分子生物学基本概念
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什么是分子生物学分子生物学是一门崭新的科学,由于它是20世纪发展起来的新兴学科,它在未来也将产生重大的影响。
下面将介绍分子生物学的几个基本概念并阐述它的重要性:一、什么是分子生物学?分子生物学是一门研究分子水平生命现象和自然关系的新科学。
它使用分子生物学手段,利用化学、物理和生物技术,探讨以分子和最小细胞为基础的生物学过程。
分子生物学以DNA、RNA、蛋白质和其他分子结构为框架,结合生物信息学,解析各种生物过程及其分子机制。
二、分子生物学的方法分子生物学有许多研究方法和工具,主要包括基因测序、分子标记、克隆技术、蛋白质分析、遗传学和定量PCR的技术。
(1)基因测序:基因测序是分子生物学研究最常用的技术,它是一种可以分析DNA片段顺序和检测DNA表达状态的技术。
(2)分子标记:分子标记是将一种活性体与另一种它可能与之具有共同性质的生物活性体混合,以产生一种可检测的化学反应的技术。
(3)克隆技术:克隆技术是指利用可重组DNA技术在一个宿主上复制目标DNA片段、克隆它们作为载体的技术。
(4)蛋白质分析:蛋白质分析是指利用紫外分光光度计、流式细胞仪等分析仪器,研究蛋白质结构、凝胶电泳分析、质谱分析以及免疫学方法等技术来检测蛋白质结构和性质的方法。
(5)遗传学:遗传学是指研究基因在细胞中的表达、基因间相互作用及其在不同生物间的进化变异,以及它们在适应性演化中的作用的学科。
(6)定量PCR:定量PCR是指使用定量PCR技术研究DNA序列,利用荧光基因特异性引物和特异序列来检测、建库和定量分析DNA。
三、分子生物学的重要性(1)分子生物学能够探究生命的奥秘;(2)通过分子生物学,我们可以更好地了解遗传基因是如何影响人类生理和心理行为;(3)分子生物学可以帮助我们更好地理解疾病的发展机制,进行疾病的预防和治疗;(4)分子生物学也是真核细胞和原核细胞的比较研究的基础,从而有助于我们更好地利用微生物培养;(5)分子生物学还可以帮助我们更好地利用基因工程技术实现转基因动物生物学研究和创新生物材料研究。
分子生物学基本概念分子生物学是研究生物活动及其调控机制的学科,通过对生物分子进行研究,揭示生命现象的本质和规律。
本文将从DNA、RNA、蛋白质、基因表达、分子遗传学等角度,介绍分子生物学的基本概念。
一、DNA的结构和功能DNA(脱氧核糖核酸)是生物体内包含遗传信息的分子。
它由一系列称为核苷酸的单元组成,核苷酸由磷酸基团、五碳糖(脱氧核糖)和碱基组成。
DNA的结构是双螺旋结构,由两条互补的链通过碱基间的氢键相互连接而成。
DNA的功能包括存储和传递遗传信息,指导蛋白质合成。
二、RNA的种类和功能RNA(核糖核酸)是DNA的转录产物,通过转录和翻译过程参与蛋白质的合成。
根据功能和结构的不同,RNA可以分为信使RNA (mRNA)、转运RNA(tRNA)、核糖体RNA(rRNA)等多种类型。
mRNA是DNA的模板,在蛋白质合成中起到携带遗传信息的作用;tRNA具有适配功能,将氨基酸带到核糖体,在翻译过程中与mRNA配对;rRNA是核糖体的组成部分,参与蛋白质的合成。
三、蛋白质的合成和功能蛋白质是生物体内重要的功能性分子,参与包括代谢、结构、传导等多种生物过程。
蛋白质的合成包括转录和翻译两个过程。
转录是指DNA模板上的信息被转录成mRNA的过程,发生在细胞核中;翻译是指mRNA上的遗传信息被翻译成蛋白质的过程,发生在核糖体中。
蛋白质的功能由其氨基酸序列和三维结构所决定。
四、基因表达的调控基因表达是指基因信息被转录和翻译成蛋白质的过程。
基因表达的调控包括转录调控和转录后调控两个层面。
转录调控是指在转录过程中对基因的调控,包括启动子结构、转录因子结合和染色质结构等因素;转录后调控是指在转录后对mRNA和蛋白质的调控,包括剪接、RNA降解和翻译后修饰等过程。
五、分子遗传学的研究分子遗传学是研究基因及其在遗传过程中的作用机制的学科。
通过分子遗传学的研究,可以揭示基因与表型之间的关系,探究基因突变与遗传病的关联,并对基因工程和基因治疗等领域提供理论基础。
生物课教案:分子生物学的基本概念一、引言分子生物学是现代生物学的重要分支之一,其研究对象为生物体内分子层面的结构、功能和相互作用方式。
分子生物学研究所取得的成果不仅促进了生命科学的发展,也为医学、农业和生物工程领域的发展提供了重要支持。
本教案将围绕分子生物学的基本概念展开,包括基本概念、分子结构与功能、分子遗传与表达等几个方面。
二、基本概念1. 分子:分子是物质最基本的组成单位,由原子通过共价键连接而成。
生物体内包含了大量的生物分子,如蛋白质、核酸、多糖和脂质等。
2. 分子结构:分子的结构决定了其功能和性质。
