单链抗体表达研究进展_邓亮

农技服务2018,35(7):48〜49产业技术单链抗体的生物学特性及应用硏究进展代晓娟(内蒙古通辽市扎鲁特旗农牧业综合行政执法大队，内蒙古通辽029100)[摘要]单链抗体是由抗体重链可变区和轻链可变区通过15〜20个氨基酸短肽连接而成的抗体，具有分子量小、抗原性弱、对实体组织的穿透能力较强等诸多优点，在医用研究领域得到广泛使用。

为单链抗 体的深入研究及其应用提供参考，阐述了单链抗体的生物学特性，并分析了单链抗体的应用研究进展及其发 展前景。

[奚键词]单链抗体;兽医；应用前景单链抗体（ScFv)是由抗体重链可变区和轻链 可变区通过15〜20个氨基酸短肽连接而成的抗体，只有完整抗体的一条链。

和完整的抗体相比，单链 抗体具有相同的抗原结合活性，同时具有分子量小、抗原性弱、对实体组织的穿透能力较强等诸多优点，所以在医用研究领域得到广泛使用，允其是人工免 疫治疗以及肿瘤免疫诊断方面。

为单链抗体的深入 研究及其应用提供参考，阐述了单链抗体的生物学 特性，并分析了单链抗体在兽医上的应用及其前景。

1单链抗体的生物学特性和其他基因工程抗体相比，单链抗体的优点在 于制备方法相对简单，只需利用一些适当的引物就 可将重、轻链v区基因通过PC R方法扩増出来，并 且将适当的表达载体插人其中，可以在大肠杆菌等 一些原核细胞当中对基因进行表达，利用细菌发酵 方法进行生产，成本低。

因为其只存在抗体的v区，所以分子量不大，和原来的单克隆抗体相比，免疫原 体较小;其氨基酸序列相对清楚，不管是在结构特点 还是在制备上都比较合适于分析抗原抗体的结构和 功能。

单链抗体没有出现f c片段，所以不能与非耙 细胞的f c受体进行结合，这样可很好地穿过组织屏 障和细胞壁，到达实体瘤周围的微循环中，使用效果 好，而且具有很好的特异性，对肿瘤等疾病的治疗具 有很大帮助。

单链抗体在体内周转快、半寿期短，对 体内毒物物质的清除以及放射免疫的显影非常有 利，容易在体内进行定位;在显影过程中，图像清晰、显影速度快。

单链抗体融合蛋白的研究及应用摘要】单链抗体具有分子量小，免疫原性低，组织穿透力强，特异性强等优点，通过重组DNA技术将单链抗体（single chain antibody fragment, scFv）基因与其他效应蛋白基因融合在一起，经表达后可以得到具有scFv特性和所融合的效应蛋白活性的scFv融合蛋白。

这种融合蛋白已应用于许多领域的研究中，并已显示出较高的价值。

本文就scFv融合蛋白的研究和应用做一综述。

【关键词】单链抗体融合蛋白表达载体【中图分类号】R96 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）16-0380-02融合蛋白[1]是指采用重组DNA技术在基因水平上将两种蛋白质或蛋白质的结构域的编码区，依读码框架首尾连接在一起，表达产生的一种新蛋白质,它具有双方蛋白的活性，这种新型的人工蛋白具有极高的应用价值和很好的发展前景，已广泛应用于许多领域的研究中。

单链抗体[1]（scFv）是现在研究最多的小分子抗体，它由一段弹性连接链（linker）把抗体重链可变区（Vh）与轻链可变区（Vl）相连而成，是具有亲代抗体全部抗原结合特异性的最小功能结构单位,只有完整抗体分子的1/6，因而具有比完整抗体具有更大的优越性。

因此，采用基因融合的方法在scFv的N端或C端，以一段多肽连接链和效应蛋白连接，可得到具有抗体活性和其他生物活性或功能的scFv融合蛋白。

这种利用基因工程技术得到的scFv融合蛋白，和scFv一样能在大肠杆菌、酵母、哺乳类细胞、昆虫细胞、植物中得到有效的表达，可以大规模生产抗体融合蛋白，具有很大的应用潜力。

