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甘草提取物及其主要成分对HepG2细胞中二相代谢酶UGT1A 基因表达的影响
谭亲友，胡骞，张靖，刘新云，廖曾珍，李江*（桂林医学院，广西 桂林 541001）
摘要：目的 研究甘草提取物及18α-甘草酸（18α-GL ）、18β-甘草酸（18β-GL ）、18α-甘草次酸（18α-GA ）、18β-甘草次酸（18β-GA ）对HepG2细胞上UGT1A 蛋白表达和UGT1A mRNA 作用的影响。方法 建立HepG2细胞模型，采用Western blot 分析HepG2细胞中二相代谢酶UGT1A 的蛋白表达，采用Q-PCR 从转录水平检测UGT1A mRNA 。结果 Western blot 实验结果表明18α-GL 、18β-GL 对UGT1A 的蛋白表达有增加作用但差异无统计学意义；18α-GA 和18β-GA 使UGT1A 的蛋白表达量增加且具差异有统计学意义（P ＜0.05）。Q-PCR 实验结果表明18α-GL 、18β-GL 使UGT1A 的mRNA 表达有上调作用；18α-GA 对UGT1A 的mRNA 表达有上调作用，但差异没有统计学意义，而18β-GA 使UGT1A 的mRNA 表达上调，且差异有统计学意义（P ＜0.05）。结论 甘草提取物、18α-GL 、18β-GL 、18α-GA 和18β-GA 对UGT1A 蛋白表达和mRNA 影响均表现为诱导作用，且18β-GA 对UGT1A 的诱导作用差异有统计学意义。
关键词：甘草提取物；18α-甘草酸；18β-甘草酸；18α-甘草次酸；18β-甘草次酸；UGT1A ；HepG2细胞中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1672-2981(2016)06-0611-05doi:10.7539/j.issn.1672-2981.2016.06.011
Effect of licorice root extract and its main components on the expression of
UGT1A gene in HepG2 cells
TAN Qin-you, HU Qian, ZHANG Jing, LIU Xin-yun, LIAO Zeng-zhen, LI Jiang * (Guilin Medical College, Guilin Guangxi 541001)
Abstract: Objective To determine the effect of licorice extract, 18α-glycyrrhizic acid (18α-GL), 18β-glycyrrhizic acid (18β-GL), 18α-glycyrrhetinic acid (18α-GA) and 18β-glycyrrhetinic acid (18β-GA) on protein expression and the effect of mRNA UGT1A on the expression of UGT1A in HepG2 cells. Methods HepG2 cell model was estab-lished, and the protein expression of UGT1A protein was analyzed by Western blot. The real-time quantitative PCR was used to detect the mRNA UGT1A from the transcription level. Results Western blot showed that 18α-GL and 18β-GL increased UGT1A protein expression but not significantly ; the UGT1A protein expression increase by 18α-GL and 18β-GA had statistical significance (P ＜0.05). The Q-PCR experimenta showed that 18α-GL and 18β-GL upregulated UGT1A mRNA expression ; the expression of 18α-GA mRNA was upregulated, but no significantly. While 18β-GA upregulated the expression of UGT1A mRNA significantly (P ＜0.05). Conclusion Licorice ex-tract, namely 18α-GL, 18β-GL, 18α-GA and 18β-GA can induce the expression of UGT1A protein and mRNA, and the induction of 18β-GA on UGT1A is significant.
Key words: licorice root extract ; 18α-glycyrrhizic acid ; 18β-glycyrrhizic acid ; 18α-glycyrrhetinic acid ; 18β-glycyrrhetinic acid ; UGT1A ; HepG2 cell
基金项目：国家自然科学基金资助项目（No. 81360665）；广西自然科学基金面上基金资助项目（No. 2015GXNSFAA 139114）；广西自然科学基金青年基金资助项目（No. 2013GXNSFBA019 174）；广西卫生厅中医药攻关课题（No. GZGG13-08）；广西医药卫生自筹经费计划课题（No. Z2014318）。
作者简介：谭亲友，男，博士，副教授，主要从事临床药学、中药药理学研究，E-mail ：tqy1013@https://www.doczj.com/doc/f71961474.html, *通讯作者：李江，男，硕士，主任药师，硕士研究生导师，主要从事临床药学、中药药理学研究，Tel ：（0773）2810610。