蛋白质是由氨基酸通过肽键连接而成的线性多肽链,核酸是由核苷酸通过磷酸二酯键连接而成的聚合物,多糖是由单糖通过糖苷键连接而成的聚合物,脂质由甘油与脂肪酸通过酯键连接而成。
3. 分子功能:不同类型的生物分子具有不同的功能。
蛋白质在生物体中担任着结构支持、酶催化、运输传递、调节和防御等多种功能;核酸是生物体内的遗传信息载体,参与了基因表达和遗传变异等重要过程;多糖参与细胞识别和黏附、能量储存和结构支持等功能;脂质在细胞膜的结构和功能中起着重要作用。
4. 分子相互作用:不同的生物分子通过相互作用形成生物体内复杂的结构和功能网络。
蛋白质与其他分子通过氢键、离子键、范德华力和疏水相互作用等形成复杂的蛋白质结构;核酸通过碱基配对和骨架相互作用形成DNA的双螺旋结构;蛋白质与核酸之间通过酶作用实现基因的转录和翻译等过程。
三、分子结构与功能1. 蛋白质结构与功能:蛋白质结构包括了四个层次,即原始结构、二级结构、三级结构和四级结构。
原始结构由氨基酸的序列决定,二级结构由氢键作用形成α-螺旋和β-折叠等结构,三级结构由氢键、离子键和疏水力等作用形成立体空间结构,四级结构由多个蛋白质亚基通过非共价键结合而成。
不同的蛋白结构决定了其特定的功能,如酶活性、结构支持或信号传导。
2. 核酸结构与功能:核酸包括DNA和RNA两种类型,它们的基本结构由核苷酸单元组成。
分子生物学分子生物学的基本含义(p8)分子生物学是研究核酸、蛋白质等所有生物大分子的形态、结构特征及其重要性、规律性和相互关系的科学,是人类从分子水平上真正揭开生物世界的奥秘,由被动地适应自然界转向主动地改造和重组自然界的基础学科。
分子生物学与其它学科的关系分子生物学是由生物化学、生物物理学、遗传学、微生物学、细胞学、以至信息科学等多学科相互渗透、综合融会而产生并发展起来的,凝聚了不同学科专长的科学家的共同努力。
它虽产生于上述各个学科,但已形成它独特的理论体系和研究手段,成为一个独立的学科。
生物化学与分子生物学关系最为密切:生物化学是从化学角度研究生命现象的科学,它着重研究生物体内各种生物分子的结构、转变与新陈代谢。
传统生物化学的中心内容是代谢,包括糖、脂类、氨基酸、核苷酸、以及能量代谢等与生理功能的联系。
分子生物学则着重阐明生命的本质----主要研究生物大分子核酸与蛋白质的结构与功能、生命信息的传递和调控。
细胞生物学与分子生物学关系也十分密切:传统的细胞生物学主要研究细胞和亚细胞器的形态、结构与功能。
探讨组成细胞的分子结构比单纯观察大体结构能更加深入认识细胞的结构与功能,因此现代细胞生物学的发展越来越多地应用分子生物学的理论和方法。
分子生物学则是从研究各个生物大分子的结构入手,但各个分子不能孤立发挥作用,生命绝非组成成分的随意加和或混合,分子生物学还需要进一步研究各生物分子间的高层次组织和相互作用,尤其是细胞整体反应的分子机理,这在某种程度上是向细胞生物学的靠拢。
第一章序论1859年发表了《物种起源》,用事实证明“物竞天择,适者生存”的进化论思想。
指出:物种的变异是由于大自然的环境和生物群体的生存竞争造成的,彻底否定了“创世说”。
达尔文第一个认识到生物世界的不连续性。
意义:达尔文关于生物进化的学说及其唯物主义的物种起源理论,是生物科学史上最伟大的创举之一,具有不可磨灭的贡献。
细胞学说细胞学说的建立及其意义德国植物学家施莱登和德国动物学家施旺共同提出:一切植物、动物都是由细胞组成的,细胞是一切动植物的基本单位。
分子生物学基础分子生物学是研究生物分子结构、功能和相互作用的学科,是现代生物学的重要组成部分。
通过对生物分子的研究,可以深入了解细胞的机制、生命的起源和演化,以及疾病的发生和治疗等方面。
本文将介绍分子生物学的基本概念、研究方法和应用领域等。
一、基本概念1. 生物分子:生物体内存在着许多不同种类的分子,如蛋白质、核酸、碳水化合物和脂质等。
这些分子构成了细胞的基本单位,参与了各种生物过程。
2. DNA:脱氧核糖核酸(DNA)是生物体中重要的遗传物质,携带了生物个体遗传信息的蓝图。
DNA由四种碱基(腺嘌呤、鸟嘌呤、胸腺嘧啶和鳞嘌呤)组成,以双螺旋结构存在。
3. RNA:核糖核酸(RNA)是DNA的姐妹分子,具有多种功能。
其中信使RNA(mRNA)通过转录过程将DNA编码的信息转化为蛋白质合成的模板。
4. 蛋白质:蛋白质是生物体内最重要的功能性分子。
它们由氨基酸组成,通过肽键连接成链状结构。
蛋白质不仅构成了细胞的结构,还具有调节代谢、传递信号和催化反应等生物功能。
二、研究方法1. 分子克隆:分子克隆是指将DNA或RNA片段插入载体(如质粒)中,通过细菌或其他生物体来复制这些分子片段。
这一技术可以用于生物工程、基因治疗等领域。
2. PCR:聚合酶链反应(PCR)是一种体外扩增DNA片段的方法。
它利用特定引物和DNA聚合酶,通过一系列温度循环反复合成DNA的同源链,扩增目标序列。
