分子生物学考试复习资料 山东大学
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分子生物学复习资料(比看重点必考)名词解释分子生物学:包括对蛋白质和核酸等生物大分子的结构与功能,以及从分子水平研究生命活动。
中心法则(central dogma):生物体遗传信息流动途径。
最初由Crick(1958)提出,经后人的不断补充和修改,现包括反转录和RNA复制等内容。
半保留复制(简称复制)(semiconservative replication):亲代双链DNA以每条链为模板,按碱基配对原则各合成一条互补链,这样一条亲代DNA双螺旋,形成两条完全相同的子代DNA螺旋,子代DNA分子中都有一条合成的“新”链和一条来自亲代的旧链,称为半保留复制。
DNA聚合酶(DNA polymerase):指以脱氧核苷三磷酸为底物,按5’→3’方向合成DNA的一类酶,反应条件:4种脱氧核苷三磷酸、Mg+、模板、引物。
DNA聚合酶是多功能酶,除具有聚合作用外,还具有其它功能,不同DNA聚合酶所具有的功能不同。
解旋酶(helicase):是一类通过水解ATP提供能量,使DNA双螺旋两条链分开的酶,每解开一对碱基,水解2分子ATP。
拓扑异构酶(topoisomerase):是一类引起DNA拓扑异构反应的酶,分为两类:类型I 的酶能使DNA的一条链发生断裂和再连接,反应无需供给能量,类型Ⅱ的酶能使DNA的两条链同时发生断裂和再连接,当它引入超螺旋时,需要由ATP供给能量。
单链DNA结合蛋白(single-strand binding protein ,SSB):是一类特异性和单链区DNA 结合的蛋白质。
它的功能在于稳定DNA解开的单链,阻止复性和保护单链部分不被核酸酶降解。
DNA连接酶(DNA ligase):是专门催化双链DNA中缺口共价连接的酶,不能催化两条游离的单链DNA 链间形成磷酸二酯键。
反应需要能量。
引物酶及引发体(primase & primosome):以DNA为模板,以核糖核苷酸为底物,在DNA合成中,催化形成RNA引物的酶称为引物酶及引物体。
分子生物学复习资料 第二章 基因:是DNA或RNA中具有遗传效应的一段核苷酸序列,是遗传的基本单位和突变单位以及控制性状的功能单位;简单来说,基因是具有遗传效应的DNA片段,是控制生物性状的基本遗传单位。
DNA的一级结构:是指四种脱氧核苷酸的排列顺序,又称为核苷酸序列或碱基顺序。 DNA的一级结构决定着基因的功能。
DNA双螺旋的结构特点: (1)双螺旋中存在大沟和小沟 ; (2)碱基顶部基团裸露在DNA 大沟内 ; (3)蛋白质因子与DNA 的特异结合依赖于氨基酸与DNA 间的氢键的形成; (4)蛋白质因子沿大沟与DNA形成专一性结合的机率与多样性高于沿小沟的结合; (5) 大沟的空间更有利于与蛋白质的结合; (6) 每一条单链具有5′ 3′极性; 两条单链间以氢键连接; 两条单链极性相反,反向平行; 以中心为轴,向右盘旋(B-DNA)。
DNA分子变性:天然存在的双链DNA具有规则的双螺旋结构,当DNA被加热或在某些试剂的作用下,配对碱基之间氢键和相邻碱基之间的堆集力就会受到破坏,逐步变为近似于无规则的线团构型的单链变性DNA。 这种由双螺旋结构状态转变成单链无规线团状态的过程叫作DNA变性,也称熔解。
变性过程的表现: ☆ 单链DNA粘度降低 ☆ 单链DNA 沉降速度加快 ☆ 单链DNA分子的A 260 nm UV 吸收值上升 (碱基序列被打乱)
