第28卷第6期2008年6月
生态学报ACTA ECOLOG I C A SI N I C A
V o.l 28,N o .6
Jun .,2008
基金项目:国家自然科学基金资助项目(90202009)收稿日期:2007-04-19;修订日期:2007-11-07
作者简介:樊宝丽(1982~),女,甘肃白银人,硕士生,主要从事繁殖生态学研究.E -ma i :l baoli207@163.co m *通讯作者Correspond i ng au t hor .E-m ai:l guoz du @lz u https://www.doczj.com/doc/fa13772734.html,
Founda tion ite m:The p rojectw as fi nan ci ally supported by Nati onalNatural S ci ence Foundati on of Ch i na (No .90202009)Recei v ed da te :2007-04-19;A ccepted da te :2007-11-07
Biography:FAN B ao -L ,i M aster .m ai n ly engaged i n reproducti ve allocati on.E-m a i :l baoli 207@https://www.doczj.com/doc/fa13772734.html,
露蕊乌头(Aconitu m gy mnandru m M axi m )
花序内位置依赖的性分配
樊宝丽1
,赵志刚2
,孟金柳2
,杜国祯
2,*
(1.兰州大学草地农业科技学院,甘肃兰州 730020; 2.兰州大学干旱与草地生态教育部重点实验室,甘肃兰州 730000)
摘要:植物会采取什么样的繁殖对策来保障它的雌性和雄性繁殖成功,特别是那些生活在高寒地区的植物,已经引起了很多学者的关注。通过野外盆栽试验对青藏高原东部高寒草甸上的常见物种露蕊乌头(A conitu m gymnandrum M ax i m )花序内的性分配模式进行了研究,发现同其它顶向式(从花序基部到顶部)开花的植物一样,随着花从基部到顶部的次序,露蕊乌头的心皮数、雌蕊重、种子数和种子重/果实减少;而花药数,花粉数/胚珠数以及雄蕊重/雌蕊重增大,顶部花表现出偏雄的性分配。结籽率在不同的位置间没有显著差异,不受花粉数量的限制;去花实验没有增加剩余部位花的种子数,只是增加了种子大小,这是花序内不可避免的位置效应导致了花序内位置依赖的性分配模式。
关键词:高寒草甸;露蕊乌头(A conit um gym nandru m M ax i m );性分配;交配环境;位置效应
文章编号:1000-0933(2008)06-2909-07 中图分类号:Q145,Q346,Q945 文献标识码:A
Positi on -dependent sex all ocati on w ithi n i nfl orescence of A conit u m gy mnandru m M ax i m
FAN Bao -L i 1
,Z HAO Zh-i Gang 2
,MENG Ji n -Liu 2
,DU Guo -Zhen
2,*
1Depar t m e n t of Pa storal Ag ric u lt u re S cie n ce and T ec hnology,Lanzhou Universit y,Lanzh ou 730020,Ch i na
2K e y L aboratory of A ri d and Grassland Ecolo gy of M i n ist ry of e ducation,L anzhou Un i v e rsit y,L anzhou 730000,C hina Act a Eco l og ica Sini ca ,2008,28(6):2909~2915.
Abstract :The questi on of wh i ch resource a llocat i on patter ns w ill be selecte d to ensure m ale and fe m ale re producti ve success has attractedm any researc hers ,especially in refere nce to plants of alpi ne environments .This study investi gated the patter n of reproductive all ocation w ith i n i nfl orescences of A conitu m gymnandr um M axi m ,a co mmon species of the Q i ngha-i T i bet P l atea u,and experm i entally explored the potential mec hanis m underl y i ng t h is patter n .
Data on floral allocat i on and see d production i n botto m,m i ddle ,and top flo w ers in race m es of A.gy mnandru m were gathere d in a vari ety of sub -alpi ne and al pine m eado ws ,
and their m aternal plants w ere collected .A flo wer -re moval
experm i ent also w as perfor med ,to deter m i ne whether all ocation was affected by w it h i n -race m e co mpetiti on .T hese data were analyzed w ith repeated -m easures anal ysi s of vari ance and t wo -w ay analysis of variance .
Results sho w ed that there was a m arked decline in car pel number ,fe ma l e m ass ,seed nu m ber ,a nd seedm ass per fr u it w ith flo weri ng sequence w ithi n a race m e ,wh ile ant her number ,m ale/fe m ale m ass rati o a nd pollen /ovule rati o i ncreased .F loral sex all ocationw asm ale -biased i n top flo wers ,while seed set was c onstant a mong positi ons .V ariati on i n the a mount of
2910 生 态 学 报 28卷
po ll en received cannot explai n t he observed results,a nd t he flo wer-re moval experm i ent did not m i pr ove t he see d set of the re ma i ni ng flo wers,i ndicati ng that an unavo i dable architect ural effect has led to the position-depe ndent patter n o f se x all ocation w it h r ace me.
K eyW ords:a l pine m eado w;A conitum gy m nandrum M ax m i;se x all ocati on;mating;architect ural effect
性分配理论主要是从雌雄两个功能考虑个体的适合度,研究繁殖资源在两性功能间的最优分配[1]。通常花序内雄性和雌性器官重量或数量的变异都被认为是性别表达的改变[2~4]。对于由动物传粉、花序复杂的雌雄同体植物来说,昆虫自下而上的访花行为造成花粉扩散具有方向性,因此很难避免自花授粉或同株异花授粉,从而会影响到花序内花的性分配[5]。自交亲和物种的自交率会随着花序内同株异花授粉的增加而升高,降低杂交的成功率[6]。由于第一朵被访问的花能够接受充足的外来花粉,而最后一朵花在花粉输出方面最为有效[7],B r unet和Charles w ort h认为:为了获得最佳的雌雄适合度,较早访问的花应该对胚珠的投入更多,而较晚被访的花应该对花粉的投入更多[5]。
对于花序内花的性分配随时间和空间变异模式的机制探讨主要有3个假说。第一种假说认为:由于资源是有限的,而基部的花通常都先开,离资源生产、运输以及储存器官也更近,与顶部的花相比对于资源的竞争更具有优势,所以果期的种子生产要高于顶部的花[8];第二种假说即 位置效应 ,认为:基部的花本身就具有生产更多胚珠的能力,这是花序发育不可避免的内在因素作用的结果,这个假说可以通过对花朵间的资源竞争不存在或者竞争很少的不结实的植物其胚珠数/花粉数以及其它花部器官依然表现出花序内的变异来证明[9,10];另一种即 不均衡的传粉假说 ,认为:是花序内不同部位的花所接受的花粉数量或质量不同才造成了结籽率的差异[11,5]。
针对这3个假说,不同的物种间存在着巨大的差异,特别是生长在青藏高原高寒草甸上的常见物种会采取什么样的资源分配模式来保障它们的雌性和雄性繁殖成效值得探讨。这里以青藏高原东部高寒草甸上的常见种露蕊乌头为材料,通过野外自然环境下的盆栽实验,拟解决以下两个问题:(1)露蕊乌头花序内的性分配模式(花的分配及种子生产)是什么?(2)造成这种模式的可能的机制是什么?
