马铃薯青枯病抗性鉴定新方法

二倍体马铃薯原生质体融合创制抗青枯病的新种质的开题报告题目：二倍体马铃薯原生质体融合创制抗青枯病的新种质一、研究背景青枯病是一种由青枯霉菌引起的马铃薯病害，其主要症状是马铃薯植株茎部和叶片上出现黑褐色的坏死斑点和腐烂，严重影响马铃薯产量和品质。

目前，农业生产中广泛使用化学农药来防治青枯病，但是长期大量使用会导致环境污染和人体健康问题。

因此，探索开发抗青枯病的新种质具有重要的意义。

二倍体马铃薯原生质体融合技术是一种将两个不同的二倍体马铃薯原生质体融合成一个四倍体细胞，通过四倍体优势表现来创制新种质的技术。

近年来，该技术被广泛应用于创建抗病新品种的研究中，取得了一定的成果。

因此，本研究拟通过二倍体马铃薯原生质体融合技术，创制抗青枯病的新种质，为马铃薯育种提供新的遗传资源。

二、研究目的本研究的主要目的是通过二倍体马铃薯原生质体融合技术创制抗青枯病的新种质，具体包括以下几个方面：1. 研究不同种质的二倍体马铃薯原生质体的融合条件；2. 筛选抗青枯病的源材料，进行二倍体马铃薯原生质体融合；3. 通过形态观察、分子生物学等方法鉴定融合细胞的四倍体性；4. 对融合细胞进行抗青枯病性状的评估和筛选，挑选出表现出抗青枯病性状的细胞系；5. 建立抗青枯病的四倍体马铃薯种质库，挑选并评价具有育种潜力的四倍体马铃薯品种。

三、研究方法1.采集不同种质的二倍体马铃薯，进行原生质体的分离和培养；2. 采用不同的原生质体融合方法，筛选出最适宜的融合条件；3. 筛选出抗青枯病的源材料，进行二倍体马铃薯原生质体的融合；4. 对原生质体融合细胞进行形态观察和倍性鉴定，其中包括荧光原位杂交技术和流式细胞术；5. 将融合细胞按照一定比例进行筛选和分离，进行抗青枯病性状的评估；6. 在不同的生长环境中对表现出抗青枯病性状的细胞系进行验证和评估，通过综合评价，筛选出具有良好抗青枯病性状的细胞系，并挑选其进行育种。

四、预期结果本研究预期通过二倍体马铃薯原生质体融合技术，创制出具有抗青枯病性状的四倍体细胞系，并建立抗青枯病的四倍体马铃薯种质库。

马铃薯青枯病
青枯病是一种细菌性维管束病害，在马铃薯整个生长期都可发生，但因苗期温度低，不宜青枯病发育，所以症状不表现或表现不明显，在现蕾、开花期症状明显，特别在温暖潮湿、降雨充沛的环境下发病。

病害发生时，先是植株顶部嫩叶或花蕾出现萎蔫，紧接着主茎或分枝的上部枝叶出现急性萎蔫，开始早晚能恢复，持续4-5天后，全株茎叶全部萎蔫枯死，但叶片仍保持绿色，只是颜色稍淡，俗称青枯病。

病菌侵染植株维管束，使茎基部和根部维管束变褐，用手挤压横断面，有污白色菌脓从断面渗出。

切开病薯可见维管束变褐，不需挤压切面上的渗出白色菌脓，但皮层和薯肉从维管束处不分离，这是青枯病的主要特征。

发病严重时表皮龟裂，髓部溃烂如泥。

马铃薯青枯病防治方法：
（1）选择种植抗病的早熟品种。

（3）轮作倒茬。

与禾谷类实行3-4年以上轮作，实行间套轮作或水旱轮作，致使土壤中的病菌失去寄主而丧失活力，间种套作也能减少病株间的蔓延，能明显减轻病害。

（4）加强栽培管理。

选土层深厚、透气性好的沙壤土或壤土，施入腐熟有机肥和钾肥，控制土壤含水量，种薯播种前做催芽处理，以淘汰出芽缓慢细弱的病薯减少发病，大薯切块后用杀菌剂和草木灰拌种杀菌，采用高垄栽培，避免大水漫灌。