影响DNA复性过程的因素 : (1)阳离子浓度 (2)复性反应的温度 Tm - 25℃ (60-65℃) (3)单链DNA分子的长度 (4)单链DNA 的初始浓度 C0 (5)DNA 分子中核苷酸的排列状况 (随机排列,重复排列) 精选文库 -- 2 经典的基因概念: (1)基因是染色体上的实体; (2)基因象链珠一样,孤立地呈线状地排列在染色体上 ; (3)基因是功能、突变、交换、“三位一体”的最小的不可分割的基本的遗传单位; 顺式作用因子:存在于基因序列旁侧能影响基因表达的序列。包括启动子、增强子、调控序列和可诱导元件等,作用是参与基因表达的调控。顺式作用元件本身不编码任何蛋白质,仅提供一个作用位点,要与反式作用因子相互作用而起作用。 通过核苷酸自身的特异二级结构控制与它紧密连锁的结构基因的表达
山东大学博士研究生入学考试分子生物学专业考题1999年名词解释(任选10个,共20分)逆转座子C值悖理半不连续DNA复制GT-AT规律魔斑RNA编辑反式作用因子顺式作用元件基因沉默副密码子拼接体调控密码基因放大简要回答以下问题(任选10题,共60分)组蛋白和非组蛋白的主要特点是什么?SOS修复为什么会导致倾向差错性突变?真核生物mRNA的帽子有几类?其名称和特点是什么?增强子有哪些特征?放线菌酮和氯霉素对蛋白质合成的抑制作用有何不同?各有何用途?真核生物结构基因5‘启动区上游远端顺式作用元件可以采用何种方式参与该基因的表达调控?杂交阻断翻译何杂交释放翻译的原理是什么?RFLP 和RAPD 的原理是什么?DDRT-PCR和phage display 的原理是什么?Tyl/copia因子在真核生物基因组中可能的作用是什么?什么叫核酶?从核酶入手,谈谈对生命进化过程中RNA世界假说的认识?大肠杆菌DNA复制所需RNA引物的合成及组织的起始过程如何?论述题选做其一(20分)试从淋巴细胞分化中DNA重排说明产生免疫球蛋白分子多样性的机理?从真核生物断裂基因mRNA的加工过程说明真核生物基因表达的复杂性?2000年名词解释(20分,12题中任选10题)D-loop 端粒酶GT-AG规律严谨反应RNA饱和杂交试验同型异位突变α-互补作用组织相容性复合体(MHC)Southern-Western blot 朊病毒Cot1/2 YAC载体二.简要回答以下问题(48分,10题中选做8题)1.信号肽与前导肽有何区别?2.何为顺式作用元件?试举例说明3.何为蛋白质剪辑?试举例说明4.原癌基因可通过哪些机制的活化而导致癌变?5.DNA复制与蛋白质合成各用什么机制维持其合成的忠实性?6.什么是基因打靶?其原理是什么?7.Lac+大肠杆菌转入含Lac的培养基中,Lac操纵子如何开启?加入葡萄糖之后,情况又如何?8.何为生物孵化器?动物乳腺作为孵化器有何优点?9.欲研究一个反式蛋白因子(Trans-activator)与某基因5‘端启动子区接合部位的序列。
山东省考研细胞与遗传学复习资料生物化学与分子生物学要点梳理细胞与遗传学是生物学的重要分支,它研究的是生物体内各种生命现象的基本单位——细胞,以及遗传信息的传递与表达。
而在山东省考研的复习过程中,对于细胞与遗传学这一科目的理解与掌握尤为关键。
本文将对生物化学与分子生物学的相关要点进行梳理,帮助考生更好地准备考试。
一、生物化学与细胞生物学要点1. 分子组成和结构:细胞由一系列有机和无机分子组成,其中有机分子包括蛋白质、核酸、脂类和碳水化合物。
这些分子的结构与功能对于细胞的生命活动至关重要。
2. 酶与代谢:酶是催化生化反应的生物催化剂,可以加速代谢过程。
掌握酶的分类、结构和功能对于理解代谢过程以及细胞内能量转化至关重要。
3. 蛋白质合成:蛋白质是构成细胞的重要组成部分,掌握蛋白质的合成过程对于理解基因表达与调控机制至关重要。
