山羊痘病毒诱导BHK-21细胞凋亡的检测

山羊痘病毒P32基因的克隆、测序及在原核细胞表达程振涛;岳筠;徐春志;李永明;许乐仁;文明;周碧君【摘要】为比较山羊痘病毒贵州分离株P32基因与国内外分离株的关系,并获得P32蛋白,应用PCR方法从贵州山羊痘病毒分离株的核酸样本中扩增出P32基因片段,将PCR产物克隆至pMDl8-T载体,对重组质粒进行了基因序列测定.将测定的P32基因核苷酸序列和推导的氨基酸序列与GenBank中相应序列作比较,同源性分别达到99.4%和98.4%,表明山羊痘病毒的P32基因具有高度保守性.将P32基因克隆至原核表达载体pET-28a,成功构建重组表达质粒pET-28a-P32/LD,转化至大肠杆菌BL2l(DE3)进行诱导表达.SDS-PAGE检测显示,重组细菌在35.5 kDa处表达一条特异性的蛋白带,而阴性对照未见这条蛋白带;Western-Blotting检测证实,这条蛋白带能与山羊痘高免血清反应而显示其免疫学活性.【期刊名称】《江苏农业科学》【年(卷),期】2008(000)004【总页数】4页(P57-60)【关键词】山羊痘病毒;P32基因;基因克隆;序列分析;原核表达【作者】程振涛;岳筠;徐春志;李永明;许乐仁;文明;周碧君【作者单位】贵州大学动物疫病研究所/贵州大学动物科学学院,贵州贵阳550025;贵州大学动物疫病研究所/贵州大学动物科学学院,贵州贵阳550025;贵州大学动物疫病研究所/贵州大学动物科学学院,贵州贵阳550025;贵州大学动物疫病研究所/贵州大学动物科学学院,贵州贵阳550025;贵州大学动物疫病研究所/贵州大学动物科学学院,贵州贵阳550025;贵州大学动物疫病研究所/贵州大学动物科学学院,贵州贵阳550025;贵州大学动物疫病研究所/贵州大学动物科学学院,贵州贵阳550025【正文语种】中文【中图分类】S852.654山羊痘是由山羊痘病毒(goat poxvirus，GPV）引起的一种高度接触性传染病，临床上以发热、皮肤和黏膜上出现痘疹为特征。

畜 牧 兽 医2021年第11期新农民山羊痘病毒属病毒检测技术分析邵 坤（河南省周口市淮阳区动物疫病预防控制中心，河南 周口 466000）摘要：近年来，我国畜牧业高速发展，逐渐呈现出规模化的养殖方式，在提高了养殖效率的同时，也增加了病毒传播的概率，山羊痘病毒属病毒在畜牧业中是一种比较常见的病毒，包括山羊痘病毒、绵羊痘病毒等，会严重影响牲畜的正常发育，造成巨大的经济损失，本文对山羊痘病毒属病毒的检测技术做出了讨论。

关键词：山羊痘病毒属病毒；病毒检测山羊痘病毒属病毒传播速度快，传播范围广，死亡率高，是动物痘病毒中最危险的一种，最早于13世纪英国被发现，被美国疫情控制中心划归为危险病毒，在中国、瑞典等地也有人感染羊痘病毒的情况，羊痘病毒属病毒的防治关乎着公共卫生安全，因此对山羊痘病毒属病毒检测技术进行深入分析具有重要意义。

1 山羊痘病毒属病毒简述及特点山羊痘病毒属病毒属于痘病毒科脊椎动物痘病毒亚科病毒，主要包括山羊痘病毒、绵羊痘病毒、牛结节疹病毒等，对牛、羊等养殖业危害严重，甚至有感染人的现象，被世界卫生组织列为A类病毒，具有非常强大的传播性和危害性，13世纪在英国被首次发现，感染山羊痘病毒属病毒的牲畜发病率达到了70%左右，其中死亡率在20%到80%之间，羔羊的死亡率甚至可以达到100%，世界各国均有相关案例出现，目前在非洲、中东等地较为流行。

