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化学发光免疫技术课件培训课件

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《化学发光免疫分析》课件

《化学发光免疫分析》课件
内分泌疾病诊断
在内分泌疾病的诊断中，化学发光免疫分析可用于检测激素、维生素 D等，有助于评估患者的内分泌功能状态。
在药物研发中的应用
药效学研究
化学发光免疫分析可用于研究药物对生物体的作用机制和效果， 为新药研发提供重要的药效学数据。
药物代谢动力学研究
通过化学发光免疫分析技术，可以研究药物在体内的吸收、分布、 代谢和排泄过程，为新药研发提供药物代谢动力学数据。
04
化学发光免疫分析的优缺 点
优点
高灵敏度
化学发光免疫分析具有较高的灵敏度， 能够检测到极低浓度的目标物质，如肿
瘤标志物、激素等。
稳定性好
化学发光标记物在长时间内保持稳定 ，不易降解，提高了检测的可靠性。
宽线性范围
该方法具有较宽的线性范围，能够检 测到目标物质在较大浓度范围内的变 化。
自动化程度高
特点
高灵敏度、高特异性、低背景干扰、 操作简便、可实现自动化检测等。
历史与发展
1 2 3
起源
20世纪70年代，随着酶标记技术的发展，研究 者开始探索利用化学发光反应进行免疫分析。
发展历程
经过几十年的研究和发展，化学发光免疫分析技 术不断完善，成为一种成熟且应用广泛的免疫分 析方法。
最新进展
新型的化学发光标记物和检测系统不断涌现，提 高了检测的灵敏度和特异性，拓展了应用范围。
在生物医学研究中的应用
生物标志物检测
基因表达分析
化学发光免疫分析可用于检测生物体 中的各种生物标志物，如激素、细胞 因子、生长因子等，有助于研究生物 体的生理和病理过程。
结合其他技术，化学发光免疫分析可 以用于基因表达分析，检测基因表达 产物的蛋白质水平，从而研究基因功 能和调控机制。

化学发光免疫分析技术【检验科】--ppt课件

化学发光免疫分析技术【检验科】--ppt课件

是目前世界公认先进的标记免疫测定技术，化学发光
免疫分析技术具有高度的准确性和特异性，成为检验方法 中最为重要的技术之一。化学发光免疫分析技术作为疾病 诊断的主要手段已被广泛用于机体免疫功能、传染性疾病 、内分泌功能、肿瘤标志物、性激素、甲状腺功能等方面 的体外诊断实验中。
化学发光免疫分析的优势
• 灵敏度高
• 参考范围： FT3：2.3—4.0pg/mL FT4：0.6—1.2ng/dL
• 临床意义：
血清FT3和FT4升高：⑴甲亢；⑵低T3综合征，由于5’脱碘酶受抑制，T4外 周脱碘作用障碍使FT4升高；⑶甲状腺素不敏感综合征， FT3和FT4升 高，而无甲亢表现；⑷某些药物，胺碘酮、肝素等可使FT4升高；FT3 适合于甲亢和左旋甲状腺素治疗中药物是否过量的判断。
电化学发光免疫分析示意图
电化学发光免疫测定示意图
标记磁颗粒在电场中发光工作示意图
目前我院最新引进的迈瑞CL-2000i 全自动化学发光免疫分析系统 主要以化学发光酶免疫分析为主。拥有国内完全自主知识产权，它的 酶促化学发光是目前免疫诊断中最灵敏的化学发光体系之一，其核心 性能达到了国际同类产品先进水平。
• 化学发光免疫分析仪是通过检测患者血清内待测物质从而 对人体进行免疫分析的医学检验仪器。将定量的患者血清 和辣根过氧化物（HRP）加入到固相包被有抗体的白色不 透明微孔板中，血清中的待测分子与辣根过氧化物酶的结 合物和固相载体上的抗体特异性结合。分离洗涤未反应的 游离成分。然后，加入鲁米诺Luminol发光底液 ，利用化 学反应释放的自由能激发中间体，从基态回到激发态，能 量以光子的形式释放。此时，将微孔板置入分析仪内，通 过仪器内部的三维传动系统，依次由光子计数器读出各孔 的光子数。样品中的待测分子浓度根据标准品建立的数学 模型进行定量分析。最后，打印数据报告，以辅助临床诊 断。

