检验科微生物室ppt课件汇编

膜磷壁酸 壁磷壁酸 表面蛋白：SPA、M蛋白
Ｇ－菌细胞壁 特殊结构 (外膜)
磷脂
脂蛋白
类脂Ａ：毒性部分
脂多糖（LPS，内毒素）： 核心多糖：属和组特异
特异多糖：种和型特异
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Ｇ＋和Ｇ－菌细胞壁差异：
特征 强度 厚度
肽聚糖层数 肽聚糖含量
磷壁酸 外膜 结构
革兰氏阳性菌 较坚韧
厚，20～80nm
牛痘、巴斯德（霍乱、炭疽、狂犬疫苗）、白喉抗毒素动 物血清治愈白喉。
（３） 抗生素的发现：
目前遇到的问题：滥用导致耐药性增高
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3． 现代微生物学时期：近二、三十年
（1）新病原微生物的发现
a．传统病原卷土重来； b．新型病原。
（2）致病机理的深入研究
a．采用新技术； b. 各种致病因素的分子机理及调控。
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（二）细菌的变异现象
形态与结构变异 培养特性变异 毒力变异 耐药性变异
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（三）细菌变异的机制
突变
基因的转移和重组
转化（transformation）是受体菌直接摄取供体菌 游离的DNA片段，通过与染色体重组，获得了供体 菌的部分遗传特性。
转导(transduction)是噬菌体为媒介，把供细菌的基 因转移到受体菌内，导致后者基因改变的过程。
微生物的进化分类、生命活动规律及与动植 物、人类、自然相互关系。 按研究对象分：细菌、病毒、真菌学 按应用领域分：工业、农业、医学、兽医 按研究方向分：基础微生物、分子微生物学、
微生态学 等
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医学微生物学(medical microbiology)：与医 学有关病原微生物的生物性状、致病机理、免 疫性及有关技术和理论的应用。

人乳头瘤病毒
常见微生物感染的症状与治疗
病原菌 淋球菌 产生β内酰胺酶的细菌
HCV
症状 分泌物增多，性交痛，背痛 患者无明显症状，但可能引起 败血症等严重疾病 发热、疲乏、肝炎症状
治疗方法
使用亚胺培南等药物
使用β-内酰胺类药物，如头孢 菌素类药物、亚胺培南等
按病情和肝功能状态，选择适 当的中西药组合治疗
1 培养基制作
2 技术操作
3 临床应用
如Sabouraud葡萄糖琼脂 培养基、鸟氏培养基、马 铃薯葡萄糖琼脂培养基等。
如准备培养基、无菌操作、 样品处理、接种、观察等 技术操作。
如寻找致病菌等方面的应 用。
寄生虫的鉴定分离技术
技术 直接涂片法
纳滤法
离心法
原理
特点
在载玻片上涂薄样，用10%甲 醛加码锥固定后，用染色法制 备标本，适用于局部感染如阴 道滴虫病、血吸虫病等。
1
细菌培养法
2
以丰富的营养培养基为基础，适用于细
菌数量较少、病原微生物缺乏特异性表
征的情况。
3
核酸检测
4
包括PCR、RT-PCR、核酸杂交等多种技 术，具有灵敏度高、特异性好的特点。
细菌涂片法
对细菌进行初步的定性鉴定，检测效率 高。
血清学检验方法
主要用于肝、梅毒、淋病、结核、病毒 性疾病等的诊断和治疗。
新型微生物检测技术发展趋势
1 微生物总体检测技术
微生物总体检测技术正以国
2 深度测序技术在微生物
学中的应用
际公认的观点和思路推广，
深度测序技术可将微生物组
是临床微生物检验的新趋势。
中所有细菌、病毒等微生物
分类特征分析清楚，洞悉小

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•2
微生物实验室的分区
一般分为下列区域: 接样室、样品保存室、培养基配制室、洁净室、生化室 、培养室、仪器室和洗刷消毒室，此外还有办公室。
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3
•3
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4
•4
实验室核心工作间的照度不低于350 lx,其他区域照度不低于 200 lx，宜采取吸顶式防水洁净照明灯。
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天平
最大量程：100g、120g等 可读性精度：0.1mg
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•17
精密电子稀释仪
样品量：0.5-1000g（依靠系数调整） 稀释系数：2-1000 液流速度：950ml/min 重量误差精度：<1%
能够准确释放稀释液的重量。
借助经过消毒的均质袋，可对样本进行 准确的稀释，最大程度地减少手工接触 操作，避免样品污染。
实验室的温度宜控制18℃~26℃范围内。
实验室的相对湿度宜控制30%~70%范围内。
在安全柜开启情况下，核心工作间的噪声应不大于68 dB(A)。
------GB 19489-2008 实验室 生物安全通用要求
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•5
病原微生物分类
国家根据病原微生物的传染性、感染后对个体或者群体的危害程度， 将病原微生物分为四类： 第一类 指能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我 国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。（天花病毒）
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•10
洁净室分级
洁净度级别 100级
尘粒最大允
≥0.5μm尘粒数
浮游菌/立方米
3,500