甘草（Radix Glycyrrhizae ）有补脾益气，性味甘平，缓急止痛，清热解毒，祛痰止咳，有调和诸药之功效[1]，在中国素有“药王之王”和“十方九草”之称，长期临床实践和历代文献记载表明，甘味药甘草是缓和药性、调和诸药、降低药物毒性的首选药。在日本的汉方中有70%的处方含有甘草，因其能解百药毒，具有“国老”之美誉。大量实验研究和临床实践均证明了甘草“解百药毒”这一传统认识的科学性，甘草酸是甘草的主要有效成分。甘草酸有2个差向异构体：18α-甘草酸（18α-glycyrrhizic acid ，α-GL ）和18β-甘草
酸（18β-glycyrrhizic acid，18β-GL），虽然两者结构相似，但在药动学[2]、理化性质[3]、不良反应[4]及药效学[5]等方面均存在差异。甘草酸差向异构体水解后生成相对应的18α-甘草次酸（18α-glycyrrhetinic acid，18α-GA）和18β-甘草次酸（18β-glycyrrhetinic acid，18β-GA）（见图1）。
图 1 18α-GL、18β-GL、18α-GA、18β-GA的分子结构
Fig 1 Molecular structure of 18α-GL，18β- GL，18α-GA and 18β-GA
在药物开发早期，肝癌细胞株（HepG2）是药物细胞毒性筛选的有价值的工具。一方面，HepG2细胞在预测化合物或者药物的毒性方面是一个很好的细胞系统，另一方面，Ⅱ相代谢酶等药物代谢酶在HepG2细胞中能够正常表达，而且HepG2细胞是一个适用且相对容易掌握的工具，并将其广泛地应用于临床毒理性试验研究、抗肿瘤机制研究及多种肝炎病毒感染机制等方面的研究。18α-GL、18β-GL是从天然药物甘草中筛选而得到的单体，而且这种单体已经在临床中广泛使用[6]，但对肝脏中Ⅱ相药物代谢酶：尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A（uridine diphosphate glucuronyl transferase 1 A，UGT1A）的作用却很少报道，为了探讨其对Ⅱ相酶UGT1A表达的作用，本文从细胞水平研究甘草提取物及其主要成分的差向异构体对HepG2细胞中Ⅱ相代谢酶UGT1A的影响。
1 材料
甘草水提取物（GR）（含甘草酸钠盐14.3%）（西安瑞鸿生物技术有限公司）；18α-甘草酸（纯度≥99.3%，江苏正大天晴药业有限公司）；18β-甘草酸（纯度≥95.0%，美国Sigma-aldrich）；18α-甘草次酸、18β-甘草次酸（纯度≥95.0%，美国Sigma-aldrich）；UGT1A（美国Santa cruz biotechnology）；HepG2细胞（10代，武汉大学典型培养物保藏中心）；利福平（RIF）（纯度≥95.0%，美国Sigma-aldrich）；酶联免疫检测仪（V arioskan flash，Thermo，USA）；落射荧光差视显微镜（E200，Nikon，Japan）；胎牛血清（Fetal bovine serum，FBS）（天津灏洋）；二甲基亚砜（DMSO）（美国Sigma）；0.25%胰蛋白酶及0.01 mol?L－1 D-Hanks（美国Gibco）；三氯甲烷、无水乙醇、异丙醇（上海化学试剂公司）；反转录试剂盒（美国Fermentans公司）。
2 方法
2.1 溶液的配制
2.1.1 MTT溶液的制备 用天平称取MTT 200 mg，加入D-Hanks溶液的浓度为40 mL 0.01 mol?L－1，充分混匀，然后避光搅拌约30 min，使MTT 粉末在D-Hanks溶液中充分溶解，终浓度为5 mg?mL－1，用0.22 μm孔径的滤器过滤除菌，在4℃冰箱中保存备用。
2.1.2 细胞冻存液的制备 用天平称取DMEM溶液70 mL，充分混匀，加入已经灭活的胎牛血清20 mL，再加DMSO 10 mL，用0.22 μm孔径的滤器过滤除菌，在4℃冰箱中保存备用。
2.1.3 实验药物溶液的制备 GR、RIF、18α-GL、18β-GL、18α-GA和18β-GA均用DMSO溶解后，充分溶解后，然后用DMEM培养基（含有10% D-hanks溶液）稀释以上溶液为工作液，GR终浓度分别为0.1、1、10、30、60、120、240 mg?L－1；RIF终浓度分别为0.01、0.1、1、10、30、100 μmol?L－1、18α-GL和18β-GL 终浓度分别为0.1、1、10、30、60、120、240、480 μmol?L－1；18α-GA和18β-GA 终浓度分别为0.01、0.1、1、10、30、60、120、240 μmol?L－1，所有工作液中加入的DMSO体积比均＜1%。配制好的各工作液均用0.22 μm孔径的滤器过滤除菌备用。
2.2 细胞培养
在螺口离心管加入含有10%胎牛血清的完全培养基3 mL，从液氮罐中取出HepG2细胞冻存管，迅速于40℃水浴中1 min融化，打开冻存管，吸取细胞悬液至离心管，轻轻混匀，用1000 r?min－1离心5 min，弃上清液，细胞沉淀中加入4 mL完全培养基，转入35 cm培养瓶37℃，5% CO
2
培养箱内进行常规培养，次日观察细胞生长情况。对数增长期汇合80%～90%的细胞进行传代，加入4 mLD-Hanks清洗2次，加入1 mL 0.25%的胰酶进行消化，消化完全后加入3 mL终止液，再将细胞悬液加入到离心管中，用1000 r?min－1离心5 min，弃上清液，再用DMEM 培养液重悬细胞，再把细胞进行稀释，然后把稀释后的细胞分别接种于新的培养瓶内进行培养。
2.3 MTT实验
实验组分别加入“2.1.3”项下不同浓度的GR、RIF、18α-GL、18β-GL，18α-GA和18β-GA，同时做空白对照（仅加培养基）以及DMSO对照组（加入DMSO、培养基及细胞）。实验进行时，分别吸尽96孔板的每孔培养
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液，在DMSO对照孔和空白对照孔加入相应溶液，在实验孔分别加入相应药物的工作液，在37℃、5%CO
2培养箱中分别继续培养72 h。然后在培养不同时间段的培养板孔中分别加入MTT溶液20 μL，培养箱中37℃继续孵育4 h；终止培养，小心吸弃上清液，每孔加150 μL DMSO；最后在酶标仪上进行测定。
2.4 Western blot 检测UGT1A 的表达
实验药物对HepG2细胞分别进行不同处理：①Blank组（生理盐水）；② GR；③ RIF；④ 18α-GL；