1 实验材料和方法
1.1 研究物种
露蕊乌头(Aconitu m gy m nandrum M ax i m)属毛茛科乌头属,虫媒的2年生直立草本。主花序为总状花序(4~20朵花),开花顺序为顶向式;主花轴通常产生数个侧枝(每个侧枝1~4朵花不等);花紫色、花萼5、花瓣2,盔部伸长;主要由采食花蜜的熊蜂类传粉,自交亲和;果实由多心皮(6~14)构成,每心皮含多个胚珠;果期40d左右。海拔2000m以上的高山地区均有分布,特别是在弃耕地或退化草地中经常有较大居群。1.2 研究地点
本研究是在兰州大学干旱与草地教育部重点实验室高寒草地生态系统野外定位研究站完成的。实验站地处青藏高原东部的亚高寒草甸,位于甘肃省甘南州合作市。合作(东经102 53 北纬34 55 ),海拔高度为2900m,年平均气温20 ,最冷的12、1、2三个月平均气温-8.9 ,最热的6~8三个月平均气温为11 5 [12]。
1.3 实验方法
2004年5月将前一年在合作市附近亚高寒草甸上收集来的露蕊乌头的种子(大约4000粒)分别放在加蒸馏水的培养皿中,等其萌发后选择近似大小的幼苗移栽:每四株一个花盆,共80个花盆。其中50个花盆的个体在花中期取样(按主花序花朵开放次序在花中期即一半花药开裂时取样采集所有花),测定花雄蕊重、雌蕊重、花冠干重,计数雄蕊数和雌蕊数,总花数;另30个花盆的所有个体均在果期取样(按主花序果实成熟次序采集所有成熟果实),所有果实在自然通风状态下干燥3个月后称量种子重/果实,计数种子数/果实,败育
数/果实并计算单个种子重和结籽率,结籽率=种子数/胚珠数。
同时,随机选100株大小近似的幼苗进行移栽,每2株幼苗于一个相同大小的花盆内,共50个花盆。其中的10个花盆的个体每一株依次取其主花序所有花蕾用作花粉数和胚珠数的统计,花粉统计时每朵花每次取5个花药,在1 3盐酸溶液中、80 下加热4h 水解,然后移入0.5m l 的乳酸-甘油(3 1)混合液中涡流搅动30s ,充分混匀,用1m l 移液管滴入血球计数板,每个样滴6次,每次计数四个角的四个方格(0.1mm )的花粉数,每朵花重复2次(共10个花药),每个花药的花粉数乘以总花药数即为每朵花的花粉数,胚珠数在解剖镜下直接计数;另外40个花盆的个体生长至开花后,选择20株作为对照,每一株再找与其匹配的一个个体(高度相当、花数目接近)即20株配对的个体作为处理,分别在花后期(花瓣凋落)去花,只留下第3、4、5、6朵花比较最终的种子产量与对照个体相应的第3、4、5、6朵花的种子产量。所有的植株都与2005年7月开花。每株植物的花根据其位置被分为3部分:基部、中部和顶部[13]
。
1.4 数据分析
花粉数/胚珠数是描述性分配的重要参数,对植物的最佳性别资源分配有着很大的影响[14~16]
。很多研究
都以花粉数/胚珠数或者雄蕊重/雌蕊重作为性分配的测量指标
[17]
,本试验中以雄蕊重/雌蕊重和花粉数/胚
珠数作为花期性分配的指标。花序内不同部位性分配、花的性状差异及果实性状的变异用重复测量方差分析,去花处理与花位置对种子性状的影响用双因素方差分析。花粉数/胚珠数以及结籽率都进行了自然对数转换。以上所有的数据分析都是在SPSS 13.0统计软件中完成的。2 结果
2.1 花序内性分配
对花序内性分配的研究表明(图1,表1):露蕊乌头从花序基部到顶部花冠重及雄蕊重没有显著差异(p >0.1),但是雌蕊重(p <0.0001)和心皮数(p <0.0001)显著地减少,而且雄蕊数(p =0.011),雄蕊重/雌蕊重(p <0.005)和花粉数/胚珠数显著增加(p <0.0001)。这说明雌性功能从基部到顶部存在显著的减少,而雄性却逐渐增加,表现出偏雄的性分配。
表1 花序内不同部位花的性状差异的重复测量方差分析
Tabl e 1 R epeated -m ea s ures ana l ys is of vari ance on flora l all oca tion w ithi n i nflores cence
性状
Characters 来源Source d f Type III 平方和
Type III s um of squ ares 均方
M ean squ are F S i g .雄蕊重(g)位置Pos iti on 23.35 10-6 1.68 10-61.077
0.341
And roeci um m as s 误差E rror 8420.001 1.57 10-6雄蕊数位置Pos iti on 2407.2672203.63364.4991
0.011387
S t am en num ber 误差E rror 84238109.5945.2608雌蕊重(g)位置Pos iti on 20.0002440.0001226.33883
<0.0001
Gynoeci um m as s 误差E rror 8400.001616 1.92 10-6心皮数位置Pos iti on 2649.9203324.9602112.578
<0.0001
Carpel numb er 误差E rror 8402424.689 2.8865花冠重(g)位置Pos iti on 29.487 10-6 4.743 10-61.6880.186
Corolla m ass 误差E rror 8360.0023 2.811 10-65.649
雄蕊重/雌蕊重位置Pos iti on 224.26312.131M a l e /fe m al e m as s 误差E rror 840268.417 2.1470.004花粉数/胚珠数位置Pos iti on 20.47410.237031.8786
<0.0001
Pollen /ovu le rati o
误差E rror
48
0.3569
0.0074
2911
6期 樊宝丽 等:露蕊乌头(A con itu m gymnandrum M ax i m )花序内位置依赖的性分配
图1 露蕊乌头花序内不同部位花的性状变异
Fi g .1 Vari ance on fl oral all ocati ons a mong pos iti on w it h i n i n florescen ce
1、2、3分别表示花序的基部、中部和顶部,误差条线图代表的是平均值 标准误 1,2and 3represent botto m,m i dd le and t op pos i ti on s of i n florescence respecti vel y ,Bars i s M ean SE
表2 花序内不同部位种子性状差异的重复测量方差分析
Tab l e 2 R epeated -m ea s ures ana l ys i s of vari ance on seed production w ithi n inflores cence
性状
Characters 来源Sou rce d f
T ype III 平方和
T ype III s um of squares
均方
M ean square F S i g .种子重/果实(g)位置Pos iti on 20.10710.053542.65
<0.0001
Seed m ass per f ru it 误差E rror 3740.46930.0013种子数/果实位置Pos iti on 2143579.771789.8357.57
<0.0001
Seed num ber per fru i t 误差E rror 374466344.91246.912单个种子重(mg)位置Pos iti on 20.24030.12010.75
0.4743
S i ngle seed size 误差E rror 37259.79160.1607结籽率(%)位置Pos iti on 290.431745.21590.95
0.3874
Seed set
误差E rror
372
17691.91
47.5589
表3 双因素方差分析检验去除花处理与花位置对种子性状的影响(所有数值分析前都进行了自然对数转换)Table3 The effects of re mov i ng flowers and sequence on s eed producti on of re ma i ned fruits (all dat a w ere log -trans f or m ed)
来源
Sou rce d f Typ e III 平方和Type III s um of squares
