需要注意的是，提取灵芝多糖的工艺可以根据具体需要进行调整和改进。
不同的提取工艺可能会有不同的影响，因此在实际操作过程中，需要根据实际情况来选择适合的提取工艺。
灵芝多糖的研究摘要:灵芝多糖是灵芝中的主要有效成分。
本研究对灵芝多糖的分离和纯化方法作了阐述，对其化学结构作了初步分析，并且对工业发酵方法生产的三种灵芝菌粉与相应的野生或栽培的灵芝子实体进行了灵芝多糖含量方面的比较从而说明，利用现代发酵技术生产灵芝菌粉将很有希望成为以后生产灵芝的一种主要方法。
关键词：灵芝多糖;发酵灵芝菌粉;野生灵芝;栽培灵芝引言灵芝的概述灵芝隶属于真菌界，担子菌纲，无褶菌目，猴椅菌科，万年茸(灵芝)属。
学名为Ganoderma fucldlum(Fr.)Karst。
它是观赏、医药兼用的菌类。
由于整个菇体木化，可长久保存不腐败，故有”万年菌”之称。
1.灵芝的保健作用灵芝是我国传统的扶正固本，滋补强壮的中药，历代医书均将之列为中药上品。
早在2千多年前的春秋战国时期《列子，汤问》列御寇中云“朽壤之一，有菌之者”，并总结当时利于灵芝治病保健的经验：“煮百沸其味清芳，饮之明目，脑清，心静，肾坚，其宝物也”。
[1]最早的医学著作《神农草经》把灵芝列为上品，谓其“久味苦平，主治中结，益心气，补中，增智慧，不忘，久服轻身不老”。
李时珍的《本草纲目》中对灵芝药性和功效作了详尽的记述：赤芝，苦平无毒，主治中结，益心气，补中，增智慧，不忘；紫芝，甘温无毒，好颜色，治虚痨，治痔。
[2]现代药理和临床研究证明，灵芝中迄今已分离到150余种化合物，但多数药理活性与灵芝多糖有关。
活性多糖是一种具有某些特殊生理功能的多糖类高分子化合物，广泛存在于植物，动物和微生物组织中。
近年来，多糖结构与功能的关系以及多糖复合物疫苗等研究在国际上受到了较多关注。
灵芝多糖主要以下生理功能：（1）调节免疫功能（2）抗肿瘤作用（3）促进体内核酸与蛋白质的代谢（4）抗氧自由基作用（5）灵芝多糖有镇定作用，强心作用和提高实验动物耐受常压缺氧的能力等其他功能2.实验的材料和方法2.1材料泰山赤芝T-1，韩国灵芝K-1，日本灵芝J-1.三种灵芝菌种均为山东莱芜农科所保存品种。
灵芝多糖提取工艺1、灵芝多糖简介灵芝多糖是一种从灵芝孢子粉或灵芝中提取的物质。
不溶于高浓度的酒精 , 微溶于低浓度的酒精及冷水 , 在热水中能全部溶解。
目前已分离到的有200多种，其中大部分为β–葡聚糖，少数为α–葡聚糖，多糖链由三股单糖链构成，是一种螺旋状立体构形物，其立体构形和DNA、RNA相似，螺旋层之间主要以氢键固定，分子量从数百到数十万，除一小部分小分子多糖外，大多不溶于高浓度酒精，在热水中溶解，大多存在于灵芝细胞内壁。
灵芝多糖都存在于灵芝的细胞壁内壁。
灵芝多糖中除含有葡萄糖外 , 大多还含有阿拉伯糖、木糖、半乳糖、岩藻糖、甘露糖、鼠李糖等单糖 , 但含量较少。
单糖间糖苷键连接有1,3、 1,4 和 1, 6 数种。
大多为β型结构 , 少数为α- 型结构。
α-型多糖没有药理活性 ( 药效 ) 。
多数多糖链有分枝 , 部分多糖链含有小分子肤链。
多糖链分枝密度高或含有肤链的其药理活性也高。
灵芝多糖在水溶液中多糖链一般由三股糖链组成 , 在 o. 1 摩 / 升氢氧化纳溶液中时多糖链的三股糖链离解为单股单糖链。
多糖的药理活性与单糖间糖苷键的结合形式有关。
单糖间以β- 1 , 3 、 1, 6 或β-1,4 、 1, 6-糖苷键连接是有效的即具有药理活性 , 而纯β_-1 ,4- 糖背键连接的则没有药理活性。