3. 凝胶电泳:凝胶电泳是一种常用的分离生物分子的方法。
通过在凝胶中施加电场,根据分子的大小和电荷来分离DNA、RNA和蛋白质等。
4. 聚合酶链式反应(PCR):PCR是一种常用的体外扩增DNA片段的方法。
通过引物的特异性与DNA片段的互补性,聚合酶可以复制和扩增模板DNA。
三、应用领域1. 基因工程:分子生物学的发展为基因工程提供了基础。
通过基因重组、转基因等技术,可以克隆和改造DNA,生产重组蛋白质、植物转基因等。
2. 遗传疾病诊断:分子生物学的方法在遗传疾病的诊断中起着关键作用。
分子生物学知识点整理1.基本分子生物学概念:基因、DNA、RNA和蛋白质是分子生物学的基本概念。
基因是一段DNA序列,负责编码产生RNA和蛋白质。
DNA是脱氧核糖核酸,由含有遗传信息的碱基序列组成。
RNA是核糖核酸,负责将DNA的信息转录成具体蛋白质的制作指令。
蛋白质是由氨基酸组成的大分子,负责细胞的结构和功能。
2.DNA的结构:DNA是双螺旋结构,由两条互相缠绕的链组成,这两条链通过碱基之间的氢键相互连接。
DNA的碱基包括腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)、鸟嘌呤(G)和胞嘧啶(C)。
3.DNA复制:DNA复制是细胞分裂的过程中,DNA双链被复制为两条相同的DNA双链。
这是生命的一个基本过程,确保每个新细胞都有完整的遗传信息。
DNA复制是由DNA聚合酶酶进行的,它们能够将新的碱基加到原有的DNA链上。
4.转录:转录是将DNA的信息复制成RNA的过程。
这个过程包括三个步骤:启动、延伸和终止。
在转录开始时,RNA聚合酶酶会识别DNA链上一个特定的启动位点,然后沿着DNA模板链向前延伸合成RNA链。
转录的终止是由特定的序列标志着的,一旦被识别,RNA聚合酶酶就会停止合成RNA。
5.翻译:翻译是将RNA的信息转化成蛋白质的过程。
这个过程涉及到tRNA和核糖体的作用。
tRNA具有与特定氨基酸结合的能力,并根据mRNA 模板上的密码子序列,将氨基酸逐个带入核糖体中合成蛋白质。
6.基因调控:基因调控是细胞内基因表达的调控机制,使细胞能够根据需要调整哪些基因的表达,以适应不同的环境条件。
这包括启动子、转录因子和RNA干扰等机制。
7.基因突变和遗传变异:基因突变是指在DNA链上发生的改变,可能导致蛋白质的结构和功能的改变。
遗传变异包括基因重组、基因扩增和基因缺失等,能够产生新的基因组和生物特征。
8.PCR:聚合酶链式反应(PCR)是一种用于扩增DNA片段的技术。
它涉及到短的引物,用于界定所需扩增的DNA片段,然后通过多次的加热和冷却循环,DNA被不断复制,产生大量的DNA片段。
《分子生物学基础知识概述》一、引言分子生物学是一门在生命科学领域中具有核心地位的学科,它深入研究生物大分子的结构、功能和相互作用,为我们理解生命现象的本质提供了关键的理论和技术支持。
从揭示遗传信息的传递规律到开发新型生物技术,分子生物学的发展深刻地改变了我们对生命的认识和改造自然的能力。
本文将全面阐述分子生物学的基础知识,包括基本概念、核心理论、发展历程、重要实践以及未来趋势。
二、基本概念1. 生物大分子分子生物学主要研究生物大分子,包括核酸(DNA 和 RNA)、蛋白质和多糖。
DNA 是遗传信息的携带者,通过特定的碱基序列编码生物体的遗传信息。
RNA 在遗传信息的表达中起着重要作用,包括信使 RNA(mRNA)、转运 RNA(tRNA)和核糖体 RNA(rRNA)等。
蛋白质是生命活动的主要执行者,具有各种催化、结构和调节功能。
多糖则在细胞结构和信号传导等方面发挥着重要作用。
2. 中心法则中心法则是分子生物学的核心概念之一,它描述了遗传信息从DNA 到 RNA 再到蛋白质的传递过程。
DNA 通过复制将遗传信息传递给子代细胞,同时通过转录将遗传信息转化为 RNA,RNA 再通过翻译合成蛋白质。
中心法则的发现为我们理解生命的遗传和进化提供了重要的理论基础。
3. 基因基因是具有遗传效应的 DNA 片段,它决定了生物体的遗传特征。
基因通过编码蛋白质或 RNA 来控制生物体的生长、发育和代谢等生命活动。
基因的表达受到多种因素的调控,包括转录因子、表观遗传修饰和环境因素等。
三、核心理论1. 核酸的结构与功能DNA 具有双螺旋结构,由两条反向平行的脱氧核苷酸链组成,通过碱基互补配对原则结合在一起。
DNA 的结构稳定性为遗传信息的准确传递提供了保障。
RNA 则具有多种结构形式,包括单链、双链和环状等,不同的 RNA 分子在生命活动中发挥着不同的功能。
2. 蛋白质的结构与功能蛋白质的结构决定了其功能。
蛋白质的一级结构是指氨基酸的线性序列,二级结构包括α-螺旋和β-折叠等,三级结构是由二级结构进一步折叠形成的三维结构,四级结构是由多个亚基组成的蛋白质复合物。