种子重/果实(g)Seed m ass per fru it
S i g .种子数/果实
Seed num ber p er fruit
S i g .单个种子重(m g)
S i ngle seed s iz e
S i g .处理T reat m ent 10.03080.006712427.80.13430.23250.0018位置Pos i ti on 30.01100.442511472.30.55450.01300.9033处理 位置T P 30.00630.6710
4730.20.8339
0.08780.2827
误差E rror 1250.5073684053.62.8496总误差Total error
133
2.9654
4394355.0
88.0284
2.2 花序内种子生产模式
从图2,表2可知,花序内不同位置间的结籽率(p =0.3874)和单个种子大小(p =0.4743)没有显著差异,这说明露蕊乌头中部以及顶部的花不受花粉数量的限制。每个果实的种子数(p <0.0001)和种子重(p <0 0001)随着花位置的升高显著地降低,这说明露蕊乌头在花序基部具有更佳的雌性繁殖成效。2.3 去除花对种子性状的影响
从表1.3可知,去花处理对剩余果实的影响只是增加了种子重/果实(0.118~0.149g ,p =0.007),这主
2912
生 态 学 报 28卷
图2 露蕊乌头花序内不同部位的种子性状变异
F i g .2 Variance on s eed produ cti on a m ong pos i ti on s w i th i n i nfl orescence
1、2、3分别表示花序基部、中部和顶部,误差条线图代表的是平均值 标准误 1,2and 3represent botto m,m i ddle and t op pos iti ons of i nfl orescence res p ecti vel y ,B ars isM ean SE
要是由于单个种子更重(0.755~0.838m g ,p =0.002),但种子数(p =0.134)并没有显著地变化,并且去除花对种子重/果实、单个种子重、种子数的影响与剩余果实所着生的部位无关,因为处理-位置的交互作用不显著。3 讨论
3.1 花序内的性分配
要充分理解雌雄同体植物花序内花朵间性分配变异的这种模式,就必须同时考虑到雄性和雌性功能,需要研究这个物种的花朵间是否存在着任何形式的性别特化
[18~20]
。实验发现,随着花从基部-顶部的开放次
序,雄蕊数,花粉数,雄蕊重/雌蕊重以及花粉数/胚珠数都显著的增加,表现出偏雄的性分配。这个结果与前人的一些研究相吻合,如Ish ii 和Sakai 研究https://www.doczj.com/doc/fa13772734.html,ticum 时发现性分配的两个重要指标雄蕊重/雄蕊重+雌蕊重及花粉数/胚珠数也都随着花序的顶向式发展而增加,顶花表现出偏雄的性分配
[21]
。对Cor ydalis a m bi g ua
研究时发现,花序内从基部-顶部花的雌蕊重、花冠重及花蜜产量都减少,而雄蕊重不变,说明性分配偏雄[22]
。
研究C l a rk i a unguicu lat a 时也发现较早开的花对雌蕊投入更大,而较晚开的花则表现出偏雄的性分配
[23]
。
雌雄异熟、昆虫访花的方向性会调节交配环境从而引起雌性和雄性相对适合度的改变[5,20]
;露蕊乌头虽
属于异步雌雄异熟
[24]
,但其主要的传粉者-熊蜂是按照从基部到顶部的顺序进行访花,所以很难避免因此造
成的同株异花授粉。由于基部的花本身就具有高的受精率以及生产更多种子的能力且会比其他部位的花朵能够接受更多的外来花粉,而顶部的花朵在花粉输出方面最有效
[25]
,所以露蕊乌头选择了花序内基部花偏雌
的性分配、顶部花偏雄的性分配,这样既可以保证基部的胚珠接受充足的外来花粉以及顶部花花粉的大量对外扩散,使雌性适合度和雄性适合度最佳化;又可以减少由于雄蜂访花的方向性而造成的同株异花授粉和花
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6期 樊宝丽 等:露蕊乌头(A con itu m gymnandrum M ax i m )花序内位置依赖的性分配
2914 生 态 学 报 28卷
粉折扣效应,从而减少雄性适合度代价。
3.2 可能的机制
3.2.1 不均衡的传粉假说
对露蕊乌头花序内的实验研究发现,不同部位果实的结籽率没有明显的差异。Ehrl n认为即使充足的异交花粉依然不能有效的提高晚花的结实率[26]。Sutherl a nd发现不管花粉的供应是否充足大多数顶花都存在严重的败育情况[27]。还有研究发现即使有足够的花粉早花的结籽率与结实率依然明显的高于晚开的花,这说明不均衡的传粉假说不能够解释位置依赖的这种分配模式[8]。但也有相反的例子,如研究Corydalis am bi g ua时发现顶部花种子数的减少是传粉限制的结果[22];同时对其它一些物种的研究也发现,花序内果实和种子生产的这种模式主要是由于所接受花粉的数量不同而引起的[28~30]。
3.2.2 资源竞争VS位置效应
对于花序内性分配随位置变异机制的研究,虽然一些结果支持资源限制假说[8,31],还有一些研究发现是资源限制和位置效应同时作用着花序内的性分配模式[10,32,33],但去花实验并没有提高剩余部位花的种子数,这说明露蕊乌头花序内种子数的减少并不是果实间的资源竞争造成的。露蕊乌头花序内不同部位性分配的这种分配模式是花序发展不可避免的内在因素作用的结果,符合 位置效应假说 [34]。Ash m an和H itchens的研究发现位置效应对 F.vir g iniana的花粉数和胚珠数有着极其显著的影响[30];在对H ydrophy ll u m app endiculatum的研究中也发现,位置效应是唯一影响花瓣长的机制[2]。Bu i d e去除S.acuti f olia中部和基部的花并对顶部的花进行人工授粉后发现,位置效应是引起花序内胚珠、结实率和种子数随空间变化的原因[35]。
综上所述,露蕊乌头为了减少由于雄蜂自下而上的访花行为造成的同株异花授粉,提高雌性和雄性的适合度,选择了顶花偏雄的性分配。同时花序内不同位置间的结籽率没有变化,去花实验也没有增加剩余部位花的种子数,所以露蕊乌头被认为是自身不可避免的位置效应所引起了花序内雌雄分配随时空变异的这种模式。
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6期 樊宝丽 等:露蕊乌头(A con itu m gymnandrum M ax i m )花序内位置依赖的性分配
129 第13卷 第8期 2011 年 8 月 辽宁中医药大学学报 JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM Vol. 13 No. 8 Aug .，2011 张仲景治疗疼痛的附子、乌头类方剂研究 张林，吴晓丹，杨勇，白晶，王坦 （北京中医药大学方剂教研室，北京 100029） 收稿日期：2011-05-16 作者简介：张林（1980-），女，山东人，讲师，博士，研究方向：中医方剂学理论与临床研究。通讯作者：白晶（1955-），女，北京人，副教授，学士，研究方向：方剂学实验研究。E-mail：baijingldq@https://www.doczj.com/doc/fa13772734.html,。 《伤寒论》与《金匮要略》作为中医方剂的经典 著作，为后人提供了多种病证的有效治疗方法。在对于疼痛一证的治疗上，张仲景更是针对不同性质、不同原因的痛证，创立了多首配伍精当、疗效斐然的方剂。根据病证的不同，仲景灵活选用多种药物治疗疼痛，如桂枝、大黄、附子等。仲景常以桂枝配伍各类药物，治疗各类疼痛。笔者曾撰文专门探讨了桂枝类及大黄类方剂在治疗疼痛中的应用[1]。仲景以三承气汤及其他一些以大黄为主药的方剂，治疗瘀血留滞所导致的疼痛，大黄类方剂集中体现了张仲景“下法”治疗疼痛的特色[2]。对于寒瘀致痛的患者，仲景亦大黄、附子并用，大黄附子汤在疼痛治疗方面应用甚广，如以大黄附子汤热敷治疗因下肢静脉曲张引起的腿痛及身体偏侧疼痛等[3-4]。 附子与乌头因其大辛大热之性，在治疗寒痛方面有其他药物不可替代的作用，故本文将附子、乌头类方在《伤寒论》与《金匮要略》中治疗疼痛的方剂做以总结，希望能深入了解经方在疼痛治疗方面的组方规律，并为临床的疼痛治疗提供组方遣药的思路。 