⑤ 18β-GL；⑥ 18α-GA；⑦ 18β-GA。将不同药物处理过的细胞分别收集于干净Ep管中，加入蛋白裂解液进行裂解。将裂解后的样品进行斡旋震荡、离心，最后吸上清液即为细胞全蛋白。进行电泳实验：包括转膜：UGT1A（64 KD，Rabbitt，1∶200）380 mA 2 h；封闭：5%脱脂牛奶，TBST稀释，37℃ 1 h；一抗孵育：4℃孵育过夜，TBST稀释；洗膜：TBST，每次5 min，共6次；二抗孵育：室温1 h（TBST稀释，兔二抗1∶4000、鼠二抗1∶2000）；洗膜：TBST，每次5 min，共6次；显影：曝光时间，2～10 min。
2.5 Q-PCR 检测UGT1A mRNA
将HepG2细胞按阴性对照组、阳性对照组（RIF）和实验组（GR、18α-GL、18β-GL、18α-GA、18β-GA，n＝3）分别加入空白培养基或含不同浓度药物的培养基孵育72 h，UGT1A的引物Sense（5’-3’）GGTGGAGTTTGT-GA TGAGG，Antisense（5’-3’）AA TGGGTCTTGGA TTT-GTGGG产物长度（218 bp），β-actin的引物Sense（5’-3’）AGGCCCCTCTGAACCCTAAG，Antisense（5’-3’）CCAGAGGCA T ACAGGGACAAC产物长度（202 bp），用Trizol 试剂按照说明书的方法提取细胞总RNA，溶解于DEPC处理水中；混匀，终体积为20 μL。上述体系在42℃水浴中反应1 h，在70℃水浴锅中水浴10 min，最终使Reverse Transcriptase失活；将得到的cDNA置于－20℃冰箱中保存以备下一步实验。
实验分组编号如下：① Blank；② GR；③ 18α-GL；④ 18α-GA；⑤ 18β-GL；⑥ 18β-GA；⑦ RIF。PCR 条件为：95℃ 2 min一个循环[95℃ 15 s，60℃（GST 56℃）30 s，PCR仪采集荧光信号]，40个循环。以β-actin作为内参，通过相对定量法计算基因UGT1A mRNA 表达水平，从而对基因UGT1A进行PCR扩增产物的实时定量分析。
2.6 统计学分析
采用SPSS 17.0统计软件进行统计分析，所有值采用（x±s）表示，各组之间采用配对t检验，P ＜0.05认为差异具有统计学意义。
3 结果
3.1 MTT毒性试验结果
MTT毒性试验结果显示18α-GL和18β-GL对HepG2细胞的最大无毒浓度（细胞存活率在90%以上）为240 μmol?L－1；18α-GA、18β-GA对HepG2细胞的最大无毒浓度为120 μmol?L－1；GR对HepG2细胞的最大无毒浓度为120 mg?L－1；RIF对HepG2细胞的最大无毒浓度为30 μmol?L－1（见图2）。
3.2 Western blot 实验结果
取药物GR（100 mg?L－1）、18α-GL（100 μmol?L－1）、18β-GL（100 μmol?L－1）、18α-GA（100 μmol?L－1）、18β-GA（100 μmol?L－1）和RIF（10 μmol?L－1）加入HepG2细胞中作用72 h。提取蛋白做Western blot实验，将实验胶片进行扫描，用图像分析软件IPP6.0对图像进行灰度分析（1～7分别对应Blank、GR、RIF、18α-GL、18β-GL、18α-GA、18β-GA）。结果用光密度比值作为观察指标，可证实GR使UGT1A的蛋白表达增加，与空白组相比差异具有统计学意义（P＜0.05）；18α-GL、18β-GL对UGT1A的蛋白表达有增加作用但差异无统计学意义；18α-GA和18β-GA使UGT1A的蛋白表达量增加且差异具有统计学意义（P＜0.05）（见图3）。
3.3 Q-PCR实验结果
取药物GR（100 mg?L－1）、18α-GL（100 μmol?L－1）、18β-GL（100 μmol?L－1）、18α-GA（100 μmol?L－1）、18β-GA（100 μmol?L－1）和RIF（10 μmol?L－1）加入HepG2细胞中作用72 h，提取细胞总RNA做Q-PCR实验，研究结果表明GR对UGT1A表达有增强作用，且差异有统计学意义（P＜0.05），18α-GL、18β-GL对UGT1A的mRNA表达有上调作用；18α-GA对UGT1A 的mRNA表达有上调作用，但差异均没有统计学意义。而18β-GA对UGT1A的mRNA表达上调，且差异有统计学意义（P＜0.05）（见图4～5）。
4 讨论
4.1 细胞培养注意事项
4.1.1 复苏温度 快速将所冻存细胞40℃水浴摇床60 r?min－1慢摇至其溶解，溶解后马上转入37℃水浴箱，手工慢摇恒温2～3 min复苏，复苏后1000 r?min－1离心5 min，吸去上清液加入10 mL 含15%胎牛血清DMEM培养基，混匀后加入细胞培养板，每孔1 mL，5%CO
2
温箱37℃培养。
4.1.2 复苏培养基 用DMEM培养基培养的细胞在接种密度为1×104?cm－2、血清含量为15%时，经6 h培养后细胞开始贴壁，12 h后大部分细胞贴壁，且增殖速度最快，4 d后可以按1∶3的比例传代。
4.1.3 消化酶以及消化时间 先用pH＝7.2的D-Hanks 溶液洗涤3遍，再用0.25%的胰蛋白酶溶液消化0.5 min效果比较好。
4.1.4 双抗浓度 双抗浓度为0.5%时传代效果较好，条件易于控制，且细胞能顺利生长。
4.1.5 培养基pH条件 pH＝7.2，4.5%CO
2
时传代效果较好，条件易于控制，且细胞能顺利生长。
4.2 药物浓度的选择
18α-GL 和18β-GL分子式相同，仅存在18位手性
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614
图 2 18α-GL、18β-GL、18α-GA、18β-GA、GR和RIF对HepG2
细胞72 h细胞毒性
Fig 2 Effect of 18α-GL，18β-GL，18α-GA，18β-GA，GR and RIF
on HepG2 cells viability after 72 h exposure by MTT assay
图 3 试验药物在HepG2细胞中对UGT1A蛋白表达的影响
Fig 3 Effect of the test drugs on UGT1A protein expression in the
HepG2 cell
注：与空白组比较，*P＜0.05。
Note：Compared with the blank group，*P＜0.05.