化学发光免疫技术 ppt课件

化学发光免疫技术 ppt课件

HRP
对-羟基苯乙酸（HPA）
• HPA在H2O2存在下被HRP氧化成氧化二聚体（荧光 物质），在350nm激发光作用下，发出450nm波长 的荧光，可用荧光光度计测量。
1.2 HPA
H2O2 HRP
HO
CH2 COOH
+荧 光
HO
CH2 COOH
氧化二聚体
AMPPD
• AMPPD在碱性条件下，被AP酶解生成相当稳定的 AMP-D阴离子，其有2～30min的分解半衰期，发 出波长为470nm的持续性光，在15min时其强度 达到高峰，15～60min内光强度保持相对稳定。
N Ru疫测定（CLEIA）
一、原理 属于酶免疫测定的一种。只是最后一 步酶反应所用底物为发光剂，通过发光反应
发出的光在特定的仪器上进行测定。
二、技术类型 根据酶促反应底物不同可分为： 1.荧光酶免疫测定技术 2.化学发光酶免疫测定技术 根据免疫学反应模式分 1.双抗体夹心法和双抗原夹心法 3.固相抗原竞争法：
荧光酶免疫测定技术反应原理图
E E E
洗涤
弃上清
E
E
E
E
4 M U E 激 发 荧 光
是利用理想的酶荧光底物，生成的产物稳定并有 碱性磷酸酶 标记抗体 样 本 抗体包被 强的荧光强度，通过测定荧光强度进行定量。
化学发光酶免疫测定技术反应原理图
E E E
洗涤
弃上清
E
E
E
E A M P P D 发
E
化学发光免疫技术
第一节
发光与化学发光剂
第二节 第三节
第四章
发光酶免疫测定（CLEIA） 化学发光免疫测定技术(CLIA)
电化学发光免疫测定技术(ECLI)

《发光免疫技术》课件

《发光免疫技术》课件
和有害物质。
PART 05
发光免疫技术的实验操作 流程
实验前的准备
实验材料
确保所有实验材料都经 过校准和验证，确保其
准确性和可靠性。
实验环境
确保实验室环境清洁、 无尘，并符合相关规定
和标准。
实验人员
实验人员应具备相关知 识和技能，熟悉实验操
作流程和注意事项。
实验设计
根据实验目的和要求， 设计合理的实验方案， 明确实验步骤和注意事
结果能够赢得客户的信任和行业的认可。
03
符合法规要求
按照相关法规和标准进行质量控制是实验室的法定义务，也是实验室取
得相关资质和开展业务的前提条件。
质量控制的方法与措施
制定严格的操作规程
根据发光免疫技术的特点和要求，制 定详细、规范的操作规程，确保检测 过程的准确性和可靠性。
定期进行仪器校准和维护
对发光免疫技术所需的仪器进行定期 校准和维护，确保仪器性能稳定、准 确可靠。
实施样品质量控制
通过采用标准品、质控品等方式对样 品进行质量控制，确保检测结果的准 确性和可靠性。
进行内部比对和外部质评
参加行业组织的外部质评或与其他实 验室进行比对，以评估本实验室发光 免疫技术的准确性和可靠性。
标准化与认证的必要性
标准化是保证检测结果准确性和可靠性的基础
通过标准化可以统一发光免疫技术的操作规程、仪器设备、试剂耗材等，从而保证检测结 果的准确性和可靠性。
局限性
成本较高
发光免疫技术所需的仪器和试 剂成本较高，可能限制其在一 些资源有限地区的普及和应用
。
交叉反应
有时发光免疫技术可能会产生 交叉反应，导致假阳性或假阴 性结果，影响检测的准确性。