附子、乌头类方是一组以附子和乌头为主要组成的方剂，仲景常用其治疗以寒邪为主的疼痛。本类方剂在仲景原书中数量众多，包括（1）附子汤；（2）桂枝附子汤；（3）白术附子汤；（4）甘草附子汤；（5）大黄附子汤；（6）真武汤；（7）四逆汤；（8）通脉四逆汤；（9）附子粳米汤；（10）大乌头煎；（11）乌头赤石脂丸；（12）乌头汤；（13）乌头桂枝汤；（14）九痛丸等。 1 附子类方 1.1 附子汤既温且补治虚痛 附子汤主治少阴病 “身体痛，手足寒，骨节痛，脉沉者”。此证为少阴阳虚，寒邪在内，肌肤骨节失温，寒湿凝滞，故身体痛、骨节痛，以附子汤扶阳温经，散寒除湿。炮附子扶真阳之虚，温经散寒而镇痛。茯苓、白术除湿止痛，利于阳气宣通。芍药制术附之温燥而护阴，和营血而通痹止痛。人参补元气以除虚，参附相伍，峻补元气，助诸药除痛之功。 附子汤既温又补，为温补少阴阳气不足常用要方，适用于因虚致病、久病致虚的痹证患者。有学者[5] 曾用附子汤治愈长达13年的定时臂痛， 本病患者起于产后，为寒、虚夹杂导致，其他药物效果甚微，而附子汤温补并用，正对病机。其他运用附子汤治疗寒湿痹证的效案亦是颇多，如治疗类风湿关节炎、骨性关节炎等常能取得较好疗效[6]。 《千金要方》的附子汤是以本方加桂心、甘草，治温痹缓风身体疼痛如欲拆，肉如锥刺刀割，是本方的进一步发展。 1.2 桂枝附子汤类和营缓痛 桂枝附子汤、白术附子汤、甘草附子汤皆用附子为主药，配以桂枝、白术、甘草等药，共治风湿见表阳虚的身体骨节疼痛，乃风寒湿邪三者并祛之剂。桂枝温经散寒，祛风解表而通经络，白术燥湿和中而运水湿。甘草在《本经》中言其可“坚筋骨，长肌肉，倍力。金疮，尰，解毒。”尰字在《说文》中有：“胫气肿，本作瘇，从广，重声。”徐曰：“下湿地则有此疾，今文做尰。”甘草附子汤有身微肿，故以之为君。清·王子接在《绛雪园古 方选注》[7] 中提到： “甘草附子汤，两表两里之偶方。风淫于表，湿留关节，阳衰阴盛，治宜两顾，白术、附子顾里胜湿，桂枝、甘草顾表化风……徐徐解救也。” 摘 要：文章总结了张仲景对于附子、乌头类方剂在治疗疼痛中的应用情况，并结合病证医案对其中的代表方 剂的配伍思想及临床运用做以详细分析，同时对于乌头与附子的不同应用范围作了归纳阐释。 关键词：附子；乌头；类方；疼痛；张仲景 中图分类号：R289 文献标识码：A 文章编号：1673-842X (2011) 08- 0129- 03Research on the Application of Fuzi and Wutou in the Pain Treatment of ZHANG Zhong-jing ZHANG Lin，WU Xiao-dan，YANG Yong，BAI Jing，WANG Tan （Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China） Abstract： This paper summarizes the application of Fuzi and Wutou in the pain treatment of ZHANG Zhong-jing. It analyses the compatibility of the prescriptions and clinical use in the representative Medical cases, and concludes the different application range of Fuzi and Wutou. Key words：Fuzi；Wutou；Categorized Formulas；Pain；ZHANG Zhong-jing
六种云南产乌头属植物的生物碱成分研究乌头属(Aconitum)属于毛茛科(Ranunculaceae),全球约350种,分布于北温带。我国约170种,其中76种民间药用,多用于镇痉、镇痛、祛风湿和解热。 二萜生物碱是该属植物的有效成分和毒性成分,也被认为是特征化学成分。二萜生物碱复杂的分子结构和显著的生理活性,吸引着天然药化研究者广泛而持久的关注。 本论文第一章至第六章对六种云南产的乌头属植物黄草乌(A. vilmorinianum Kom.)、宾川乌头(A. duclouxii Levl.)、保山乌头(A. nagarum Stapf)、剑川乌头(A. handelianum Comber)、玉龙乌头(A. stapfianum Hand.-Mazz.)和独龙乌头(A. taronense Fletcher et Lauener)的化学成分组成和结构进行了系统的研究。运用多种色谱分离材料和手段,结合现代波谱分析技术和X-单晶衍射技术,从六种乌头属植物中分离鉴定了131个化合物。 所得的二萜生物碱有107个,结构类型涉及C18-高乌宁碱型、C19-乌头碱型、C19-7,17-次裂型、C19-牛扁碱型、C20-光翠雀碱型和C20-纳哌啉型,其中有19个新的生物碱,包括两个新颖的二萜生物碱骨架：vilmorine A分离自黄草乌,其B环中C(8)-C(9)键断裂重排为C(8)-C(10)键而形成六元B环；保山乌头中得到的nagarines A和B,其D环C(8)-C(15)键断裂而开环。同时也探讨了这两类新骨架C19-二萜生物碱可能的生源途径。 其他16个新化合物分别为1个苯甲酰胺衍生物,1个C18-高乌宁碱型,1个C20-光翠雀碱型,2个C19-重排型及11个C19-乌头碱型二萜生物碱。此外,还对所得二萜生物碱的植物化学分类学意义进行了讨论。 第七章对所得部分化合物的抗肿瘤活性和抗氧化活性进行了筛选。第八章归
常用乌头类中药的毒性研究概述
常用乌头类中药的毒性研究概述 摘要： 关键词:乌头类中药；毒性； 乌头属（Aconitum）植物属于毛茛科（Ranunculaceae），主产于四川、云南、贵州等西南省份。其品种在我国比较多，达160多种，其中作为药用大概有44种。附子（Radix Aconiti Lateralis）、川乌（Radix Aconiti）以及草乌（Radix Aconiti Kusnezoffii ）是乌头属植物中最为常用的。乌头(Aconitum carmichaeli Debx)的干燥母根是川乌,子根即为附子，毛茛科植物北乌头(Aconitum kusnezoffii Reichb)的干燥块根，即为草乌。 中医认为乌头类中药能够治疗风寒湿痹，具有散寒止痛的作用。而现代医学也表明，乌头类中药具有抗炎、镇痛、抗肿瘤等作用，临床应用有较好的疗效。乌头类中药大多有毒性，如川乌的中毒量与治疗量非常接近，因此《中华人民共和国药典》2010年版也将其列为“剧毒大毒”之品。 1、古代文献资料中附子、川乌、草乌毒性的记载 1.1 附子是《伤寒杂病论》中应用较多的一种药物。全书所载方剂中应用到附子的就达到了20余首。如：桂枝加附子汤、四逆汤、桂枝附子汤、干姜附子汤等。仲景用附子走皮表、驱寒湿则取炮附子，且多与术作配，须姜作伍时，则从不用干者，均取生者，如桂枝附子去桂加术汤。张仲景用附子的方剂有37个，除8个丸散方剂外，其余
29个汤剂中有23个方剂都配伍生姜、甘草，另外6个方剂大多也配伍干姜或大黄。 在历代本草中，均有对附子毒性的记载。例如: 《本草备要》说道：（附子）大燥，辛甘有毒，大热纯阳。另一部本草巨著《新修本草》也记载：附子，味辛、甘,温、大热，有大毒。李时珍的《本草纲目》记载：（附子）气味辛，温，有大毒。 1.2 《金匾要略》中，川乌的方剂一共有5首,如在胸痹心痛短气病篇中提到的乌头赤石脂丸以及中风历节病篇中的提到的乌头汤等等。 历代本草中也有对川乌毒性的不少记载。如我国第一部本草药物学专著《神农本草经》说道:“其汁，煎之，名射周，杀禽兽。”；著名的《本草纲目》也记载道:“气味辛,温,有大毒。”可见其毒性是相当大的。 1.3 关于草乌的本草记载，最早是在《千金翼方·卷第十五》中出现的，其首次提到了“草乌头”之名。这说明了在当时的民间，已经有了“草乌头”这样一个叫法。在另一部由五代时期的后唐的药师侯宁极著作的《药谱》一书中，也提到了草乌头之名。 明代的李时珍在其著名的《本草纲目》中记道：“（草乌）处处有之、根苗花实并与川乌头相同，但此系野生，又无酿造之法，其根外黑内白，皱而枯燥为异尔，然毒则甚焉。”同时李时珍特别强调：“草乌头、射罔，乃至毒之药。非若川乌头、附子人所栽种，加以酿
