QCP0001028 菌种和生物指示剂使用管理规程

标准菌株管理规定标准菌株管理规定1、目的标准用于微生物实验质量控制和操作评估的标准菌株管理与使用程序，尽量减少交叉污染，确保实验结果可靠与实验室平安。

3、接收和传代程序3.1菌株接收3.1.1由科室技术负责人和科室微生物室负责人保管，双人双锁管理，两人须受过专业培训，有足够的菌株保存经验。

3.1.2根据检验工程的需要，由技术负责人制定购置方案，报站长。

3.2 标准菌株的复壮 3.2.1在无菌环境下撕开袋子取出KWIK-STIK。

3.2.3捏住针剂的底部让水合物流出。

3.2.4垂直的握住针剂使小球滑到底部。

3.2.5捏碎小球使里面的液体充分混合。

3.2.6立即把棉签浸泡在液体中。

3.2.7在接种培养皿中，转动棉签作直径大概25mm的圆周运动。

3.2.8用已经消过毒的环在接种区域迅速划线，使其被别离出来。

3.2.9正确的处理用完的药签，防止污染。

3.2.10立即培养被别离出来的菌株。

3.3传代3.3.1从保藏机构获得的菌种干粉是0代，再转接到斜面培养得到第一代。

按此下推。

3.3.2每隔2周进行传代，传代时应接种多支平行管作为备用种；备用种可以每周接出工作种，通常工作种以营养琼脂斜面保存。

3.3.3检测用工作菌种从ATCC标准种算起不应超过5代。

4、储存4.1采购回来的标准菌株需单独锁在2～8℃的冰箱内，每周检查一次冰箱温度。

.2一旦发现有以下情况时不得使用：4.2.1发现包装有泄漏现象。

4.2.2过了有效期。

5、菌种使用与销毁5.1每次使用的菌种必须是培养后健康、生命力强、无变异的菌种。

每次使用菌种均须作记录。

5.2超过传代限度或经鉴定检查不合格的菌种，由技术负责人审报，站长批准后销消灭活〔高压灭菌〕，销消灭活须由技术负责人和质量负责人共同执行，并在记录签字。

标准菌种管理规程目的：规范药品微生物学检定用菌的管理，最大限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，从而确保微生物学检验结果的准确可靠。

职责： QC 主管负责菌种的申购、接受、保存、分发，微生物检验员负责菌种的确认、传代、使用及销毁。

范围：本规程适用于检定用菌种的管理，包括菌种的申购、保存、传代、使用及销毁等。

内容：1术语标准菌种是指由中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌。

传代用菌种是指用标准菌种制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制备工作用菌种。

工作用菌种是指用标准菌种或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工作使用的菌种。

菌种的代是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即称为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0 代。

2.标准：2.1 检定菌的申购QC主管每年根据检定菌种的使用情况（包括临时检验需要），提出购买计划，交由质量管理部部长审批后，向中检所菌种保藏中心或省（市）药检所购买冻干菌种（标准菌种）；也可以直接向省（市）药检所购买传代用菌种，购买时，需询问与确定菌种的代数，以便传代时控制代数。

2.2 检定菌的接收菌种到达实验室后，由QC主管接收菌种，检查其名称和数量，以及每一支的完整性，同时将菌种的所有信息，填写在《检定菌接收记录》（附表 1）上，内容包括：名称、数量、编号（无编号者按检定菌种的编号原则编号）、代数、来源、接收日期、接收人等，贴好标签并储存于 2-8?C直到需要使用时。

储存期最长不超过 5 年。

2.3 检定菌的保存2.3.1 工作用菌种的保存工作用菌种采用斜面低温保存法。

将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌生长充分以后，转移至2～8℃冰箱中保存。

此法仅用于工作用菌种的短期保存，并应随时检查其污染杂菌和变异等情况，发现异常情况，经应灭活处理后销毁。

保存时间根据菌种种类而不同，细菌： 1 个月；酵母菌： 2 个月；霉菌及芽胞： 3 个月。

SMP-QC0028微⽣物鉴定管理规程⼀、⽬的：规范菌种以及控制菌检查中疑似菌的鉴定程序，以减少菌种污染和⽣长特性的改变，确保实验室安全和实验结果可靠。

⼆、范围：适⽤于实验室所⽤标准储备菌株和控制菌检查中疑似菌的鉴定。

三、职责：品质部：确保使⽤的菌株是可靠的，准确鉴别样品中控制菌，保证实验结果可靠。

四、内容：1、试验菌株:⼤肠埃希菌（Escherichia coli）[CMCC(B)44102]⾦黄⾊葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC(B)26003]枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）[CMCC(B)63501]⽩⾊念珠菌（Candida albicans）[CMCC(F)98001]⿊曲霉（Aspergillus niger）[CMCC(F)98003]铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）[CMCC(B)10104]沙门菌（Salmonella）[CMCC(B)50094]2、菌种确认试验的主要内容：2.1 菌种的纯度确认。