1 scFv融合蛋白的研究进展1.1活性研究倪剑锋[2]等人将已经突变了稀有密码子的人IL-2(Ala125) 基因, 与GD2单链抗体基因通过over-lap-PCR 法构建成ScFv-IL-2融合基因,并在基因的C端引入his tag序列。

ScFv-IL-2基因经测序正确后连接到表达载体pSE380上,然后导入大肠杆菌BL21中表达。

单链抗体（single-chain antibody fragment，scFv）由抗体重链可变区和轻链可变区通过１５～２０个氨基酸的短肽（linker）连接而成。

在目标特定的scFv上连接放射性核素、生物毒素、药物，将极大增强对靶细胞的杀伤能力。

Kanter等［１］研究发现将个体基因型scFv和细胞因子粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子或免疫刺激肽组成融合蛋白，是一种有效治疗淋巴瘤的疫苗。

Wang等［２］通过抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）和抗单端孢霉毒素（ZEN）scFv基因融合，表达为抗DON和抗ZEN scFv，结果显示双功能抗体成功构建，并可应用于DON和ZEN检测。

scFv表达是scFv制备的关键步骤。

将基因通过表达载体整合入受体宿主基因内，依靠宿主的转录和翻译系统，scFv 片断完整表达于产物中。

本文将就scFv 表达技术及其进展做一综述。

１表达载体常用的scFv表达载体包括：质粒载体、噬菌体载体、腺病毒载体等。

１．１质粒载体质粒（plasmid）是以超螺旋状态存在于细菌细胞质中的一种能够自主复制的遗传成分，多以共价闭合环状的DNA（covalently closed circular DNA）分子形式存在［３］。

质粒载体借助于物理或化学的作用导入细胞内，依据质粒在宿主细胞内是否具有自我复制能力分为整合型和附加体型两种。

Jurado等［４］以Sigma-５４依赖的分解性TOL质粒为表达载体，在M１３噬菌体文库中表达的scFV 含量增高且与受体结合活性增强。

１．２噬菌体载体噬菌体表面呈现展示技术（phage display techniques），是近年来建立和发展的利用噬菌体表达外源基因的一项新技术。

它以改建的噬菌体为载体，将编码外源肽或抗体可变区的DNA片段定向插入噬菌体外壳蛋白质基因区，使外源多肽或蛋白质表达并展示于噬菌体表面，进而通过亲和富集筛选表达有特异肽或蛋白质的噬菌体，并得到大量富集，然后进行DNA序列测定。

动物医学进展,2003,24(2):24-26Prog ress in Veterinary Medicine单链抗体的研究进展尹惠琼　综述,范泉水　审校(成都军区联勤部军事医学研究所,云南昆明650032)中图分类号:Q343.1 文献标识码:A文章编号:1007-5038(2003)02-0024-03摘　要:抗体在疾病的诊断、治疗和预防中发挥着重要的作用,其生产制备经历了抗血清多克隆抗体和单克隆抗体(M onoclo nal antibodies, M cAb)阶段,现已进入了基因工程抗体的时代。

基因工程抗体主要包括单链抗体(ScFv)、Fab抗体、F(ab`)2抗体等小分子抗体、嵌合抗体和改形抗体。

本文就单链抗体的研究进展作了综述。

关键词:基因工程抗体;单链抗体;噬菌体展示技术自从20世纪70年代德国学者Kohler和英国学者Milstein利用细胞融合技术首次成功地制备出单克隆抗体[1]以来,其在医学、生物学、免疫学等诸多学科发挥了巨大的作用。

然而,由于目前制备的单克隆抗体绝大多数为鼠源性的,鼠源性单抗在临床治疗中由于反复使用,在体内易引起人抗鼠抗体(hunam a nti-mouse anti-body,HAM A)反应,而且其分子量大,血管通透性差,给临床应用带来了一定的困难。