乌头属药用植物的研究概述 摘要：乌头属植物虽然具有很强的毒性，但由于其显著的药理作用，越来越受到国内外的广泛关注。本文查阅了乌头属药用植物的文献资料，阐述了乌头类中药的资源分布、化学成分、药理作用及其临床应用的研究近况，为该属植物的进一步研究开发提供帮助。 关键词：中药;资源分布;化学成分;药理作用;临床应用 毛茛科(Ranuculaceae)乌头属(AconitumL )植物全世界约有300 余种，广泛分布于北温带，主要分布于亚洲，其中我国乌头属(AconitumL )主要有27种[1]。在乌头属块根的种类中，多数是有毒的植物，其主要有效成分及毒性成分均为二萜类生物碱。本文对乌头类中药的资源分布、化学成分、药理作用和临床应用状况综述如下： 一、资源分布 毛茛科约50属，2000 种植物，分布全球，以北温带为多。我国42 属800 余种，分布全国;已知药用30 属，近500 种。其中比较大的有毛茛属、乌头属、铁线莲属、黄连属[2] 等。乌头主要分布于长江中下游，华北西南等;生于山坡、草地、灌丛中，其中四川，陕西大量栽培。贵州地处亚热带地区，境内分布有四个种，包括花葶乌头 ( Aconitum scaposum )、岩乌头
（Aconitum racemulosum ）、昆明乌头（Aconitum vilmorinianum ）和鞘柄乌头（Aconitum vagiratum ）。 二、化学成分乌头类中药具有显著镇静作用，其镇痛的活性成分主要是其中乌头类生物碱，如乌头碱（AC）、中乌头碱（MAC）、 3-酸乌头碱（AAC）、次乌头碱（LA）、N-脱酸刺乌头碱（DLA）、 滇乌头碱（TI）等［3］。通过紫外光谱、红外光谱、核磁共振、质谱等方法对分离出来的乌头生物碱进行结构鉴定，目前已发现乌头属中药含有400 多种生物碱。有人从瓜叶乌头根中分得氨茴酰牛扁碱、牛扁碱、8-酰滇乌碱、伪乌头宁、chacontine 、尼奥宁、senbusine、6-表弗斯生、滇乌碱、印乌碱、查斯曼宁等12个C19二萜生物碱［6］;工布乌头的块根中黄草乌碱丁、黄草乌碱丙等9个C19二萜生物碱［4］。 三、药理作用 （一）镇痛作用。乌头属植物用于治疗跌打损伤，风湿关节炎等症，其有效成分主要为二萜生物碱。采用小鼠醋酸扭体法观察了冉乌头的镇痛作用，得出冉乌头有显著的镇痛效果。以吗啡为阳性对照药，用热板法测定小鼠疼痛反应的潜伏期，进行药物镇痛作用的研究，充分肯定了乌头注射液的镇痛作用，并证实其药效强度较高，维持时间较长等［6］。 观察乌头注射液镇痛作用的强弱及其药效等过程，用热板法测定小鼠疼痛反应的潜伏为痛阈指标，以吗啡为阳性对照药，进行药物镇痛作用的研究，具有肯定的镇痛、药效强度较高、时间长、其药
2010年5月 第19卷第2期中央民族大学学报（自然科学版）Journal of MUC （Natural Sciences Edition ）May ，2010Vol.19No.2 乌头属植物在少数民族医药中的应用 *李志勇1，李彦文2，图雅3，黄秀兰1，张嫚1，崔箭1 （1.中央民族大学中国少数民族传统医学研究院，北京100081； 2.中国中医科学院中医药信息研究所，北京100700； 3.清华大学化学系，北京100084） 摘要：毛茛科乌头属植物是我国各民族传统医药中常用的有毒植物药物，本文就其在蒙、藏、彝、维吾尔、 侗等少数民族中的应用进行了综述，对乌头属药用植物在不同民族中的应用做了简要评价.关键词：乌头属；民族医药 中图分类号：R282.7 文献标识码：A 文章编号：1005-8036（2010）02-0072-03收稿日期：2009- 12-08基金项目：国家自然科学基金（No.30860391）. 作者简介：李志勇（1978－），男（汉族），山西太原人，中央民族大学少数民族传统医学研究院医学博士，助理研究 员.主要研究方向：民族有毒药物的合理应用与心脑血管药理学.E-mail ：lizyong@https://www.doczj.com/doc/fa13772734.html, ；Tel ：010- 68933254-8391前言 毛茛科Ranunculaceae 乌头属Aconitum L 植物作为有毒植物及药用植物一直受到广泛的关注.乌头属植物在全世界约有300余种，在我国分布的有200多种.分布于我国境内的乌头属植物具体又分为牛扁亚属、乌头亚属、露蕊乌头亚属三大类.其中，以乌头亚属的种类最为复杂，可分为多果乌头组和乌头组.前者仅一种多果乌头A.polycarpum Chang ex W.T.Wang ，后者则包括了11个系，即唐古特乌头 系、 圆叶乌头系，保山乌头系、短柄乌头系、显柱乌头系、兴安乌头系、蔓乌头系、乌头系、准噶尔乌头系、岩乌头系、褐紫乌头系.当中，以唐古特乌头系、圆叶乌头系群植物的毒性在乌头属中最小［1］. 乌头属植物在我国作为药材的应用历史十分悠久，涉及品种也较为丰富.最早在《神农本草经》中便有附子（附子是乌头Aconitum carmichaeli Debx.的子根的加工品）的使用记载，将附子列为下品.汉代 名医张仲景为善用附子的第一人，其用附子的指征主要是“少阴病，脉微细，但欲寐” .其著作《伤寒论》中记载含附子方剂20首，37条；《金匮要略》记载含附子方剂11首， 16条［2］.在我国供药用的乌头属植物已达76种之多，著名的有附子、川乌、草乌、雪上一枝蒿、关白附等，其传统功效有祛风除湿、活血祛 瘀、 温里散寒等，可用于治跌打损伤、关节炎、神经性疼痛、中风瘫痪、胃冷痛、胃肠炎、月经不调、痈疽疮毒等疾病.但是， 乌头属植物多具有显著的毒性，毒副作用成为限制乌头属植物药用的主要因素.我国各民族在长期的生产生活实践中，积累了丰富的乌头属药用植物“制毒”、用药经验，藏、苗、蒙、维、土家等 我国少数民族在乌头属植物的药用方面更因环境、文化、医学理论的各异而形成了不同用药习惯与方法，本文将就乌头属植物在少数民族传统医药中的应用做重点探讨. 2 乌头属植物在少数民族医药中的应用2.1乌头属植物在蒙医药中的应用
乌头类药减毒方法 1.久煎法:如大乌头煎，煎煮法云:“以水三升煮取一升，内蜜二升，煎令水气尽，取二升.”所谓“煎令水气尽”，意为通过久煎，将水分蒸发完.实验表明，乌头水煎至3~4小时以上，有毒之乌头碱即可水解，使毒性降到最低限度，而且水解之物具有一定的镇痛作用。 2.与蜜、甘草及姜枣同煎法:上述五方全部与蜜同煎，使之减低毒性且能延缓疗效。白蜜中含有某些氨基酸，能和毒性乌头碱结合成盐，容易溶解于水，以提高疗效，又能减低毒性.其次甘草、姜枣也有一定减毒作用。 3.从小剂量开始逐渐加最法:如在乌头汤方后云:“内蜜煎中更煎之，服七合，不知，尽服之，’;乌头赤石脂丸方后云:“右五味，末之，蜜丸如桐子大，.先食服一丸，日三服，不知，稍加服”;赤丸方后云:“·一不知，稍加之，以知为度”;乌头桂枝汤方后云:“令得一升后，初服二合，不知，即服三合，又不知，复加至五合，其知者，如醉状.得吐者为中病”。这种用法是很合理的，因为乌头的治疗量与中毒量很接近，为了摸索有效治疗量，就必须从小荆量开始，直至以知为度，中病即止。一旦出现眼眩，唇舌麻木等感觉，应立即减量或停服观察. 4.根据体质不同服药法:如大乌头煎服法:“强人服七合，弱人服五合”。病人体质强弱对药物毒性的耐受性也往往随之不同，故体质虚弱者应适当减量。 5.先食服药法:如赤丸:“先食，酒饮下三丸，’:乌头赤石脂丸:“先食，服一丸”.都是采用饭后服，使药物吸收缓慢，一以减少毒性吸收。 6.‘饱制法:如赤丸“乌头二两，炮”乌头赤石脂丸“乌头一分，炮”。通过动物实验证明，使用制川乌比生乌头毒性低得多。 《金匾要略》对乌头的应用，采用了多种有效减毒方法，足证张仲景运用乌头有丰富的经验，并且与现今科学家验相为吻合，可以作为临床应用的参考。
常用乌头类中药的毒性研究概述 摘要： 关键词:乌头类中药；毒性； 乌头属（Aconitum）植物属于毛茛科（Ranunculaceae），主产于四川、云南、贵州等西南省份。其品种在我国比较多，达160多种，其中作为药用大概有44种。附子（Radix Aconiti Lateralis）、川乌（Radix Aconiti）以及草乌（Radix Aconiti Kusnezoffii ）是乌头属植物中最为常用的。乌头(Aconitum carmichaeli Debx)的干燥母根是川乌,子根即为附子，毛茛科植物北乌头(Aconitum kusnezoffii Reichb)的干燥块根，即为草乌。 中医认为乌头类中药能够治疗风寒湿痹，具有散寒止痛的作用。而现代医学也表明，乌头类中药具有抗炎、镇痛、抗肿瘤等作用，临床应用有较好的疗效。乌头类中药大多有毒性，如川乌的中毒量与治疗量非常接近，因此《中华人民共和国药典》2010年版也将其列为“剧毒大毒”之品。 1、古代文献资料中附子、川乌、草乌毒性的记载 1.1 附子是《伤寒杂病论》中应用较多的一种药物。全书所载方剂中应用到附子的就达到了20余首。如：桂枝加附子汤、四逆汤、桂枝附子汤、干姜附子汤等。仲景用附子走皮表、驱寒湿则取炮附子，且多与术作配，须姜作伍时，则从不用干者，均取生者，如桂枝附子去桂加术汤。张仲景用附子的方剂有37个，除8个丸散方剂外，其余
