植物总蛋白提取演示教学

植物总蛋白提取方法•相关推荐植物总蛋白提取方法植物总蛋白提取试剂盒产品组成：产品组成规格植物蛋白提取液蛋白稳定剂蛋白酶抑制剂混合物BB-3124-150T 25ml 200ul 100ulBB-3124-2 100T 50ml 400ul 200ul储存条件：蛋白提取液、稳定剂2-8℃保存；蛋白酶抑制剂-20℃保存。

有效期：一年。

产品简介：本试剂盒提供配套试剂，适用于从各种植物细胞、组织样本中提取总蛋白。

提取过程简单方便。

本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀等蛋白研究。

本试剂盒提取的蛋白不可用于2D电泳。

如下游实验需要用于2D电泳、等电聚焦电泳，请使用贝博其他货号的'试剂盒。

使用方法：植物组织样本：1、提取液准备：每500ul冷的提取液中加入4ul蛋白稳定剂和2ul蛋白酶抑制剂，混匀后置冰上备用。

2、取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的200mg鲜嫩植物组织样本剪碎，采用以下一种方法处理：i. 加入500ul提取液A后用匀浆机/匀浆器匀浆。

ii. 置于研钵中用液氮研磨，研磨后加入500μl冷的提取液 A。

iii. 加入500ul提取液A直接置冰上研磨。

3、研磨后吸入一个预冷的干净离心管中在冰上或4℃冰箱静置1小时。

4、在4℃，12000rpm以上条件下离心10-15分钟。

5、将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到总蛋白。

上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

细胞样本：1、提取液准备：每500ul冷的提取液中加入4ul蛋白稳定剂和2ul蛋白酶抑制剂，混匀后置冰上备用。

2、细胞用PBS洗涤2次。

3、加入细胞体积5-10倍体积的蛋白提取液，振荡1小时。

4、在4℃，12000rpm以上条件下离心10-15分钟。

5、将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到总蛋白。

上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

植物全蛋白提取方法：TCA丙酮沉淀法、Tris-HCl法、Trizol沉淀法提取法。

1TCA丙酮沉淀法基于蛋白在酸或疏水条件下变性使蛋白浓缩并去除污染物原理的TCA丙酮沉淀法，最早用于小麦蛋白的提取，是目前提取植物蛋白的常用方法之一。

具有降低次生代物质的干扰、减少蛋白降解等优点。

TCA能有效地抑制蛋白酶对蛋白质的水解作用，保证在制样过程中蛋白质不被降解；丙酮溶液能除去样品中的酚类及色素等干扰物质，同时实验过程中采用的高速离心办法能较好地去除多糖的影响。

然而该方法的一个最大缺点是蛋白质很难重新溶解，而且样品中的非蛋白成分很难除去，可能会丢失膜蛋白和疏水性蛋白，导致2-DE图谱上有明显的横纵条纹。

在研磨样品时加入聚乙烯吡咯烷酮(PVP )或交联聚乙烯基吡咯烷酮(PVPP )用来吸附样品中富含的酚、醌类物质。

它们能通过疏水键与酚类形成复合物，离心可以去除该复合物。

然而，TCA丙酮沉淀法中与蛋白共沉淀的污染物在随后的有机溶剂清洗步骤常难以去除，可以通过振荡和延长蛋白沉淀在裂解缓冲液中温育时间的方法来增加蛋白的溶解能力。

在提取的过程中同时加入了TCA、B-巯基乙醇及DTT 3种药剂可以更好的抑制蛋白质的水解及去除干扰物质。

TCA丙酮提取法耗时少且容易操作，一般作为植物蛋白提取的初始方案，该方法常用于幼嫩组织中蛋白的提取，对更为复杂的植物组织该方法并非最佳选择。

但该方法还是在植物蛋白的提取中占有重要位置，很多木本植物的样品应用该方法效果很好，如鹅掌楸叶片、巴东木莲的雌蕊柱头、槟榔叶片、银杏叶片及枝条、茶树叶片及芽、红豆杉的愈伤组织、石斛叶片等。