感染了山羊痘病毒、绵羊痘病毒、牛结节疹病毒等的动物，会出现身体发热，皮肤、粘膜、器官表面出现丘疹或结节的现象，严重时会发生皮肤水肿、身体消瘦、毛色暗淡枯黄、淋巴结肿大、乳量下降，甚至是死亡等情况，这种病毒一旦爆发将会给地区的养殖业带来巨大危害，严重损害养殖主的经济利益，甚至危害生命安全。

我国将山羊痘、绵羊痘等疾病列为了一级动物疾病，对其高度关注，因此对山羊痘病毒属病毒的检测技术进行深入分析与研究意义重大。

2 山羊痘病毒属病毒检测技术2.1 病原学检测 病原学检测是一种常见的山羊痘病毒属病毒检测方法，是一种将病毒分离出来的检查技术，需要采集染病动物皮肤和粘膜上的痘疹、痘斑，当染病动物进入发热期需要采集其血液、淋巴结细胞和肺部病变组织。

兔出血症病毒诱导BHK-21细胞凋亡及其VP60蛋白单克隆抗体制备兔出血症病毒诱导BHK-21细胞凋亡及其VP60蛋白单克隆抗体制备引言兔出血症病毒（rabbit hemorrhagic disease virus，简称RHDV）是一种造成家兔高致命性出血性疾病的病毒，属于RNA病毒科。

该病毒的主要外壳蛋白为VP60，在病毒感染中起到关键作用。

本研究旨在探究RHDV感染下BHK-21细胞的凋亡变化，并通过制备VP60蛋白的单克隆抗体为后续病毒治疗及相关研究提供实验基础。

材料与方法1. 细胞培养：采用BHK-21细胞作为细胞模型，将其在含有DMEM培养基和10%胎牛血清的培养皿中培养至80%的细胞密度。

2. 病毒感染：将培养好的BHK-21细胞分为实验组和对照组，实验组接种RHDV，并不同时间点取样。

3. 细胞凋亡检测：采用流式细胞术检测感染后BHK-21细胞中凋亡细胞的比例，并比较实验组和对照组的差异。

4. VP60蛋白纯化：将RHDV中提取VP60蛋白，并通过离心和洗涤等步骤进行纯化。

5. 序列分析：对VP60蛋白进行质谱测序和氨基酸序列分析，以确定其结构和功能信息。

6. 单克隆抗体制备：将纯化的VP60蛋白注射到小鼠体内，获得抗体阳性小鼠后，制备小鼠的脾细胞瘤并融合至免疫阳性鼠鞘细胞，最终通过筛选和克隆获得目标VP60单克隆抗体。

结果与讨论1. RHDV感染导致BHK-21细胞凋亡增加：实验组中感染后的BHK-21细胞中凋亡细胞比例明显增加，且感染时间越长，凋亡细胞比例越高，与对照组相比存在显著差异。

2. VP60蛋白纯化：通过组织工程学技术，成功提取和纯化了RHDV的VP60蛋白，得到了高纯度的目标蛋白样品。

3. VP60蛋白序列分析：质谱测序和氨基酸序列分析结果表明，VP60蛋白为带有糖基化位点的酸性蛋白，具有一定的糖基化修饰。

4. VP60单克隆抗体制备：通过小鼠体内免疫和细胞融合技术，成功制备出具有高效性且特异性的VP60单克隆抗体。

贵州山羊痘的病原学研究与血清学检测摘要2002年10月以来,贵州省8个养羊场相继发生一种以皮肤、呼吸道和消化道粘膜出现痘疹的传染病。

通过电镜观察在痘疹材料中发现大量典型的痘病毒粒子；感染鸡胚后绒毛尿囊膜增厚、充血和出现痘斑;接种BHK21单层细胞引起明显的细胞病变效应，而且这种现象能够被山羊痘参考血清所抑制。

血清学检测结果表明，患病羊痘疹材料中山羊痘抗原的阳性率为66.7%；血清样本中山羊痘抗体的阳性率为47.4%。

根据对本次疫病的病原学研究和血清学检测，可以确诊贵州省发生了山羊痘暴发流行。

关键词山羊痘；电镜观察；绒毛尿囊膜；细胞病变效应；血清学检测山羊痘（goat pox）是由山羊痘病毒属（capripoxvirus）、山羊痘病毒（goat poxvirus，GPV）引起的一种呈地方流行、高度接触性传染病，1997年OIE将其列为A类动物传染病。