图 4 实验药物在HepG2细胞中对UGT1A mRNA的影响
Fig 4 Effect of test drugs on UGT1A mRNA expression in HepG2
cells
图 5 GR、RIF、18α-GL、18β-GL、18α-GA、18β-GA对UGT1A
mRNA 表达的影响（x±s，n＝3）
Fig 5 Effect of GR，RIF，18α-GL，18β-GL，18α-GA and 18β-GA
on UGT1A mRNA expression（x±s，n＝3）
注：与空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
Note：Compared with the blank group，*P＜0.05，**P＜0.01.
碳原子的构型差异，由于位阻效应，前者亲脂性大于后者，从而在体内易与受体蛋白结合。自从以异甘草酸镁（18α-GL为主要成分）上市以来，临床上对甘草酸差向异构体的认识逐渐重视起来。据文献报道，异甘草酸镁在健康受试者试验中：单剂量给药（单次静脉滴注分别为0.1、0.2、0.3 g），多剂量给药（静脉滴注0.1 g，每日1次，连续9 d），2次给药的最大血药浓度分别为31.40 μmol?L－1和46.66 μmol?L－1 [7]。本次MTT细胞毒性实验显示18α-GL、18β-GL的最大无毒浓度为240 μmol?L－1，结合临床上长期使用甘草酸可能会对其他药物的药动学或药效学产生影响，本研究实验结果提示18α-GL、18β-GL的最大无毒浓度为240 μmol?L－1，这个药物浓度与人体单剂量注射0.2 g 甘草酸后的最大血药浓度较接近[8-10]，因此，本实验设计100 μmol?L－1浓度作为进行下一步18α-GL和18β-GL实验研究的药物浓度。同样推理本研究设计18α-GA、18β-GA实验研究药物浓度也为100 μmol?L－1。在MTT实验中发现甘草提取物浓度在120 mg?L－1时不影响细胞的生长，因此本研究选择100 mg?L－1作为甘草提取物浓度进行下一步实验研究。
4.3 Western blot和Q-PCR实验结果分析
通过以上2种实验技术手段分别从蛋白表达和转录水平考察了实验药物对UGT1A的蛋白表达和UGT1A mRNA转录水平的影响，通过体外细胞实验探讨实验药物对二相酶UGT1A的诱导作用。实验结果显示GR在HepG2细胞中对UGT1A蛋白表达和UGT1A mRNA有明显的增强作用，且差异有统计学意义（P ＜0.05），这也与Aree M[11] 报道的实验结果一致。18α-GL、18β-GL对UGT1A蛋白表达和mRNA的表达有增强作用，这点与本课题组前期在大鼠肝脏组织中的研究结果较为一致。王宇光等[12]的报道，18β-GL和18α-GL在转录水平上分别上调和下调大鼠肝细胞CYP3A 的表达，然而本课题组通过研究甘草酸差向异构体对二相酶UGT1A实验中并没有发现这种相反的实验结果，这从侧面反映出甘草的“解百药毒”可能与对二相酶作用相关。因此，甘草酸差向异构体作用于代谢酶的研究在今后的研究中更应引起重视。
甘草酸差向异构体水解后生成相对应的18α-GA和18β-GA，在本课题组前期研究18H甘草次酸作用于大鼠的体内实验中，发现其对大鼠肝组织中的二相代谢酶也产生了诱导作用，但与空白组比较诱导作用差异无统计学意义，与本研究在HepG2细胞中开展的体外实验18α-GA和18β-GA对二相酶UGT1A的实验研究结果较为一致，体外细胞实验结果提示18α-GA和18β-GA在细胞水平对UGT1A蛋白表达和UGT1A mRNA表达有增强作用，但18β-GA对UGT1A mRNA表达和UGT1A蛋白表达水平的影响差异都具有统计学意义（P＜0.05），这可能与细胞实验中药物浓度高于动物实验中药物浓度有关，本实验提示18α-GA和18β-GA对二相酶的诱导作用可能有一定的浓度依赖性，因此，后续课题可以从浓度依赖性及其相关作用机制进行研究。
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（收稿日期：2016-04-06；修回日期：2016-04-27）
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酵母提取物 酵母抽提物 通过自溶作用和其他几种技术，可以将酵母细胞部分或全部地溶解。经过进一步的加工，酵母泥可以转化成各种制剂和产品，它们可以提供给实验室中使用，还可以作食品、饲料和发酵培养基的各种成分。生要的产品中含有浓缩的酵母转化酶和, ,半乳糖苷酶，液体状、膏状、粉状或预粒状的可溶性酵母成分，另外还有酵母细胞成分中分离出的成份，比如通过机械粉碎细胞而释放出的蛋白质和细胞壁(聚糖)。 生要的工业产品是澄清的、可溶于水的提取物，一般称之为酵母抽提物，自溶酵母抽提物，酵母水解物。有些厂家用谷氨酸一钠(味精)和5, ,核苷酸来强化抽提物，或将抽提物和水解植物蛋白(Rosenthal和Pinkalla，1960)和改变性的乳清固体(Corbeff，1978)混合起来生产出不同风味的混合物。商业中将水解植物蛋白称为HVP(这些东西是从大豆渣，小麦谷蛋白，玉米谷蛋白，大米人谷蛋白酵母以及酪蛋白的Hydrolysed Vergetable Proteins )和HPP(Hydrolysed Plant Protein)酸水解过程中而得到的。 酵母抽提物作为食品和药物管理局所批准使用的天然调味品(Aron，1973a，b)可在肉制品、汤类、卤汁、干酪烘焙食品、调味料、蔬菜制品和海味品中用作调料。酵母抽提物作为多肽、氨基酸、微量元素、B族维生素的可靠而经济的来源，在食品保健、儿童食品、饲料营养补充剂，以及微生物生产和培养基和其他生物培养系统的营养补充剂中，是营养添加剂。当和酚醛抗氧化剂配合时，自溶物和水解物具有增效剂的作用(Bishor 和Henick，1975)。 制取酵母抽提物的生物体生要取自啤酒厂过剩的啤酒，其次取自初生酵母，其中包括可以在糖蜜中生长的面包酵母(Saccharomyees Cerersiae)，在乳清液中生