而人源性单抗的制备尚存在许多困难。

基因工程抗体的研究开始于80年代初期,其最重要的进展是噬菌体抗体库技术的建立[2],其表面展示技术的创建,被誉为又一次革命性进展。

1989年,Huge第一次从噬菌体表达的重组抗体库中分离出单克隆抗体[3],由于丝状噬菌体展示技术[4],使得该技术得到了迅速的发展。

收稿日期:2002-09-12作者简介:尹惠琼(1973-),女,云南曲靖人,云南大学生化实验室在读硕士。

1　单链抗体的基因构建单链抗体(sing le chain Fv,Sc Fv)是一个重要的基因工程抗体,是利用基因工程方法使抗体重链可变区(V H)和轻链可变区(V L)通过一段约5～25个aa的连接肽,首尾拼接而形成的重组蛋白。

#综述#单链抗体的构建及其在医学上的应用*汪希雅综述,余平**审校(中南大学湘雅医学院免疫学系,湖南长沙410078)=摘要>基因工程抗体在疾病诊断、治疗及医学研究等方面都有着广泛的应用。

近几年来,国内外学者对抗体的研究已迈入基因工程抗体阶段,其中单链抗体(single chain F v,scFv)因其具有分子质量小、穿透力强、体内循环半衰期短及排除了Fc段所致的免疫复合物反应等优点,成为基因工程抗体探索领域中的研究热点。

尤其是将scF v应用于医学的研究已取得突破性进展,现就scF v的构建及其在医学上的应用综述如下。

=关键词>单链抗体;构建;应用;综述=中图分类号>R392.11=文献标识码>A=文章编号>167325234(2009)1020790203[J our nal of P a thogen B iology.2009Oct;4(10):790-792.]Construction of single2chain Fv antibody and its application in the medicineWANG Xi2ya,YU Ping(Dep ar tment of I mmunology,Xiangya Med ica l College,Centra l Souther n University, Cha ngsha410078,China)=Abstract>T he genetic engineer ing antibody is widely used in disease diagnosis,tr eat ment and medical resea rch.In re2 cent years,many scholars have taken in the genetic engineering antibody research.And because the single2cha in F v fr ag2 ment(ScFv)has small molecular weight,str ong penetr ating,short half2life in vivo circulation and avoided t he immunity compound response by F c section,it become to a research focus in the genetic engineering antibody.Especially,the medi2 cine applies research of ScF v have obtained br eakthr ough pr ogress.The r eview is given of ScF v constr uction and it s appli2 cation in t he medicine.=Key wor ds>Single2chain F v antibody(scF v);construction;applicat ion;r eview在现代免疫学技术迅速发展的今天,抗体尤其是单链抗体技术所具有的优点,使其被广泛应用于医疗和生物技术领域[1,2]。

《热带作物学报》科研论文Word结构格式1 参数设计纸张：A4；页边距：上22 mm，下20 mm，左20 mm，右20 mm；文档网格：42或43行/页，单倍行距。

2 要求与注意事项(1) 所有数据图要求用excel软件制作，并带上数据库。

图一定要黑白图，不要边框和底纹。

带数据库的方法：先在excel软件里直接生成图，复制，然后打开word里的正文，再粘贴。

检查是否带数据库的方法：打开word里的正文，双击图，带excel数据即可。

(2) 图片或照片的像素要求300DPI以上，且是未加工的原始图。

(3) 表格，作者只须提供方格表（编辑部在排版时再转为科技期刊要求的三线表），表头【小五黑】，表格内容【小五宋】。

(4)参考文献须是最直接、最新的、阅读过的。

(5) 图、表中除数据以外的内容皆须提供汉、英对照。

(6) 凡是因课题鉴定、成果验收、博士出站、硕士答辩以及紧急用于职称晋升的学术论文，请投稿时务必说明最晚发表期限，以免延误。

3 格式标题标题标题标题标题①【二黑】第一作者【小四仿宋】1)②作者二2)作者三1)③(1 单位单位单位单位单位单位单位571737【五楷】；2 单位单位单位单位单位单位单位571737【五楷】)摘要【小五黑】【研究目的】30～50字，□□□□□□□□□；【方法】30～50字□□□□□□□□□；【结果】核心部分，约150字□□□□□□□□□□□□□□□□□□□；【结论】不能忽略，约50字□□□□□□□□□□□□。

