茶多糖的提取分离课件

茶多酚提取实验蚌埠学院生物与食品工程系综合实验实验名称：茶多酚的提取工艺试验一、实验目的及要求：1.了解茶多酚的性质和用途。

2.了解植物天然产物的常规提取及精制方法。

3.通过本实验的具体操作，掌握并熟悉茶多酚的提取与精制的方法及其操作原理和步骤。

4.掌握提取精制过程中茶多酚的分析检测方法。

二、实验原理：茶多酚是茶叶中多酚类物质的总称，含量约占茶叶干重量的20％－30％。

茶多酚可以消除超氧阴离子和过氧化氢自由基，同时具有抑菌、杀菌，有效降低大肠对胆固醇的吸收，增强机体免疫能力等功能。

目前，茶多酚被广泛的用作食品、饮料、药品和化妆品的天然添加成分。

（离子沉淀法）茶多酚易溶于热水，与一些金属离子形成络合物，并在一定pH值下溶解度很低。

形成的金属离子络合物溶于酸溶液后，茶多酚再次转变成游离状态，再用对茶多酚有更好选择性的溶剂进行萃取、浓缩和干燥，即可得到茶多酚的纯品。

三、实验仪器：电动搅拌器、离心机、pH试纸、真空干燥箱、抽虑瓶、旋转蒸发仪、真空泵、天平、紫外分光光度计、容量瓶、烧杯、量筒等。

四、实验试剂及材料：氯化钠、碳酸氢钠、柠檬酸、硫酸铝、盐酸、亚硫酸氢钠、乙酸乙酯、维生素C（抗坏血酸）、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、硫酸亚铁、酒石酸钾钠、硫酸、绿茶等五、实验内容及步骤：1．浸提1.1 预处理:粉碎干茶叶;粉碎的目的是与液体的接触面增大,使提取率增高；1.2 提取:准确称取经过预处理的干茶叶末10. 00g,按照单因素实验的料液比、浸提温度、浸提时间分别搅拌浸提。

过滤（用抽滤的方法）得到茶多酚提取液。

用附一的方法测提取液中的茶多酚含量。

单因素实验步骤：（1）将称取得10.00g茶叶末置于500ml烧杯中，加入200mL蒸馏水，在85℃下，分别提取0.5h、0.75h、1.0h、1.25h、1.5h，测提取液的吸光度，绘制曲线图，找出最佳提取时间。

（2）称取得10.00g茶叶末置于500ml烧杯中，加入200mL蒸馏水，在所测得的最佳提取时间下，分别在75℃、80℃、85℃、90℃、95℃下浸提，测提取液的吸光度，绘制曲线，找出最佳提取温度。

茶多糖提取工艺的方法摘要：目的：探讨了茶叶多糖的最佳提取条件。

方法：在茶叶多糖的提取中通过对预处理的方法、提取温度、茶叶的老嫩、Sevage除蛋白试剂与提取液之比等因素的改变，探讨了茶叶多糖的最佳提取条件。

结果：茶叶多糖的最佳提取条件为：①老茶叶的茶叶多糖提取率要高于嫩茶叶的茶叶多糖提取率；②茶叶多糖的提取温度在60～70°C提取率较高；③预处理时用乙醇作预处理（虽然乙醇乙醚混合液脱脂的效率最高，但不利于人体健康，且成本较高，舍弃使用）最好；④将Sevage除蛋白试剂与提取液之比配成l：3效果较理想。

结论：用老叶多糖在温度60-70°C用乙醇做预处理时可较高提取茶多糖。

关键词：茶多糖；提取；最佳工艺条件前言茶叶最早是被当作药物使用的，茶的药用实例早已载入史册，现代科学研究也证实了茶叶的药用功能，长期研究表明，茶叶具有降血糖、降血脂、降血压、防辐射、防龋齿、消炎灭菌、抗衰老、抗过敏、抗癌、抗突变等功效，并揭示出茶叶中对人体具有保健效果的有效成分，如儿茶素类、咖啡碱、多糖、粗纤维、叶绿素、B胡萝卜素、维生素B、维生素C、维生素E、维生素P、维生素U等。

目前，茶叶药用成分的提取利用已成为国内外天然药物开发关注的热点[1]。

因此它是一种极具开发利用价值的生物活性物质，它可以被广泛地应用：食品、医疗、保健等各个领域。

深加工是茶叶生产领域的一个重要内容，包括两个方面：第一，将传统加工的成品茶进行更深层次的加工，形成新型茶饮料品种；第二，提取和利用茶叶中的功能性成分，并将这些产品应用于医药、食品、化工等行业。

近20年来，茶叶有效成分的利用研究越来越引起广泛的重视，研究主要集中在茶多糖和茶多酚上，其次是咖啡因和茶黄素[3]。

但茶多糖的提取工艺至今仍不完善。

茶多糖热稳定性较差，在高温或偏酸或偏碱条件下，均会使其中的多糖部分水解而造成损失，因此在提取纯化时应加以注意[本文在茶叶多糖的提取中通过对预处理的方法、提取温度、茶叶的老嫩、Scrag除蛋白试剂与提取液的比等因素的改变，探讨了茶叶多糖的最佳提取条件，并阐述其纯化方法，以期对这种极具利用价值的生物活性物质在提取和纯化方面得到最佳方法，对茶多糖的深入研究和应用提供参考。