4. 糖类代谢:糖类是细胞主要的能量来源,糖类代谢过程涉及糖原的合成与降解以及糖酵解和糖异生等。
5. 脂类代谢:脂类在细胞内起到结构与储能的作用,掌握脂类合成与降解的过程对于理解细胞膜的组成和功能至关重要。
二、分子生物学要点1. DNA的结构和功能:DNA是细胞中负责储存遗传信息的分子,它的双螺旋结构以及碱基配对规则是分子生物学的基础。
2. DNA复制:DNA复制是细胞分裂过程中不可或缺的一环,理解DNA复制的过程以及相关的酶的作用对于理解遗传信息的传递与复制机制至关重要。
3. RNA转录与转译:RNA是DNA的复制产物,转录和转译是将DNA上的遗传信息转化为蛋白质的过程。
了解RNA转录与转译的机制对于理解基因表达与调控至关重要。
4. 突变与基因重组:突变和基因重组是遗传学研究的重点,突变可以导致基因组的变异,而基因重组可以增加遗传多样性。
5. 基因调控:基因调控是细胞内部调节基因表达的机制,包括转录因子的结合、染色质的改变以及非编码RNA的作用等。
通过对生物化学与分子生物学的要点梳理,我们可以更好地理解细胞与遗传学这门科目的核心概念与原理。
(完整版)分子生物学与基因工程复习资料分子生物学与基因工程绪论1、分子生物学与基因工程的含义从狭义上讲,分子生物学主要是研究生物体主要遗传物质-基因或DNA的结构及其复制、转录、表达和调节控制等过程的科学。
基因工程是一项将生物的某个基因通过载体运送到另一种生物的活体细胞中,并使之无性繁殖和行使正常功能,从而创造生物新品种或新物种的遗传学技术。
2、分子生物学与基因工程的发展简史,特别是里程碑事件,要求掌握其必要的理由上个世纪50年代,Watson和Crick提出了的DNA双螺旋模型;60年代,法国科学家Jacob和Monod提出了的乳糖操纵子模型;70年代,Berg首先发现了DNA连接酶,并构建了世界上第一个重组DNA分子;80年代,Mullis发明了聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)技术;90年代,开展了“人类基因组计划”和模式生物的基因组测序,分子生物学进入“基因组时代”3、分子生物学与基因工程的专业地位与作用。
核酸概述1、核酸的化学组成2、核酸的种类与特点:DNA和RNA的区别(1)DNA含的糖分子是脱氧核糖,RNA含的是核糖;(2)DNA含有的碱基是腺嘌呤(A)、胞嘧啶(C)、鸟嘌呤(G)和胸腺嘧啶(T),RNA含有的碱基前3个与DNA完全相同,只有最后一个胸腺嘧啶被尿嘧啶(U)所代替;(3)DNA通常是双链,而RNA主要为单链;(4)DNA的分子链一般较长,而RNA分子链较短。
3、DNA作为遗传物质的直接和间接证据;间接:(1)一种生物不同组织的细胞,不论年龄大小,功能如何,它的DNA含量是恒定的,而生殖细胞精子的DNA含量则刚好是体细胞的一半。
多倍体生物细胞的DNA含量是按其染色体倍数性的增加而递增的,但细胞核里的蛋白质并没有相似的分布规律。
(2)DNA在代谢上较稳定。
(3)DNA是所有生物的染色体所共有的,而某些生物的染色体上则没有蛋白质。
(4)DNA通常只存在于细胞核染色体上,但某些能自体复制的细胞器,如线粒体、叶绿体有其自己的DNA。
可编辑修改精选全文完整版分子生物学复习资料名词解释:复制叉:复制时,双链DNA要解开成两股链分别进行,所以,这个复制起点呈现叉子的形式,被称为复制叉。
复制子:单独复制的一个DNA单元被称为一个复制子,是一个可移动的单位。
一个复制子在任何一个细胞周期只复制一次。
Klenow片段:用枯草杆菌蛋白酶处理大肠杆菌DNA聚合酶而从全酶中除去5’-3’外切酶活性的肽段后的大片段肽段。