标本的处理

标本的处理：对环境敏感的细菌（如脑膜 炎奈瑟菌 ，淋病奈瑟病等应保温并立即送 检）。其他标本最好在采集后2h内送检。 若不能及时送检，标本应在一定环境下保 存，如支气管洗液，心包液，痰，尿等标 本应在保存在4℃环境中。
标本的显微镜检查
1.不染色细菌标本的检查 2.细菌染色标本的检查： (1)革兰染色：细菌学中最经典，最常用的染色 方法，可将所有细菌分为G＋G－ （2）抗酸染色：大多数为非抗酸性细菌，所以 只针对麻风病，结核病的细菌检查 （3）荧光染色：敏感性强，效率高且容易观察
常见标本的采集
血液标本：严格无菌操作，用0.5%的碘伏消毒 瓶盖和静脉采血部位（先注入需氧瓶，后注入 厌氧瓶），不得放入冰箱，应立即送检。 尿标本：嘱咐病人留取早晨清洁中段尿,留尿前 应仔细清洗会阴部，将前段尿排去，中段尿留 取约10-20ml，直接排入专用的无菌杯中。 痰标本：（漱口）晨痰为佳，用力咳出呼吸道 深部的痰，吐入无菌标本杯。应大于1ml。 粪便标本：采集脓血，粘液部分2-3g,外观无异 常的大便应从不同部位取材，放入无菌杯中。
抗菌药物敏感性试验

3.E-text法：该方法 结合扩散法和稀释法 的原理和特点，操作 简便如扩散法，但可 以同稀释法一样直接 定量测出药物对待检 菌的MIC。
抗菌药物敏感性试验

结果的测量
科玛嘉琼脂培养基
细菌分布情况
其中：肠杆菌科细菌占所有分离菌株的44.8 ％ ， 其中最多见者依次为大肠埃希菌、 克 雷伯菌属、 肠杆菌属、 变形杆菌属； 不发 酵糖革兰阴性杆菌占所有分离菌株的26.7 ％ ， 其中最多见者依次为不动杆菌属、 铜 绿假单胞菌和嗜麦芽窄食单胞菌。

伤寒及副伤寒感染早期/交叉反应
伤寒及副伤寒感染晚期/预防接种/非特异性回忆反应
伤寒 甲型副伤寒 乙型副伤寒 接种伤寒及副伤寒三联疫苗 非肠热症/早期用抗生素/免疫功能低下
肉毒梭菌
产气荚膜梭菌
第六次 实验内容
一、细菌染色标本检查法 抗酸染色法（操作）
二、标本片观察： （钩端螺旋体 、白色念珠菌，曲霉、枯 草杆菌）
一、抗酸染色原理
分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，主要是分枝菌酸， 它包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要 经过加热和延长染色时间来促使其着色。但分枝杆菌中的 分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名 抗酸染色。
齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与石炭酸复 红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理也不脱色。当再加 碱性美兰复染后，分枝杆菌仍然为红色，而其他细菌及背 景中的物质为兰色。
霍乱弧菌
Figure 3 - Gram stain of Gram – Cholera cells
2.细菌的特殊结构观察
芽胞示教片：破伤风杆菌。 鞭毛示教片：变形杆菌。 荚膜示教片：肺炎双球菌。
产芽芽孢胞细菌的种类
芽孢 菌体 （营养细胞）
破伤风梭菌×1000
鞭毛
变形杆菌鞭毛×1000
3、贴药片；镊子灭菌取药片放置于平皿上的标 记 位置，再灭菌后可取另一药片放置。
4、37℃，过夜培养，观察结果。
药敏实验结果
药敏实验结果
药敏实验
敏感标准
白色葡萄球菌 （ G+ ） 大肠杆菌 （ G- ）
纸片法抑 菌环直径
抗药 中度敏感 高度敏感
青霉素 (10ug/
片) ≦20
21-28 ≧29