29个汤剂中有23个方剂都配伍生姜、甘草，另外6个方剂大多也配伍干姜或大黄。 在历代本草中，均有对附子毒性的记载。例如: 《本草备要》说道：（附子）大燥，辛甘有毒，大热纯阳。另一部本草巨著《新修本草》也记载：附子，味辛、甘,温、大热，有大毒。李时珍的《本草纲目》记载：（附子）气味辛，温，有大毒。 1.2 《金匾要略》中，川乌的方剂一共有5首,如在胸痹心痛短气病篇中提到的乌头赤石脂丸以及中风历节病篇中的提到的乌头汤等等。 历代本草中也有对川乌毒性的不少记载。如我国第一部本草药物学专著《神农本草经》说道:“其汁，煎之，名射周，杀禽兽。”；著名的《本草纲目》也记载道:“气味辛,温,有大毒。”可见其毒性是相当大的。 1.3 关于草乌的本草记载，最早是在《千金翼方·卷第十五》中出现的，其首次提到了“草乌头”之名。这说明了在当时的民间，已经有了“草乌头”这样一个叫法。在另一部由五代时期的后唐的药师侯宁极著作的《药谱》一书中，也提到了草乌头之名。 明代的李时珍在其著名的《本草纲目》中记道：“（草乌）处处有之、根苗花实并与川乌头相同，但此系野生，又无酿造之法，其根外黑内白，皱而枯燥为异尔，然毒则甚焉。”同时李时珍特别强调：“草乌头、射罔，乃至毒之药。非若川乌头、附子人所栽种，加以酿
乌头类中药不良反应发生的原因及对策 发表时间：2014-08-15T16:06:37.950Z 来源：《医药前沿》2014年第16期供稿作者：潘秀文 [导读] 乌头类中药的主要药用成分为乌头碱，具有镇痛、扩血管作用，临床常用来治疗跌打损伤、风湿性关节炎等症。 潘秀文 (贵州省黄平县中医医院药剂科 556100) 【摘要】目的：研究乌头类中药不良反应的发生原因并分析其预防对策。方法：对我院2004.9-2013.9期间收治的26例发生乌头类中药不良反应的患者资料进行整理分析，总结出不良反应发生的原因。结果：乌头类中药不良反应发生的原因中辨证不符占32.50%、剂量过大 23.33%、配伍不当17.50%、个体差异10.83%、煎服有误9.17%、炮制不当3.33%，其他原因3.33%。相比较其他各因素，前个因素引起的不良反应发生率较高，差异显著（P＜0.05)。结论：乌头类中药不良反应的发生原因是多方面的，应该正确认识并合理使用乌头类中药，通过辨证，控量、合理配伍等对策促进临床安全、有效用药。 【关键词】乌头不良反应原因对策 【中图分类号】R28 【文献标识码】B 【文章编号】2095-1752（2014）16-0330-02 乌头是附子、天雄、侧子、乌喙、漏篮子等的母根，首次记载于《神农本草经》，在我国已有 2000 多年的应用历史。其功强效捷,尤其是在危重病症的抢救和慢性顽病痼疾、疑难病证治疗中显示出独特疗效[1]。正因为乌头类中药具备特有的功效，自古至今一直为临床广泛应用。但是由于乌头类中药含有毒性强烈的乌头碱,临床不良反应常有发生，长期以来严重影响着其临床用药的安全，也限制了乌头类中药临床作用的发挥。本研究旨在探究乌头类中药不良反应的发生原因并分析其防治对策，报告如下。 1. 资料与方法 1.1 一般资料 26例患者中，男性15例(占57．69%) ，女性11例(42.23%) ;年龄21-78岁; 平均年龄（55.8±19.4）岁。根据症状不同，将患者的不良反应划分为三类：循环系统、神经系统和呼吸系统。三类不良反应发生例数依次为19例(73.08%)、5例(19.23%)、3例（11.53%）。详细见表1。 表1 患者一般资料（%） 1.2 方法 ⑴从2004.9-2013.9期间我院接诊的发生乌头类中药不良反应的患者中随机选出26例，整理并分析不良反应发生的原因。收集所有病例不良反应发生时间、服药原因、服用剂量、服用方法等信息，分析总结乌头类中药不良反应的原因。必要时走访患者及家属进一步了解发生药物不良反应的具体原因[2]。并针对原因提出相应的对策。⑵采取洗胃与中药解毒法治疗患者中严重不良反应者[3]。 1.3统计学方法 利用SPSS18.0软件对收集的的数据资料进行分析与处理, 采用n%表示计数资料，卡方检验用于组间数据检验，以P<0.05表示有统计意义。 2.结果 统计显示，乌头类中药不良反应发生的原因主要有辨证不符、剂量过大、配伍不当、个体差异、煎服有误和炮制不当。其中以辩证不符引起的发生率最高，其次为剂量过大、配伍不当。相比较其他各因素，此三者引起的不良反应发生率较高，差异显著（P＜0.05)。除此之外，误服、以生代熟、农药残留等其他因素也是导致不良反应的原因。见表2。16例辩证不符病例绝大多数由于患者先前在不规范诊所就诊导致，并在发生中毒症状后来我院就诊。 表2 患者出现不良反应的原因分析 注：*P<0.05 3.讨论 乌头类中药的主要药用成分为乌头碱，具有镇痛、扩血管作用，临床常用来治疗跌打损伤、风湿性关节炎等症。而此类药物主要毒性成分也是乌头碱[4]。乌头碱中毒剂量为 0.2mg,致死剂量为 2.0～4.0mg，与治疗剂量非常接近。 引起乌头类中药不良反应的原因有很多。此次研究结果显示，乌头类中药不良反应发生的原因主要有辨证不符、剂量过大、配伍不当、个体差异、煎服有误、炮制不当。其中以辩证不符引起的发生率最高，其次为剂量过大、配伍不当。相比较其他各因素，此三者引起的不良反应发生率较高，差异显著（P＜0.05)。除此之外，误服、以生代熟、农药残留、工业污染等其他因素也是导致不良反应的原因。 本文在分析乌头类中药不良反应的原因的基础上，总结出相应的解决对策，希望能为该类中药的临床科学应用提供借鉴。第一，正确辨证，审证施用。乌头类中药适用于阴寒痼结及寒湿偏胜者，能疏通痼阴冱寒，效果显著，但是切不可用于阴虚阳盛，真寒假热者，尤其避免患有心肌病、严重肝肾病者以及孕妇等人群。第二，把握剂量，适可而止。《中国药典》指出附子合理剂量范围3～15g，川乌、草乌
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我国乌头属药用植物的研究概况 作者：符华林 作者单位：四川农业大学动物科技学院,雅安,625014 刊名： 中药材 英文刊名：JOURNAL OF CHINESE MEDICINAL MATERIALS 年，卷(期)：2004,27(2) 被引用次数：60次 参考文献(26条) 1.傅立国中国高等植物 2000 2.肖小河中国乌头属分布式样的数值分析 1992(01) 3.中国科学院中国植物志编辑委员会中国植物志 1979 4.中华人民共和国卫生部药政管理局现代实用本草 1997 5.吕光华乌头属植物、药材及其中成药中的生物碱测定方法 1999(02) 6.李娅萍乌头类药物的化学成分及分析方法概况[期刊论文]-中国中药杂志 2001(10) 7.张继高乌头资源的开发利用研究 1998(01) 8.陈永康家种与野生雪上一枝蒿总生物碱毒性及药理的比较研究 1997(01) 9.肖崇厚中药化学 1987 10.陈善墉乌头属牛扁亚属中药原植物种类资源的初步研究 1989(09) 11.孙文基铁棒锤化学成分的研究 1989(01) 12.李洪刚伏毛铁棒锤地上部分生物碱成分研究 1997(05) 13.董锦艳;李良宣威草乌根的二萜生物碱[期刊论文]-植物资源与环境学报 2000(01) 14.丁立生露蕊乌头的二萜生物碱 1993(03) 15.张嘉岷深裂黄草乌二萜生物碱研究 1997(06) 16.沈映君中药药理学 2000 17.汪沪双乌头碱抗风湿作用的药效学研究概述 1996(03) 18.蔡定芳乌头碱对大鼠下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素含量的影响 1996(09) 19.师海波川乌总碱的抗炎作用 1990(03) 20.王雅贤乌头碱对小鼠免疫功能影响的实验研究 1989(05) 21.胡学军乌头类中药及其制剂的镇痛作用[期刊论文]-中医药研究 2001(04) 22.胡烈乌头临床新用[期刊论文]-中国临床医生杂志 2000(12) 23.赛汉其其格紫花高乌头药理作用的研究 1997(z1) 24.陈冀胜中国有毒植物 1987 25.孙建忠乌头草中毒症的诊治[期刊论文]-草与畜杂志 1998(03) 26.郭选政新疆乌头属毒草的分布、危害及防除 1998(01) 本文读者也读过(8条) 1.肖培根.王锋鹏.高峰.闫路平.陈东林.刘勇.XIAO Pei-Gen.WANG Feng-Peng.GAO Feng.YAN Lu-Ping.CHEN Dong-Lin.LIU Yong中国乌头属植物药用亲缘学研究[期刊论文]-植物分类学报2006,44(1) 2.杨姝.金振辉.羊晓东.李良.YANG Shu.JIN Zhen-hui.YANG Xiao-dong.LI Liang乌头属植物的化学成分及药理作用研究进展[期刊论文]-云南农业大学学报(自然科学版)2007,22(2)