20XX-20XX学年第二学期 药用植物资源与开发 名称甘草化学成分的提取与分离 年级 20XX 学院中药材学院 专业植物科学与技术 学号 07107107 姓名林俊旭 任课教师张永刚 完成时间 20XX-5-11 成绩
甘草中化学成分的提取与分离 摘要：本文主要介绍了甘草中主要的化学成分以及这些化学成分的含量和性质，并简述了甘草酸，甘草次酸和甘草甘的提取和有效成分的含量测定，为进一步的生产实践做出贡献。 关键词：甘草化学成分提取 正文：甘草属于豆科甘草属，以根和根状茎入药。甘草在我国集中分布于三北地区(东北、华北和西北各省区)，而以新疆、内蒙古、宁夏和甘肃为中心产区。随着药学及其相关学科以及科研设备的发展，甘草中主要含有的甘草酸、甘草次酸、黄酮、生物碱和氨基酸等化学成分，具有广泛的生物活性。 一、化学成分 药用甘草质量与其化学成分的组成、积累变化有直接的关系。先后从甘草属植物中提取、分离、鉴定了200多种化学成分，涉及甘草属植物10个种。其中最重要并已证实具有生物活性的成分主要是甘草酸等三萜皂苷类、黄酮类、香豆素类、多糖、生物碱、氨基酸等。 三萜皂苷类化合物：甘草属植物中三萜皂类成分具有量高、生理活性强的特点，甘草的许多药理作用都与这类成分有直接关系。至今在甘草属植物中已鉴定得到61种三萜类化合物，其中苷元45个。这些三萜类化合物其苷元均为3β-经基齐墩果烷型化合物的衍生物；皂苷一般为3β-羟基上的氧苷，糖元多为D-葡萄糖酸或D-葡萄糖。甘草酸一直被认为是甘草中最重要三萜类化合物，《中国药典》把甘草酸的量作为评价甘草药材及其制品质量的重要指标，通常要求不低于2％。 黄酮类成分：是近年来研究最活跃的天然活性成分之一，广泛存在于植物界中。这类化合物的存在对植物生长、发育、开花、结果以及抵御异物的侵入起着重要的作用。目前，从甘草属植物中已发现黄酮及其衍生物153种，它们的基本母核结构类型有15种，其中包括：黄酮、黄酮醇、双氢黄酮、双氢黄酮醇、查尔酮、异黄酮、双氢异黄酮、异黄烷、异黄烯等。对甘草中黄酮类成分的药理作用研究表明，这些成分在抗肿瘤、抗氧化、抗病毒方面作用显著。 甘草中黄酮类成分的分布和积策也表现出一定的特点。乌拉尔甘草无论是野生还是栽培，在一个生长季中，叶中总黄酮量最高，而地下部分的t相对较低；在5—10月，叶中的总黄酮量逐渐下降，而地下部分总黄酮盆具有上升趋势。各
Material Safety Data Sheet Version 1.0 Revision Date 12/18/2014 Print Date 12/18/2014 1.Identification of the substance/preparation and of the company ●Product name: Licorice Root Extract ●Recommended use: Flavorings ●Manufacturer: ●Company address: ●Emergency telephone no.: ●Fax no.: https://www.doczj.com/doc/f71961474.html,position/information on ingredients ●Chemical identity: Licorice Root Extract ●Molecular formula: N/a ●CAS No.: 97676-23-8 ●BRN No.: N/a ●EC-Index-No.: N/a 3.Hazards Information On Substance ●Health hazards: No data available yet ●Fire and explosion hazards: Not combustible, flammable or explosive ●Environmental hazards: No environmental hazards as far as to our knowledge 4.First-Aid Measures ●After inhalation: Remove to well-ventilated area. Seek medical attention. ●After skin contact: Take off all contaminated clothing, wash with plenty of water. ●After eye contact:Rinse thoroughly with plenty of water and seek medical advice.