本病一年四季均可发生，但春秋常见，不分性别、年龄、品种，主要流行于北非、中东、欧洲、亚洲及澳大利亚[1]。

近年来，我国福建[2]、陕西[3]、南京[4]、江苏[5]等地均有暴发流行，贵州省属首次发生[6]。

自2002年10月以来，在贵州省修文、镇远、铜仁和遵义等8个地（县）养羊较为集中的乡（镇）相继暴发流行一种全身皮肤及部分粘膜出现痘疹的传染病，患病羊主要表现发热、体温升高41—42℃，食欲减退乃至废绝，精神萎顿，眼结膜潮红、流泪，鼻和眼流脓性分泌物。

大部分病羊在眼、唇、鼻、颊，腹部和尾内侧无毛处出现大小不等的红疹，严重时病变波及全身皮肤和部分内脏器官。

1—4d后形成小的丘疹突出于皮肤和内脏器官表面，逐渐扩大为灰白色石头样的硬结节。

在舌面和气管粘膜形成丘疹—水疱型，水疱破溃后形成痂块，最后痂块脱落遗留白色的痕迹。

在疫区随机剖检10只病羊：皮肤痘疹（10/10）、瘤胃痘疹（4/10），气管和支气管有黄豆大小卵圆形水疱（4/10），肺部可见融合的实变区和大量分布于肺表面的硬结节（6/10）。

绵羊痘的防治技术及处理方法-养羊技术绵羊痘也叫做绵羊天花，是感染绵羊痘病毒所致一种热性、急性传染病，发病率和死亡率都较高，尤其是羔羊死亡率可达100％，妊娠母羊患病后容易发生流产，严重损害养羊业的经济效益。

检疫人员在屠宰检疫时必须按照宰前、宰后检疫程序操作，方可有效防止疫情的蔓延和发生。

下面我们一起来看看绵羊痘的防治技术及处理方法。

1、宰前检疫群体检疫。

根据羊群的产地、种类以及入场时间来分批分圈，然后进行检查。

首先对羊群进行静态检查，即检疫员进入到圈舍内，在不会影响羊群的情况下对其进行仔细观察，如立卧姿势、反刍、呼吸以及机体对外界刺激的反应能力等状态，并观察看是否存在流涎、气喘、咳嗽等症状。

接着要对羊群进行动态检查，即在轰赶圈内羊群或者卸载后驱赶到饲养圈内的过程中，对机体的运动状态进行观察，看是否存在走动困难、步态不稳等情况。

最后是对羊群进行状态检查，即在采食过程中，观察是否存在吞咽困难、贪饮、少食或者停食等症状，还要观察粪尿颜色、气味、形态存在异常。

个体检疫。

通过群体检疫将弱羊以及疑似病羊隔离，然后逐只进行个体检疫。

主要采取视诊、触诊以及听诊等方式，如有需要还可采取微生物学、实验室检查。

检查被毛、皮肤，观察被毛是否光滑、平顺或者杂乱不整、发生脱落等，皮肤是否存在红肿、瘢痕、溃烂等。

检查五官，即观察眼和结膜是否存在潮红、苍白、黄疸、发绀、肿胀、溃疡、出血以及结节等症状；鼻镜湿润、光滑与否，鼻腔内是否存在异常分泌物，鼻黏膜是否发生肿胀、破溃；口腔是否散发异味，口腔以及舌黏膜是否发生肿胀、破溃等。

