遗传实验2-2 粗糙链孢霉生活史及
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实验成绩汇总表第一次实验实验日期:2022年10月21日实验成绩:实验名称:果蝇的形态、生活史观察及杂交实验维生素、维生素D、脂肪、粗纤维素、碳水化合物、矿物元素及微量元素2等,同时还含有丰富的酶系统和生理活性物质,果蝇喜甜食且葡萄糖能增加酵母活性。
实验操作:A溶液不断搅拌煮沸;B溶液玉米粉和水加热搅拌均匀后再加酵母粉煮沸。
A、B溶液再合到一起煮沸,待其降温至50~60℃时再加0.5 mL丙酸,待培养基冷却至室温后,再分装到各培养管中(每管约3mL)。
灭菌:将分装好的培养基置于高压蒸汽灭菌锅中,103.4 kPa ,121℃,灭菌20 min,冷却后置于-20℃冰箱保存备用。
注意事项:1.A溶液加热过程中不断搅拌,以防琼脂在底部结块。
2.酵母菌加入后,加热的时间必须尽量缩短,避免酵母菌失活;丙酸必须待其降温至50~60℃时再加入,避免丙酸的挥发。
3.分装培养基时要一次性垂直分装到管底,不能污染到管壁、管口。
4.培养管内应晾至表面无水层、管壁无水滴再置于-20℃冰箱保存备用。
(三)野生型果蝇的采集取一个清洁玻璃容器放入腐烂的香蕉,用纱布罩住容器口,在纱布上开几个2〜3 mm 见方的孔,将容器置于室外。
2〜3 d 后即可采集到野生型果蝇,放入冰箱冷冻室(-20℃)冷冻约2 min,待果蝇全部被麻醉之后,再转移到培养管内。
(四)接种将新培养管与装有果蝇的培养管口对口垂直放置。
其中,装有新鲜培养基的培养管倒扣在上方,打开培养管塞后应迅速对好2个管口,将对好的2个培养管翻转,使新培养管位于下方,轻顿几下,待全部果蝇落入新培养管注明两亲本的基因型及交配日期。
7~8天后清空亲本,待F1成蝇羽化后逐日观察、计数对应表型个体数(可靠的计数及观察是培养开始的20天以内,再晚可能有F2了)若须继续试验、观察F2,可从F1内挑出雌雄蝇5-10对另瓶培养。
单因子杂交杂交实验步骤:1、选处女蝇:每两组做正、反交各1瓶,正交选野生型,红眼为母本,反交选突变型白眼为母本,将母本旧瓶中的果蝇全部麻醉处死,在8-12h内收集处女蝇5只将处女蝇和5只雄蝇转移到新的杂交瓶中,贴好标签,于25℃培养。
真菌类的遗传分析————四分子分析与作图一粗糙脉孢霉的性质与生活史(一)粗糙脉孢霉的性质粗糙脉孢霉( Neurosporocrassa ) 属于真菌中的子囊菌纲,是低等的真核生物。
每一菌丝细胞中含有几十个细胞核。
是遗传分析好材料:1子囊孢子是单倍体,其表型直接反应其基因型。
2 一次只分析一个减数分裂的产物。
3体积小,易培养,繁殖快,一次杂交就能产生大量的后代,便于获得正确的统计学结果。
4能进行有性生殖,其染色体的结构和功能类似于高等动植物。
5 更加重要的是,子囊孢子在子囊中的线性排列顺序与减数分裂中期染色体在赤道板两侧的排列顺序相同,这就是粗糙脉孢霉成为了遗传分析的好材料。
(二)粗糙链孢霉的生活史粗糙链孢霉有有性生殖和无性生殖。
二 顺序四分子与遗传分析 (一)顺序四分子 (ordedtetrad)粗糙脉霉菌减数分裂的四个产物保留在一起,称为四分子。
但是,在分裂的过程中子囊的外形比较狭窄,以至分裂的纺锤体不能重叠,只能纵立于它的长轴中,这样所有分裂后的核――8个子囊孢子都是从上到下排列成行,所以,脉孢菌减数 分裂所产生的四分子是属于顺序四分子(ordedtetrad)。
可推知:第一对子囊孢子来自一条染色单体,第二对孢子则是来自这条染色单体的姊妹染色单体; 第三和第四对子囊孢子是来自前一条染色体同源染色体的姊妹染色单体。
无性孢子——分生孢子 有性孢子——子囊孢子这种顺序四分子在遗传分析上有很多优越性:(1). 可以把着丝粒作为一个座位(locus),计算基因与着丝粒的重组率,即着丝粒作图。
(2). 子囊中子囊孢子的对称性,证明减数分裂是一个交互过程,而非单向过程。
(3).可以检验染色单体的交换有否染色单体干涉现象,还可利用它来进行基因转变(gene conversion)的研究。
(4).证明双交换不仅可以包括4线中的两线, 而且可以包括3线或4线双交换。
(二)着丝粒作图与遗传分析利用四分子分析法,测定基因与着粒间的距离称为着丝粒作图。
粗糙链孢霉顺序四分子分析Analysis of the Neurospora crassa’s ordedtetrad摘要:本实验通过菌种活化、杂交、显微镜观察等方法对粗糙链孢霉的顺序四分子进行遗传分析,从而达到以下目的:1、了解粗糙链孢霉的生活周期及生长特性;2、通过对粗糙链孢霉杂交后代的表型分析,掌握顺序四分子的遗传学分析方法;3、通过有关基因的着丝粒作图,进一步理解基因的分离和连锁交换定律。