肺炎克雷伯菌 ATCC 700603 ESBL阳性菌
参考菌株保存方法
高层琼脂 非苛养菌
低温速冻 苛养细菌
冷冻干燥 长期保留菌株
参考菌株 保存方法
琼脂斜面 现用菌株
室间质评—样本的检测操作程序
1. 测试环境、仪器、试剂的要求 ① 室温：20～25℃ ② 湿度：<80% ③ 试剂：所用试剂或试条均为仪器配套产品 ④ 质控品：为仪器配套产品，并在使用效期内，同时无变质或污染。 ⑤ 仪器：仪器必须有质量控制保证。 2. 质评样品的准备 ① 按测定日期从冰箱中取出参评物，放置至室温(约30min)。 ② 根据标本种类，质控菌株进行培养分离鉴定。 3. 质评样品的测定 ① 质控菌株用小牛血清或肉汤溶解，按标本种类接种各种选择培养基，放适当环境
➢ 卫生部医政司颁布的《全国临床检验操作规程》，美国临床实验标准化协会 （CLSI）定期颁布的最新的质量控制和评议方案。
➢ 检验方法学、操作手册应不断更新，开展循诊医学，不断淘汰无价值的试验， 增加新的有临床价值的试验。
微生物实验室程序 临床微生物制度 ▪ 生物安全防护制度 ▪ 三级报告制度：①涂片；②初步药敏和确切涂片；③正式鉴定和药敏 ▪ 传染病原报告制度 ▪ 菌毒株保存制度 ▪ 废弃物处理制度 ▪ 质量控制制度
临床微生物检验的目的和意义
提供感染性疾病诊断的病原学依据 为医院感染流行病学调查提供依据 为感染性疾病治疗提供用药依据 细菌耐药性监测需要 为合理使用抗菌药物提供依据
二、临床微生物的质量控制
是对人体的各种物质进行微生物学检验，整 个检验过程包括病人样品的采集、运送、处 理，样品中致病微生物的分离、培养、鉴定 ，药物敏感试验，出具检验报告。
称为细菌检验的质量控制。 3. 质量保证：为达到应有的质量水平而采取的措施。 4. 质量评价：用一个客观的公认的标准来评定一个实验室或实验室中某项试验是

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一.药品的微生物限度检查（一）
1.口服药物的微生物检查: ①大肠杆菌的检查： ②细菌总数的检查
2.外用药物的微生物检查: ①绿脓杆菌的检查： ②金黄色葡萄球菌的检查：
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3
药品的微生物限度检查实验方法（一）
1.药品的预处理
口服药 外用药
2克药品加20毫升生理盐水， 研磨制成悬液
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1、制片 涂片、干燥、固定
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2.结晶紫初染 1min——水洗
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3. 碘液媒染
1min——水洗
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4. 95% 酒精脱色 30s——水洗
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5.沙黄复染 1min——水洗、滤纸吸干
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※革兰染色步骤
• 1.制片：取标本（球杆混合物、牙垢） 涂片、干燥、固定
• 2.初染：结晶紫——1min——水洗 • 3.媒染：碘液——1min——水洗 • 4.脱色：95% 酒精——30s——水洗 • 5.复染：沙黄——1min—水洗、滤纸吸干 • 6.油镜观察：
对照菌
(产气杆菌)
蛋白胨水培养 接种1支管 基2支管
接种1支管ห้องสมุดไป่ตู้
葡萄糖蛋白胨 接种2支管 水培养基4支管
接种2支管
枸橼酸盐培养 接种1支管 基2支管
接种1支管
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抗酸染色步骤

微生物实验室分级
根据对所操作生物因子采取的防护措施，将实验室安全防护水平 （bio-safety level，BSL）分为1~4级，BSL-1防护水平最低。 病原微生物
一类 二类 · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · ·
------《中国药品检验标准操作规范》
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洁净室分级
洁净度级别 尘粒最大允许数/立方米 ≥0.5μ m尘粒数 3,500 350,000 3,500,000 10,500,000 ≥5μ m尘粒数 微生物最大允许数 浮游菌/立方米 5 100 500 1000 沉降菌/皿 100级 10,000级 100,000级 300,000级 0 2,000 20,000 60,000 1 3 10 15
三级
四级
7或8
7或8
12或15
12或15
≥30
≥60
≥10
≥25
18~25
18~25
30~70
30~70
≤60
≤60
300
300
-----------GB 50346-2011 生物安全实验室建筑技术规范
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BSL-2
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洁净室
应具有空气除菌过滤的单向流空气装置，操作区洁净度100级或放置同 等级别的超净工作台 室内温度控18~26℃，相对湿度45%~65% 缓冲间及操作室内均应设置能达到空气消毒效果的紫外灯或其他适宜的 消毒装置， 空气洁净级别不同的相邻房间之间的静压差应大于5Pa，洁净室（区） 与室外大气的静压差大于10Pa。 无菌室内的照明灯应嵌装在天花板内，室内光照应分布均匀，光照度不 低于300lx。