外切酶:是一类能从多核苷酸链的一端开始按序催化水解3、5-磷酸二酯键,降解核苷酸的酶。
内切酶:是一种能催化多核苷酸的链断裂的酶,只对脱氧核糖核酸内一定碱基序列中某一定位置发生作用,把这位置的链切开。
前导链:在DNA复制过程中,与复制叉运动方向相同,以5'-3'方向连续合成的链。
冈崎片段:在DNA复制过程中,前导链连续合成,而滞后链只能是断续的合成5’-3’的多个短片段,这些不连续的片段称为冈崎片段。
端粒:是真核生物线性基因组DNA末端的一种特殊结构,它是一段DNA序列和蛋白质形成的复合体。
端粒酶:是负责染色体末端(端粒)复制,是由 RNA 和蛋白质组成的核糖核蛋白.其中的 RNA 成分是端粒复制的模板.(因此端粒是逆转录酶) 作用:维持端粒长度.DNA复制参与的酶和蛋白:拓扑异构酶,解链酶,单链结合蛋白(SSB蛋白),引发酶,DNA聚合酶,DNA连接酶。
线性DNA末端复制方式:1)环化;2)末端形成发卡结构;3)某些蛋白质的启动。
DNA修复的方式:错配修复,切除修复,重组修复,DNA直接修复,SOS反应。
AP位点:所有细胞中都带有不同类型、能识别受损核酸位点的糖苷水解酶,它能特异性切除受损核苷酸上的N-β糖苷键,在DNA链上形成去嘌呤或去嘧啶位点,统称为AP位点。
AP修复:DNA分子中一旦产生了AP位点,AP核酸内切酶就会把受损核苷酸的糖苷-磷酸键切开,并移去包括AP位点核苷酸在内的小片段DNA,由DNA聚合酶Ⅰ合成新的片段,最终由DNA连接酶把两者连成新的被修复的DNA链。
第二章核苷酸代谢一、选择题1.食物中很少被机体利用的组分是A.氨基酸B.必需脂肪酸C.维生素D.碱基E.己糖2.不属于嘌呤核苷酸从头合成直接原料的是A.CO2B.甘氨酸C.谷氨酸D.天冬氨酸E.一碳单位3.嘌呤核苷酸合成时首先生成的是A.GMPB.AMPC.IMPD.XMPE.UMP4.人体嘌呤核苷酸分解代谢的主要终产物是A.尿囊酸B.尿酸C.乳氢酸D.黄嘌呤E.尿素5.作为第二信使的核苷酸是A.cAMPB.cCMPC.cUMPD.cTMPE.AMP6.嘌呤环的C-4和C-5来自A.CO2B.丙氨酸C.甘氨酸D.谷氨酸E.天冬氨酸7.脱氧核糖核苷酸生成的主要方式是A.由核苷还原B.直接由核糖还原C.由一磷酸核苷还原D.由二磷酸核苷还原E.由三磷酸核苷还原8.别嘌呤醇治疗痛风症是因为能抑制A.腺苷脱氢酶B.尿酸氧化酶C.黄嘌呤氧化酶D.鸟嘌呤脱氢酶E.核苷磷酸化酶9.dTMP合成的直接前体是A.dUMPB.TMPC.TDPD.dCDPE.dCMP10.Lesch-Nyhan综合征是因为缺乏A.HGPRTB.腺苷激酶C.核糖核苷酸还原酶D.腺嘌呤磷酸核糖基转移酶E.硫氧化还原蛋白还原酶11.嘧啶核苷酸从头合成的限速反应是A.UMP的形成B.乳清酸的形成C.CMP的形成D.氨甲酰磷酸的形成E.氨甲酰天冬氨酸的形成12. 不需要PRPP作底物的反应是A.5-磷酸核糖胺的形成B.次黄嘌呤转变为IMPC.腺嘌呤转变为AMPD.腺苷转变为AMPE.嘧啶生物合成中乳清酸苷的形成13. 5-FU抑制A.UTP生成CTPB.CDP生成dCDPC.dUMP生成TMPD.UDP生成dUDPE.dUDP生成dUMP14. 催化dUMP转变为TMP的酶是A.核苷酸还原酶B.胸腺嘧啶核苷酸合成酶C.核苷酸激酶D.甲基转移酶E.脱氧胸苷激酶15. 阿糖胞苷抗肿瘤作用的机理是抑制A.IMP生成GMPB.UTP生成CTPC.IMP生成AMPD.CDP生成dCDPE.dUMP生成dTMP二、名词解释1. 嘌呤核苷酸的从头合成(de novo synthesis of purine nucleotide)2.核苷酸的补救合成途径(salvage pathway of nucleotide)三、问答题1.体内嘌呤核苷酸的合成有哪两条途径?2.以酶的竞争性抑制作用的原理,说明用别嘌呤醇治疗痛风症的机理。