疫病症状。

发病初期，羊群中只有少数羊出现发病，接着快速蔓延至全群。

病羊的主要特征是体温明显升高，能够达到大约41℃，脉搏、呼吸加快，有时会出现呼吸困难的现象，精神沉郁，采食量下降或者完全废绝，往往呈俯卧状。

眼结膜肿胀、潮红，有黏性鼻液从鼻孑L流出，症状较严重时会在眼角处堆积有乳白色的脓样分泌物，羞明流泪，角膜变得混浊，视力下降，有浆液性、黏液性和脓性鼻液流出，部分甚至在唇部也出现水泡，严重时唇上的水泡会发生溃烂，出现上述症状经过1一4天就会在机体少毛或者无毛处开始出现圆形的红色斑点，如上下唇、眼睑、鼻孔、胸腹部、尾根部、外阴部、乳房以及周围等；部分已经形成如同黄豆或者蚕豆大小的丘疹，用手指按压褪色，且触感较硬。

用BHK—21悬浮细胞培养法生产试验狂犬病疫苗
李凯年
【期刊名称】《畜牧兽医科技信息》
【年(卷),期】1997(000)008
【摘要】最近,法国巴斯德研究所的研究人员用适于生物反应器悬浮培养的BHK-21细胞系制备了一种试验狂犬病疫苗。

使用研制供各种细胞系培养和生产某些生物制剂用的一种新的无血清培养基
【总页数】1页(P7-7)
【作者】李凯年
【作者单位】
【正文语种】中文
【中图分类】S859.79
【相关文献】
1.三株 BHK-21悬浮细胞培养特性比较 [J], 武发菊;尚勇良;孙玉霞;董文教;安芳兰;万玉林;刘学荣;杨进才
2.生物制品生产中BHK-21传代细胞培养 [J], 高婕;魏新;吴家骥;庄仁礼
3.浅谈疫苗生产中BHK21细胞培养工艺的改进 [J], 沈铭强;许士杰;沈青
4.BHK-21细胞无血清悬浮培养生产新城疫病毒 [J], 姬阿美; 白春丽; 叶倩; 周燕; 刘旭平; 谭文松; 刘志亮
5.应采用细胞培养法取代动物试验法检定狂犬病疫苗 [J], 严家新;祝玉桃;徐葛林;黄仕和;方志正
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现代畜牧兽医2018年第9期刘艳霞：微载体培养BHK-21细胞生产狂犬病毒Flury株的研究狂犬病（Rabies）是由狂犬病毒感染引起的一种致死性、人兽共患的传染病，表现为急性、进行性、几乎不可逆转的脑脊髓炎，临床表现恐水、怕风、兴奋、咽肌痉挛、流涎、进行性瘫痪等症状，最后因呼吸、循环衰竭而死亡[1]。

犬狂犬病在80多个国家和地区广泛分布，主要是发展中国家。

99%以上的人狂犬病病例的病毒都来自于犬[2]。

通过大幅度提高犬的免疫覆盖率，在控制了犬狂犬病流行的同时也使人狂犬病的发病率显著降低[3-4]。

狂犬病弱毒活疫苗的安全性一直令人担忧[5]，2017年7月1日，农业部发布第2514号公告，停止生产使用狂犬病活疫苗（包括多联活疫苗）。

目前国内市场上兽用狂犬病灭活疫苗毒株主要为FluryLEP株、Flury株、PV206株、CVS-11株、CNT-1株、SAD株、dG株、PV/BHK-21株，其中绝大多数采用传统的转瓶培养工艺进行生产。

高滴度的抗原液是疫苗生产中非常重要的一微载体培养BHK-21细胞生产狂犬病毒Flury株的研究刘艳霞（辽宁益康生物股份有限公司，辽宁辽阳111000）摘要：本文主要研究了利用生物反应器Tide-Cell微载体培养的BHK-21细胞生产狂犬病毒Flury株工艺。