此外 , 多糖的药理活性还与其立体构形有关 , 若螺旋形立体结构被破坏 , 其活性则大大下降。
淀粉、纤维素、糊精也是多糖 , 但其构形与灵芝多糖 ( 或其他真菌多糖 ) 不同。
淀粉、纤维素等多糖没有螺旋形立体结构 , 单糖间的连接全是β- 1,4-连接。
纤维素是β-型多糖 , 淀粉、糊精是α-型多糖。
由于其构形不同 , 所以淀粉、糊精、纤维素都没有药理活性。
灵芝多糖是灵芝的最有效成分之一 ,已分离到的灵芝多糖有 200 多种 , 其中有数十种的结构已被搞清 , 分子量已被测定。
现知灵芝多糖有广泛的药理活性，能提高机体免疫力，提高机体耐缺氧能力，消除自由基，抑制肿瘤、抗辐射，提高肝脏、骨髓、血液合成DNA、RNA、蛋白质能力，延长寿命，灵芝多糖还具有刺激宿主非特异性抗性、免疫特异反应以及抑制移植肿瘤生理活性的特性。
灵芝多糖研究实验报告灵芝多糖研究实验报告实验目的：1. 测定灵芝多糖的含量；2. 研究灵芝多糖对人体免疫功能的影响。
实验材料：1. 灵芝提取物；2. 高效液相色谱仪；3. 免疫功能检测试剂盒；4. 实验动物，如小鼠。
实验步骤：1. 提取灵芝多糖：取一定量的灵芝样品，加入适量的水，用超声波浸泡2小时，过滤获得灵芝提取液；2. 测定灵芝多糖含量：用高效液相色谱仪测定灵芝提取液中多糖的含量；3. 灵芝多糖对人体免疫功能的影响：将实验动物分为实验组和对照组，实验组给予灵芝多糖，对照组不给予。
观察两组动物的免疫功能指标，如白细胞计数、淋巴细胞活性等。
实验结果：1. 测定灵芝多糖含量：灵芝提取液中多糖的含量为X g/L（样品浓度）。
2. 灵芝多糖对人体免疫功能的影响：实验组动物的白细胞计数为X（单位），对照组动物的白细胞计数为X（单位）。
实验组动物的淋巴细胞活性为X（单位），对照组动物的淋巴细胞活性为X（单位）。
结论：1. 灵芝中含有一定量的多糖，通过高效液相色谱仪可以测定其含量；2. 灵芝多糖可以提高人体免疫功能，表现为增加白细胞计数和提高淋巴细胞活性。
讨论：本实验结果表明灵芝多糖对人体免疫功能具有一定的影响，但还需要进一步研究来确定具体的机制和效应。
此外，本实验只使用了动物作为实验对象，将来还可以考虑人体试验的进行，以进一步验证实验结果。
此外，对于灵芝样品的提取方法，还可以考虑使用其他技术来进行提取，以提高多糖的得率和提取效果。
感想：通过本次实验，我对灵芝多糖的研究有了更深入的了解。
灵芝多糖作为一种天然产物，具有重要的药用价值。
通过研究其免疫功能，可以为人类的免疫调节和疾病治疗提供有益的启示。
希望未来能有更多的研究报道，以推动灵芝多糖的应用和发展。
灵芝多糖提取工艺的优化作者：周吴萍杜文佳来源：《湖北农业科学》2013年第15期摘要：以灵芝为原料提取多糖，采用蒽酮-硫酸法测定提取液中的多糖含量，设计单因素试验考察提取方法和提取溶剂组合对多糖提取率的影响，并采用正交设计优化提取工艺。
结果表明，采用回流提取法，先后以蒸馏水和体积分数55%的乙醇溶液作提取溶剂，每次提取时浸润时间0.5 h、料液比（m灵芝∶V提取溶剂）为1∶20（g/mL）、提取时间1.5 h，所得灵芝多糖的提取率较高，为1.75%。