《分子生物学》复习资料(一)第一章蛋白质的分子结构1、蛋白质的三维结构称为构象,指的是蛋白质分子中所有原子在三维空间中的排布,并不涉及共价键的断裂和生成所发生的变化。
2、维持和稳定蛋白质高级结构的因素有共价键(二硫键)和次级键,次级键有4种类型,即离子键、氢键、疏水性相互作用和范德瓦力。
3、蛋白质的二级结构是指肽链中局部肽段的构象,它们是完整肽链构象(三级结构)的结构单元,是蛋白质复杂的立体结构的基础,因此二级结构也可以称为构象单元。
α螺旋、β折叠是常见的二级结构。
4、一些肽段有形成α螺旋和β折叠两种构象的可能性(或形成势),这类肽段被称为两可肽。
5、两个或几个二级结构单元被连接肽段连接起来,进一步组合成有特殊几何排列的局域立体结构,称为超二级结构。
超二级结构的基本组织形式有αα,βαβ和ββ等3类。
6、蛋白质家族:一类蛋白质的一级结构有30%以上同源性,或一级结构同源性很低,但它们的结构和功能相似,它们也属于同一家族。
例如球蛋白的氨基酸序列相差很大,但属于同一家族。
超家族:有些蛋白质家族之间,一级结构序列的同源性较低,但在许多情况下,它们的结构和功能存在一定的相似性。
这表明它们可能存在共同的进化起源。
这些蛋白质家族属于同一超家族。
7、结构域是一个连贯的三维结构,是可互换并且半独立的功能单位,在真核细胞中由一个外显子编码,由至少40个以上多至200个残基构成最小、最紧密也最稳定的结构,作为结构和功能单位,会重复出现在同一蛋白质或不同蛋白质中。
8、蛋白质一级结构所提供的信息有哪些?①同源蛋白质的物种差异与生物进化。
不同物种之间可变残基差异的数目可提供物种之间亲源关系远近的信息。
②可以从一级结构推测出蛋白质的高级结构。
③在蛋白质数据库中,可根据某种蛋白质或其肽段的一级结构对数据库进行同源性搜索,与已知蛋白质进行序列比较。
④在搜索功能上可能无关的蛋白质中发现有相关的同源性序列,揭示了一些蛋白质还可能具有未被认识的新功能。
分子生物学复习资料(第一版)一名词解释1 Southern blot / Northern blot—DNA斑迹法 / RNA转移吸印技术。
是为了检测待检基因或其表达产物的性质和数量(基因拷贝数)常用的核酸分子杂交技术。
二者均属于印迹转移杂交术,所不同的是前者用于检测DNA样品;后者用于检测RNA样品。
2 cis-acting element / trans-acting factor—顺式作用元件 / 反式作用因子。
均为真核生物基因中的转录调控序列。
顺式作用元件是与结构基因表达调控相关、能被基因调控蛋白特异性识别和结合的特定DNA序列,包括启动子和上游启动子元件、增强子、反应元件和poly(A)加尾信号。
反式作用因子是能与顺式作用元件特异性结合、对基因表达的转录起始过程有调控作用的蛋白质因子,如RNA 聚合酶、转录因子、转录激活因子、抑制因子。
3VNTR / STR—可变数目串联重复序列 / 短串联重复。
均为非编码区的串联重复序列。
前者也叫高度可变的小卫星DNA,重复单位约9~24bp,重复次数变化大,变化高度多态性;后者也叫微卫星DNA,重复单位约2~6 bp,重复次数约10~60次,总长度通常小于150bp 。
(参考第7题)4 viral oncogene / cellular oncogene—病毒癌基因 / 细胞癌基因。
病毒癌基因指存在于逆转录病毒中、体外能使细胞转化、体内能导致肿瘤发生的基因;细胞癌基因也叫原癌基因,指存在于细胞内,与病毒癌基因同源的基因序列。