分子生物学概述概念:分子生物学是从分子水平研究生命本质为目的的一门新兴边缘学科,它以核酸和蛋白质等生物大分子的结构及其在遗传信息和细胞信息传递中的作用为研究对象,是当前生命科学中发展最快并正在与其它学科广泛交叉与渗透的重要前沿领域。
分子生物学的发展为人类认识生命现象带来了前所未有的机会,也为人类利用和改造生物创造了极为广阔的前景所谓在分子水平上研究生命的本质主要是指对遗传、生殖、生长和发育等生命基本特征的分子机理的阐明,从而为利用和改造生物奠定理论基础和提供新的手段。
这里的分子水平指的是那些携带遗传信息的核酸和在遗传信息传递及细胞内、细胞间通讯过程中发挥着重要作用的蛋白质等生物大分子。
这些生物大分子均具有较大的分子量,由简单的小分子核苷酸或氨基酸排列组合以蕴藏各种信息,并且具有复杂的空间结构以形成精确的相互作用系统,由此构成生物的多样化和生物个体精确的生长发育和代谢调节控制系统。
阐明这些复杂的结构及结构与功能的关系是分子生物学的主要任务。
发展历史:一、准备和酝酿阶段19世纪后期到20世纪50年代初,是现代分子生物学诞生的准备和酝酿阶段。
在这一阶段产生了两点对生命本质的认识上的重大突破:确定了蛋白质是生命的主要基础物质19世纪末Buchner兄弟证明酵母无细胞提取液能使糖发酵产生酒精,第一次提出酶(enzyme)的名称,酶是生物催化剂。
20世纪20-40年代提纯和结晶了一些酶(包括尿素酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、黄酶、细胞色素C、肌动蛋白等),证明酶的本质是蛋白质。
随后陆续发现生命的许多基本现象(物质代谢、能量代谢、消化、呼吸、运动等)都与酶和蛋白质相联系,可以用提纯的酶或蛋白质在体外实验中重复出来。
在此期间对蛋白质结构的认识也有较大的进步。
1902年EmilFisher证明蛋白质结构是多肽;40年代末,Sanger创立二硝基氟苯(DNFB)法、Edman发展异硫氰酸苯酯法分析肽链N端氨基酸;1953年Sanger 和Thompson完成了第一个多肽分子--胰岛素A链和B链的氨基全序列分析。
分子生物学基础分子生物学是现代生命科学领域中最具活力和前景的学科之一。
它以分子为研究基础,探索生命的奥秘,揭示生物体的生命活动规律。
本文将介绍分子生物学的基础知识,包括DNA、RNA、蛋白质和细胞信号转导等。
一、DNA:生命的遗传密码DNA,即脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic Acid),是生物体的遗传物质,负责储存和传递遗传信息。
DNA由四种碱基组成:腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)、鸟嘌呤(G)和胞嘧啶(C)。
这些碱基按照特定的顺序排列,形成一串串的密码子,指导细胞合成相应的蛋白质。
DNA的复制是生命延续的基础。
在分裂间期,DNA双链解开,形成单链模板,根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。
在分裂期,DNA双链进一步解开,形成两条单链染色体,分配到两个子细胞中。
二、RNA:翻译过程中的重要角色RNA,即核糖核酸(Ribonucleic Acid),是DNA转录的产物,也是蛋白质合成的中间产物。
RNA分为三种:mRNA、tRNA和rRNA。
mRNA 是编码蛋白质的RNA,携带由DNA转录而来的信息;tRNA是转运RNA,负责将氨基酸转运到核糖体上;rRNA是核糖体RNA,与蛋白质一起构成核糖体,为蛋白质合成提供场所。
在翻译过程中,mRNA根据密码子的顺序指导氨基酸合成多肽链。
tRNA 将氨基酸转运到核糖体上,按照mRNA的密码子顺序依次连接成肽链。
rRNA与蛋白质构成核糖体,为翻译过程提供场所和能量。
三、蛋白质:生命活动的执行者蛋白质是生物体内最重要的分子之一,是生命活动的主要执行者。
蛋白质由氨基酸组成,具有特定的空间构象和功能活性。
不同的蛋白质具有不同的结构和功能,如酶、激素、抗体、载体等。
蛋白质的合成以mRNA为模板,经过翻译过程合成多肽链。
多肽链经过折叠和修饰后形成具有特定结构和功能的蛋白质。
蛋白质的合成和降解受到严格的调控,以确保生命活动的正常进行。
四、细胞信号转导:细胞通讯的基础细胞信号转导是指细胞间通过传递信号分子来实现信息交流和沟通的过程。
分子生物学的基本概念引言分子生物学是研究生物体中分子结构和功能的科学领域。
它通过研究和理解生物大分子(如DNA、RNA和蛋白质)以及它们的相互作用来揭示生命的基本原理。
本文将介绍一些分子生物学的基本概念。
DNADNA(脱氧核糖核酸)是一种储存生物信息的长链分子。