（5）及时拔除田间病株，作好病残株处理。

当田间发现萎蔫植株或部分萎蔫植株时，连基部泥土、薯块一起产出深埋或烧毁，病穴周围撒施生石灰粉消毒。

园　艺　学　报　2000,27(1):37～41Acta H orticulturae S inica马铃薯青枯病抗性的分子标记郜　刚　屈冬玉　连　勇　金黎平　冯兰香(中国农业科学院蔬菜花卉研究所,北京100081)提　要　对两个马铃薯二倍体分离世代群体E D和CE共140个基因型进行青枯病人工接种鉴定,并以此为作图群体,综合RAPD、SSR、AF LP3种标记技术,利用BS A分析方法对抗性基因进行分子标记筛选和定位。

筛选到与抗病感病性状相连锁的3个RAPD标记OPG05940、OPR11800和OPO13770;筛选到一个SSR标记ST M0032,被定位于染色体XII上;检测到7个AF LP多态性带,初步认为其与抗病性相关,并为已有图谱上的共性AF LP标记。

这些标记可用于马铃薯分子育种。

关键词　马铃薯青枯病;抗性;分子标记青枯病(Bacterial Wilt)是由Ralstonia solanacearum comb.nov引起的世界范围的植物细菌性病害〔1〕,在热带亚热带地区可侵害马铃薯等50多科数百种植物〔2〕。

这种植物维管束病害的为害随着气候变化、土壤类型、地理位置及实际耕作情况而变化,造成不同程度的减产,甚至绝产〔1,3〕。

由于该病的新寄主不断增加,控制该病发生的技术十分有限,故成为目前许多栽培植物的重大病害〔4〕。

近几十年来在该病病理学机制方面做了许多重要工作,但抗性遗传机制却知之不多,同时由于可供利用的抗病育种材料十分有限,抗病育种工作进展缓慢。

分子标记技术有助于从DNA水平上寻找与抗病基因连锁的遗传标记,本文报道了利用混群法(Bulked Segregation Analysis,BS A)〔5〕结合已构建的马铃薯分子标记连锁图谱,获得了与青枯病抗性相关的几个分子标记。

1　材料与方法1.1　材料及抗性鉴定二倍体马铃薯群体材料的亲本为C(USW533723),D(USW785922)和E(772102237),其遗传背景及杂交组合见文献〔6〕,其中E来源于野生二倍体种Solanum phureja及S. vernei,E D和CE群体各包括87和53个基因型。

马铃薯品种对枯萎病菌的抗性鉴定曲延军;蒙美莲;张笑宇;陈雯廷;胡俊;马志伟;陈慧【摘要】通过室内接种试验与田间接种试验,调查评价供试马铃薯品种对枯萎病菌的抗性.结果显示,供试的马铃薯品种中没有免疫品种,脱毒组培苗接种病原菌测定的19个品种中,表现为中抗的品种有2个,占供试品种的10.53％;表现为中感的品种有10个,占供试品种的52.63％;表现为高感的品种7个,占供试品种的36.84％.田间接种病原菌测定的20个品种中,中抗及以上品种有9个,占供试品种的45％,中感及高感品种11个,占供试品种的55％.【期刊名称】《植物保护》【年(卷),期】2015(041)003【总页数】5页(P149-153)【关键词】马铃薯;枯萎病;尖孢镰刀菌;抗性鉴定【作者】曲延军;蒙美莲;张笑宇;陈雯廷;胡俊;马志伟;陈慧【作者单位】内蒙古农业大学农学院,呼和浩特010019;内蒙古农业大学农学院,呼和浩特010019;内蒙古农业大学农学院,呼和浩特010019;内蒙古农业大学农学院,呼和浩特010019;内蒙古农业大学农学院,呼和浩特010019;内蒙古农业大学农学院,呼和浩特010019;内蒙古农业大学农学院,呼和浩特010019【正文语种】中文【中图分类】S435.32马铃薯枯萎病是由镰刀菌侵染所致的土传病害,据Rakhimov等[1]报道,马铃薯枯萎病是由镰刀菌的5个不同种引起的,即尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum Schlecht.)、茄类镰刀菌[F.solani (Mart.) Sacc.]、串珠镰刀菌(F.moniliforme Sheld.)、接骨木镰刀菌(F.sambucinum Fuckel)、雪腐镰刀菌[F.nivale (Fr.) Ces.]。

据薛玉凤[2]的研究,内蒙古马铃薯枯萎病病原菌有尖孢镰刀菌、茄类镰刀菌、三线镰刀菌[F.tricinctum (Corda) Sacc.]，尖孢镰刀菌为主要致病菌且其致病力也最强。