总数为1×1010个BHK-21细胞接入装有500g BioNOCTMⅡ型载体的Tide-Cell培养系统，最适条件下培养120h。

当细胞培养系统中葡萄糖消耗量达到8g/（L·h）左右，细胞数达到4×1011时，按照MOI为1接入Flury株病毒。

一批至少可以收获10次（50L/次）毒价高于107.5TCID50/mL的抗原液，其中包含5次毒价为108.0TCID50/mL 的抗原液。

提高抗原液病毒含量有助于提升狂犬病灭活疫苗效价，从而降低生产成本。

关键词：微载体；BHK-21细胞；狂犬病毒；Flury株中图分类号：S852.65文献标识码：B文章编号：1672-9692(2018)09-0006-04 Production of Flury Strain of Rabies Virus by MicrocarrierCulture of BHK-21CellsLiu Yanxia(Liaoning Yikang Blological Corporation Limited,Liaoning Liaoyang111000)Abstract:In this paper,we studied the process of BHK-21cells cultured in Tide-Cell bioreac‐tor filled microcarrier manufacture rabies virus Flury strain.1×1010BHK-21cells were seeded to bioreactor cell culture system(CCS)bioreactor equipped with500g BioNOCTMⅡvector and cultured optimum parameters.Flury virus(MOI=1)were seeded with8g/L·h glucose consumption and4×1011 total cells in cell culture system after120h.Every time would have harvest50L antivirus so‐lution(TCID50>107.5/mL)and10times for each batch,including antivirus solution TCID50about108.0/mL for5times.Increase the virus content of the antivirus solution help to improve the efficacy of rabies inactivated vaccine,it contribute toreduce production cost.key words:Microcarrier;BHK-21cells;Rabies virus;Flury strain收稿日期：2018-07-27作者简介：刘艳霞（1981-09），女，黑龙江省齐齐哈尔人，本科，兽医师，主要从事兽用生物制品研发工作。

山羊痘直接荧光抗体检测方法的建立与应用周碧君;岳筠;徐春志;程振涛;罗阿东;周思旋;李永明【期刊名称】《中国兽医科学》【年(卷),期】2008(38)4【摘要】用兔抗山羊痘病毒IgG制备荧光抗体,检测了临床发病山羊皮肤痘疹切片和山羊痘病毒B、Y、LD和QL株感染的BHK-21细胞中的病毒抗原。

结果,皮肤痘疹切片、感染细胞抹片及飞片均呈阳性,而正常山羊皮肤和细胞对照为阴性;荧光抗体的最适工作浓度为1∶32,且这种荧光可被山羊痘标准阳性血清特异性抑制。

表明,建立的山羊痘直接荧光抗体检测方法能对临床发病山羊皮肤痘疹和感染细胞中的山羊痘病毒抗原进行定位检测,为临床诊断山羊痘提供了一种简单快速的方法。

【总页数】4页(P323-326)【关键词】山羊痘病毒;荧光抗体;建立;应用【作者】周碧君;岳筠;徐春志;程振涛;罗阿东;周思旋;李永明【作者单位】贵州大学动物科学学院;贵州大学动物疫病研究所【正文语种】中文【中图分类】S852.659.1【相关文献】1.应用间接竞争ELISA检测山羊痘抗体方法的建立 [J], 何光志;周颖;田维毅;王平;王文佳;韩洁;安永如;简昌友;崔小东2.山羊痘病毒TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法的建立与应用 [J], 程振涛;岳筠;李永明;许乐仁;王开功;周碧君;陈军义;李俊;江楠3.山羊痘病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用 [J], 姚俊;段国军;陈官国;彭海生;鲁富有;杨永军;李华春4.禽波氏杆菌免疫荧光检测和抗体检测ELISA方法的建立与应用 [J], 杨春晓;王小娥;刘冠华;肖海君;崔金生;朱瑞良5.鸭源大肠杆菌荧光抗体的制备及直接荧光抗体染色法的建立 [J], 伍红贤;海泉;张焕容;杨发龙因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

广西地方标准《羊痘病毒、羊传染性脓疮病毒的检测二重聚合酶链反应法》（征求意见稿）编制说明一、项目来源和目的，工作概况1. 项目背景山羊痘是山羊痘病毒（goatpox virus, GTPV）引起的一种高度接触性传染病，以发热、全身痘疮、结节和死亡为特征。

该病危害严重，我国农业部将其列为一类动物疫病。

羊传染性脓疮由羊传染性脓疮病毒（orf virus, ORFV）引起的一种接触性、嗜上皮性传染病，侵害绵羊、山羊和野生反刍兽以及人，以在口唇、舌、鼻、乳房等部位形成丘疹、水疱、脓疱和痂皮为特征，呈全世界广泛流行。