Abstract:This experiment by strains of activation, hybridization, microscope observation and other methods of rough chain spore mould order four molecular genetic analysis, so as to achieve the following objectives:1 and understand the life cycle of the rough chain spore mould and growth characteristics;2, through the rough chain spore mildew hybrid offspring phenotype analysis, grasp the sequence of four molecular genetics analysis method;3, through the relevant genes centromere mapping, separation of further understanding the genetic chain and exchange law.关键词:顺序四分子,连锁交换定律,基因转换,第一次减数分裂,第二次减数分裂Key words:Ordedtetrad,Chain exchange law,Gene conversion,First division segregation,Second division segregation前言:粗糙链孢霉( Neurospora crassa ) 又称红色面包霉,属于真菌中的子囊菌纲、球壳目、脉孢菌属,目前已知4~5种。
实验十三链孢霉四分子分析实验十三链孢霉四分子分析(,学时)一、教学基本要求:1、了解粗糙脉孢菌的生活周期及特性。
2、学习顺序四分子的遗传学分析方法二、教学内容:〖目的和要求〗要求学生加深了解顺序四分子分析的原理和方法,增加链孢霉杂交的感性认识,并能进行有关基因的着丝粒距离的计算和作图。
从而正确认识和验证分离和交换定律,并了解基因转变现象。
〖实验原理〗1、原理:基因分离——第二次减数分裂分离。
1交换型子囊数,8,,,重组型配子数2重组值,,100%,,100%总的配子数总的子囊数,8,,交换型子囊数,,50%总的子囊数,,9,5,10,16,,50%,7.3%274〖实验目的〗通过对粗糙链孢霉赖氨酸缺陷型和野生型杂交所得后代的表现型的分析,了解顺序排列的四分体的遗传学分析方法,进行有关基因的着丝粒距离的计算和作图。
〖实验材料〗+,1(粗糙链孢霉野生型菌株,Lys,接合型。
-2(粗糙链孢霉赖氨酸缺陷型菌株,Lys,接合型a。
〖实验器具和药品〗1(器具:显微镜,钟表镊,解剖针,接种针,载波片,试管,培养皿。
2(培养基(1)基本培养基(野生型可生长,缺陷型不能生长):50倍浓度的贮存液,,,2HONaCHO,2HO236572 柠檬酸钠 125克KHPO24 250克NHNO43 100克MgSO,7HO42 10克CaCl,2HO22 5克生物素溶液(5毫克/100毫升) 5毫升微量元素溶液,HO柠檬酸2500克,2,ZnSO,HO75.00克42,,Fe,,,,NHSO,HO61.00克44222,CuSO,HO50.25克,425毫升,MnSO,HO0.05克42,,HBO0.05克33,,NaMoO,2HO0.05克242,蒸馏水100毫升,氯仿 1毫升蒸馏水 1000毫升氯仿(防腐) 2-3毫升用前稀释贮存液,再加1.5%的蔗糖,PH5.8。
如加2%琼脂,即成基本固体培养基。
(2)补充培养基:在基本培养基上补加一种或多种生长物质,如氨基酸、核酸碱基、维生素等。
粗糙脉孢菌顺序四分子遗传分析摘要:了解粗糙脉孢菌的生活周期及特性;通过对粗糙脉孢菌的赖氨酸缺陷型和野生型杂交所得后代的表型分析,学习顺序四分子的遗传学分析方法,进行有关基因与着丝粒距离的计算和作图。
关键词:粗糙脉孢菌;顺序四分子;交换型;非交换型;图距。
Abstract:understand the life cycle and features of neurospora crassa;Through phenotype analysis to hybrid offspring of the neurospora crassa lysine defect type and wild type, Learning order four molecular genetic analysis method and related genes and centromere distance calculation and drawing.Key word:neurospora crassa. Fourth order; Exchange type; The exchangetype; From figure.前言:粗糙脉孢霉(Neurosporocrassa)属于真菌中的子囊菌纲,是低等的真核生物。
每一菌丝细胞中含有几十个细胞核。
是遗传分析好材料:1)子囊孢子是单倍体,其表型直接反应其基因型。
2)一次只分析一个减数分裂的产物。
3)体积小,易培养,繁殖快,一次杂交就能产生大量的后代,便于获得正确的统计学结果。
4)能进行有性生殖,其染色体的结构和功能类似于高等动植物。
5)更加重要的是,子囊孢子在子囊中的线性排列顺序与减数分裂中期染色体在赤道板两侧的排列顺序相同,这就是粗糙脉孢霉成为了遗传分析的好材料。
粗糙链孢霉的生活史:粗糙链孢霉有有性生殖和无性生殖。
无性世代(单倍体世代):菌丝体→分生孢子→菌丝体。
粗糙脉孢菌生殖方式有性世代(双倍体世代):一个交配型的分生孢子落在另一交配型原子囊壳受精丝上,从而进入原子囊(子实体),进行多次有丝分裂,形成多个单倍体核,这些单倍体核与子实体中的单倍体核融合,形成多个二倍体核,然后进入减数分裂,每个二倍体核形成4个单倍体核,再进行一次有丝分裂,形成8个核,最后形成为一个子囊中的8个子囊孢子。