在全球经济复苏步伐放缓的背景下，世界茶叶生产依然保持上涨的态势。

茶树种植面积和茶叶产量持续上涨，产大于销的问题依然严重。

2017年，我国茶叶产业发展呈现出产业规模惯性扩张，茶类结构继续调整的特点；2017年全国干毛茶总产量约为260.9万吨；市场需求不足，销售状况不容乐观。

目前，我国经济已进入新常态，茶叶消费增长动力不足的现状仍将继续维持，茶叶企业产能增长速度与老百姓茶叶消费增长速度已经严重不匹配，这是茶叶产业发展面临的难点之一。

为了解决此问题，应扩大茶叶的应用领域，而从茶叶中提取功能成分茶多糖不失为一个好的方法。

茶多糖（TeaPolysaccharides，TPs）是茶叶中具有生物活性的复合多糖，由糖类、蛋白质、果胶和灰分等物质组成，具有降血糖、降血脂、抗血栓、抗癌、抗辐射和增强机体免疫力等多种功效，尤其是降血糖功效明显，对糖尿病的防治具有显著效果。

目前，国内外提取茶多糖的方法主要有水浸法、酸提法、碱提法以及辅助提取法，如微波辅助提取法、酶辅助萃取法和超声波辅助萃取法等。

酸提法和碱提法均对提取条件要求高，所以应用情况不多。

倘采用这两种方法提取茶多糖，应特别注意，使用稀酸法浸提时，时间要短，温度也不要太高；使用稀碱法浸提，则应在氮气流中操作，以防止茶多糖降解失效。

当前，采用较多的茶多糖浸提法主要是水浸法及相关辅助萃取法。

1水浸提法茶多糖的水浸法，首先要把原料磨碎，然后再用水浸提。

焦自明等以低档茶叶提取茶多酚后的茶渣为原料，研究茶多糖的水提工艺及初步纯化技术。

分别对提取过程中的料液比、浸提时间、浸提温度、浸提次数进行了单因素实验，并用L9（3）正交实验优化提取工艺，用醇沉及脱蛋白技术对茶多糖进行初步纯化，得出优化的工艺：料液比1∶30，浸提温度85℃，浸提时间2h，浸提次数3次，浓缩液与95%乙醇用量比为1∶5，乙醇沉淀静置6h，Sevage法脱蛋白3次，茶多糖的得率为4.10%。

水浸法由于操作方便、成本低，因而应用广泛，与其配套的辅助萃取法也被很多研究者采用并作深入研究，因为单纯的水浸法萃取率偏低。

T logy科技分析与检测茶多糖富含灰分、果胶、蛋白质以及矿物质元素等，茶多糖作为一种天然活性物质，其营养丰富，应用价值广泛。

研究发现，茶多糖在调节免疫力、抗血栓、降血脂血糖等方面均有巨大的用途，对于治疗糖尿病有特殊功效。

目前，相关领域专家致力于茶多糖的提取及测定方法研究，挖掘茶多糖更大的应用价值。

1　茶多糖提取及测定方法研究 意义我国茶叶生产量较高，一些高端茶叶的销路比较好，但那些中低端茶叶因为没有销路，而造成资源的大量浪费。

同时在茶叶生产加工过程中产生大量粗枝叶和茶叶灰末等副产品，这些副产品大多没有被合理利用，因此，从中低档茶叶中提取茶叶多糖，有利于解决中低端滞销茶叶及其副产品的再利用问题，发挥其在保健、食品、医药等诸多领域的应用价值。

茶多糖是茶叶中的主要生理活性物质之一，目前我国针对茶多糖还没有具体的标准检测方法，主要是利用其他植物多糖的检测方法来测定茶叶中茶多糖含量[1]。

从茶叶当中提取茶多糖，有利于提高茶叶利用效率，减少资源浪费。

茶多糖的应用价值十分广泛，其具有良好的药理效果，茶多糖的药用作用主要体现在以下方面：首先，摄入适量的茶多糖，有利于保护人体心血管系统，茶多糖具有良好的降血脂、降血糖的功效，它能够增加冠状动脉流量；其次，茶多糖具有良好的抗凝血及抗血栓作用；最后，茶多糖还具有增加机体免疫功能的功效。