关键词：灵芝多糖；提取工艺；优化中图分类号：R284.2；S567.3+1 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）15-3632-03灵芝始载于《神农本草经》，在我国有悠久的药用历史，在《中国药典》中收录作为药材灵芝来源的是赤芝[Ganoderma lucidum （Leys.exFr.）Karst]或紫芝[G. japonicum （Fr.）Hoyd]的干燥子实体[1]。
灵芝分布于我国许多省区，生于栎树及其他阔叶树木桩上，多为野生，许多省区已有人工栽培。
传统中医视灵芝为名贵滋补类药材，有扶正固本、延年益寿之功效。
现代研究表明，灵芝具有抗肿瘤、抗衰老、调节免疫、降血糖、保护肝脏、保护心脏、改善血液循环、抗炎镇痛、促进睡眠等作用[2-6]。
灵芝的药用成分非常丰富，已分离得到的有效成分有数十种[5，6]，其中灵芝多糖是灵芝中主要的生理活性物质之一，具有抗肿瘤、提高机体免疫力、消除自由基、抗血栓、降血糖等作用，被认为是灵芝扶正固本的重要有效成分[7-10]。
近年来，灵芝已成为人们日常较为关注的功能保健品，灵芝多糖的提取测定和药用研究也受到重视[11-13]。
本研究以常见的赤芝为原料，以灵芝多糖提取率为指标，对灵芝多糖的提取方法和条件进行研究，旨在寻找高效低耗的灵芝多糖提取技术，为工业化提取制备灵芝多糖制剂提供参考。
1 材料与方法1.1 材料与仪器1.1.1 材料灵芝购于广西壮族自治区玉林市大型药材市场，经鉴定为赤芝，用前粉碎，60 ℃下干燥备用。
灵芝多糖含量检测条件及其提取工艺的优化
王新
【期刊名称】《安徽农业科学》
【年(卷),期】2007(035)014
【摘要】优化了苯酚-硫酸法测定灵芝多糖含量的显色条件,并且通过单因素和正交试验确定了灵芝多糖的最佳提取工艺条件.结果表明:苯酚-硫酸法测定灵芝多糖含量的条件为最大吸收波长490 nm,显色时间20min,显色温度100℃;灵芝多糖的最佳提取工艺条件为提取温度80℃,提取时间2.5 h,液料比50ml/g,在此条件下灵芝多糖的提取率为2.58%.
【总页数】3页(P4281-4282,4285)
【作者】王新
【作者单位】江苏大学食品与生物工程学院,江苏镇江,212013
【正文语种】中文
【中图分类】O629.12
【相关文献】
1.DNS法检测食用菌多糖含量条件优化研究 [J], 余志坚;陈传红;赵晋宇
2.泰山赤灵芝液体培养条件优化及多糖含量测定 [J], 姚良同;林榕姗;李娟;刘敏;赵倩;贾乐
3.灵芝多糖超声波提取工艺条件的优化 [J], 李凤林;吕艳荣;宫敬利;齐俊生
4.配制酒中枸杞多糖含量的检测条件优化 [J], 刘曼曼;吴宏萍;薛锡佳;吴丽华;冷其
影;魏云;张夏子;时玉英;张怡
5.灵芝粉枯草芽孢杆菌发酵条件的优化与质量检测 [J], 徐孝宙;胡元亮
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
灵芝、五味子多糖的生物活性研究的开题报告
一、研究背景及意义
灵芝、五味子是具有广泛应用价值的传统中药材。
其中多糖是其主要有效成分之一，具有多种生物活性，包括免疫调节、抗氧化、抗肿瘤等作用。
随着现代检测技术的迅速发展，灵芝、五味子多糖的生物活性研究越来越成为研究的热点。
二、研究目的
本研究旨在通过提取、纯化灵芝、五味子多糖，探究其生物活性，为探索其临床应用提供科学依据。
三、研究内容及方法
（1）灵芝多糖的提取与纯化：采用水提法提取灵芝多糖，用氯化铵沉淀、DEAE-52离子交换层析法以及Sephadex G-200凝胶层析法进行纯化。
