DNA和RNA提取原理和方法 PPT

DNA和RNA提取方法及原理DNA提取方法及原理：1.酚/氯仿法：酚/氯仿法是最常用的DNA提取方法之一、其原理是通过酚类物质将细胞质膜破坏，使DNA从细胞内溶解出来，然后利用氯仿的重度稠化剂作用，将DNA上层的蛋白质、脂类等杂质与下层的DNA分离。

2.盐溶液法：盐溶液法是一种温和的DNA提取方法，适用于多种植物和动物样品。

其原理是将样品细胞裂解后，加入高浓度盐溶液中，通过离心分离出DNA上层液相。

3.硅胶柱法：硅胶柱法是一种高效纯化DNA的方法，可去除杂质并提高DNA的纯度。

该方法利用硅胶柱对DNA进行吸附，去除杂质，然后通过洗脱得到纯净的DNA。

这种方法常用于分离较小的DNA片段。

4.酶解法：酶解法是一种特异性较高的DNA提取方法，通过特定的酶切酶对细胞膜进行消化，将DNA释放出来。

常用的酶解酶有蛋白酶K和蛋白酶E等。

RNA提取方法及原理：1.酚酸法：酚酸法是最常用的RNA提取方法之一、它基于RNA和DNA的相对稳定性差异，利用酚酸破坏细胞膜、沉淀RNA，然后利用酚酸与蛋白质和DNA 形成复合物，分离RNA。