正常情况下不激活,与细胞增殖相关,是维持机体正常生命活动所必须的,在进化上高等保守。
当原癌基因的结构或调控区发生变异,基因产物增多或活性增强时,使细胞过度增殖,从而形成肿瘤。
第1 页/共16 页5 ORF / UTR—展开阅读框 / 非翻译区。
均指在mRNA中的核苷酸序列。
前者是特定蛋白质多肽链的序列信息,从起始密码子开始到终止密码子结束,决定蛋白质分子的一级功能;后者是位于前者的5'端上游和3'端下游的、没有编码功能的序列,主要参加翻译起始调控,为前者的多肽链序列信息改变为多肽链所必须。
1.复制和转录的异同:共同点:反应都是核苷酸的聚合过程,模版是DNA,酶依
赖DNA的聚合酶,化学键3,5磷酸二酯键,方向5-3延伸,配对是碱基配对规
律。 不同点:底物不同分别是dNTP和NTP ;酶不同分别是DNA聚合酶和RNA
聚合酶;模版不同,分别是整个染色体双链DNA和部分基因模板链转录;产物不
同,分别是子代双链DNA和mtrRNA ;引物分别是需要和不需要;碱基配对分别
是A=T,GC和A=UT=AGC
2.转录的过程:模板DNA原料:NTP(ATP,GTP,CTP,UTP)酶:RNA聚合酶(RNA-pol)
其它蛋白质因子:如ρ因子,转录因子(TF)等. A转录起始过程,RNA聚合酶全
酶结合,DNA双链解开,在RNA聚合酶作用下发生第一次聚合反应,形成转录起
始复合物b转录延长,伽马o亚基脱落,核心酶变构,与,模版结合松弛,沿着
DNA模板前移在核心酶作用下,NTP不断聚合,RNA链不断延长,合成方向沿5-3
进行c终止转录RNA聚合酶在DNA模板上停止前进,转录产物RNA链在转录复合
物上脱落下来。
3.基因克隆的步骤:目的基因的获取;目的基因与载体的拼接,将重组体导入受
体细胞,重组体筛选和鉴定,扩增和表达a获取,从基因组文库中制备,从CDNA
文库中制备,PCR扩增目的基因,人工合成目的基因b目的基因片段与适当的载
体经限制性内切酶剪切后,再在DNA连接酶的催化下即可相互连接形成人工重组
体,粘性末端连接,平端连接,同聚物加尾连接,人工头连接c氯化钙法,电穿
孔法,脂质体转染法,显微注射法d遗传学法,分子杂交法,免疫化学筛选法,
PCR筛选法e重组体的扩增与表达。
4.寡核苷酸定点诱变技术所依据的原理是:首先制备单链核酸,即按体外DNA重
组技术,将待诱变的目的基因插入到M13噬菌体上,制备此种含有目的基因的
M13单链DNA,即正链DNA。再使用化学合成的含有突变碱基的寡核苷酸短片段
作引物,启动M13单链DNA分子进行复制,随后这段寡核苷酸引物便成为新合成
的DNA子链的一个组成部分。因此所产生的新链便具有已发生突变的碱基序列,
将其转入细胞后,经过不断复制,即可获得突变的DNA分子,再经表达即可获得改
造后蛋白质.为了使目的基因的特定位点发生突变,所设计的寡核苷酸引物的序
列除了所需的突变碱基外,其余的则与目的基因编码链的特定区段完全互补。B
诱变过程1)合成含有目的基因的正链DNA;2)合成含有特殊突变碱基的引物;3)
制备异源双链DNA;4)富集和转化双链DNA分子;5)筛选突变体并鉴定
5.Kunkel定点诱变法基本原理:是一种通过筛除含有尿嘧啶(U)的DNA模板链进
行的寡核苷酸定点诱变法。它的基本原理是:
模版。(细胞内的dUTP酶能将细胞内的dUTP降解,使其含量减少; ung能将误
入DNA新生链中的dUTP切除.在dut和ung双缺陷的大肠杆菌中,新合成的DNA
链中含有U.)dut缺陷导致细胞内dUTP水平上升,并在DNA复制时,部分取代