高乌头药材常规项检查及高乌甲素、冉乌头碱含量测定 目的对高乌头药材进行常规项检查并测定高乌甲素、冉乌头碱含量，为建立高乌头药材质量标准提供参考。方法采集不同产地高乌头药材，采用薄层色谱法进行定性鉴别，按药典水分测定法（烘干法）、灰分测定法、浸出物测定法测定水分、灰分和浸出物，采用HPLC测定高乌甲素和冉乌头碱含量。结果薄层色谱斑点清晰，分离度好；暂定高乌头药材中水分、总灰分及酸不溶性灰分分别不得过11.0%、12.0%、7.0%，水溶性浸出物和醇溶性浸出物分别不少于18.2%、10.6%；高乌头药材中冉乌头碱和高乌甲素含量分别不少于0.125%、0.815%。结论本研究所建立的方法准确可靠，可用于高烏头药材质量评价。 Abstract：Objective To study the routine examination of Aconitum sinomontanum Nakai and determine the contents of lappacontine and ranaconitine；To provide basis for establishing the quality standard of Aconitum sinomontanum Nakai. Methods Aconitum sinomontanum Nakai were collected from different areas. A method of TLC was used for qualitative discrimination. The methods in the Chinese Pharmacopoeia were adopted for the determination of moisture content，ash content and extractives. Determination of lappacontine and ranaconitine were performed by HPLC. Results The TLC showed that the spots were clear and the separation was good. Individual provisional standards：the moisture，total ash and acid-insoluble ash content of Aconitum sinomontanum Nakai were not more than 11.0%，12.0%，and 7.0%，respectively；water soluble and alcohol soluble extractives were not less than 18.2% and 10.6%，respectively. The content of ranaconitine and lappacontine in Aconitum sinomontanum Nakai were not less than 0.125% and 0.815%，respectively. Conclusion The method established by the study is accurate and reliable，and can be used for quality evaluation of Aconitum sinomontanum Nakai. Key words：Aconitum sinomontanum Nakai；routine examination；HPLC；lappacontine；ranaconitine 高乌头为毛茛科乌头属植物高乌头Aconitum sinomontanum Nakai的根，又名麻布七、辫子七、破骨七等，是我国甘肃等中西部地区民间习用中药，也是著名“七药”之一[1]，具有祛风除湿、理气止痛、活血散瘀的功效，用于治疗风湿痹痛、关节肿痛、跌打劳伤等。现代药理研究表明，高乌头具有镇痛、抗炎、解热、局部麻醉、抗心律失常、抗氧化、杀虫等广泛的药理作用[2-4]，临床上常用于治疗类风湿关节 炎及局部镇痛[5-6]。高乌头的主要活性成分为二萜生物碱[7]，其中以高乌甲素和冉乌头碱的含量最高[8]，而活性成分之一高乌甲素已开发出不同剂型并应用于临床[9]。高乌头为我国特有植物，在北方地区有着丰富的资源分布，目前甘肃地区引种驯化成功、大量生产和应用，现已成为甘肃地产大宗商品药材。高乌头收载于《甘肃省中药材标准》（2009年版）[10]，现有的标准尚不完善，既无常规项检查，也无含量测定项。为此，本试验采用常规项检查及高乌甲素、
(药理药化( 收稿日期:2008-10-09; 修订日期:2008-12-20基金项目:国家自然科学基金(N o .30873360); 吉林省科技发展计划资助课题(No .20080105) 作者简介:随志刚(1979-),男(汉族),吉林长春人,现为吉林大学药学院在读博士研究生,硕士学位,主要从事质谱分析化学研究工作. * 通讯作者简介:刘忠英(1964-),女(汉族),吉林白城人,现任吉林大学 药学院教授,博士生导师,博士学位,主要从事生物化学分析研究工作. 草乌中乌头类生物碱提取方法比较研究 随志刚1 ,陈明玉1 ,刘志强2 ,皮子凤2 ,刘忠英 1* (1.吉林大学药学院,吉林长春 130021; 2.中国科学院长春应用化学研究所,吉林长春 130022) 摘要:目的优化草乌中乌头类生物碱提取方法,比较草乌、 附子生品及市售炮制品中乌头类生物碱的含量,为相关中药中生物碱的测定和临床应用提供参考。方法分别用7种提取方法提取附子中乌头类生物碱,比较各方法对3种双酯型生物碱的提取效率,并测定乌头类生药及其炮制品中乌头类生物碱含量。结果10%氨水乙醚冷浸法对3种双酯型生物碱的提取效率最高。炮制品中的乌头类生物碱含量明显低于生药,各种炮制品中乌头类生物碱的含量差别也比较大。结论采用10%氨水乙醚冷浸法,高效液相色谱-紫外光谱(H PLC-UV )法对药材中乌头类生物碱进行提取和含量测定,能真实反映药材中药效和毒性成分。不同的炮制品中各生物碱含量差别较大,临床应用应有差别。 关键词:提取方法; 草乌; 附子; 乌头碱类生物碱中图分类号:R284.2 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2009)03-0513-02 Co mparison of D ifferent Extraction M ethods of Aconitu m A lkaloids fro m Radix Aconiti Kus nezoff ii S U I Z h-i gang 1,C H EN M ing -yu 1,L I U Z h-i q iang 2,P I Z -i feng 2,L I U Z hong -y i n g 1* (1.College of Phar m acology,J ilin Un i v ersit y ,Changchun 130021,China;2.Changchun Institute of App lied Che m istry ,Chinese Acade m y of Sciences ,Changchun 130022,China ) Abst ract :O bjective T o opti m ize the ex tracti on techno logy of acon itu m a l ka l o i ds from R adi x A con iti K usnezoff ii ,and to de ter -m i ne the contents o f acon it u m a l kalo i ds i n