虽然茶多糖具有如此多的药理效果，但是由于茶多糖提取技术还比较落后，人们只能依靠饮茶来摄入茶多糖，但这样摄入的茶多糖量是非常小的，难以达到良好的药理效果。

目前的茶多糖提取工艺流程多，难度大，花费成本比较高。

研究茶多糖提取及测定方法，有利于提高茶叶的综合利用价值，优化提取方法，提高提取率，节省提取成本，更好的发挥茶多糖的药理功效。

2　茶叶中茶多糖的提取方法本文所提出的茶多糖提取方法工艺如下：采集茶叶，对其进行粉碎、脱脂等预处理—水浴提取—Sevage法脱蛋白—去除小分子杂质—沉淀称量。

2.1　茶叶预处理首先将采集来的茶叶洗净、晾晒后粉碎。

茶籽多糖的提取多糖的提取方法主要有水提法、乙醇/甲醇提取法、酸碱提取法、复合酶- 热水浸提法、树脂法、絮凝法等。

水提法所得提取物中有一定量的淀粉、蛋白质,导致过滤困难,给后处理带来麻烦。

酸碱提取法容易破坏多糖的结构而导致其活性丧失。

用甲醇作为提取剂,所得多糖纯度较高,但是由于甲醇的毒性,一般不考虑采用。

絮凝法使得大量的多糖被吸附，多糖得率很低，一般不考虑。

用乙醇浸提,不仅选择性好、渗透性强、浸出率高、安全;而且易保留多糖的活性成分。

本实验主要采用的是水提法和乙醇提取两种方法。

并对乙醇提取法的最优条件进行了研究。

1 材料与方法1. 1 材料和仪器茶籽粕:实验室提供；粉碎机；石油醚沸程60℃~90℃AR；三氯乙酸（TCA）；旋转蒸发仪；索式提取器；葡萄糖、甲醇、无水乙醇、浓硫酸、苯酚均为分析纯；紫外可见分光光度计；电子分析天平;真空干燥箱;电子恒温干燥箱；电热恒温水浴锅；循环水真空泵、高速离心机。

1.2原料预处理原料的脱脂处理：原料经过粉碎至60~80目之后烘干至恒重，准确称取15g已粉碎的茶籽饼5份，用滤纸包捆好置于索式提取器中，然后烧瓶中加入120ml提取剂，装好反应装置，加热2h，回流速度5min/次。

2茶籽多糖的提取方法概述2.1醇提法：准确称取50 g经干燥并脱脂的茶籽粕于1 000 mL 烧杯中,按要求加入一定量的酒精溶液。

在一定温度下萃取一段时间,趁热减压抽滤。

滤液加乙醇沉淀。

沉淀加水溶解,加入三氯乙酸(TCA) ,直至溶液中不再有沉淀产生。

过滤,滤液浓缩,真空干燥,即得茶籽多糖。

取一定量得粗茶籽多糖样品，加少量水溶解，然后加入无水乙醇，离心分离。

所得沉淀继续加入无水乙醇，反复沉淀。

最终所得沉淀真空干燥，既得纯度较高的茶籽多糖。

步骤分析：1、茶籽粕应该是经过脱脂并干燥至恒重的。

方法是：取脱脂后的茶籽粕放入烧杯中，在105℃的条件下干燥一个小时之后放入干燥器中冷却，半个小时之后称重，记下总重M1。

具有降血糖活性的茶多糖组分分离纯化与结构鉴定一、本文概述糖尿病作为一种全球性的健康问题，已对全球公共卫生造成了严重挑战。

近年来，随着人们对天然产物的深入研究，越来越多的降血糖天然活性成分被发掘，其中茶多糖因其独特的降血糖活性受到了广泛关注。

本文旨在深入研究具有降血糖活性的茶多糖的组分分离纯化及其结构鉴定，以期为开发新型降血糖药物或功能性食品提供理论依据。

本文将首先介绍茶多糖的来源、性质及其在降血糖领域的研究现状，阐述其分离纯化的重要性和必要性。

接着，详细介绍茶多糖的提取方法、分离纯化步骤，包括色谱分离、电泳分离等，以及每一步骤的原理和操作要点。

在此基础上，通过现代波谱技术如核磁共振（NMR）、质谱（MS）等手段对茶多糖的结构进行鉴定，包括其分子量、单糖组成、糖苷键类型等关键信息。

本文还将探讨茶多糖降血糖活性的可能机制，包括其对胰岛素敏感性的改善、对葡萄糖转运蛋白的调控等，并通过细胞实验和动物实验验证其降血糖效果。

对茶多糖的应用前景进行展望，以期为茶多糖在降血糖领域的研究和应用提供有益参考。

通过本文的研究，我们期望能够为茶多糖的开发利用提供更为深入的理论基础和实践指导，为糖尿病的治疗和预防提供新的思路和方法。

二、茶多糖的提取和纯化茶多糖的提取和纯化是研究其降血糖活性的关键步骤。

我们选用了优质的茶叶作为原料，通过热水浸提法提取茶多糖。

具体过程为：将茶叶粉末与适量热水混合，加热至沸腾并保持一段时间，使茶多糖充分溶解在热水中。

随后，通过离心分离去除不溶性杂质，得到茶多糖的粗提液。

为了进一步提高茶多糖的纯度，我们采用了多种纯化方法。

利用乙醇沉淀法去除茶多糖中的小分子物质和色素等杂质。

将粗提液与适量乙醇混合，使茶多糖在乙醇中沉淀析出，然后通过离心分离得到沉淀物。

接着，我们采用了离子交换层析法进一步纯化茶多糖。

将沉淀物溶解后，通过离子交换柱，根据茶多糖中的离子性质进行分离。

通过调整洗脱液的离子强度和pH值，逐步洗脱并收集茶多糖组分。