2.1.1 试验内容。

①菌落形态：在特定的培养基上，将待检测培养物稀释涂布或平板划线，适宜培养后，同⼀平板上的单菌落的⼤⼩、形状、颜⾊、质地、光泽等是否相似；对于两种或以上形态的出发菌株，应再分别挑取单菌落划线或稀释涂布培养，检测是否重复出现相同特征。

②镜检特征：对数⽣长期的培养物⾰兰⽒染⾊反应应呈现⼀致性；细胞形状、⼤⼩、荚膜、芽孢等特征应相似。

2.1.2 菌种的特性确认。

⽣化试验：各种微⽣物具有各⾃的独特的酶系统，因⽽在代谢过程中所参与的物质分解和合成代谢的产物也不同，这些代谢产物⼜具有不同的⽣化特征。

根据此特征，利⽤⽣物化学⽅法来鉴定不同的微⽣物的试验即为微⽣物的⽣化试验。

2.1.3 菌种的确定⽅法。

⽤⽆菌接种环粘取培养物，在相应的培养基平板上划线分离单个菌落，并在适宜条件下培养。

培养后观察是否具有典型的菌落形态，然后挑取单⼀纯菌落，进⾏⾰兰⽒染⾊、镜检，观察其染⾊特性及菌形。

检验科微生物菌种管理制度
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检验科微生物菌种管理制度
一、目的
规范微生物菌种日常管理，确保实验室安全及检验结果可溯源性。

二、范围
细菌室保存的标准微生物菌种及来自临床标本的菌株。

三、职责
细菌室检验人员正确保管、使用菌株，并确保实验室生物安全。

四、程序
（一）、设立《菌种管理登记表》，其内容包括：名称、
来源、存入/取出数量、使用日期、保管人等。

（二）、根据菌种特性选择适宜的保存方式。

存放要用小剂量密封瓶，做好标记后放入-80℃冰箱内，并采用双人双锁管理。

（三）、根据菌种情况，定期检测菌种品质，发现菌种变异或退化时应及时报告，并查明原因。

（四）、菌种发放需要双保管人员同时在场的情况下才能进行。

每次使用标准菌株都应做好使用记录，包括标注菌株的名称、编号、使用时间等。

剩余最小库存量时必须进行繁殖。

（五）、购买的标准品菌种初次复苏使用时，应批量保存在菌种管中， -20℃以下保存。

（六）、新的标注菌株复苏后，传代最多不超过 3 次，如超过 3 次将不再作为标准菌株使用。

（七）、标注菌株保存管一经解冻使用后，不得再次使用。

（八）、菌种必须装在密封的专用容器内高压灭菌销毁，并做好销毁记录。

五、菌种管理人员：崔爱丽王晴晴
胡桥乡卫生院
2021年3月11日。

标准菌种管理规程目的：规范药品微生物学检定用菌的管理，最大限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，从而确保微生物学检验结果的准确可靠。

职责：QC主管负责菌种的申购、接受、保存、分发，微生物检验员负责菌种的确认、传代、使用及销毁。

范围：本规程适用于检定用菌种的管理，包括菌种的申购、保存、传代、使用及销毁等。

内容：1 术语标准菌种是指由中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌。

传代用菌种是指用标准菌种制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制备工作用菌种。

工作用菌种是指用标准菌种或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工作使用的菌种。

菌种的代是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即称为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0 代。

2.标准：2.1 检定菌的申购QC主管每年根据检定菌种的使用情况（包括临时检验需要），提出购买计划，交由质量管理部部长审批后，向中检所菌种保藏中心或省（市）药检所购买冻干菌种（标准菌种）；也可以直接向省（市）药检所购买传代用菌种，购买时，需询问与确定菌种的代数，以便传代时控制代数。

2.2 检定菌的接收菌种到达实验室后，由QC主管接收菌种，检查其名称和数量，以及每一支的完整性，同时将菌种的所有信息，填写在《检定菌接收记录》（附表1）上，内容包括：名称、数量、编号（无编号者按检定菌种的编号原则编号）、代数、来源、接收日期、接收人等，贴好标签并储存于2-8?C直到需要使用时。