由于山羊痘和羊传染性脓疮在临床症状上较为相似，容易误诊，常规血清学试验存在明显的交叉反应。

实验室可采用电镜、病毒中和实验、抗原捕获ELISA以及PCR等方法鉴别并区分两种病毒。

但是，上述方法在实际应用中尚存在一定的缺陷。

例如，电镜观察需要有昂贵的设备，这对于基层单位而言是不可能获得的；病毒中和试验耗时长、操作烦琐，在操作过程中需要活的细胞和病毒，而细胞、病毒的保存需要超低温条件，因此也难以在基层推广；抗原捕获ELISA目前尚未有标准化的试剂盒面市。

尽管国内外不少研究者已相继建立了分别检测上述两种病毒的单联PCR方法，但由于需要分别进行操作，这增加了在同时检测两种疫病时的成本和操作复杂性，并增加了污染的可能。

2. 项目来源本标准为自治区质量技术监督局下达广西动物疫病预防控制中心承担的2010年第二批广西地方标准制定（修订）计划任务项目（桂质监函[2010]342号），编号为2010-2036。

3. 项目目的对于山羊痘和羊传染性脓疮检测和诊断，目前尚无国家标准，只有《NY/T 576-2002 绵羊痘和山羊痘诊断技术》一项农业部行业标准。

但该标准只提供了中和试验、电子显微镜检查和包涵体检查等3种实验室检测方法。

其中中和试验和电子显微镜检查不适合在基层单位运用，包涵体检查检出率较低，结果易受干扰，而且也无法区分山羊痘和羊传染性脓疮。

东北农业大学网络教育学院第一章、第二章练习题参考答案一、填空题1、依据病原体的种类和先后顺序可将感染分为单纯感染混合感染原发感染继发感染2、国际兽医局规定的A类传染病有口蹄疫水疱性口炎猪水疱病猪瘟非洲猪瘟非洲马瘟牛瘟牛传染性胸膜肺炎蓝舌病小反刍兽疫裂谷热疙瘩皮肤病绵羊痘和山羊痘高致病性禽流感鸡新城疫3、家畜传染病发展的阶段包括潜伏期前驱期症状明显期转归期4、动物传染病在流行过程中的主要表现形式包括散发流行地方性流行大流行5、采取隔离封锁的基本原则早快严小二、名词解释1、感染：病原微生物侵入动物机体，并在一定的部位定居，生长繁殖，从而引起机体一系列病理反应，这个过程称为感染。

2、生物安全：主要是采取必要的有效措施，最大限度地消除各种理化和生物性致病因子对人和动物的危害，是动物生产中的一种安全保障体系。

3、传染病：凡是由病原微生物引起，具有一定的潜伏期和临诊表现，并具有传染性的疾病，称为传染病。

4、检疫：是指利用各种诊断和检测方法对动物及其相关产品和物品进行疫病、病原体和抗体的检查。

5、隔离：将不同健康状态的动物严格分离、隔开、完全、彻底切断其间的来往接触，以防疫病的传播、蔓延即为隔离。

6、自然疫源性疾病：有些病原体在自然条件下，即使没有人和动物的参与，也可以通过传播媒介感染宿主造成流行，并且长期在自然界循环延续其后代，人和动物疫病的感染和流行，对其在自然界的保存来说不是必要的，这种现象称为自然疫源性，具有自然疫源性的疾病，称为自然疫源性疾病。

7、慢病毒感染：又称长程感染是指潜伏期长，发病呈进行性且最后常以死亡为转归的病毒感染。

8、紧急接种：紧急接种是在发生传染病时，为了迅速控制和扑灭疫病的流行，而对疫区和受威胁区尚未发病的畜禽进行的应急性免疫接种。

9、假定健康动物：在有传染病疫情发生时，疫区内除了患病动物和可疑感染动物以外，其它易感动物都属于假定健康动物。

10、地方流行性：在一定的地区和畜群中，带有局限性传播特征的，并且是比较小规模流行的家畜传染病，可称为地方流行性三、简答题1、简述造成动物传染病流行的基本环节？答：家畜传染病的流行过程，就是从家畜个体感染发病发展到家畜群体发病的过程，也就是传染病在畜群中发生和发展的过程。