酵母抽提物又叫酵母味素、酵母精、酵母浸膏，是以食用酵母为原料，利用现代生物技术将酵母菌体内的蛋白质、核酸类物质进行降解，再经过一些精制工序得到的粉末、膏状或液体状的产品，具有强烈的呈味功能。它含有肽类化合物、人体所需的18种氨基酸、多种核苷酸、糖分、B族维生素、麦角甾醇、各种微量元素等，不含胆固醇及饱和脂肪酸，同时还具有营养、辅助医疗的作用。它们的主要成分是：A氨基酸、肽及多肽，它们是由食用酵母中存在的天然酶使肽键发生分解而产生的；B酵母细胞的水溶性成分，在加工过程中可加入符合标准的盐，自溶抽提物可以为液体状、膏状、粉状或颗粒状。 酵母抽提物的生产实质是酵母的自溶或酶解过程，酵母细胞自溶是控制一定的条件激活酵母细胞内的自溶酶类酶原，继而产生一系列消化自身结构的分解反应，细胞内的蛋白质降解为氨基酸、核酸降解为核苷酸，从而形成酵母抽提物特有的营养和风味成分。可以生产酵母抽提物的原料有面包酵母、啤酒酵母、假丝酵母、乳酸酵母，目前国内用面包酵母较多。酵母菌体内营养丰富、氨基酸组成齐全，且富含各种维生素，提取使其中成分酶解及溶出，再进而分离、浓缩成为酵母抽提物。现已形成了多种较为成熟的工艺来生产酵母抽提物，由于科技新成果的不断推出及各生产单位生产规模及条件的限制，在国内外生产酵母抽提物工艺上目前还没有一个统一的固定模式。现介绍一种工艺流程。 1．酵母自溶自溶原理是借助酵母菌体内的内源酶（蛋白酶、核酸酶、碳水化合物水解酶等），将酵母菌体内的高分子物质水解成可溶解的小分子物质。酵母细胞最外层有牢固的细胞壁为保护层，制取抽提物时需先将酵母的细胞破壁。破壁的方法有水解法（酸解、碱解）、机械破壁法、自身消化法、加细胞壁溶解酶法、超声波振动法、高压均质法等多种方法，以上方法各有优缺点，各单位可根据自身条件选择使用。然后将破壁后的酵母加水、搅拌配制成10~15%的酵母悬浮液。调节悬浮液酸碱度、温度使之适合酵母细胞体内的蛋白酶和核酸酶类的作用，PH值为5.5~6.5，自溶温度40-55℃，时间24-28小时。在酵母悬浮液中，加入某些自溶促进料，如0.1%硫胺素+5%的葡萄糖或1%的Nacl,可以缩短自溶时间,提高抽提率,增加氨基酸和呈味核苷酸的含量。在自溶开始或进行到一定阶段，加入蛋白酶和5′-磷酸二酯酶会更有利于蛋白质、核酸的降解及抽提率的提高。2．加热灭酶自溶结束后，升温80-90℃、0.5-1小时，使酵母细胞内的酶类失活，否则成品中的氨基酸、核苷酸等会在酶的作用下被继续分解而使成品变质。3．离心分离灭酶的半成品冷却，在3500-5000r/min转速下离心30min，得到自溶上清液，去除酵母残渣，残渣里还含有7-9%没被酶解的蛋白质，经烘干、粉碎后可以调成各类高蛋白的饲料。 4．浓缩干燥将离心所得的自溶上清液，控制温度60℃减压浓缩成干物质浓
2012-2013学年第二学期 药用植物资源与开发 论文名称甘草化学成分的提取与分离 年级 2010 学院中药材学院 专业植物科学与技术 学号 07107107 姓名林俊旭 任课教师张永刚 完成时间 2013-5-11 成绩
甘草中化学成分的提取与分离 摘要：本文主要介绍了甘草中主要的化学成分以及这些化学成分的含量和性质，并简述了甘草酸，甘草次酸和甘草甘的提取和有效成分的含量测定，为进一步的生产实践做出贡献。 关键词：甘草化学成分提取 正文：甘草属于豆科甘草属，以根和根状茎入药。甘草在我国集中分布于三北地区(东北、华北和西北各省区)，而以新疆、内蒙古、宁夏和甘肃为中心产区。随着药学及其相关学科以及科研设备的发展，甘草中主要含有的甘草酸、甘草次酸、黄酮、生物碱和氨基酸等化学成分，具有广泛的生物活性。 一、化学成分 药用甘草质量与其化学成分的组成、积累变化有直接的关系。先后从甘草属植物中提取、分离、鉴定了200多种化学成分，涉及甘草属植物10个种。其中最重要并已证实具有生物活性的成分主要是甘草酸等三萜皂苷类、黄酮类、香豆素类、多糖、生物碱、氨基酸等。 三萜皂苷类化合物：甘草属植物中三萜皂类成分具有量高、生理活性强的特点，甘草的许多药理作用都与这类成分有直接关系。至今在甘草属植物中已鉴定得到61种三萜类化合物，其中苷元45个。这些三萜类化合物其苷元均为3β-经基齐墩果烷型化合物的衍生物；皂苷一般为3β-羟基上的氧苷，糖元多为D-葡萄糖酸或D-葡萄糖。甘草酸一直被认为是甘草中最重要三萜类化合物，《中国药典》把甘草酸的量作为评价甘草药材及其制品质量的重要指标，通常要求不低于2％。 黄酮类成分：是近年来研究最活跃的天然活性成分之一，广泛存在于植物界中。这类化合物的存在对植物生长、发育、开花、结果以及抵御异物的侵入起着重要的作用。目前，从甘草属植物中已发现黄酮及其衍生物153种，它们的基本母核结构类型有15种，其中包括：黄酮、黄酮醇、双氢黄酮、双氢黄酮醇、查尔酮、异黄酮、双氢异黄酮、异黄烷、异黄烯等。对甘草中黄酮类成分的药理作用研究表明，这些成分在抗肿瘤、抗氧化、抗病毒方面作用显著。 甘草中黄酮类成分的分布和积策也表现出一定的特点。乌拉尔甘草无论是野生还是栽培，在一个生长季中，叶中总黄酮量最高，而地下部分的t相对较低；在5—10月，叶中的总黄酮量逐渐下降，而地下部分总黄酮盆具有上升趋势。各
1-MCP处理对桃果实成熟软化及其α-阿拉伯呋喃糖苷酶活性和基因表达的影响 阚娟，刘俊，金昌海 （扬州大学食品科学与工程，江苏扬州 225127） 摘要：本研究以软溶质型桃果实‘雨花三号’和硬溶质型桃果实‘加纳岩’为材料，研究了1-甲基环丙烯（1-MCP）处理对两种不同溶质型桃果实成熟软化过程中的基本生理变化及细胞壁多糖降解相关的重要酶α-阿拉伯呋喃糖苷酶的影响，为进一步研究核果类果实成熟软化机理提供理论依据。主要研究结果如下：1-MCP有效延缓了‘雨花三号’和‘加纳岩’桃果实硬度的下降，抑制了‘雨花三号’贮藏前8 d的乙烯释放，对‘加纳岩’乙烯释放的抑制主要表现在贮藏4 d后。1-MCP处理后对不同溶质型桃果实呼吸速率具有一定的抑制作用，但对‘雨花三号’的抑制表现在贮藏前10 d，而对‘加纳岩’的抑制表现在贮藏6 d后。1-MCP处理后α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶基因和酶活性受到抑制，对‘雨花三号’和‘加纳岩’桃果实贮藏6 d和12 d时酶活性的抑制率均达50%左右，果实软化延迟，进一步证明α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶作用于细胞壁的降解受乙烯调控。 