储存期最长不超过5年。

2.3 检定菌的保存2.3.1 工作用菌种的保存工作用菌种采用斜面低温保存法。

将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌生长充分以后，转移至2~ 8C冰箱中保存。

此法仅用于工作用菌种的短期保存，并应随时检查其污染杂菌和变异等情况，发现异常情况，经应灭活处理后销毁。

保存时间根据菌种种类而不同，细菌：1个月；酵母菌：2个月；霉菌及芽胞：3个月。

生物制品生产、检定用菌种、毒种管理规程1 总则1.1 本规程所称之菌、毒种系指直接用于制造和检定生物制品的细菌、立克次体或病毒，以下简称菌、毒种。

菌、毒种按《中国医学微生物菌种保藏管理办法》第二条分类。

菌、毒种的管理由中国药品生物制品检定所(以下简称检定所)负责。

1.2 各生产单位按规程生产或检定生物制品所用之菌、毒种由检定所或卫生部委托的单位保存、检定及分发。

各生产单位自行分离或收集的菌、毒种，凡拟用于生产或检定者，均须经检定所审查认可。

新生物制品所用的菌、毒种按卫生部《新生物制品审批办法》办理。

1.3 生物制品生产应采用种子批系统。

原始种子库应验明其记录、历史、来源和生物学特性。

从原始种子库传出、扩增后冻干保存的为生产用种子库。

生产用种子批的生物学特征应与原始种子批一致。

每批生产用种子批均应按规程要求保管、检定和使用。

1.4 各生产单位应指定专业部门对本单位的菌、毒种施行统一管理，每年向单位领导书面报告管理情况，并抄报检定所。

1.5 凡增加、减少或变更生产及检定用菌、毒种须经检定所审查认可。

2 菌、毒种登记程序2.1 菌、毒种由检定所统一进行国家菌、毒种编号，各单位不得更改。

各生产单位自行分离、收集的菌、毒种，凡正式用于生产和检定者，经检定所审查同意后给予正式国家编号。

2.2 保管菌、毒种应有严格的登记制度，建立详细的总帐及分类帐。

收到菌、毒种后应立即进行编号登记，详细记录菌、毒种的学名、株名、历史、来源、特性、用途、批号、传代冻干日期、数量。

在保管过程中，凡传代、冻干及分发，均应及时登记，并定期核对库存数量。

2.3 收到菌、毒种后一般应于3个月内进行检定。

用培养基保存的菌种应及时检定。

3 菌、毒种的检定3.1 生产用菌、毒种应按各项制品规程要求定期进行检定。

3.2 所有菌、毒种检定结果应及时记入菌、毒种检定专用记录内。

3.3 不同属或同属菌、毒种的强毒及弱毒株不得同时在同一或未经严格消毒的无菌室内操作。

菌种检定操作规程
《菌种检定操作规程》
一、目的
菌种检定操作规程旨在规范菌种检定过程，确保检定结果准确可靠，保障实验室菌种质量。

二、适用范围
本规程适用于各类实验室对菌种进行检定的操作。

三、设备和试剂
1. 必备设备：无菌工作台、培养箱、平板计数器等。

2. 必备试剂：琼脂培养基、生理盐水、甘油等。

四、菌种检定操作流程
1. 取样准备：将待检菌种进行悬浮液制备或直接取样，保证单一菌种在接种时的质量。

2. 培养基接种：将取样溶液均匀涂敷于琼脂培养基表面，将琼脂培养基放入培养箱进行培养。

3. 孵化：将接种后的琼脂培养基置于培养箱中，进行相应的温度和时间的培养。

4. 菌落计数：使用平板计数器对菌落进行计数，记录结果。

5. 结果分析：根据计数结果，对菌种进行鉴别和鉴定。

五、结果确认与报告
1. 只有经过两名以上实验人员的确认，结果方可出具。

2. 将检定结果填写在检定记录表上，并进行备份存储。

六、质量控制
1. 定期对实验室设备和试剂进行检验、校正。

2. 定期进行内部质量控制，对检定结果进行复核和比对。

七、附则
1. 对于异常情况的处理：出现异常结果时，要及时进行排查并记录处理过程。

2. 本规程未尽事宜，由实验室主管负责进行详细规定。

以上即为《菌种检定操作规程》的内容，希望各实验室严格按照此规程进行菌种检定工作，确保实验室菌种质量及检定结果的准确性。

菌种检验管理制度一、总则为规范菌种检验工作，保障检验结果准确可靠，确保实验室安全，特制定本管理制度。