第九章化学发光免疫技术

第九章化学发光免疫技术

• AFP • CEA • Ferritin • TPA • PAP • PSA • F-PSA • CA125
甲胎蛋白 癌胚抗原 铁蛋白 组织多肽抗原 前列腺酸性磷酸酶 前列腺特异性抗原 游离前列腺特异性抗原 糖类抗原125
• Prenatal Screening 产前筛查
• AFP • Free-B-HCG • PAPP-A
• 1、直接化学发光免疫分析 • 2、化学发光酶免疫分析 • 3、电化学发光免疫分析 • 4、鲁米诺氧途径免疫分析
常用化学发光剂: (1)吖啶酯类 直接标记发光剂 (2)三联吡啶钌 电化学发光剂 (3)酶促反应发光剂:鲁米诺
AMPPD(金刚烷)
五、化学发光免疫得非均相分离方式
(一)固相分离——板式或管式 (二)过滤分离——过滤杯(膜) (三)珠式分离——与丙烯酰胺小珠子 (四)顺磁珠性颗粒分离——顺磁性颗粒
(一)辣根过氧化酶标记得化学发光免疫分析
HRP标记得疫分析
ALP标记得LEIA
三、电化学发光免疫分析
• 电化学发光免疫分析(ECLIA):就是 电化学发光和免疫测定相结合得产 物。
第四节 化学发光免疫测定得临 床应用
• 化学发光免疫技术因标记物为非 放射性物质,且易于实现自动化,具 有快速、简便、灵敏、特异等特 点,已广泛应用于各种激素、肿瘤 标志物、药物及其化微量生物活 性物质测定。
1、反应必须提供足够得能量(170300KJ/mol)
2、这些化学能必须能被某种物质分子吸 收而产生电子激发,并且有足够得光量子 产生。
直接化学发光: 间接化学发光:
大家应该也有点累了，稍作休息
大家有疑问的，可以询问和交流
9
三、化学发光效率
发射光子的分子数

《化学发光免疫技术》课件

《化学发光免疫技术》课件
总结词
利用酶催化反应放大信号，将化学发光物质作为底物，通过测量发光强度来检测 目标分析物。
详细描述
酶促化学发光免疫分析中，酶标记的抗体或抗原与目标分析物结合后，通过酶催 化反应放大信号，使化学发光物质的生成量大大增加，再通过测量发光强度来检 测目标分析物。
电化学发光免疫分析
总结词
利用电化学反应产生激发态的化学发光物质，通过测量发光 强度来检测目标分析物。
直接化学发光免疫分析
总结词
直接利用化学发光物质作为标记物，与抗体或抗原结合，通过测量发光强度来 检测目标分析物。
详细描述
直接化学发光免疫分析中，化学发光物质直接与抗体或抗原结合，形成复合物 ，当激发时，产生光子并释放出来，通过光电倍增管等设备测量发光强度，从 而确定目标分析物的浓度。
酶促化学发光免疫分析
特点
高灵敏度、高特异性、操作简便 、检测速度快、可自动化等。
化学发光免疫技术的应用领域
01
02
03
医学诊断
用于检测肿瘤标志物、激 素、病毒抗原抗体等。
食品安全
用于检测食品中的农药残 留、兽药残留等有害物质 。
环境监测
用于检测水体中的重金属 离子、有机污染物等有害 物质。
化学发光免疫技术的发展历程
《化学发光免疫技术》 ppt课件
CATALOGUE
目 录
• 化学发光免疫技术概述 • 化学发光免疫技术的原理 • 化学发光免疫技术的分类 • 化学发光免疫技术的优缺点 • 化学发光免疫技术的应用实例
01
CATALOGUE
化学发光免疫技术概述
定义与特点
定义
化学发光免疫技术是一种利用化 学发光物质和免疫反应相结合， 对生物体内微量物质进行定性和 定量检测的技术。

