Folin-Ciocalteu显色剂的配制

Folin-Ciocalteu比色法测定板栗总苞提取液中总多酚的含量田桂芝;李绍明;王大超;侯立白【摘要】[目的]探索一种简单、科学、准确的分析多酚的方法,使富含多酚的板栗总苞废弃物得到充分的再利用.[方法]采用Folin-Cio-calteu比色法测定板栗总苞中多酚含量,并对碳酸钠、Folin-Ciocalteu试剂用量及显色温度、显色时间进行优化.[结果]该测定方法的最佳条件为:取0.50 ml板栗总苞提取液,加入3.0ml福林-酚试剂、6.0ml 15％的Na2C03溶液,在40℃务件下反应70 min,测定最佳波长为760 nm.吸光度与多酚含量在0～9 μg/ml范围内有良好的线性关系(y=0.135 1x +0.019 0,R =0.999 3).该方法的平均加标回收率为99.5％,相对标准偏差为1.2％(n=5).[结论]该方法具有精密度高、稳定性好、操作简单、快速、结果准确等优点,可用于板栗总苞多酚含量的测定.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2015(000)006【总页数】4页(P289-291,370)【关键词】板栗总苞;总多酚;Folin-Ciocalteu比色法;含量测定【作者】田桂芝;李绍明;王大超;侯立白【作者单位】沈阳工学院,辽宁抚顺113122;沈阳工学院,辽宁抚顺113122;沈阳工学院,辽宁抚顺113122;沈阳工学院,辽宁抚顺113122【正文语种】中文【中图分类】S509.9;TS207.3板栗(Castanea mollissima Blume)属壳斗科(Fagceae)栗属乔木类经济植物，是世界著名的干果之一［1］。

主要分布于北半球温带及亚热带，在我国大部分地区均有分布，以华北和长江流域各地栽培集中。

我国板栗年总产量达82．5万t，占世界总产量的75%［2］。

据《中药大辞典》［3］记载，板栗具有健脾益气、补肾强筋、散结解毒等功效，能治疗丹毒、肿瘤等疾病，就连板栗壳也具有止咳、化痰、清热、去火的作用，常用于药物治疗。

Reagent）公司名称：上海荔达生物科技有限公司通讯地址：上海市浦东新区顾唐路138弄37号邮政编码：201209公司网址：联系电话：+86-21-61630382E-MAIL:SALES@福林酚试剂（Folin-Ciocalteu's phenol Reagent）使用说明产品性质：本试剂采用钨酸钠、钼酸钠、磷酸、浓盐酸按一定比例加热回流后加入硫酸锂精制而成，色泽金黄、透亮，是实验室测定溶液中蛋白质、多肽、多酚或酪氨酸等物质含量的常用试剂。

本品酸度为1N，请根据实验需要直接使用或适当稀释（说明书以蛋白含量测定为...........例.，如需用于其他物质的检测，请参考相关标准或文献）。

本试剂可测定蛋白浓度0.05～1mg/mL，当蛋白浓度范围为0.05～0.5mg/mL 时，线性关系最好。

※如果待测样品蛋白浓度超过此范围，请适当稀释到合适浓度范围。

※本试剂具有腐蚀性，应避免接触皮肤、粘膜等；试剂颜色变为墨绿色时应弃用。

实验前准备工作1、配制A1：称取20g 无水碳酸钠、4g 氢氧化钠溶解于1L 水中；2、配制A2：称取0.2g 硫酸铜溶于20mL 水中；3、配制A3：称取0.4g 酒石酸钾钠溶于20mL 水中；在测定的当天将A1:A2:A3按100:1:1的体积比混合，即为试剂A，混合放置30分钟后使用。