二、管理范围本制度适用于实验室内所有菌种检验人员及相关人员。

三、菌种检验申请1. 实验室内所有菌种检验均需填写检验申请单，包括样本信息、检验项目、检验目的等内容，并由责任人审核后方可进行检验。

2. 检验申请单需真实填写相关信息，若有虚假情况会造成检验结果的误判。

3. 检验申请单需妥善保存，作为检验结果确认的依据。

四、菌种检验操作1. 所有参与菌种检验工作的人员必须接受专业培训，了解菌种检验操作流程及安全操作规范。

2. 在进行菌种检验时，必须穿戴实验室服装、手套等个人防护用具，避免污染。

3. 在进行菌种培养时，需遵守培养基制备、接种等操作规范，避免细菌交叉感染。

4. 在进行菌种检验时，需做好实验记录，包括检验条件、结果等内容，确保结果可追溯。

五、菌种检验结果确认1. 检验结果需由责任人进行确认，并在检验报告上签字确认。

2. 对于有争议或异常结果，需进行复检及审查，确保结果准确可靠。

3. 对于符合检验标准的结果，需及时通知委托单位，并提供检验报告。

六、菌种检验质量控制1. 实验室需定期进行内部质量控制，包括检验准确性、稳定性等方面的检测。

2. 实验室需定期参与外部质量评价，确保菌种检验结果的准确性。

3. 对于发现的质量问题，需及时处理并采取纠正措施，确保质量持续改进。

七、菌种检验安全1. 所有参与菌种检验工作的人员需了解实验室安全规范，避免发生意外事故。

2. 在进行菌种检验时，需做好实验室消毒、废弃物处理等工作，确保安全。

3. 对于有可能产生危险的菌种，需采取相应的防范措施，确保实验室安全。

八、菌种检验记录管理1. 对于所有菌种检验结果及操作记录，需妥善保存，保密管理。

2. 对于检验结果的修改或调整，需有相应的记录并签字确认。

3. 菌种检验记录需保存一定时间，以备查阅及追溯。

九、违规处理1. 对于违反菌种检验管理制度的行为，将按规定进行处理，包括警告、奖惩等措施。

1.0 目的1.1规范生测组对生物指示剂的接收、质量检查、储藏、使用、销毁标准操作规程。

2.0 范围2.1验证或监控用生物指示剂的管理。

3.0 职责3.1质量控制（QC）部对本操作规程实施负责。

4.0 定义生物指示剂简称BI，是一类特殊的活微生物制品，是对特定灭菌工艺有一定耐受性并且能够定量测定灭菌效力的微生物制剂，可用于确定灭菌设备的性能、灭菌程序的验证、生产过程灭菌效果的监控等。

5.0 规程5.1生物指示剂管理流程图：5.2生物指示剂的接收5.2.1根据验证要求，确定所需要的生物指示剂。

新购入的生物指示剂应由生测组组长接收，购买的生物指示剂应附有相应的质量报告，内容包括微生物种类、孢子量、D 值、有效期等，仔细检查生物指示剂包装是否破损，有破损的剔出，核对生物指示剂的有效期，过期的剔出，核对生物指示剂是否与计划的相一致，不可用的剔出。

5.2.2登记：核对无误后及时填写《生物指示剂接收与发放记录》(R-SMP-QC-0031-02)内容包括生物指示剂名称、批号、数量、规格、生产厂家、接收日期、接收人、领用日期、领用人等。

5.3生物指示剂质量检验：测试内容包括含指示剂菌种形态学鉴别（Gram染色和芽孢染色）、载菌量检测和D值测定。

5.3.1生物指示剂菌种形态学鉴别（Gram染色和芽孢染色）5.3.1.1革兰氏染色操作步骤见《菌种鉴定标准操作规程》（SOP-QC-0009-00）。

5.3.1.2芽孢染色5.3.1.2.1染色试剂：5％孔雀绿水溶液、0.5％番红液5.3.1.2.2染色步骤5.3.1.2.2.1在载玻片上滴上一滴的超纯水，用无菌接种环挑取一颗菌落均匀涂开；5.3.1.2.2.2将载玻片通过酒精灯火焰上方快速来回 2～3 次使之干燥、固定；5.3.1.2.2.3涂片冷却后，滴加5％孔雀绿水溶液，微火加热，使冒蒸汽，但不干涸（随时补加染液）保持 5min；5.3.1.2.2.4倾去染液，待载玻片冷却后用已灭菌去离子水冲洗涂片至孔雀绿不再褪色为止；5.3.1.2.2.5在涂片上方滴加 0.5％番红液复染 1min 后水洗；5.3.1.2.2.6用滤纸吸干后镜检。