山羊痘病毒NM株的分离鉴定
切环
【期刊名称】《中国畜牧兽医》
【年(卷),期】2013(40)7
【摘要】从内蒙古牛场疑似山羊痘病毒感染的病羊中分离到1株病毒,命名为NM 株.取病羊的皮肤痘疹和水疱作病料样品,分别接种BHK-21传代细胞和10日龄SPF鸡胚.结果表明,BHK-21细胞出现了明显的、规律的细胞病变,鸡胚接种部位出现了明显的痘斑；NM株细胞毒和胚毒均能够被山羊痘病毒阳性血清所抑制.利用1对山羊痘病毒特异性检测引物对NM株病毒进行PCR扩增,获得445 bp片段,与预期大小一致.将扩增产物提纯后克隆至pMD18-T载体,经酶切鉴定正确后,对阳性克隆株进行序列测定,结果表明,NM株的基因片段与已发表的山羊痘病毒毒株的相应基因片段具有高度同源性,同源性在99.2％～100％之间.
【总页数】3页(P179-181)
【作者】切环
【作者单位】青海省贵德县畜牧兽医站,青海贵德811700
【正文语种】中文
【中图分类】S852.65+4
【相关文献】
1.重庆地区山羊痘病毒分离鉴定及其动物模型构建 [J], 丁玉春;林玲;罗林;张成刚;吴梦
2.规模化羊场山羊痘病毒的分离鉴定及其P32基因的分析 [J], 杨世发;朱瑞良;崔国林;钟世勋;左雪梅;高秀妹;梁漫飞
3.猪痘病毒江西株(SWPV-JXO1株)的分离鉴定 [J], 邓舜洲;蒋新华;冷闯;张文波
4.山羊痘病毒的分离鉴定及生物学特性的研究 [J], 刘棋;黄夏;郭建刚;陈义祥;郑敏;邓朝阳;李华明;邹联斌
5.鸡痘病毒FJ01株的分离鉴定 [J], 高映雪; 林敏; 胡换仪; 刘小兰; 刘昌锦; 万文忠; 罗锋; 邓舜洲
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重庆地区山羊痘病毒分离鉴定及其动物模型构建丁玉春;林玲;罗林;张成刚;吴梦【期刊名称】《中国草食动物科学》【年(卷),期】2018(038)003【摘要】该研究旨在对重庆地区一疑似山羊痘病病例进行病原分离鉴定,并构建动物模型,分析其致病性.利用临床诊断与实验室诊断技术,对山羊痘进行鉴定,并利用BHK21细胞对山羊痘病毒进行分离纯化,将纯化到的毒株人工感染3月龄羔羊,构建动物模型,分析羔羊发病情况.分子鉴定结果表明:PCR扩增出了山羊痘病毒P32基因特异性条带,经测序共815bp,该序列在NCBI中经BLAST比对与山羊痘病毒(NCBI登录号:AY880717.1)的同源性最高(99%),且在系统进化发育树中也与其聚为一簇;细胞培养结果表明,在接种72h后,细胞出现变圆、聚集和脱落的现象;攻毒结果显示,实验组羊只体温升高(42℃),第7天在唇部和尾根部出现红色丘疹和水泡,第15天唇部出现褐色结痂.该研究为山羊痘的防治和致病机理研究奠定了基础,也为山羊痘地方株疫苗研究提供了理论依据.%In this paper,the suspected case that was capripoxvirus was isolated and identified, the animal model was also constructed so as to analyze the pathogenicity. The capripoxvirus was identified with clinical diagnostic and laboratory diagnostic techniques. The capripoxvirus was isolated and purified by BHK21 cells. For constructing animal model,the purified strain was used to infect three-month-old kids so as to analyze the incidence. The molecular identification results indicated that the special bands of P32 gene in capripoxvirus were found by PCR,the target gene sequenced 815 base pairs,the sequencehomology between the target gene and capripoxvirus (NCBIID:AY880717.1)was 99% by BLAST comparing,at the same time,they were the same group in the phylogenetic tree by clustering analysis. The results of cell culture showed that the cells appeared rounded,aggregated and shedding after inoculated 72 h. By toxicity testing,as for experimental goats,their body temperature was 42℃,red papules and blisters appeared on the lip and tail on the 7th day. The brown knots appeared on the lip on the 15th day. Therefore,the basic data were accumulated to prevent and further research capripoxvirus,furthermore,the results were helpful to develop the local strain vaccine of capripoxvirus.【总页数】4页(P39-42)【作者】丁玉春;林玲;罗林;张成刚;吴梦【作者单位】重庆市畜牧科学院,重庆402460;重庆市畜牧科学院,重庆402460;重庆市畜牧科学院,重庆402460;重庆市畜牧科学院,重庆402460;重庆市畜牧科学院,重庆402460【正文语种】中文【中图分类】S827.7【相关文献】1.规模化羊场山羊痘病毒的分离鉴定及其P32基因的分析 [J], 杨世发;朱瑞良;崔国林;钟世勋;左雪梅;高秀妹;梁漫飞2.山羊痘病毒NM株的分离鉴定 [J], 切环3.江苏地区2株山羊痘病毒的分离与鉴定 [J], 易成功;朱相儒;满成连;韩卫洲;张伟伟;秦涛;陈素娟;彭大新;夏同海4.共表达口蹄疫病毒vp1基因和山羊IFN-γ基因的重组山羊痘病毒的构建 [J], 海岗;韩宗玺;邵昱昊;王芳;陈洪岩;刘胜旺5.山羊痘病毒的分离鉴定及生物学特性的研究 [J], 刘棋;黄夏;郭建刚;陈义祥;郑敏;邓朝阳;李华明;邹联斌因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