它由四种不同的碱基(腺嘌呤、胸腺嘧啶、鸟嘌呤和胞嘧啶)组成。
DNA的两条链以螺旋的形式相互缠绕,形成了著名的双螺旋结构。
DNA携带了生物体的遗传信息,指导了细胞的生长、发育和功能。
RNARNA(核糖核酸)也是一种核酸分子,它在细胞中担任多种重要角色。
与DNA不同,RNA是单链分子,由四种碱基(腺嘌呤、尿嘧啶、胸腺嘧啶和胞嘧啶)组成。
RNA可以将DNA中的遗传信息转录成蛋白质,这个过程被称为转录。
除了转录,RNA还参与其他生物过程,如蛋白质合成、基因表达和调控等。
蛋白质蛋白质是生物体中最重要的分子之一,它在细胞中发挥着多种功能。
蛋白质由氨基酸组成,不同的氨基酸序列决定了蛋白质的结构和功能。
蛋白质可以催化生化反应、支持细胞结构、传递信号和参与免疫系统等。
蛋白质的功能多样化,对生命过程至关重要。
基因基因是DNA分子的一个片段,它包含了一个或多个编码蛋白质的遗传信息。
基因是遗传物质在子代之间传递的基本单位。
基因通过蛋白质的合成来实现其功能,蛋白质的合成过程被称为翻译。
基因的变异和表达调控是生物体进化和发育的关键因素。
分子生物学技术随着科技的进步,许多分子生物学技术被开发出来,用于研究和探索生命的奥秘。
其中一些常用的技术包括PCR(聚合酶链式反应),DNA测序和基因编辑等。
这些技术的应用有助于加深我们对于分子生物学的理解,并为医学、生物工程和农业领域的发展提供了强有力的工具。
结论分子生物学的基本概念涵盖了DNA、RNA、蛋白质、基因和相关技术。
通过研究这些基本概念,我们可以更好地理解生物体的结构和功能,并推动生命科学的发展。
分子生物学的进展对于医学、农业和生物工程等领域具有重要意义。
[1]The Shine-Dalgarno sequence(AGGAGG), proposed by Australianscientists John Shine and Lynn Dalgarno,[1] is a ribosomal binding site located upstream of the start codon AUG. It is a consensus sequence that helps recruit the ribosome to the mRNA to initiate protein synthesis by aligning it with the start codon. The complementary sequence (CCUCCU), is called the anti-Shine-Dalgarno sequence and is located at the 3' end of the 16S rRNA in the ribosome.Mutations in the Shine-Dalgarno sequence can reduce translation. This reduction is due to a reduced mRNA-ribosome pairing efficiency, as evidenced by the fact that complementary mutations in the anti-Shine-Dalgarno sequence can restore translation.When the Shine-Dalgarno sequence and the anti-Shine-Dalgarno sequence pair, the translation initiation factors IF2-GTP, IF1, IF3, as well as the initiator tRNA fMet-tRNA(fMET) are recruited to the ribosome.Shine-Dalgarno sequence vs. ribosomal S1 protein in Gram-negative bacteria, however, Shine-Dalgarno sequence presence is not obligatory for ribosome to locate initiator codon, since deletion of anti-Shine-Dalgarno sequence from 16S rRNA doesn't lead to translation initiation at non-authentic sites.Moreover, numerous prokaryotic mRNAs don't possess Shine-Dalgarno sequences at all. What principally attracts ribosome to mRNA