※先将A2和A3混合，混合液再与A1混合，次序颠倒可能有沉淀产生。

试剂A 只能当天使用，如产生沉淀或混浊需重新配制，三种溶液分开于室温下可长期保存。

4、先制作2mg/mL 的蛋白母液，再参考“附表”稀释成各种浓度的蛋白标准品溶液。

操作步骤操作步骤（反应总体积（反应总体积5.6mL mL））※根据实际所需反应总体积，以上试剂用量可按比例缩放（蛋白样品：试剂A：福林酚试剂＝1：50：5）。

包装规格及包装内容包装规格及包装内容：：50mL/125mL/250mL/500mL(250mL×2瓶，白瓶方便取用，棕瓶适于储存)四种包装规格、产品说明书壹份、产品质量承诺卡片壹份。

第３７卷２００９年１０月分析化学（ＦＥＮＸＩＨＵＡＸＵＥ）ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎａｌｙｔｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ增刊Ｆ１７６Ｆｏｌｉｎ．Ｃｉｏｃａｌｔｅｕ比色法测定保健品中多酚总量何莎莉＋王钫（浙江省农业科学院质量标准研究所，杭州３１００２１）目前多酚的测定方法主要有高锰酸钾法、酒石酸亚铁比色法、原子吸收法、紫外分光光度法等。

Ｆｏｌｉｎ．Ｃｉｏｃａｌｔｅｕ比色法原理是基于Ｆｏｌｉｎ．Ｃｉｏｃａｌｔｅ试剂中的钨钼酸可以将多酚化合物定量氧化，自身被还原（、矿变为、Ⅳ５＋）生成蓝色的化合物，颜色的深浅跟多酚的含量呈正相关。

目前关于Ｆｏｌｉｎ．Ｃｉｏｃａｌｔｅｕ比色法的条件研究较少【ｌ，２Ｊ，不同文献中比色条件的选择差异很大，本研究主要探讨Ｆｏｌｉｎ．Ｃｉｏｃａｌｔｅｕ比色法测定保健品时的最佳显色条件，考察了本方法的稳定性、精密度、重现性。

Ｌａｍｂｄａ紫外．可见分光光度计（Ｐｅｋｉｎ．Ｅｌｍｅｒ公司），ＤＣ．２００６低温恒温槽（宁波市海曙天恒仪器厂），ＤＫ．￥２２型电热恒温水浴锅（上海精宏实验设备有限公司），ＢＳ．２２４Ｓ电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）。

绿原酸购自Ｓｉｇｍａ公司；Ｆｏｌｉｎ．Ｃｉｏｃａｌｔｅｕ’Ｓ酚试剂购自上海ＭＯＬ．ＩＭＭＵＮＯＢＩＯ生物化学实验室；无水碳酸钠为分析纯，购自浙江中星化工试剂有限公司。

根据绿原酸溶液经显色反应后的吸收光谱可知，绿原酸溶液与Ｆｏｌｉｕ．Ｃｉｏｅａｌｔｅｕ试剂反应显色后在７５０～８００ｎｍ范围内有一明显吸收峰，实验选择吸收最强处７８０ｎｎｌ作为测定波长。

将各比色试剂混合均匀后，考察显色时间对吸光度值的影响。

结果表明，４０ｍｉｎ内吸光值增大，显色反应迅速，反应液颜色变蓝且蓝色逐渐加深，４０ｍｉｎ以后吸光度值趋于稳定，为使反应完全，将反应时间定为６０ｍｉｎ。

显色反应温度对显色效果也有一定影响，在低温条件下，显色反应缓慢，吸光值较小，随着温度提高，反应速度加快，吸光值也逐渐增大。

福林-酚比色法测定桑椹中总多酚李巨秀，王柏玉【摘要】摘要：以桑椹为原料，没食子酸为标准物质研究了用福林-酚比色法测定桑椹提取液中多酚类物质含量的最适反应条件。

结果表明，当福林-酚试剂与质量分数为12%的Na2CO3溶液体积比为1:2、反应温度20℃、反应时间2h时，总多酚的含量与吸光度呈良好的线性关系，测定方法的平均回收率为97.63%，相对标准偏差(RSD)为4.5%。