化学发光免疫技术医学课件

化学发光免疫技术医学课件
团直接连接到被标记物分子的反应基团上.
碳二亚胺（EDC）缩合法、过碘酸钠氧化法、重氮盐偶联法
间接偶联：用功能交联剂在标记物和被标记物之间 插入一条链或一个基团，使之连接成结合物
琥珀酰亚胺活化法
1. 碳二亚胺（EDC）缩合法
经缩合反应，蛋白质分子中的游离羧基与发光剂中的氨基形成稳定的酰胺键 用于结构中有羧基或氨基的标记物
内容
第一节 概述 一、发光的分类 二、化学发光产生的条件 三、化学发光效率 四、化学发光免疫技术的分类 五、化学发光免疫分析的非均相分离方式
第二节 化学发光剂和标记技术 一、化学发光剂 二、发光剂的标记技术
第三节 化学发光免疫分析的类型 一、直接化学发光免疫分析 二、化学发光酶免疫分析 三、电化学发光免疫分析 四、鲁米诺氧途径免疫分析
•直接化学发光剂 •间接化学发光剂
直接化学发光剂
------可直接标记抗原或抗体
1. 吖啶酯 在碱性条件下被H2O2氧化时,发出波 长为470nm的光，具有很高的发光效率，其激发态产 物 N-甲基吖啶酮是该发光反应体系的发光体。
2．三联吡啶钌
三联吡啶钌 [RU(bpy)3]2+是电化学发光剂，它和电 子供体三丙胺（TPA）在阳电极表面可同时失去一 个电子而发生氧化反应。
由光量子阅读系统接收，光电倍增管将光信号转变为 电信号并加以放大，再把它们传送至计算机数据处理系统， 计算出测定物的浓度。
化学发光酶免疫分析的特点
• 标记物：酶（HRP、ALP) • 底物(发光剂）：HRP--鲁米诺
ALP--AMPPD • 固相载体：磁性微粒、塑料珠、塑料锥形小管 • 分离：磁场、高速离心
荧光素酶 ATP；O2；Mg2+
光 + AMP+ O2 + CO2 +
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化学发光免疫技术课件
人民卫生出版2社1
化学发光免疫分析双抗体夹心法原理示意图
化学发光免疫技术课件
人民卫生出版2社2
二、方法类型
1.分离方法 常用磁颗粒分离技术，即用抗原或抗体包被磁颗粒，
与标本中相应抗体或抗原及吖啶酯标记的抗体或 抗原通过一定模式的免疫学反应后,最终通过在磁场 中冲洗将结合到免疫复合物中的标记物和游离标记物 进行分离的技术。
化学发光免疫技术课件
人民卫生出版社
本章要点
1.化学发光剂的概念及常用的化学发光剂。 2.化学发光免疫分析的基本原理及其技术类 型。 3.化学发光酶免疫分析基本原理及其分离技 术。 4.电化学发光免疫分析基本原理。 5.化学发光免疫技术的临床应用。
化学发光免疫技术课件
人民卫生出版社2
目录
1 发光基本知识 2 化学发光免疫分析 3 化学发光酶免疫分析 4 电化学发光免疫分析 5 化学发光免疫技术的临床应用
一、 检测原理
• 用化学发光剂（如吖啶酯）直接标记抗体(抗原)， 与待测标本中相应的抗原(抗体)和磁颗粒性的抗 体（抗原）发生免疫反应后，通过磁场把结合状 态和游离状态的化学发光剂标记物分离开来，这 时只需加入氧化剂（H2O2）和NaOH使成碱性环境， 吖啶酯在不需要催化剂的情况下分解、发光。由 集光器和光电倍增管接收、记录单位时间内所产 生的光子能，可从标准曲线上计算出待测抗原 (抗体)的含量
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吖啶酯在碱性条件下被H2O2氧化时,发出波长 为470nm的光，具有很高的发光效率，其激发
态产物N-甲基吖啶酮是该发光反应体系的发光体。
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2.酶促反应的发光底物
• 是利用标记酶的催化作用，使发光剂（底物）发 光。 目前化学发光酶免疫技术中常用的酶有辣根过氧 化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（ALP）。HRP的常用 的发光底物为鲁米诺或其衍生物，ALP的发光底物 为金刚烷（AMPPD）
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前言
• 化学发光免疫技术是将具有高灵敏度的化学发光 测定技术与高特异性的抗原抗体反应技术相结合， 用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、维生 素和药物等的检测分析技术。该技术具有特异性 高、灵敏度高、分离简便、 快速、试剂无毒、安 全稳定、可自动化分析等特点，在免疫学检验中 应用广泛。
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1.光照发光（photoluminescence）
• 发光剂（荧光素）经短波长入射光照射后进 入激发态，当回复至基态时发出较长波长的 可见光。