草本植物中的大豆叶片、生菜叶片、黄瓜叶片、番茄子叶、龙胆花芽、灰木相思叶片等应用该方法都获得了较清晰的2-DE图谱。

TCA protein precipitation protocolStock Solutions: 100% (w/v) Trichloroacetic acid (TCA) recipe: dissolve 500g TCA (as shipped) into 350 ml dH2O, store at RT. Precipitation Protocol:1.Add 1 volume of TCA stock to 4 volumes of protein sample.1. e. in 1.5ml tube with maximum vol., add 250讥TCA to 1.0ml sample.2.Incubate 10 min at 4°C.3.Spin tube in microcentrifuge at 14K rpm, 5 min.4.Remove supernatant, leaving protein pellet intact. Pellet should be formed from whitish,fluffy ppt.5.Wash pellet with 200^l cold acetone.6.Spin tune in microfuge at 14K rpm, 5min.7.Repeat steps 4-6 for a total of 2 acetone washes.8.Dry pellet by placing tube in 95°C heat block for 5-10 min to drive off acetone.9.For SDS-PAGE, add 2X or 4X sample buffer (with or without bME) and boil smaple for10 min in 95°C herat block before loading smaple onto polyacrylamide gel.2Trizol沉淀法与TCA丙酮沉淀法相比，Trizol沉淀蛋白质的方法可有效地除去色素、酚类等干扰电泳的化学物质，特别是对植物样品中高丰度蛋白Rubisco1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/ 加氧酶(Ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase，通常简写为RuBisCO)。

植物蛋白的提取方法
植物蛋白啊，那可是个宝！你知道从植物中提取它都有哪些奇妙的方法吗？咱就拿大豆来说吧，那可是植物蛋白的丰富来源。

可以通过浸泡，让大豆吸饱水，就像人喝足了水一样精神饱满。

然后呢，把它们磨碎，哎呀，这就像是把宝藏给挖掘出来了。

还有啊，像花生，那也是提取植物蛋白的好材料呀！把花生炒熟了，香气扑鼻，然后再去提取蛋白，感觉就像是在烹饪一道美味的大餐。

再说说小麦，通过一些特别的工艺，也能从中获取珍贵的植物蛋白呢。

这就好像是在一堆麦粒中寻找闪闪发光的金子。

提取植物蛋白的过程可不简单呢，需要精心的操作和耐心的等待。

这就跟培养一个优秀的孩子一样，得花费好多心思。

难道不是吗？
在这个过程中，每一个步骤都很关键啊。

从选择合适的植物原料，到运用恰当的提取技术，就像走在一条充满挑战的道路上，但一旦成功，那收获可是满满的呀！想想看，得到了纯净的植物蛋白，那是多么让人兴奋的事情。

而且啊，植物蛋白对我们的身体有那么多好处，能提供能量，让我们活力四射。

这就如同给身体注入了一股强大的力量，让我们能够勇往直前。

不用 animal 蛋白，咱用植物蛋白也能打造出健康又美味的食物，这多厉害呀！这就好像我们有了一把神奇的钥匙，可以打开健康生活的大门。

所以呀，大家可别小看了植物蛋白的提取，这可是一项充满魅力和价值的事情呢！。

总蛋白提取方法嘿，朋友们！今天咱就来聊聊总蛋白提取这个事儿。

你说这总蛋白啊，就像是一个神秘的宝藏，藏在细胞的世界里，等着我们去把它挖掘出来。

要提取总蛋白，就好像是一场和细胞的“战斗”。

首先呢，得准备好各种“武器”，也就是实验器材和试剂啦。

就像战士上战场得有趁手的家伙事儿一样。

然后呢，就是要选择合适的样本。

这可不能马虎，就好比你要去钓鱼，总得选个有鱼的地方吧。

不同的样本，提取的难度和效果可都不一样哦。

接下来，就是关键步骤啦！就像解开一个复杂的谜题。

你得小心翼翼地操作，不能有一点马虎。

比如要掌握好各种试剂的用量和比例，这就好比做饭时放盐放调料，多了少了味道可就不对啦。

有时候我就在想啊，这提取总蛋白不就跟我们找东西一样嘛。

在一堆乱七八糟的东西里面，要精准地找到我们想要的那个。

而且还得保证它的完整性和活性，不能给弄坏了呀。

提取的过程中还得注意各种条件，温度啦、时间啦，都得拿捏得死死的。

这就像烤蛋糕，温度高了低了，时间长了短了，蛋糕可就不完美啦。

你说要是一个不小心，操作失误了，那不就前功尽弃啦？那得多郁闷啊！所以啊，每一步都得谨慎再谨慎。

还有啊，不同的提取方法也各有特点呢。

就像不同的武功秘籍，各有各的厉害之处。

有的方法简单快捷，但是可能纯度不那么高；有的方法复杂一些，但是能得到更纯的蛋白。

这可就得根据我们的需求来选择啦。

哎呀，说了这么多，其实提取总蛋白真的不简单啊！但这也是科学的魅力所在嘛。

我们就是要不断地探索，不断地尝试，才能找到最好的方法。

总之呢，提取总蛋白是一项既有趣又有挑战的工作。

它需要我们有耐心，有细心，还要有扎实的专业知识。

朋友们，加油吧，让我们在总蛋白的提取之路上不断前进，挖掘出更多的宝藏！。

植物蛋白质提取关键点：a、种子研磨充分 b、蛋白质尽量溶解 c、蛋白质尽量沉淀所需药品：NaCl、C2H5OH、(NH4)2SO4、NaOH、H Cl、CH3COOH﹑Na2SO4﹑冰水注：Na2SO4,芒硝，禁与强酸、铝、镁相配。