2.硅胶柱法：硅胶柱法也适用于RNA提取。

与DNA的硅胶柱法不同的是，RNA在硅胶柱上结合后会进行一系列的洗脱步骤，除去污染物。

该方法能有效去除DNA、蛋白质、盐和其他杂质。

3.离心收集法：离心收集法是一种简便、快速的RNA提取方法。

根据RNA在水相中的溶解性，通过离心将细胞裂解液中的RNA分离出来，然后加入酒精沉淀纯化。

4.硅酸盐法：硅酸盐法是一种特异性较高的RNA提取方法，通过利用试剂中的硅酸盐吸附RNA，并在洗涤步骤中去除杂质，从而得到纯净的RNA。

DNA与RNA提取方法DNA及RNA提取的方法有很多种，常用的方法包括酚-氯仿法、离心法、磁珠法、膜结合法和柱式纯化法等。

酚-氯仿法是最早用于DNA与RNA提取的方法之一，它利用酚和氯仿的差异溶解力来分离DNA/RNA和蛋白质。

首先，将待提取的细胞裂解并加入含有酚的溶液中，酚能破坏细胞膜和核膜，使DNA/RNA释放到溶液中，然后加入氯仿，形成两相体系。

DNA/RNA会在两相之间进行分配，DNA/RNA会富集在上层的酚相中，而蛋白质则富集在下层的氯仿相中。

最后，利用离心将两相分离，然后从上层分离出DNA/RNA即可。

离心法是用于分离DNA/RNA和其他细胞组分的一种常见方法。

通过离心的方式来分离细胞组分，离心力可以使大分子的DNA/RNA和小分子的蛋白质等有差异的质量在离心仪中发生分离。

首先，将待提取的细胞离心，将细胞沉淀，然后将沉淀的细胞裂解，并加入适当的缓冲液使DNA/RNA释放到溶液中。

再次进行离心，使DNA/RNA沉淀到底部，上清液中只剩下其他细胞组分，最后将底部的DNA/RNA沉淀收集，即可得到纯化的DNA/RNA。

磁珠法是一种通过磁性珠子来选择性纯化DNA/RNA的方法，它的原理是磁性珠子上特定的配体能够与DNA/RNA结合。

首先，将待提取的细胞裂解，并加入磁性珠子，磁性珠子上的配体与DNA/RNA结合形成复合物，然后用磁力将复合物沉淀到底部，上清液中只剩下其他细胞组分。

然后，去除上清液，用适当的缓冲液洗涤磁性珠子上的复合物，最后用缓冲液溶解复合物，即可得到纯化的DNA/RNA。

膜结合法是一种通过特定质量的薄膜来选择性吸附DNA/RNA的方法。

膜上的小孔可以使DNA/RNA通过，而使大分子如蛋白质等无法通过。

首先将待提取的细胞裂解，并加入适当的缓冲液，使DNA/RNA完全释放到溶液中。

然后，将溶液滴在膜上，通过重力或离心使DNA/RNA通过膜上的小孔，将DNA/RNA捕获在膜上，上清液中只剩下其他细胞组分。

DNA和RNA提取方法及原理DNA提取方法：1.酚/氯仿方法：这是最早应用的DNA提取方法之一，适用于绝大多数生物样本。

原理是利用酚酸抽提DNA，酚酸能溶解细胞膜和蛋白质，而DNA在酚相沉淀。

然后用氯仿提取，分离DNA与酚相中的蛋白质和RNA。

最后通过乙醇沉淀纯化DNA。

这种方法可以得到高质量的DNA，但操作过程相对繁琐。

2.硅胶基质法：硅胶基质可吸附DNA，该方法使用硅胶膜或硅胶粉末来固定DNA，通过洗涤去除杂质，最后用洗脱液从硅胶上洗脱DNA。

这种方法具有简便和高纯度的优点，适用于大规模提取DNA。

3.盐酸法：盐酸法以酸性条件下使DNA变为不溶性沉淀物的原理，通过加入盐酸将DNA沉淀下来，然后经过洗涤和乙醇沉淀纯化。

这种方法适用于提取纯度要求不高的DNA。

RNA提取方法：1.酚酸提取法：这是最常用的RNA提取方法之一、原理类似于DNA的酚/氯仿法，通过酚酸将核酸与蛋白质和其他杂质分离。

然后通过氯仿脱脂，去除酚相中的蛋白质，并且获得RNA水相。

最后通过乙醇沉淀纯化RNA。

这种方法适用于大多数样品，得到的RNA纯度较高。

2.硅胶基质法：与DNA提取类似，它也适用于RNA的提取。

通过硅胶膜或硅胶粉末结合RNA并洗脱，用洗脱液分离RNA与杂质。

这种方法适用于大规模提取RNA。

3.氯仿法：这是一种较为简便的RNA提取方法，它通过氯仿脱脂去除脂质和其他杂质，并且能够同时去除DNA。

最后用乙醇沉淀纯化RNA。

这种方法适用于需要较快速提取RNA的情况。

DNA和RNA提取的基本原理都是通过分离和纯化DNA或RNA与其他杂质的物质。

酚酸提取法和硅胶基质法同属于酚酸法，都是通过酚酸和氯仿来分离DNA或RNA与蛋白质和其他杂质。

其中酚酸能溶解细胞膜和蛋白质，并且DNA或RNA在酚相中沉淀，而蛋白质和RNA在氯仿相中溶解。

然后通过洗脱和纯化步骤，从酚酸相中提取DNA或RNA。

盐酸法与酚酸法不同，它是通过酸性条件下使DNA变为不溶性沉淀物来分离DNA与其他杂质。

RNA与DNA提取一.DNA的提取方法简介为了研究DNA分子在生命代谢中的作用，常常需要从不同的生物材料中提取DNA.由于DNA分子在生物体内的分布及含量不同，要选择适当的材料提取DNA。