马铃薯青枯病无公害防治方法马铃薯青枯病是一种典型维管束病害，病菌随病残体在土壤中越冬，随雨水、浇灌水从茎基部或根部伤口侵入，病株和茁壮株根系间的接触也可发生侵染。

一、发病症状马铃薯青枯病在马铃薯幼苗和成株期均能发生。

植株染病典型症状是病株稍矮缩，下部叶片先萎蔫后全株下垂，开头早晚恢复，持续4～5天后全株茎叶所有萎蔫死亡，但仍保持青绿色，也有时一个主茎或一个分枝萎蔫，另外茎叶生长正常，植株基部横剖可见维管束变褐。

薯块染病后，芽眼呈灰褐色水浸状，并有脓液，切开薯块，切面可自动溢出乳白色菌脓。

二、发病逻辑马铃薯青枯病是一种典型维管束病害，病菌随病残体在土壤中越冬，随雨水、浇灌水从茎基部或根部伤口侵入，病株和茁壮株根系间的接触也可发生侵染。

病菌侵入维管束后快速繁殖并阻塞导管，妨碍水分正常运送。

青枯病菌不耐干燥，土壤含水量高、高湿、多雨条件下存活长，最适温度为30～37℃，普通酸性土壤发病重。

三、无公害防治办法1、选用抗病品种。

这是防治青枯病的最佳办法之一，如新芋4号等较抗病品种。

2、建立无病种薯繁育体系。

选留未发生过青枯病的地块举行繁育种薯，通过脱毒技术繁殖原原种等，都会遏止青枯病的发生。

3、合理轮作。

青枯病是土传性病害，应大力倡导与非寄主植物采取2～3年以上的轮作。

不施带病菌肥料，尽量施用有机活性肥、生物有机肥。

大雨后注重准时排水，采纳高畦栽培，避开大水漫灌。

4、通过小整薯代替大薯切块播种。

能够避开用刀切块时感染，再通过枯草芽孢菌菌株0702、GP7-13制成粉状制剂对种薯举行处理。

5、药剂防治。

发病初期，举行药剂灌根，药剂可选用53.8%可杀得悬浮剂1000倍液、72%农用硫酸链霉素4000倍液、25%青枯灵可湿性粉剂800倍液，每株灌0.1～0.2千克，每隔7～10天1次，延续灌2～3天，同时对相邻植株用以上药剂也举行灌根杀菌。

马铃薯体细胞杂种后代青枯病抗性鉴定及分子标记检测李朋;蔡兴奎;陈琳;柳俊【摘要】马铃薯(Solanum tuberosum L.)青枯病是由茄科雷尔氏菌（Ralstonia solanacearum）引起的一种毁灭性的细菌性土传病害。

马铃薯青枯病抗性资源主要存在于一些野生种中，体细胞杂交是创制马铃薯青枯病抗性资源的一种有效途径。

本研究以具有对青枯病抗性的体细胞杂种与栽培种杂交产生的100个后代为材料，对其进行青枯病抗性评价，旨在筛选可供育种利用的青枯病抗性资源。

青枯病抗性鉴定结果表明，在试管苗组培鉴定中100个杂交后代共有6个基因型表型抗青枯病，温室钵栽接种鉴定有8个基因型表现为抗病，在两种接种鉴定中均表现为抗病的有3个基因型(07SF.3-79、07SF.6-8和07SF.6-5)。

选用本实验室前期筛选的与青枯病抗性相关的4对SSR标记引物（STI0051、STI0054、STI0056、STI0057），对100个基因型进行分子标记检测，结果显示，有3个标记（STI0051.180、STI0054.180、STI0056.205）可以明确鉴定抗感基因型，它们表现为抗病稳定的3个基因型的标记位点与抗病对照的带型一致，而在感病对照中缺失，与表型鉴定结果吻合，表明筛选的SSR标记可以用于具有S. chacoense 遗传背景材料的青枯病抗性辅助选择。