【小五宋】关键词【小五黑】3～8个【小五宋】中图分类号【小五黑】Title Title Title Title Title【小四号Times New Romam】Mary Sunny John【五号Times New Romam】(1 CAASS, Beijing 100026; 2CAT, Beijing 100094)【五号Times New Romam】Abstract:【OBJECTIVE】≈15% Abstract Abstract abstract Abstract abstract;【METHOD】≈15% abstract abstract Abstract abstract;【RESULTS】≈55% Abstract abstract abstract abst ract. abstract abstract【六宋】①基金项目：项目来源“项目名称”（项目编号）。

单链抗体技术及其在药用植物研究中的应用一、单链抗体技术单链抗体技术是指通过单个抗体特异性结合抗原来传递信号，实现抗原特异性功能的技术。

其原理是，利用单抗体特异性结合其特定致病性抗原（也称为抗原原子），形成抗原-抗体复合物；同时储存该信号，以便在相关的检测系统中识别、检测、分析。

最近几年，由于单抗体技术的灵活性，准确性，可靠性以及成本低等优点，越来越多地应用于诊断、检测、分析和研究抗原。

单抗体技术由抗原-抗体复合物引发的整合、转录调节通路（signalosome）组成，涉及抗原特异性结合和共轭反应调节等，可实现抗原-抗体的从反应到感受的功能。

抗原作为信号，抗体能有效地传达抗原；有效控制信号通路中的关键步骤、连接细胞中其他相关信号系统的信号量，最终将Fc作为受体传递信号，实现抗原的特异性功能。

1. 分子标志贴标技术单抗技术在药用植物研究中被广泛应用，其主要应用之一就是用于分子标志贴标技术。

单链抗体与细胞膜中的蛋白质结合后可以调控细胞的信号传导，引起细胞的功能变化，从而提高植物的生长率、发育速率，提高植物的产量和质量，可以实现基因分子标志贴标技术。

2. 生物活性物质分析单抗技术也可用于对药用植物中各种生物活性物质的分析。

单抗可以用于抗原的鉴定，结合应用特异性能力可以准确地快速定位特定的抗原，从而不仅可用于药物及其半合成产品的质量控制分析，也能够进一步分析和确定药物中的关键活性成分及分子机制。

3. 免疫学检测结合单衣抗体的特异性与可重复性，单抗技术可以用于药用植物中生物活性物质的检测。

通过特异性的催化和放大机制，使得检测有较高的特异性、灵敏度和可重复性，从而能更好地发掘和检测药用植物中具有生物活性物质。

总之，单链抗体技术作为一种灵活高效的信号传导调控技术，对于药用植物的研究，尤其在分子标志贴标、生物活性物质分析及免疫学检测等方面具有重要意义，在药用植物研究中应用单抗技术，可以提高研究效率，克服传统技术的局限性，为药用植物的分子育种及活性物质的发掘、分析提供新的视角和手段。

单链抗体（single-chain antibody fragment，scFv）由抗体重链可变区和轻链可变区通过１５～２０个氨基酸的短肽（linker）连接而成。

在目标特定的scFv上连接放射性核素、生物毒素、药物，将极大增强对靶细胞的杀伤能力。

Kanter等［１］研究发现将个体基因型scFv和细胞因子粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子或免疫刺激肽组成融合蛋白，是一种有效治疗淋巴瘤的疫苗。