药品溶解度：NaCl，36g[20℃]; (NH4)2SO4，76.7g[25℃]; Na2SO4, 19.5g[20℃]其中溶解蛋白质的常用中性盐是NaCl、(NH4)2SO4、Na2SO4、Mg2SO4等①、盐析法﹕原理：蛋白质在水溶液中的溶解度取决于蛋白质分子表面离子周围的水分子数目，亦即主要是由蛋白质分子外周亲水基团与水形成水化膜的程度以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。

蛋白质溶液中加入中性盐后，由于中性盐与水分子的亲和力大于蛋白质，致使蛋白质分子周围的水化层减弱乃至消失。

同时，中性盐加入蛋白质溶液后由于离子强度发生改变，蛋白质表面的电荷大量被中和，更加导致蛋白质溶解度降低，之后蛋白质分子之间聚集而沉淀。

由于各种蛋白质在不同盐浓度中的溶解度不同，不同饱和度的盐溶液沉淀的蛋白质不同，从而使之从其他蛋白中分离出来。

简单的说就是将硫酸铵、硫化钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏，导致蛋白质在水溶液中的稳定性因素去除而沉淀。

步骤：溶解蛋白质→离心→取上清液，盐析（低温）→离心沉淀蛋白质→透析②﹑等电点法（本方法中最好不要用Na2SO4）：原理：在等电点时，蛋白质分子以两性离子形式存在，其分子净电荷为零(即正负电荷相等)，此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥，分子相互之间的作用力减弱，其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀，所以蛋白质在等电点时，其溶解度最小，最易形成沉淀物。

等电点时的许多物理性质如黏度、膨胀性、渗透压等都变小，从而有利于悬浮液的过滤。

步骤：溶解蛋白质→离心→取上清液，调节PH，析出蛋白质→离心沉淀蛋白质→ 透析③、有机溶剂法：原理：有机溶剂能降低溶液的电解常数，从而增加蛋白质分子上不同电荷的引力，导致溶解度的降低；另外，有机溶剂与水的作用，能破坏蛋白质的水化膜，故蛋白质在一定浓度的有机溶剂中的溶解度差异而分离的方法，称“有机溶剂分段沉淀法”，它常用于蛋白质或酶的提纯。

一、植物蛋白质提取1. TCA-丙酮法（1）称量一定量的样品置于液氮预冷的研钵中，加少许PVPP，反复加液氮研磨至粉末。

（2）研磨好的样品用10 倍体积（w/V）的10%的TCA-丙酮溶液悬浮，加入0.1 M PMSF、1 M DTT 至终浓度为1 mM PMSF、10mM DTT，超声5 分钟，于-20℃静置6 小时或过夜后，4℃，20000g 离心15 分钟，弃上清。

（3）沉淀用10 倍体积于样品的丙酮溶液重悬浮，于-20℃静置1 小时后，4℃，20000g 离心15 分钟，弃上清。

（4）重复步骤（3）一次。

（5）沉淀用10 倍体积于样品的乙醇/乙醚=1:1 洗，于-20℃静置1 小时后，4℃，20000g 离心15 分钟，弃上清。

（6）重复步骤（3）一次。

（7）取出沉淀真空干燥约5 分钟，除尽有机溶剂。

（8）按10mg 干粉末加200 微升裂解液的比例，加入1 mM PMSF、10mM DTT，超声5分钟，充分溶解1 小时，10℃，35000g 离心30 分钟，上清为所需的蛋白溶液。

（9）用Bradford 法测定蛋白样品的蛋白浓度。

（10）蛋白样品溶液小量分装，-80℃保存。

注意事项：（1）TCA 有利于去除酚类色素等物质，但不利于蛋白的抽提，使用浓度不宜过高，在后面丙酮处理中，尽量除去。

（2）蛋白样品保存：样品浓度不宜过高，建议将高浓度样品适度调整，为避免反复冻融应分装保存，长期保存用-80℃，短期保存用-20℃。

（3）1M DTT：0.1542g DTT 用1ml MilliQ 水溶解，-20℃保存。

（4）0.1M PMSF：0.0174g PMSF 用1ml 异丙醇溶解，-20℃保存。