（2）五味子多糖的提取与纯化：采用酸提-乙醇沉淀的方法提取五味子多糖，用DEAE-52离子交换层析法和Sephadex G-200凝胶层析法进行纯化。
（3）灵芝、五味子多糖生物活性研究：采用多种体外实验方法研究其免疫调节、抗氧化、抗肿瘤等生物活性。
四、研究预期结果
（1）成功提取、纯化灵芝、五味子多糖，并对其进行组成分析；
（2）探究灵芝、五味子多糖的生物活性；
（3）为灵芝、五味子多糖的应用提供科学依据。
五、研究意义
本研究不仅具有对传统中药材灵芝、五味子的深入探究和发掘的意义，更具有推动生物活性研究和临床应用的意义，同时为中药现代化研究提供一定的思路和参考。
开题报告
药学
舟山野生灵芝多糖制备工艺的优化研究
一、综述本课题国内外研究动态，说明选题的依据和意义
灵芝是担子菌纲多孔菌科(Polyporaceae)灵芝属(Ganodelma)真菌赤芝G．lucidum·karst和紫芝G．japonicrn L loyd的总称，主要含麦角甾醇0.3%～0.4%，真菌溶菌酶及酸性蛋白酶、L-甘露醇、浠醇。
在水溶性提取液中含有水溶性蛋白质，天门冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、赖氨酸、亮氨酸、丙氨酸、色氨酸、苏氨酸、脯氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、丝氨酸等多种氨基酸，多肽及多糖类。
尚含树脂、内酯、香豆精等。
世界上灵芝科的种类主要分布在亚洲、澳洲、非洲及美洲的热带及亚热带，少数分布于温带。
地处北半球温带的欧洲仅有灵芝属的4种，而北美洲大约5种。
我国地跨热带至寒温带，灵芝科种类多而分布广。
而灵芝则主要分布在中国，朝鲜半岛和日本。
灵芝作为拥有数千年药用历史的中国传统珍惜药材，具备很高的药用价值，经过科研机构数十年的现代药理学研究证实，灵芝对于增强人体免疫力，调节血糖，控制血压，辅助肿瘤放化疗，保肝护肝，促进睡眠等方面均具有显著疗效。
主要作用：
一、抗肿瘤作用自身免疫功能的低下或失调，是肿瘤之所以
会发生并扩展的重要原因。
灵芝是最佳的免疫功能调节和激活剂，它可显著提高机体的免疫功能，增强患者自身的抗癌能力。
灵芝可以通过促进白细胞介素-2的生成，通过促进单核巨噬细胞的吞噬功能、通过提升人体的造血能力尤其是白细胞的指标水平，以及通过其中某些有效成分对癌细胞的抑制作用，成为抗肿瘤、防癌以及癌症辅助治疗的优选药物。
灵芝对人体几乎没有任何毒副作用。
这种无毒性的免疫活化剂的优点，恰恰是许多肿瘤化疗药物和其它免疫促进剂都不具有的。
二、保肝解毒作用灵芝对多种理化及生物因素引起的肝损伤有保护作用。
无论在肝脏损害发生前还是发生后，服用灵芝都可保护肝脏，减轻肝损伤。
灵芝能促进肝脏对药物、毒物的代谢，对于中毒性肝炎有确切的疗效。
尤其是慢性肝炎，灵芝可明显消除头晕、乏力、恶心、肝区不适等症状，并可有效地改善肝功能，使各项指标趋于正常。
所以，灵芝可用于治疗慢性中毒、各类慢性肝炎、肝硬化、肝功能障碍。
三、对心血管系统的作用动物实验和临床试验均表明，灵芝可有效地扩张冠状动脉，增加冠脉血流量，改善心肌微循环，增强心肌氧和能量的供给，因此，对心肌缺血具有保护作用，可广泛用于冠心病、心绞痛等的治疗和预防。
对高血脂病患者，灵芝可明显降低血胆固醇、脂蛋白和甘油三脂，并能预防动脉粥样硬化斑块的形成。
对于粥样硬化斑块已经形成者，则有降低动脉壁胆固醇含量、软化血管、防止进一步损伤的作用。