dTTP进入DNA新生链中。又由于ung缺陷使掺入DNA的dUTP残基不能除去。由
这种大肠杆菌菌株产生的M13单链DNA大约有1%的T被U所取代,然后 以其为
模板体外合成DNA的另一条链(不含U),双链DNA导入正常的大肠杆菌中,其N-
尿嘧啶脱糖苷酶切去DNA链上的尿嘧啶碱基。结果原来的M13模板链被降解。只
有突变链因不含U,被保留下来。这种方法产生的M13噬菌体中含有突变DNA的
比例大大增加。
6.PCR定点诱变的原理步骤①将待诱变靶基因克隆到质粒载体上,并分装到两个
反应管中;②在每一个反应管中加入两种特定的引物,其中引物1和3均含有错
配核苷酸,但两个引物分别与质粒DNA的不同链不完全互补,引物2和4均不含
有错配核苷酸,二者分别与质粒DNA的引物1和3杂交链的互补链完全互补;③
进行PCR扩增获得含有突变碱基的线型质粒DNA;④将两个反应管中的线型质粒
DNA混合,再经过变性和复性,一个反应管中的一条链和另一个反映管中的互补
链杂交,通过两个粘性末端形成带有缺口的环状DNA分子;⑤转化入大肠杆菌,
环状DNA分子的缺口可被大肠杆菌修复。如果同一反应管中的两个互补链又互相
杂交,则继续形成线状DNA分子,在大肠杆菌中不稳定,易被降解。该方法把特
异突变点导入克隆基因,无需把基因插入M13中,即可在大肠杆菌中进行表达。
7翻译过程从阅读框架的5'-AUG开始,按mRNA模板三联体密码的顺序延长肽链,
直至终止密码出现。分成翻译的起始翻译的延长翻译的终止3个阶段。肽链合成
起始指mRNA和起始氨基酰-tRNA分别与核蛋白体结合而形成,原核生物翻译起
始复合物形成核蛋白体大小亚基分离;mRNA在小亚基定位结合;起始氨基酰
-tRNA的结合; 核蛋白体大亚基结合。肽链合成延长
指根据mRNA密码序列的指导,按次序添加氨基酸从N端向C端延伸肽链,直到
合成终止的过程。肽链延长在核的反密码蛋白体上连续性循环式进行,又称为核
蛋白体循环(ribosomal cycle),每次循环增加一个氨基酸,包括以下三步:进
位成肽转位。肽链合成的终止是当mRNA上终止密码出现后,多肽链合成停止,
肽链从肽酰-tRNA中释出,mRNA、核蛋白体等分离,这些过程称为肽链合成终止。
8a蛋白质翻译后的加工过程,多肽链折叠为天然的三维结构新生肽链经盘曲折
叠形成空间结构。新生肽链的折叠可能是随着肽链的不断延伸而逐步完成的,逐
渐产生正确的二级结构、模序、结构域, ,最终形成完整空间构象。一般认为,
多肽链自身氨基酸顺序储存着蛋白质折叠的信息,即一级结构是空间构象的基
础。B肽链一级结构的修饰肽链N端的修饰:去除N-甲酰基或N-蛋氨酸。2个别
氨基酸的共价修饰:磷酸化修饰; 羟基化修饰:羟脯氨酸、羟赖氨酸。3二硫
键的生成4多肽链的水解修饰C高级结构修饰,亚基聚合辅基连接
9.原核生物的DNA生物合成。复制的起始,DNA解开成单链,提供模板合成引物,
提供3-OH末端。复制的延长,指在DNA-pol催化下,dNTP以dNMP的方式逐个
加入引物或延长中的子链上,其化学本质是磷酸二酯键的不断生成,复制的终止
原核生物基因是环状DNA,双向复制的复制片段在复制的终止点处汇合。
9遗传密码的特点:连续性,编码蛋白质氨基酸序列的各个三联体密码连续阅读,
密码间既无间断也无交叉。简并性是几种密码子代表一种氨基酸的现象成为密码
的简并性,密码的简并性主要是由于密码子的第三个碱基发生摆动现象形成的。
通用性是蛋白质生物合成的整套密码,从原核生物岛人类都通用,密码的通用性
进一步证明各种生物进化自同一祖先。摆动性转运氨基酸的TRNA的反密码需要
通过碱基互补与MRNA上的遗传密码反向配对结合,但反密码与密码间不严格遵
守常见的碱基互补规律