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2.生物发光（bioluminescence）
• 发生在生物体内的发光现象，如萤火虫的发光，反 应底物为萤火虫荧光素，在荧光素酶的催化下，利 用ATP产能，生成激发态氧化型荧光素，它在回复 基态时多余的能量以光子的形式释放出来。
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二.化学发光剂
• 在化学发光反应中参与能量转移并最终以发射光 子的形式释放能量的化合物称为化学发光剂或发 光底物。
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人民卫生出版社11
• 作为化学发光免疫技术的化学发光剂应符合以下 几个条件：
发光的量子产率高 物理-化学特性要与被标记或测定的物质相匹配 能与抗原或抗体形成稳定的偶联结合物 其化学发光常是氧化反应的结果
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2.常用的免疫学反应模式
双抗体夹心法 双抗原夹心法 固相抗原竞争法
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化学发光免疫技术课件
人民卫生出版社8
3.化学发光
• 某些物质(发光剂)在化学反应时，吸收了反应过 程中所产生的化学能，使反应的产物分子或中间 态分子中的电子跃迁到激发态，当电子从激发态 回复到基态时，以发射光子的形式释放出能量， 这一现象称为化学发光。
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人民卫生出版社9
• 一个化学反应要产生化学发光现象，必须满足以 下条件：
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人民卫生出版社4
标记免疫技术
放
酶
射
免
免
疫
疫
技
技
术
术
化
荧
金
学
光
免
发
免
疫
光
疫
技
免
技
术
疫
术
技
术
Hale Waihona Puke 化学发光免疫技术课件人民卫生出版社5
第一节 基本知识
一、发光
发光是指分子或原子中的电子吸收能量后，由低能级 的基态跃迁到高能级的激发态，然后再返回到基态， 释放出的能量表现为光的发射。根据形成激发态的激 发能不同可将发光分为光照发光、生物发光和化学发 光。
①该反应必须提供足够的激发能, 并由某一步骤单 独提供, 因为前一步反应释放的能量将因振动弛豫 消失在溶液中而不能发光
②要有有利的反应过程, 使化学反应的能量至少能被 一种物质所接受并生成激发态
③激发态分子必须具有一定的化学发光量子效率释放 出光子, 或者能够转移它的能量给另一个分子使之进 入激发态并释放出光子
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3．电化学发光剂
• 电化学发光剂是指通过在电极表面进行电化学反 应而发光的物质。如化学发光剂三联吡啶钌 [Ru(bpy)3]2+和电子供体三丙胺（TPA）在阳性电 极表面可同时失去一个电子而发生氧化反应。
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第二节 化学发光免疫分析
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（1）鲁米诺或其衍生物
• 鲁米诺在碱性条件下可被一些氧化剂氧化，发生化 学发光反应，辐射出最大发射波长为425nm的光。
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• 鲁米诺增强发光反应原理
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（2）AMPPD
• 〔3-(2‘-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3“-磷酰氧基 )苯-1,2-二氧杂环丁烷〕〕
在所使用的浓度范围内对生物体没有毒性
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• 常用的化学发光剂或发光底物有 1.直接化学发光剂 2.酶促反应的发光底物 3.电化学发光剂
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1.直接化学发光剂
• 在发光免疫分析过程中不需酶的催化作用，直接 参与发光反应，它们在化学结构上有产生发光的 特有基团，可直接标记抗原或抗体。如常用的吖 啶酯（acridinium，AE） 。