Wang等［２］通过抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）和抗单端孢霉毒素（ZEN）scFv基因融合，表达为抗DON和抗ZEN scFv，结果显示双功能抗体成功构建，并可应用于DON和ZEN检测。

scFv表达是scFv制备的关键步骤。

将基因通过表达载体整合入受体宿主基因内，依靠宿主的转录和翻译系统，scFv 片断完整表达于产物中。

本文将就scFv 表达技术及其进展做一综述。

１表达载体常用的scFv表达载体包括：质粒载体、噬菌体载体、腺病毒载体等。

１．１质粒载体质粒（plasmid）是以超螺旋状态存在于细菌细胞质中的一种能够自主复制的遗传成分，多以共价闭合环状的DNA（covalently closed circular DNA）分子形式存在［３］。

质粒载体借助于物理或化学的作用导入细胞内，依据质粒在宿主细胞内是否具有自我复制能力分为整合型和附加体型两种。

Jurado等［４］以Sigma-５４依赖的分解性TOL质粒为表达载体，在M１３噬菌体文库中表达的scFV 含量增高且与受体结合活性增强。

１．２噬菌体载体噬菌体表面呈现展示技术（phage display techniques），是近年来建立和发展的利用噬菌体表达外源基因的一项新技术。

它以改建的噬菌体为载体，将编码外源肽或抗体可变区的DNA片段定向插入噬菌体外壳蛋白质基因区，使外源多肽或蛋白质表达并展示于噬菌体表面，进而通过亲和富集筛选表达有特异肽或蛋白质的噬菌体，并得到大量富集，然后进行DNA序列测定。

单链抗体的表达代鹏;周广青;马军武【期刊名称】《生物技术通报》【年(卷),期】2011(000)010【摘要】单链抗体(scFv)是具有抗体活性的最小功能结构单位,是基因工程抗体研究领域中的热点,具有比单克隆抗体在生物病原体、微生物污染和寄生虫病等预防、检测和治疗的独特优点和应用前景.鉴于其重要性,单键抗体在不同的表达系统中得到表达与研究.简要综速了scFv的表达.【总页数】6页(P60-65)【作者】代鹏;周广青;马军武【作者单位】中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃省生物检测工程技术研究中心,兰州730046;中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃省生物检测工程技术研究中心,兰州730046;中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室国家口蹄疫参考实验室甘肃省生物检测工程技术研究中心,兰州730046【正文语种】中文【相关文献】1.抗伏马菌素B1单链抗体的原核表达及其抗体活性和稳定性分析 [J], 陈静;邹龙;许杨;李燕萍;何庆华;黄运红2.人源化抗肾小球基底膜抗体的单链抗体scFv3的原核表达及鉴定 [J], 肖静;刘章锁;王雅楠;赵国强;王沛3.鼠抗人纤维蛋白单链抗体-低相对分子质量单链尿激酶融合基因真核分泌表达载体的构建 [J], 舒东;徐兵;俞炜源;罗深秋4.抗FKBP52人源单链抗体的筛选及其完整抗体真核表达载体的构建 [J], 丁立;熊丽娟;王欲晓;吴成林;付凯飞;周丽君5.抗鼻咽癌单克隆抗体BAC5单链抗体原核表达载体的构建和表达 [J], 吴涛;唐彩华;肖锡宾;梁昌盛;刘长征因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

基因工程单链抗体的研究进展
喻启桂
【期刊名称】《国外医学：免疫学分册》
【年(卷),期】1994(017)005
【摘要】抗体的ＶＨ基因的ＶＬ基因经寡核苷酸接头连接成ＳｃＦｙ基因，转入
原核或真核表达系统中表达，表达产物具有与亲本抗体相同的抗原结合特性和能力。

在ＳｃＦｖ基因的ＶＬＣ端连连接柔曲的铰链和易形成螺旋束或卷曲螺旋结构的寡核苷酸，表达产物能在活细胞内折叠成具有活性的双价ＳｃＦｖ。

ＳｃＦｖ是研究蛋白质结构与功能最理想的实验系统，本文拟就有关问题作一综述。

【总页数】3页(P244-246)
【作者】喻启桂
【作者单位】无
【正文语种】中文
【中图分类】R392.11
【相关文献】
1.基因工程单链抗体在传染病中的应用研究进展 [J], 汤正好;姚集鲁
2.抗芽殖酵母端粒G4-DNA结构的单克隆抗体和基因工程单链抗体片段的制备和
定性研究 [J], 董琦
3.基因工程单链抗体的研究进展及临床应用 [J], 马广鹏;王敏
4.抗氯霉素单链抗体基因工程菌表达条件优化 [J], 边名鸿;左勇;陈欲云
5.基因工程单链抗体的研究进展 [J], 石小枫;覃川平;刘杞
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