光学成像技术在医学检验中的应用
发展高分辨率、高灵敏度的成像技术，提高形态学检测的准确性。
人工智能和大数据在医学检验中应用探讨
人工智能在医学检验中的应用
通过深度学习、机器学习等技术，实现自动化、智能化的检测和分析。
大数据在医学检验中的应用
整合多来源、多维度的数据，挖掘潜在信息，为精准医疗提供支持。
人工智能和大数据结合在医学检验中的应用
微生物的结构
微生物的结构包括细胞壁、细胞膜、 细胞质和核质等部分，其中细胞壁是 微生物特有的结构，不同种类的微生 物细胞壁成分和结构不同。
微生物的超微结构
通过电子显微镜可以观察到微生物的 超微结构，如细菌的鞭毛、菌毛、荚 膜等，这些结构与微生物的致病性和 免疫原性密切相关。
微生物生长与繁殖
微生物的生长条件
微生物的特点
体积微小、种类繁多、分布广泛、代谢旺盛、繁殖迅速、容易变异 等。
微生物在医学检验中的意义
微生物是医学检验中重要的研究对象之一，对于疾病的诊断、治疗 和预防具有重要意义。
微生物分类与命名
微生物的分类
根据微生物的形态、结构、生理 生化特性以及遗传特征等进行分 类，常见的分类系统有伯杰氏系 统细菌学手册、原核生物分类学
病毒性肝炎、艾滋病等。
医院感染控制与预防策略制定
医院感染监测
定期对医院环境、医疗器械、医护人员手等进行微生物监测，及时 发现潜在感染源。
消毒与灭菌
采用物理、化学等方法对医疗器械、环境等进行消毒与灭菌，切断 传播途径，降低医院感染发生率。
手卫生与个人防护
加强医护人员手卫生管理，提高个人防护意识，减少医源性感染的发 生。
2024年医学检验微生 物ppt课件
contents

微生物室通过监测和鉴定病原菌，有助于及时发现和控制感染的传 播，保护患者和医务人员的健康。
抗菌药物合理使用的指导
微生物室的药敏试验结果可以为临床医生提供抗菌药物选择的参考 ，有助于减少抗菌药物的滥用和耐药性的产生。
微生物室的历史与发展
历史回顾
微生物室的历史可以追溯到20世纪初，随着医学微生物学的不断发展，微生物 室的功能和职责也不断完善。
检验科微生物室
汇报人：可编辑
2024-01-11
目录
Contents
• 微生物室概述 • 微生物室设备与器材 • 微生物室工作流程 • 微生物室常见检测项目 • 微生物室质量控制与管理 • 微生物室案例分享
01 微生物室概述
微生物室的定义与功能
定义
微生物室是医院检验科下属的一个专业实验室，主要负责临 床微生物的分离、培养、鉴定和药敏试验等工作，以指导临 床合理选用抗菌药物，控制感染的发生和传播。
统进行耐药性检测。
监测结果显示，医院内常见 病原菌对多种抗生素的耐药 率较高，如大肠埃希菌对青 霉素和头孢菌素的耐药率超
过50%。
该监测项目及时发现并控制 了医院内细菌耐药性的传播 ，为临床医生提供了有效的 抗生素选择指导，提高了治
疗效果。
案例二：某食品企业食品安全检测项目介绍
检测目的
确保食品企业生产的 食品符合国家食品安 全标准，保障消费者 健康。
定期对设备进行保养 、维修和校准，保证 设备的正常运行和使 用效果。
检测方法与标准操作规程
1
选择合适的检测方法，确保检测结果的准确性和 可靠性。
2
制定标准操作规程，规范实验操作，提高检测质 量。
3
对操作规程进行定期审查和更新，以适应新的检 测需求和技术发展。

公开课pptcontents •微生物实验室培养基础•细菌培养方法与技巧•真菌培养方法与技巧•病毒培养方法与技巧•细胞培养在微生物研究中的应用•实验设计与数据分析目录微生物实验室培养基础微生物概述与分类微生物定义与特点微生物是一类肉眼难以看见或看清的微小生物，具有种类繁多、分布广泛、代谢类型多样等特点。