%Ralstonia solanacearum, the causal pathogen of potato (Solanum tuberosum L.) bacterial wilt, is soil-borneand destructive for potato production. Somatic hybridization between S. tuberosum and wild relatives is an effective way to obtain germplasm possessing resistance to R. solanacearum. Evaluation of resistance to R. solanacearum on 100 progenies derived from somatic hybridization between S. tuberosum and wild relatives were conducted in this study to screen for germplasms that possess resistance to R. solanacearum and arerelevant to breeding. The results showed that six clones exhibited resistance to the pathogen in vitro inoculation and eight clones performed resistance to the pathogen by the inoculation with greenhouse grown plants among the 100 progenies. Noticeably, three resistant clones(07SF.3-79, 07SF.6-8 and 07SF.6-5) were consistent for resistance level in the two tests. Four SSRs (STI0051, STI0054, STI0056 and STI0057) previously identified were used to test al of the 100 clones mentioned above. The results demonstrated that three markers (STI0051.180,STI0054.180 and STI0056.205) could differentiate resistant genotype from susceptible ones. The three clones considered resistant in the two inoculations amplified the same bands as resistant control while they were absent in susceptible control. These were in accordance with the disease phenotyping and suggest an application potential of these SSRs in marker-assistant selection of bacterial wilt resistance introgressed from S. chacoense.【期刊名称】《中国马铃薯》【年(卷),期】2014(000)006【总页数】7页(P321-327)【关键词】马铃薯;体细胞杂种;青枯病;抗性鉴定;分子标记【作者】李朋;蔡兴奎;陈琳;柳俊【作者单位】华中农业大学生命科学技术学院，华中农业大学园艺植物生物学教育部重点实验室，国家蔬菜改良中心华中分中心，湖北武汉 430070;华中农业大学生命科学技术学院，华中农业大学园艺植物生物学教育部重点实验室，国家蔬菜改良中心华中分中心，湖北武汉 430070;华中农业大学生命科学技术学院，华中农业大学园艺植物生物学教育部重点实验室，国家蔬菜改良中心华中分中心，湖北武汉 430070;华中农业大学生命科学技术学院，华中农业大学园艺植物生物学教育部重点实验室，国家蔬菜改良中心华中分中心，湖北武汉 430070【正文语种】中文【中图分类】S532马铃薯（SolanumtuberosumL.）青枯病是由茄科雷尔氏菌（Ralstoniasolanacearum）引起的细菌性病害，由于细菌性病害的系统感染特性，导致其药物防治十分困难[1]。

马铃薯青枯病病原的鉴定郑雪坳;宋波涛;谭晓丹;陈惠兰【期刊名称】《中国马铃薯》【年(卷),期】2014(28)2【摘要】The colony morphology, carbohydrate utilization, microscopy, fliC sequence, phylotype and pathogenicity of Ralstonia solanacearum were studied by using the diseased potato from four cities of Hubei Province in order to investigate the etiology of the disease bacterial wilt. Sixteen strains exhibited irregular round, upheaval, pink colonies with white margin differential y on BG medium with 2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride. Six strains of them showed the targeted morphology of R. solanacearum by microscope. Only two strains had targeted fragments, which were amplified by the specific fliC primers. The targeted fragments were sequenced. The results revealed that HZ4-14 and HZ5-1 had99%nucleotide matching with the fliC gene of R. solanacearum GMI1000. The results of phylotype multiple PCR indicated that the specific 144 bp fragments were amplified from two strains. HZ4-14 and HZ5-1 were virulent to potato and showed the typical bacterial wilt symptom. These results demonstrate that the pathogen of bacterial wilt in Wuhan belongs to Bivoar II, Phylotype II of R. solanacearum.%利用湖北省四个地点的马铃薯青枯病样本，对其病原物的菌落形态、碳水化合物利用、显微形态、鞭毛引物序列、演化型以及致病力等方面进行了分析。

马铃薯青枯病抗性相关基因的克隆及表达模式分析
的开题报告
一、研究背景
马铃薯青枯病是一种由青枯链霉菌引起的严重病害，能够导致马铃
薯产量显著降低甚至死亡，对马铃薯种植业造成了极大的经济损失。

因此，挖掘马铃薯青枯病抗性相关基因，并研究其表达模式，将为马铃薯
抗青枯病育种提供理论支持。

二、研究内容
本课题将从马铃薯中筛选出与青枯病抗性相关的基因并进行克隆。

综合运用生物信息学方法，设计引物，克隆青枯病抗性相关的候选基因，将其插入马铃薯中，验证其抗青枯病性。

然后利用qRT-PCR技术，探究
不同马铃薯品种中青枯病抗性相关基因的表达模式，并研究其对青枯病
免疫反应的调控作用。

三、技术路线
1.筛选马铃薯中与青枯病抗性相关的候选基因，并进行克隆。

2.利用qRT-PCR技术，分析不同品种马铃薯中候选基因的表达模式。

3.将克隆得到的基因插入马铃薯中，验证其抗青枯病性。

4.研究不同马铃薯品种中青枯病抗性相关基因的调控机制。

四、意义与价值
本课题的研究成果将推动马铃薯育种的发展。

通过挖掘马铃薯中的
青枯病抗性相关基因，并研究其表达模式及对病原体的免疫反应调控机制，将有助于开发出更抗病的马铃薯新品种，提高马铃薯产量和质量，
减少青枯病给马铃薯种植业带来的经济损失。