单链抗体经流式细胞仪检测细胞表面受体
乔旭刚
【期刊名称】《中国优生与遗传杂志》
【年(卷),期】1998(6)5
【摘要】用流式细胞仪检测两个自然杀伤细胞抑制受体的单链抗体（ＮＫＡＴ２－ｓｃＦｖ；ＮＫＡＴ４－ｓｃＦｖ），识别细胞表面受体分子的能力。

单链抗体是吸附固相的抗原筛选一噬菌体抗体库而获得。

结果显示，含ＮＫＡＴ２－ｓｃＦｖ的细菌上清及胞质提取物均可识别到表达在细胞表面的ＮＫＡＴ２受体分子。

【总页数】2页(P3-4)
【关键词】单链抗体;流式细胞仪;杀伤细胞;抑制受体;KIR
【作者】乔旭刚
【作者单位】暨南大学医学院血液病研究室
【正文语种】中文
【中图分类】R446.1
【相关文献】
1.用细胞筛选噬菌体抗体库分离自然杀伤细胞抑制受体的单链抗体 [J], 乔旭刚
2.流式细胞仪检测淋巴细胞亚群糖皮质激素受体的表达：创伤后应激病患者糖皮质激素受体减少 [J], 姜维洁;李培成
3.流式细胞仪检测胰蛋白酶对烟曲霉分生孢子表面纤连蛋白受体黏附力的影响 [J], 徐赤宇;王溪涛;陈江汉;吴建华;温海
4.胃肠道肿瘤靶向抗癌胚抗原单链抗体与T细胞表面受体基因的融合分子构建 [J], 徐立;徐宏勇;樊代明
5.流式细胞仪鉴定抗人CD3单链抗体活性 [J], 白玉杰;苏成芝;杨安钢;刘智广;曹云新
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

RP215单链抗体的构建、表达及其生物活性鉴定的
开题报告
一、研究背景与意义
单链抗体是由单个变异段连接桥接的不含Fc片段的适体，具有小分子抗原结合特异性高、生物稳定性高等优点，在抗肿瘤、抗病毒、临床
诊断等领域得到广泛应用。

RP215是一种针对乳腺癌组织中酸性糖蛋白（TAG-72）上的多克隆抗体，其作用机制尚不清楚，但已证实其在肿瘤
治疗中的应用前景广阔。

在RP215多克隆抗体的基础上，研究人员利用
软件模拟、分子克隆等技术获得了相应的单链抗体RP215scFv，但其构建、表达及其生物活性鉴定尚未进行深入研究。

基于以上情况，本研究旨在构建RP215单链抗体，并对其表达和生
物活性进行鉴定，为其在乳腺癌治疗上的应用提供科学依据和实验基础。

二、研究内容和步骤
1. RP215单链抗体的构建
通过软件模拟、分子克隆等技术，构建出RP215单链抗体的DNA序列，并插入到适宜的表达载体中。

2. RP215单链抗体的表达
将构建好的RP215单链抗体载体转染至细胞，并进行培养，收集细
胞上清液并进行纯化、浓缩等步骤，获得纯净的RP215单链抗体。

3. RP215单链抗体的生物活性鉴定
对纯净的RP215单链抗体进行活性鉴定，包括结合ELISA、Western blot、免疫荧光等方法，确定其在抗肿瘤治疗中的生物学特性和效能。

三、研究预期结果
本研究预期获得RP215单链抗体的构建、表达以及其在抗肿瘤治疗中的生物活性鉴定结果，为其在临床应用中提供实验基础和科学依据，对开发针对乳腺癌的新型治疗手段具有重要的理论和实践意义。