关键词：桃；软化；细胞壁；乙烯；α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶 文章篇号：1673-9078(2014)10-42-46 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2014.10.008 Effect of 1-Methylcyclopropene T reatment on Peach Softening and α-L-Arabinofuranosidase Activity and Gene Expression KAN Juan, LIU Jun, JIN Chang-hai (College of Food Science and Engineering, Y angzhou University, Y angzhou 225127, China) Abstract: In this study, ‘Yuhuasanhao’ (melting-flesh) and ‘Jianayan’ (non-melting-flesh) peach cultivars were used to study the effect of 1-methylcyclopropene (1-MCP) treatment on the basic physiological changes and activity of α-L-arabinofuranosidase (an important enzyme related to the degradation of cell wall polysaccharides) during the softening of the peach fruit. This study could provide a theoretical basis for further study of the ripening mechanism of drupe fruits. The main results were as follows: 1-MCP effectively delayed the decline of peach firmness and inhibited ethylene release during the first eight days of storage for ‘Y uhuasanhao’ and after four days of storage for ‘Jianayan’cultivars. 1-MCP treatment showed a certain inhibitory effect on the respiration rate of different flesh types of peaches, which were observed during the first ten days of storage for ‘Y uhuasanhao’variety, but after six days of storage for ‘Jianayan’ variety. 1-MCP treatment led to inhibition of α-L-arabinofuranosidase translation and enzyme activity, and the inhibition rate after six days of storage for ‘Y uhuasanhao’ and 12 days of storage for ‘Jianayan’ was 50%. Peach fruit softening was delayed, further demonstrating that the role of α- L-arabinofuranosidase on cell wall degradation was regulated by ethylene. Key words: peach; softening; cell wall; ethylene; α-L-arabinofuranosidase 桃属于典型的呼吸跃变型果实，成熟过程伴随着呼吸速率和乙烯释放量的增加。乙烯刺激了细胞代谢的改变，对成熟果实的质地有一定的作用，尤其对调节溶质型桃果实硬度的下降有明显的作用[1]。1-MCP 收稿日期：2014-05-05 基金项目：国家自然科学基金项目(31101586)；江苏省科技计划项目资助（BC2013401）；江苏省自然科学基金项目(BK2010310) 作者简介：阚娟(1980-)，女，博士，讲师，研究方向农产品贮藏与加工 通讯作者：金昌海(1963-)，男，博士，教授，研究方向为农产品贮藏与加工（1-methylcyclopropene，1-甲基环丙烯）是乙烯作用的抑制剂，其与乙烯受体的结合能力是乙烯自身的10倍以上，在许多跃变型果实中阻止了乙烯引起的成熟作用，但在不同品种中这种作用有所差异。通过对杏[2]、香蕉[3]、李[4]和苹果[5]等果实的研究表明，1-MCP处理可提高跃变型果实的贮藏品质，能较好的保持桃和油桃采后果实的硬度和酸度。近年来，对1-MCP在桃果实采后贮藏的应用研究也逐渐深化，在桃贮藏上的处理时间、浓度、方法与作用机理探讨始终不断。但是迄今缺乏对1-MCP对不同桃品种作用的综合比较。
甘草提取物 甘草提取物，是从甘草中提取的有药用价值的成份。甘草提取物一般包含：甘草甜素、甘草酸，甘草甙、甘草类黄酮等。甘草提取物的美白作用主要是通过抑制酪氨酸酶和多巴色素互变酶(TRP-2)的活性、阻碍5,6—二羟基吲哚(DHl)的聚合，以此来阻止黑色素的形成，从而达到美白皮肤的效果。 产品基本信息 【中文名称】：甘草提取物 【拉丁名称】：Radix Glycyrrhizae 【英文名称】：Licorice Roots Northwest Origin 【提取来源】：甘草属植物甘草的根茎 【产品性状】：黄色至类白色粉末 【产品规格】：甘草酸7%-98%/甘草酸二钾98%/光甘草定40% HPLC 【植物形态】：多年生草本；根与根状茎粗状，直径1-3厘米，外皮褐色，里面淡黄色， 具甜味。茎直立，多分枝，高30-120厘米，密被鳞片状腺点、刺毛状腺体及白色或褐色的绒毛，叶长5-20厘米；托叶三角状披针形，长约5毫米，宽约2毫米，两面密被白色短柔毛；叶柄密被褐色腺点和短柔毛；小叶5-17枚，卵形、长卵形或近圆形，长1.5-5厘米，宽0.8-3厘米，上面暗绿色，下面绿色，两面均密被黄褐色腺点及短柔毛，顶端钝，具短尖，基部圆，边缘全缘或微呈波状，多少反卷。总状花序腋生，具多数花，总花梗短于叶，密生褐色的鳞片状腺点和短柔毛；苞片长圆状披针形，长3-4毫米，褐色，膜质，外面被黄色腺点和短柔毛；花萼钟状，长7-14毫米，密被黄色腺点及短柔毛，基部偏斜并膨大呈囊状，萼齿5，与萼筒近等长，上部2齿大部分连合；花冠紫色、白色或黄色，长10-24毫米，旗瓣长圆形，顶端微凹，基部具短瓣柄，翼瓣短于旗瓣，龙骨瓣短于翼瓣；子房密被刺毛状腺体。荚果弯曲呈镰刀状或呈环状，密集成球，密生瘤状突起和刺毛状腺体。种子3-11，暗绿色，圆形或肾形，长约3毫米。花期6-8月，果期7-10月。 【原产地】：甘草主要分布于新疆、内蒙古、宁夏、甘肃；家种甘草主产在新疆、内蒙古、甘肃的河西走廊，陇西的周边，宁夏部分地区。 在亚洲、欧洲、澳洲、美洲等地都有分布（并大都有传统的药用和其他用途）。 【化学成分】：甘草含有多种化学成分，主要成分有甘草酸、甘草甙等。甘草的化学组成极为复杂，目前为止从甘草中分离出的化合物有甘草甜素、甘草次酸、甘草甙、异甘草甙、新甘草甙、新异甘草甙、甘草素、异甘草素以及甘草西定、甘草醇、异甘草醇、7-甲基香豆精、伞形花内酯等数十种化合物，但这些成分和数量通常会随甘草的种类、种植区域、采收时间等因素的不同而异。大量的研究表明，甘草甜素和黄酮类物质是甘草中最重要的生理活性物质，主要存在于甘草根表皮以内的部分。 【产品功效】：在化妆品界的应用 甘草是世界上使用最广泛的草药之一，在印度草药医学中它可以辅助治疗眼疾、喉咙感染、胃溃疡、关节炎和肝病。原因在于它可以化痰、润肤、抗炎、抗滤过性病原体，抗肝毒素和抗菌。 甘草中含有甘草酸、皂角苷、天门冬素、糖、树脂、苦味素、一些挥发油和其他化合物。甘草里主要成分是：三萜皂苷甘草酸，以及甘草酸钙盐和钾盐的混合物。其他成分包括：三萜皂苷（光甘草定、美草醇、光甘草内酯、异甘草内酯、光甘草酚），异黄酮（7羟基-4甲氧异黄酮，新甘草苷、光甘草酮、欧甘草素），三萜固醇（芒柄花醇、β-香树脂素和豆甾醇），香豆素(伞花内酯甲醚和伞形酮)。甘草中疏水成分是光甘草定，也是用于化妆品中的