该方法具有所用试剂量少、操作方便、灵敏度高、精密度高、稳定性高等优点，适宜桑椹样品总多酚含量的测定。

【期刊名称】食品科学【年(卷),期】2009(030)018【总页数】4【关键词】桑椹；Folin-Ciocaileu；比色；总多酚含量桑椹(Fructus mori L.)为桑科植物桑的果实，富含多酚类化合物，是桑椹中一类重要的生物活性物质，其主要成分是花色苷[1-2]。

据大量研究报道，多酚化合物具有清除自由基、抗动脉硬化、降血脂、防止衰老和肿瘤等功能[3-6]，已经成为当前功能性食品研究的热点。

近年来对于苹果、葡萄、茶叶等的多酚物质的研究较多和深入[7-9]，而对桑椹多酚研究的报道较少。

陕西有大面积的桑椹种植区，研究桑椹中的多酚化合物，对提高桑椹经济价值，增加桑蚕业的附加值具有一定的推动作用。

多酚含量的测定方法有高锰酸钾法、酒石酸分光光度法、原子吸收法、紫外分光光度法等。

各种方法都有局限性，有的操作繁杂、费时，有的测定结果的重复性差，有的测定的误差大、灵敏度差，只能在很小的范围内加以采用[10-12]。

本工作通过乙醇提取桑椹果实中的多酚化合物，以没食子酸为标准物采用福林-酚法测定桑椹中多酚类物质的含量，分别研究最佳吸收波长、显色剂、显色时间和温度，并对分析方法的精密度实验、稳定性实验和加标回收率等进行评价，以期寻找操作简单、分析准确度高、速度快的桑椹多酚的分析方法，为桑椹果的开发利用提供得科学依据。

1 材料与方法1.1 材料与试剂桑椹于2008年采摘于西北农林科技大学桑蚕研究所，分装于保鲜袋中，放置于-30℃冰箱中保藏。

Ｆｏｌｉｎ－Ｃｉｏｃａｌｔｅｕ法测定鱼腥草多酚的含量蔡文国，吴 卫*，邵金凤，陈 鹊，王元彪，刘正琼(四川农业大学农学院，四川 雅安 625014)摘 要：目的：探索优化Folin-Ciocalteu 法测定鱼腥草中多酚含量。

方法：运用不同的溶剂超声提取鱼腥草叶片，比较不同时间提取物用Folin-Ciocalteu 法测得的吸光度。

并以乙醇2h 提取液为对象研究不同的碳酸钠溶液、Folin-Ciocalteu 显色剂加入量、反应温度及时间对吸光度大小及稳定性的影响。

结果：甲醇提取效率最高，其次为乙醇、丙酮和水；提取时间2h ；较适宜测定方法为采用0.5mL 提取液，加入2.0mL 20%的碳酸钠缓冲液、1.5mL Folin-Ciocalteu 显色剂，蒸馏水定容至50.0mL ，55℃保温1.5h ，测定波长为760nm 。