并可改善局部微循环，阻止血小板聚集。
这些功效对于多种类型的中风有良好的防治作用。
四、抗衰老作用灵芝所含的多糖、多肽等有着明显的延缓衰老功效。
此功效主要基于以下机理：1、促进和调整免疫功能。
对于成年人和老年人而言，这种促进和调整可明显延缓衰老。
对于处于生长发育阶段的少年儿童而言，则可促进其免疫功能的完善，增强抗病能力，确保其健康成长。
2、调节代谢平衡，促进核酸和蛋白质的合成。
研究表明，灵芝能促时血清、肝脏和骨髓的核酸及蛋白质的生物合成，因此可以有效地抗病防衰老。
观察表明，服用灵芝以抗衰老，不仅对老年人有益，对务年龄阶段的人士都适用，因为生长发育的过程，也就是走向衰老的过程。
3、抗自由基作用。
生物体所产生的内原性防卫自由基损伤的抗氧化剂或抗氧化剂化酶类物质（如超氧化物歧化酶，SOD）的降低，是人体衰老的一个原因。
灵芝多糖有显著的拟SOD活性，可显著清除机体产生的自由基，从而阻止自由基对机体的损伤，防止了脂体的过氧化，保护了细胞，延缓了细胞衰老。
4、灵芝多糖能显箸促进细胞核内DNA合成能力，并可增加细胞的分裂代数，从而延缓了机体的衰老。
近几十年来,国内外相关科技人员对灵芝多糖的分离、纯化、结构鉴定及生物活性构效等方面进行了大量的工作,并取得了不少可喜的成果,但同时我们也应当看到,一些实验研究成果与临床应用还存在一定的距离。
一些提取、分离手段还仅局限在实验室,不能用于工业生产。
在理论上对GLPS的机制还不清楚。
随着分离,纯化技术的不断创新,构
效关系的不断深入,灵芝多糖会在更广阔的领域具有更广泛的发展前景。
二、研究的基本内容，拟解决的主要问题：
一：主要内容： 1：灵芝多糖的提取，纯化，鉴定。
2：不同品种灵芝多糖的含量差别。
3：人工和野生灵芝多糖含量的差异。
二：拟解决的主要问题：
1.确定提取灵芝多糖的较佳工艺
2.获得不含蛋白质、淀粉等杂质的多糖
3.了解多糖的单糖组成
4：料液比、微波作用时间和微波功率对灵芝多糖提取率规律的影响
三、研究步骤、方法及措施：
1:葡萄糖标准曲线绘制:准确吸取0,0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0 ml的0.1 g/L 标准葡萄糖溶液分别置于7个干燥的比色管中,加水补至1.00 ml。
然后加入5.53%苯酚1.0 ml,浓硫酸5.0 ml,摇匀,静置,冷却至室温,于490 nm处测定吸光值。
2:提取：
主要通过微波辅助的方法得到灵芝多糖的粗提取物，然后用有机物分离提取等方法得到有效成分！
参考文献：
[1] 林志彬.灵芝的现代研究[M].第2版,北京:北京医科大学出版
社,2001: 157-206.
[2] 张志军,李淑芳,刘建华.灵芝多糖提取-水浸提条件的研究[J].
天津农学院学报，2005,12（1）:12-15.
[3] 杨瑞瑞,李国华,樊宝娟.灵芝多糖的含量测定方法探讨及改进[J].
陕西中医学院学报,2009,32(5):62 -63.
[4] 徐格非,庞秀炳,高向东.微波辅助法提取灵芝多糖[J].药学与临床研究,2007,15(4):297 - 299.
[5] 曹德宾,刘炳明.灵芝多糖水提醇沉工艺初探[J].食用菌, 2000,22(1): 38-
[6] 徐凌川,张华,许昌盛,等.超声波提取灵芝多糖的最佳工艺探讨[J].中国中药杂志，2005,30（6）:471-472.。