initiation region is apparently ribosomal protein S1, which binds to AU-rich sequences found in many prokaryotic mRNAs 15-30 nucleotides upstream of start-codon. It should be noted, that S1 is only present in Gram-negative bacteria, being absent from Gram-positive species.SD序列(16S互补区)是位于原核生物mRNA 起始密码子(AUG)上游5~10个核苷酸处,一段富含嘌呤的序列。
其与核糖体小亚基中的16S rRNA的3’末端互补配对,促进mRNA 的翻译。
[2]ORF:An open reading frame (ORF) is a portion of a gene’s sequencethat contains a sequence of bases, uninterrupted by stop sequences, that could potentially encode a protein. When a new gene is identified and its DNA sequence deciphered, it is still unclear what its corresponding protein sequence is. This is because, in the absence ofany other knowledge, the DNA sequence can be translated or read in six possible reading frames (three for each strand,corresponding to three different start positions for the first codon). ORF identification involves scanning each of the six reading frames and determining which one(s) contains a stretch of DNA sequence bounded by a start and stop codon, yet containing no start or stop codons within it; a sequence meeting these conditions could correspond to the actual single product of the gene. The identification of an ORF provides the first evidence that a new sequence of DNA is part or all of a gene encoding for a particular protein.开放性阅读框架是结构基因上一段从起始密码子至终止密码子的核苷酸序列,其编码一个多肽或蛋白质。
通过ORF的检测识别可以判断一条新克隆的DNA序列是否是一个完整的基因。
[3]The blue-white screen is a screening technique that allows for thedetection of successful ligations in vector-based gene cloning. DNA of interest is ligated into a vector. The vector is then transformed into competent cell (bacteria). The competent cells are grown in the presence of X-gal. If the ligation was successful, the bacterial colony will be white; if not, the colony will be blue. This technique allows for the quick and easy detection of successful ligation. β-galactosidase is a protein encoded by the lacZ gene of the lac operon, and it exists as a homotetramer in its active state. However, a mutant