结论：该方法比较快速、准确和稳定，适合推广。

关键词：鱼腥草；多酚；Folin-Ciocalteu 法；超声提取Determination of Polyphenol Content in Houttuynia cordata Thunb. by Folin-Ciocalteu Colorimetric MethodCAI Wen-guo ，WU Wei*，SHAO Jin-feng ，CHEN Que ，WANG Yuan-biao ，LIU Zheng-qiong(Agronomy College, Sichuan Agricultural University, Ya ’an 625014, China)Abstract ：Objective: To establish a quantitative method to assay total polyphenols in Houttuynia cordata Thunb.. Method:Four solvents (methanol, ethanol, acetone and water) were used to extract Houttuynia cordata Thunb. with the assistance of ultrasonic in order to explore the effects of extraction solvent type and length of extraction on the extraction of total polyphenols.Subsequently, the 2 h ethanol extract was used to optimize 20% sodium carbonate amount, Folin-Ciocalteu regent amount,reaction temperature and length of reaction. Results: Methanol was the best extraction solvent, followed by ethanol, acetone and water. The optimum conditions for determining total polyphenols in Houttuynia cordata Thunb. were as follows: a mixture of 0.5 mL of methanol extract, 2.0 mL of 20% sodium carbonate and 1.5 mL of Folin-Ciocalteu reagent diluted with distilled water to 50.0 mL for incubation at 55 ℃ for 1.5 h, followed by detection at 760 nm. Conclusion: The method is simple, accurate and provides an appropriate method for measuring total polyphenols in Houttuynia cordata Thunb.Key words ：Houttuynia cordata Thunb.；polyphenol ；Folin-Ciocalteu ；ultrasonic extraction中图分类号：TS207.3 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2010)14-0201-04收稿日期：2009-10-20基金项目：教育部留学回国人员科研启动基金项目作者简介：蔡文国(1987—)，男，硕士研究生，研究方向为中草药资源评价与利用。