农药防治马铃薯青枯病的症状及的方法
农药防治马铃薯青枯病的症状及的方法
一、症状：
病后病株稍矮缩，叶片浅绿或苍绿，下部叶片先萎蔫后全株下垂，开始早晚恢复，持续4－5天后，全株茎叶全部萎蔫死亡，但仍保持青绿色，叶片不凋落，叶脉变褐，茎出现褐色条纹，横剖可见维管束变褐，湿度大时，切面有菌液溢出。

块茎染病后，发病轻的不明显，发病重的脐部呈灰褐色水浸状，切开薯块，维管束圈变褐，挤压时溢出白色粘液，但皮肉不从维管束处分离，严重时外皮龟裂，髓部溃烂如泥。

二、发生规律：
细菌引起的病害。

病菌随病残组织在土壤中或病薯块上越冬，病菌通过灌溉水或雨水传播，从茎基部或根部伤口侵入，是典型维管束病害。

一般酸性土发病重。

土壤含水量高、连阴雨或大雨后转晴气温急剧升高发病重三、防治方法：
青枯病是由一种细菌性病菌引起植株整株枯萎而死亡，目前还未发现防治青枯病的有效药剂，主要还是以农业防治为主。

1.发病初期用72%农用链霉素可溶性粉剂4000倍液，或3%中生菌素可湿性粉剂800-1000倍液，或77%氢氧化铜可湿性微粒粉剂400－500倍液
2.灌根，隔十天灌一次，连续灌2－3次，也可用可杀得2000+金云大-120稀释800倍液进行灌根或用农用链霉素+金云大-120灌根。

马铃薯青枯病的识别与防治马铃薯青枯病是一种危害极为严重的病害，此病全株表现症状。

一般幼苗期较少显症，多在现蕾开花后表现急性显症。

染病植株比健株稍矮缩，叶色较浅，在晴天的午间一般是上部个别小叶或复叶出现萎蔫，晚间及清晨尚可恢复；以后逐渐加重致全株叶片萎垂不能再恢复，全株茎叶萎蔫死亡，但仍保持青绿颜色，叶片亦不脱落。

随后叶脉逐渐变褐，茎部亦出现褐色条纹。

横切病株茎部，可见到维管束变褐色，用手挤压有污白色菌脓从切口处溢出，如用玻璃杯盛清水，将病茎切面插入水中，约半分钟后可以见到从维管束切口处排出似雾状的细菌群，这是识别和诊断青枯病的一种最好方法。

病株所结薯块如染病轻，外表无明显症状，染病重的脐部变灰褐色湿润状，切开病薯，维管束环变褐，稍挤压亦溢出污白色细菌脓液，严重的块茎外皮龟裂，髓部软腐溃烂。

此病对马铃薯有潜伏侵染，外表虽无明显症状，但因细菌已侵入并潜伏薯块内，在贮运销售期间，若条件合适就会继续发展及致引起块茎大量腐烂。

防治马铃薯青枯病可采取下列措施：1.选用无病种薯。

从外省调进的种薯播种前要留心挑选无病的作种用，切块时要特别注意，若发现其中有带菌种薯要立即剔除，并用75%酒精把切刀消毒后才可继续使用；2.实行轮作。

不可与茄科蔬菜或花生、大豆等作物连作或邻作；3.采用小块健康种薯整薯播种，可避免切块造成侵染；4.加强栽培控病措施，如清洁田园、翻晒土壤，适当施石灰降低土壤酸度。

切勿使用未腐熟可能带菌的土杂肥，增施优质有机肥及磷钾肥，防止大水漫浇，田间发现病株立即拔除，病穴施适量石灰以防细菌扩散；5.药剂防治。

药剂应作预防性喷浇，若田间已发现病株，施药效果就较差。

药剂可选用庄园乐、农用硫酸链霉素、络氨铜、可杀得等。