低血清培养的BHK21细胞染色体遗传稳定性分析陈苗苗;董金杰;杜平【摘要】目的:分析1种商业化的低血清培养基适应BHK21细胞进行传代培养,该细胞染色体的变异稳定性,以判定其质量.方法:采用直接法制取4个代次的BHK21细胞的染色体标本,用常规Giemsa染色,1 000倍光学显微镜下计数中期分裂相染色体数目,求出染色体变异率(％),并进行核型分析.结果:BHK21为亚二倍体或亚四倍体细胞系,亚二倍体众数为42,亚四倍体细胞众数为72～74,该细胞系染色体的畸变率在各代次所占的比例为0～2％,均较低.结论:用商业化的低血清培养基驯化培养BHK21细胞,逐渐降低培养液中血清含量,进行传代培养,通过选取不同代次细胞的染色体进行核型分析,该细胞系的遗传学特性相对稳定,各代次间无本质差异,可候选为制苗用细胞.【期刊名称】《贵州畜牧兽医》【年(卷),期】2016(040)004【总页数】4页(P9-12)【关键词】低血清;BHK21细胞;染色体;遗传稳定性【作者】陈苗苗;董金杰;杜平【作者单位】中农威特生物科技股份有限公司,甘肃兰州730046;中农威特生物科技股份有限公司,甘肃兰州730046;中农威特生物科技股份有限公司,甘肃兰州730046【正文语种】中文【中图分类】Q813.1+1BHK21是源于幼仓鼠肾的一种传代细胞系［1，2］。

由于BHK21细胞对口蹄疫病毒敏感，且又是口蹄疫病毒很好的宿主细胞，所以在口蹄疫疫苗生产中，都使用BHK21细胞对口蹄疫病毒进行繁殖。

无论是传统的转瓶工艺还是悬浮培养工艺，都以贴壁的BHK21细胞为驯化对象，由权威机构的ATCC保存的BHK21细胞，在其介绍中明确说明，此传代细胞遗传上具有一定的变异性。

为了能够保证口蹄疫病毒生产的高效性，保证宿主细胞的遗传稳定性则是重中之重。

目前能够检测细胞变异系数的有效方法就是核型分析，这是细胞遗传学及细胞生物学的核心基本技术之一。

这一技术可以用于研究细胞和组织及个体的特异性鉴定、遗传变异、种属进化关系。