动植物中，小牛胸腺?动物肝脏?鱼类精子，植物种子的胚中都含有丰富的DNA。

微生物中，谷氨酸菌体含7%~10%，面包酵母含4%，啤酒酵母含6%，大肠肝菌含9%~10%。

从各种材料中提取DNA方法不同，分离提取的难易程度也不同。

对于低等生物。

如从病毒中提取DNA 比较容易，多数病毒DNA 分子量较小，提取时易保持其结构完整性。

从细菌及高等动植物中提取DNA难度大一些。

细菌DNA 分子量较大，一般达2×10 道尔顿。

因此易被机械张力剪断。

细菌DNA，除核DNA 外，还有质粒DNA 等。

1、核酸的理化性质RNA和核苷酸的纯品都呈白色粉末或结晶，DNA则为白色类似石棉样的纤维状物。

除肌苷酸、鸟苷酸具有鲜味外，核酸和核苷酸大都呈酸味。

DNA、RNA和核苷酸都是极性化合物，一般都溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂，它们的钠盐比游离酸易溶于水，RNA钠盐在水中溶解度可达40g/L。

DNA在水中为10g/L，呈黏性胶体溶液。

在酸性溶液中，DNA、RNA易水解，在中性或弱碱性溶液中较稳定。

天然状态的DNA 是以脱氧核糖核蛋白(DNP)形式存在于细胞核中。

要从细胞中提取DNA 时，先把DNP抽提出来，再把P除去，再除去细胞中的糖，RNA及无机离子等，从中分离DNA 。

DNP和RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响而不同。

DNP在低浓度盐溶液中，几乎不溶解，如在0.14 mol/L的氯化钠溶解度最低，仅为在水中溶解度的1%，随着盐浓度的增加溶解度也增加，至1mol/L氯化钠中的溶解度很大，比纯水高2倍。

RNP在盐溶液中的溶解度受盐浓度的影响较小，在0.14mol/L氯化钠中溶解度较大。

因此，在提取时，常用此法分离这两种核蛋白。

实验三Trizol法提取细菌总RNA一、实验原理Trizol主要物质是异硫氰酸胍,它可以破坏细胞使RNA释放出来的同时,保护RNA的完整性。

加入氯仿后离心,样品分成水样层和有机层。

RNA存在于水样层中。

收集上面的的水样层后RNA 可以通过异丙醇沉淀来还原。

无论是人、动物、植物还是细菌组织Trizol法对少量的组织(50-100 mg)和细胞(5×106)以及大量的组织(≧1 g)和细胞(>107)均有较好的分离效果。

Trizol试剂操作上的简单性允许同时处理多个的样品。

所有的操作可以在一小时内完成。

Trizol抽提的总RNA能够避免DNA和蛋白的污染。

主要试剂和器材Trizol 溶液氯仿异丙醇75%乙醇0.1% DEPC水超净工作台 2.0 mL离心管无Rnase移液枪紫外分光光度计石英比色皿泳槽和模具电泳仪凝胶成像系统大肠杆菌实验步骤一. 采用Trizol 溶液提取细菌的总RNA挑取大肠杆菌菌单菌落培养至稳定期取菌液2.0 mL 于2.0 mL离心管离心得菌体2、每管加入1 mL Trizol 溶液盖紧管盖激烈振荡15 s室温静置5 min 4℃12000 g离心10 min取上清转入(约 1 mL)新的2.0 m L离心管中每管加入0.2 mL 的氯仿(0.2 体积Trizol)盖紧盖剧烈振荡15 s室温静置3 min4℃, 12000 g, 离心10 min，小心吸取上层水相转入另一新的2.0mL 离心管，测量其体积,加氯仿时应充分震荡使其充分乳化。

加入1倍体积的氯仿，盖紧盖，剧烈振荡15 s，室温静置3 min，4℃12000 g离心10 min 小心吸取上层水相，转入另一已编号新的2.0mL 离心管。

加入0.5 mL 的异丙醇(0.5 体积Trizol)轻轻颠倒混匀，室温静置10 min，4℃12000 g离心10 min，RNA 沉于管底，小心吸去上清6、加1 mL75%的乙醇(预冷),并轻柔颠倒，洗涤沉淀4℃7500 g离心5 min,小心弃上清，微离吸去剩余乙醇，室温干躁10 min。