微生物分类根据形态、结构、生理生化特性等，微生物可分为细菌、真菌、病毒、原生动物等大类。

微生物在自然界中的作用微生物在自然界中扮演着重要角色，参与物质循环、能量流动等生态过程。

实验室常用设备介绍用于观察微生物形态、结构等特征的仪器，包括光学显微镜和电子显微镜等。

提供稳定的温度、湿度等环境条件，用于微生物的培养和繁殖。

如高压蒸汽灭菌器、干热灭菌器等，用于对实验器具和培养基等进行灭菌处理。

提供无菌操作环境，保护实验人员免受微生物感染。

显微镜培养箱灭菌设备生物安全柜培养基类型及选择培养基类型培养基定义与组成根据微生物种类和实验需求，培养基可分为固体培养基、液体培养基、半固体培养基等类型。

培养基选择原则无菌操作技术要点无菌操作概念与重要性无菌操作技术要点无菌操作注意事项细菌培养方法与技巧平板划线法斜面接种法液体培养基接种法注射接种法细菌接种技术细菌接种至培养基后，对新环境有一个短暂适应过程，此期曲线平坦稳定，因为细菌繁殖极少。

延迟期对数期稳定期衰亡期又称指数期，此期生长曲线上活菌数直线上升，表示细菌以恒定的几何级数极快增长。

该期的生长菌群总数处于平坦阶段，但细菌群体活力变化较大。

随着稳定期发展，细菌繁殖越来越慢，死亡菌数明显增多。

细菌生长曲线解读比浊法根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量。

显微镜直接计数法将待测样品与等体积的已知浓度的红细胞悬液混合均匀，滴在载玻片上，盖上盖玻片后镜检。

测重法取一定体积的待测培养液或洗涤液过滤，将滤纸上截留的过滤物干燥、称重，以此推算培养液或洗涤液中的细菌含量。

细菌计数方法细菌保存与复苏常规保存法半固体穿刺保存法冷冻真空干燥法液氮超低温保存法真菌培养方法与技巧表面接种法穿刺接种法倾注接种法030201真菌接种技术真菌生长条件及特点01020304温度湿度光照氧气真菌计数方法平板计数法显微镜计数法光电比色法1 2 3斜面保存法液体石蜡保存法冷冻干燥保存法真菌保存与复苏病毒培养方法与技巧病毒接种技术选择适当细胞系观察细胞病变效应（CPE ）准备病毒接种物接种方法病毒生长条件及特点温度与湿度营养需求A B C D光照与pH值生长特点病毒滴度测定方法空斑形成单位法（PFU）通过计算病毒在细胞培养物中形成的空斑数来测定病毒滴度。

临床意义：
6、脓液及创伤感染分泌物：化脓性感染可 由单种或多种细菌引起。常见的病原菌主 要有金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌、肺 炎链球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、 变形杆菌、结核分枝杆菌、诺卡菌和厌氧 菌（梭杆菌和拟杆菌）。
临床意义：
7、各个部位穿刺液（胸水、腹水、心包液、关 节液及鞘膜液等）的细菌检查对于确定该部位是 否细菌感染具有重要的诊断价值。正常穿刺液为 无菌的，若从病人穿刺液中查见致病菌或条件致 病菌则提示该部位有细菌感染。胸腔感染的病原 菌以结核分枝杆菌多见，其次是金黄色葡萄球菌 、溶血性链球菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌等 ；腹腔感染的病原菌以肠道细菌如大肠埃希菌、 粪肠球菌，以及结核分枝杆菌多见；心包炎和关 节腔液以金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、大肠 埃希菌和铜绿假单胞菌等多见。
临床意义：
2、脑脊液的细菌检查对细菌性脑膜炎的诊 断有重要的临床价值。脑脊液为无菌体液， 检出细菌提示细菌性（急性化脓性或结核性 等）脑膜炎。化脓性脑膜炎最多见脑膜炎奈 瑟菌，肺炎链球菌居第二位。3个月至5岁儿 童细菌性脑膜炎的主要致病菌是流感嗜血杆 菌，新生儿脑膜炎多由大肠埃埃希菌、B群 溶血性脑膜败血黄杆菌引起的，特别是早产 婴儿。结核分枝杆菌引起结核性脑膜炎。葡 萄球菌、产单核细胞李斯特菌等。
3、留取标本后请及时送检。
临床意义：
1、血液标本的细菌培养是诊断菌血症和败血 症的基本方法。正常人的血液是无菌的， 如果从患者血液检出细菌，一般应视为病 原菌（排除采集标本或其他操作过程污染 ），提示有菌血症或败血症，或心内膜炎 、心包炎、血源性骨髓炎。常见病原菌主 要有金黄色或表皮葡萄球菌、某些革兰氏 阴性杆菌、链球菌（A、B群，肺炎链球菌 ）、肠球菌、产单核细胞李斯特菌、脑膜 炎奈瑟菌、伤寒及副伤寒沙门菌和厌氧菌 等。