folin酚试剂法Folin酚试剂法是一种常用于测定物质浓度的方法。

它基于Folin-Ciocalteu试剂与物质中的还原性化合物反应产生蓝色产物的原理。

该方法被广泛应用于食品、药品、生物化学等领域的研究中。

Folin-Ciocalteu试剂是一种含有酚酸和磷酸的溶液，它具有优异的氧化性能。

在试验中，Folin-Ciocalteu试剂首先与物质中的还原性化合物反应，生成具有吸收波长为760nm的蓝色产物。

蓝色产物的浓度与物质中还原性化合物的浓度成正比，通过测量蓝色产物的吸光度，可以间接测定物质中还原性化合物的浓度。

Folin酚试剂法的优点在于操作简便、灵敏度高、适用范围广。

它可以测定各种还原性化合物，如多酚类物质、抗氧化剂、维生素C 等。

同时，该方法还可以用于测定植物中的总酚含量，用于评估植物的抗氧化能力和生物活性。

在使用Folin酚试剂法进行测定时，需要注意一些关键步骤。

首先，需要准备好Folin-Ciocalteu试剂溶液，并根据需要调整其浓度。

其次，需要准备待测物质的溶液，并确保其浓度在试剂检测范围内。

然后，将试剂和待测物质混合，充分反应一定时间。

最后，使用紫外可见光谱仪或分光光度计测量蓝色产物的吸光度，并根据标准曲线计算出物质浓度。

Folin酚试剂法的应用非常广泛。

在食品领域，该方法可以用于测定茶叶、咖啡、葡萄酒等中的多酚类化合物的含量，评估其抗氧化性能。

在药品领域，该方法可以用于测定药物中的还原性物质，如双酚A等。

在生物化学研究中，该方法可以用于测定细胞培养基中的抗氧化剂浓度，评估其对细胞的保护作用。

Folin酚试剂法是一种简便、灵敏且广泛应用的测定物质浓度的方法。

它通过与还原性化合物反应生成蓝色产物，并通过测量蓝色产物的吸光度间接测定物质浓度。

该方法在食品、药品、生物化学等领域都有重要的应用价值，为科学研究提供了有力的工具。

单宁含量测定单宁是一种广泛存在于植物中的化合物，对于食品、药品和化妆品等行业具有重要的意义。

因此，准确测定单宁的含量是非常重要的。

在本文中，将介绍三种常用的单宁含量测定方法：Folin-Ciocalteu法、酶法和高效液相色谱法。

一、Folin-Ciocalteu法Folin-Ciocalteu法是一种经典的测定单宁含量的方法，常用于测定果实、蔬菜、茶叶和酒类等样品。

该方法的基本原理是单宁与Folin-Ciocalteu试剂反应，生成蓝色化合物，通过比色测定蓝色化合物的吸光度，从而确定单宁的含量。

具体操作步骤如下：1.准备样品溶液：将待测样品粉碎并称取适量加入溶剂中，使其浓度在1-1000µg/mL范围内。

2. 加入Folin-Ciocalteu试剂：向样品溶液中加入一定量的Folin-Ciocalteu试剂，混匀后静置一段时间，使反应充分进行。

3.加入碱液：向反应溶液中加入碱液，混匀后静置一段时间，使反应继续进行。

4.比色测定：将反应溶液转移到比色皿中，使用紫外可见光谱仪测定反应溶液的吸光度，得到单宁的含量。

二、酶法酶法是一种基于单宁酶的反应原理分析单宁含量的方法，常用于测定茶叶、果汁和葡萄酒等样品的单宁含量。

该方法的基本原理是单宁酶可以与单宁结合，并生成可测定的产物，通过测定产物的光吸收来确定单宁的含量。

具体操作步骤如下：1.准备酶溶液：将单宁酶溶解于合适的缓冲液中，制备一定浓度的酶溶液。

2.准备样品溶液：将待测样品粉碎并称取适量加入缓冲液中，使其浓度在1-1000µg/mL范围内。

3.加入酶溶液：向样品溶液中加入一定量的酶溶液，混匀后静置一段时间，使反应进行。

4.比色测定：将反应溶液转移到比色皿中，使用紫外可见光谱仪测定产物的吸光度，得到单宁的含量。

三、高效液相色谱法高效液相色谱法是一种快速、准确的测定单宁含量的方法，常用于测定茶叶、葡萄酒和草药中单宁的含量。

该方法的基本原理是利用色谱柱将样品中的单宁与其他组分分离，通过测定峰面积来确定单宁的含量。

Folin-Ciocalteu比色法测定石榴皮多酚含量条件的优化杜丹丹;李建科【摘要】[目的]系统研究Folin-Ciocalteu(FC)比色法测定石榴皮中多酚含量的最佳反应条件,为进一步开发利用石榴皮资源提供有效的测试手段.[方法]以没食子酸为标准物质,考察FC试剂浓度、Na2CO3质量浓度、反应时间和反应温度4个因素对FC比色法测定石榴皮多酚含量的影响,用L9(34)正交试验对测定条件进行优选,并对FC比色法的测定效果进行评定.[结果]适宜的显色条件是:FC试剂浓度为0.6 mol/L,Na2CO3质量浓度为0.150g/mL,在25℃避光条件下反应50 Min后,于765 nm处测吸光值.1～6 mg/L没食子酸的吸光度值与其质量浓度呈良好的线性关系,相关系数R2=0.995 8.在优化条件下测得石榴皮中多酚含量为287.46 mg/g,平均回收率为99.31%,平均相对标准偏差(RSD)为1.98%.[结论]FC比色法具有试剂用量少、检测速度快、准确度高、精密度高、稳定性好等优点,可用于石榴皮中多酚含量的测定.【期刊名称】《西北农林科技大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2011(039)005【总页数】7页(P190-196)【关键词】石榴皮;多酚;Folin-Ciocalteu法【作者】杜丹丹;李建科【作者单位】陕西师范大学食品工程与营养科学学院,陕西,西安,710062;陕西师范大学食品工程与营养科学学院,陕西,西安,710062【正文语种】中文【中图分类】TS207.3石榴多酚是从石榴皮中提取的多酚类化合物，其组成成分包括安石榴苷、没食子酸、儿茶素、绿原酸、表儿茶素、咖啡酸、芦丁等多种化合物[1-2]，含量约为石榴皮干质量的10%～30%[3]。

石榴皮多酚类物质的抗病毒、抗菌能力及对消化系统、心血管系统、免疫系统等方面的保健作用已越来越受到人们的关注[4-6]。

多酚含量的测定方法有高锰酸钾法、薄层层析法、气相色谱法、高效液相色谱法、Folin-Ciocalteu比色法(FC比色法的)等多种方法[7-9]。