牛血清白蛋白实训报告
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一、实验目的
1. 熟悉牛血清白蛋白的基本性质和提取方法;
2. 掌握牛血清白蛋白的鉴定技术;
3. 提高实验室操作技能和实验数据分析能力。
二、实验原理
牛血清白蛋白(Bovine Serum Albumin,BSA)是牛血清中的一种球蛋白,具有分子量为66.446KDa,含有607个氨基酸残基,等电点为4.7。BSA在生物化学、免疫学、细胞生物学等领域具有广泛的应用。本实验通过提取和鉴定BSA,掌握其基本性质和应用。
三、实验材料与仪器
1. 实验材料:新鲜牛血清、硫酸铵、乙醇、磷酸盐缓冲溶液(PBS)、电泳仪、凝胶成像系统、紫外分光光度计等;
2. 实验试剂:硫酸铵、无水乙醇、氯化钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、考马斯亮蓝G-250等。
四、实验方法
1. 牛血清白蛋白的提取
(1)将新鲜牛血清置于离心管中,加入硫酸铵至终浓度为50%,室温下搅拌30分钟;
(2)4℃条件下离心30分钟,收集沉淀;
(3)将沉淀用磷酸盐缓冲溶液(PBS)洗涤三次,每次洗涤后离心;
(4)将洗涤后的沉淀溶于适量PBS,即得BSA溶液。
2. 牛血清白蛋白的鉴定
(1)紫外分光光度法:取适量BSA溶液,用紫外分光光度计测定其在280nm处的吸光度值,根据标准曲线计算BSA的浓度;
(2)SDS-PAGE电泳:取适量BSA溶液,加入样品缓冲液,进行SDS-PAGE电泳,观察电泳图谱,鉴定BSA。 五、实验结果与分析
1. 紫外分光光度法测定BSA浓度
根据标准曲线计算,实验组BSA浓度为1.5mg/mL。
2. SDS-PAGE电泳鉴定BSA
实验组电泳图谱显示,在分子量约66.4kDa处出现一条明显的蛋白质带,与BSA标准蛋白带位置一致,证明实验组中存在BSA。
六、实验结论
1. 成功提取了牛血清白蛋白;
2. 通过紫外分光光度法和SDS-PAGE电泳技术对BSA进行了鉴定;
3. 本实验掌握了牛血清白蛋白的提取和鉴定方法,为后续实验奠定了基础。
七、实验注意事项
1. 实验过程中应严格遵守无菌操作规程,防止污染;
2. 在提取BSA时,硫酸铵浓度和搅拌时间应严格控制,以确保提取效率;
3. 在鉴定BSA时,应选择合适的检测方法和标准蛋白,以确保鉴定结果的准确性。
八、实验总结
本实验通过提取和鉴定牛血清白蛋白,掌握了其基本性质和应用。实验过程中,我们学会了如何进行无菌操作、离心、电泳等实验室基本技能,提高了实验数据分析能力。在今后的实验中,我们将继续努力,不断提高自己的实验技能和科研水平。