R ad i x A conitiK usnezoffii ,Fuzi and their processed produc ts so l d i n Ch i nese phar m acy . M ethods The effi c iency of seven ex tracti on m ethods w ere compared by deter m i n i ng the conten ts o f acon i tine ,m esacon iti ne and hypacon iti ne of sa m ples extracted by d ifferent m ethods .The H PLC -UV m ethod w as used to deter m i ne t he contents o f acon itu m a l ka l o i ds i n R ad i x A conitiK usnezoffii ,Fuzi and their processed products .Re s u lts The m ost e fficient me t hod was to ex tract sa m ple w it h e t her from the herb sub m erged i n 10%a mm onia .T he three diester-d iterpeno i d a l ka l o i ds o f processed products w ere m uch lo w er than t hose o f the raw herbs and the con tents o f acon it u m a l kalo i ds i n d iffe rent processed products we re different w i de l y .Conc l u sion The me t hods used i n ex tracti on and ana l ysis f o r acon itu m a l ka l o i ds from herbs are e ffecti v e ,reli able and si m ple .D i -f ferent k i nds o f processed products of ra w herbs shou l d be d i scri m i nati ng l y treated in cli nic applica ti on . K ey w ords :Ex tracti on m ethod ; R ad i x A coniti Kusnezoff ii ; Fuz;i A conitu m a l kalo i ds 在乌头类生药及炮制品中,生物碱成分既是药效成分同时也 是毒性成分[1],而且稳定性不好,很容易降解[2],所以生物碱的提取方法在其成分分析中十分重要。目前有关生物碱的提取方法有很多[3~5],但是,各种方法对双酯型生物碱的提取效率的比较研究尚无报道。中医临床常用的乌头类中药为附子的炮制品,市售的附子炮制品饮片按不同的炮制方法分为盐附子、黑附片、白附片、淡附子、熟附片及炮附子等[6],但是,不同的炮制方法,必然会造成生物碱含量的不同,在使用上应有所区别。本文比较了7种提取方法对乌头类中药中3种双酯型生物碱的提取效率,并测定乌头类生药及其炮制品中乌头类生物碱含量,以期准确测定附子中生物碱,为保证此类中药的临床应用更为安全合理提供可靠的分析方法。1 仪器与试剂 1.1 仪器LC -10A 高效液相仪(Shi m adzu ,日本);超声清洗器(Autosc i ence ,天津);高速离心机(Eppendo r,f 德国);电子天平(Sarto ri us ,德国)。 1.2 试剂乌头碱,中乌头碱和次乌头碱对照品购自中国药品生物制品检定所。生附子、生草乌购自四川江油,制草乌、黑附片、 白附片、盐附子、淡附子购自吉林省长春市吉深药店,经长春中医 药大学王淑敏教授鉴定均为正品。甲醇为色谱纯,水为去离子水,乙醚、二氯甲烷等其他试剂为分析纯。2 方法与结果2.1 方法学考查 2.1.1 色谱条件A g ilent extended C 18色谱柱(150mm @4.6mm,5L m );流动相为甲醇B 0.1%三乙胺(65B 35);流速为0.6m l #m i n -1 ;检测波长为230nm ;柱温为30e ;样品经过0.45L m 微孔滤膜过滤,滤液进样10L l 。 2.1.2 标准曲线精密称取中乌头碱、乌头碱和次乌头碱对照品适量置于容量瓶中,加入二氯甲烷溶解并定容,得浓度为1.08m g #m l -1的中乌头碱、1.12m g #m l -1的乌头碱和1.22m g #m l -1 的次乌头碱标准品储备液。每种对照品溶液分别进样2,4,6,8,10L ,l 高效液相色谱法测定。以浓度(L g #m l -1)对峰面积计算回归曲线。得到中乌头碱标准曲线方程为Y =20672.0X -58377.5,r =0.9995;乌头碱标准曲线方程为Y =18114.2X -28544.2,r =0.9999;次乌头碱的标准曲线方程为Y =186632X -13386.7,r =0.9993。说明乌头碱在5.6~112L g #m l -1、中 乌头碱在5.4~108L g #m l -1 ,次乌头碱在6.1~122L g #m l -1的浓度范围内均呈良好的线性。 2.1.3 重复性实验同一生草乌粉末按优选的提取方法操作,提取6份溶液,H PLC 测定,记录乌头碱、中乌头碱、次乌头碱峰面积。乌头碱、中乌头碱和次乌头碱含量的RSD 值分别为4.32%, 3.57%和 4.84%。说明方法重复性较好。 2.1.4 回收率实验精密称取已知含量的生草乌粉末18份,每份0.2g 。第1个6份分别加入0.05m g 乌头碱,第2个6份分别 # 513#L I SH I Z H EN M EDIC I NE AND M ATER I A M ED I CA RESEARCH 2009VOL.20NO.3时珍国医国药2009年第20卷第3期
HPLC同时测定复方藤乌软膏中6种乌头类生物碱含量 DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2015.09.024 Simultaneous Determination of 6 Aconitum Alkaloids in Compound Tengwu Ointment by HPLC LI Mei-yan1，2， HE Qing-xue1，2， WANG Ai-wu1 （1.Shandong Provincial Hospital Affiliated to Shandong University， Jinan 250021， China；2.Shandong University of Traditional Chinese Medicine， Jinan 250355， China）复方藤乌软膏是山东大学附属省立医院骨伤科专家与药学人员遵循 中医药理论共同研制的传统中药制剂，由鸡血藤、生川乌、生草乌、自然铜等组成，具有消肿止痛、续筋接骨等功效，主要用于治疗运动劳损、急性扭伤、挫伤、闪伤及轻度骨折引起的疼痛，临床应用30余年疗效较好。 复方藤乌软膏中的生川乌、生草乌含有乌头碱、新乌头碱、次乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱等乌头类生物碱，既是毒性成分又是有效成分[1]。我们前期对其制备工艺及皮肤安全性进行了研究[2]。本研究采用高效液相色谱法（HPLC）建立复方藤乌软膏中6种乌头类生物碱的含量测定方法，为更好地控制其质量、进一步推广和扩大应用奠定基础。 1 仪器与试药 Waters 600F高效液相色谱仪（Waters2996紫外检测器，Empowers色谱工作站），Agilent XDB-C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；CP2250型电子分析天平（奥豪斯国际贸易有限公司）；BSA223S电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）；KQ-600DB型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限