β-galactosidase derived from the M15 strain of E. coli has its N-terminal residues 11—41 deleted and this mutant, the ω-peptide, is unable to form a tetramer and is inactive. This mutant form of protein however may return fully to its active tetrameric state in the presence of an N-terminal fragment of the protein, the α-peptide.The rescue of function of the mutant β-galactosidase by the α-peptide is called α-complementation.In this method of screening, the host E. coli strain carries the lacZ deletion mutant (lacZΔM15} which contains the ω-peptide, while the plasmids used carry the lacZα sequence which encodes the first 59 residues of β-galactosidase, the α-peptide. Neither are functional by themselves.However, when the two peptides are expressed together, as when aplasmid containing the lacZα sequence is transformed int o a lacZΔM15 cells, they form a functional β-galactosidase enzyme.The blue/white screening method works by disrupting this α-complementation process. The plasmid carries within the lacZα sequence an internal multiple cloning site (MCS). This MCS within the lacZα sequence can be cut by restriction enzymes so that the foreign DNA may be inserted within the lacZα gene, thereby disrupting the gene and thus production of α-peptide. Consequently, in cells containing the plasmid with an insert, no functional β-galactosidase may be formed.The presence of an active β-galactosidase can be detected by X-gal, a colourless analog of lactose that may be cleaved by β-galactosidase to form 5-bromo-4-chloro-indoxyl, which then spontaneously dimerizes and oxidizes to form a bright blue insoluble pigment 5,5'-dibromo-4,4'-dichloro-indigo. This results in a characteristic blue colour in cells containing a functional β-galactosidase. Blue colonies therefore show that they may contain a vector with an uninterrupted lacZα (therefor e no insert), while white colonies, where X-gal is not hydrolyzed, indicate the presence of an insert in lacZα which disrupts the formation of an active β-galactosidase.蓝白斑筛选是一种基因工程常用的重组菌筛选方法。