Product Information Protease Inhibitor Cocktail (EDTA-Free, 100X in DMSO) I. Kit Contents: Components Information 1,10-Phenanthroline Metalloprotease inhibitor AEBSF Serine protease inhibitor E-64 Cysteine protease inhibitor, irreversible Pepstatin A Aspartic proteinases inhibitor II. Introduction: Endogenous proteins are produced and degraded in a balanced state, so their cellular levels are stable under stable environmental conditions. Crude cell extracts contain a number of endogenous enzymes, such as phosphatases and proteases, which are capable of degrading proteins in the extracts. Protein production is greatly halted and degradation is increased when proteins are extracted from cells and tissues in vitro. The best way to increase the yield of intact proteins is to add inhibitors of those enzymes known to be present. Protease inhibitor cocktail is used with fungal and yeast extracts to increase protein stability. The cocktail functions to inhibit proteases that would degrade either non-phosphorylated or phosphorylated protein substrates. This protease inhibitor cocktail contains individual components, including AEBSF, 1,10-Phenanthroline, E-64 and Pepstatin A with a broad specificity for cysteine, serine, aspartic, and metalloproteases. This cocktail has been optimized and tested for fungal and yeast cell use. This protease inhibitor cocktail is supplied as a ready-to-use solution in DMSO. III. Protocol: Thaw at room temperature; add at 1:100 (v/v) dilution to solution samples (such as yeast extracts) before assaying. Applications: WB, Co-IP, pull-down, IF, IHC, kinase assay and etc. IV. Storage: Stored at -20°C, and stable for at least 12 months. For research use only! Not to be used in humans. Our promise If the product does not perform as described on this datasheet, we will offer a refund or replacement. For more details, please visit https://www.doczj.com/doc/f71961474.html,/ or contact our technical team.
100%天然射干提取物 [产品名称-KinGreen]: 射干提取物 [英文名称-KinGreen]: Blackberry Lily Rhizome Extract [生产单位-KinGreen]: 西安金绿生物工程技术有限公司 [原料别名-KinGreen]: 乌扇、乌蒲、黄远、乌萐、夜干、乌翣、乌吹、草姜、鬼扇、凤翼、扁竹根、仙人掌、紫金牛、野萱花、扁竹、地萹竹、较剪草、黄花扁蓄、开喉箭、黄知母、冷水丹、冷水花、扁竹兰、金蝴蝶、金绞剪、紫良姜、铁扁担、六甲花、扇把草、鱼翅草、山蒲扇、剪刀草、老君扇、高搜山、凤凰草。[拉丁名称-KinGreen]: Rhizoma Belamcandae [产品来源-KinGreen]:西安金绿生物工程技术有限公司生产的射干提取物来源为鸢尾科植物射干Belamcanda chinensis （L.）DC.的干燥根茎。春初刚发芽或秋末茎叶枯萎时采挖，除去须根及泥沙，干燥[西安金绿]。 [原料形态-KinGreen]: 射干多年生草本。根茎粗壮，横生，鲜黄色，呈不规则的结节状，着生多数细长的须根。茎直立，高50-150cm，实心，下部生叶。叶互生，扁平，宽剑形，对折，互相嵌叠，排成2列，长20-60cm，宽2-4cm，先端渐尖，基部抱茎，全线，绿色带白粉；叶脉数条，平行。聚伞花序伞房状顶生，2叉状分枝，技端着生数花，花梗及分枝基部均有膜质苞片；苞片披针形至狭卵形；花被片6，2轮，外轮花被裂片倒卵形或长椭圆形，长约2.Scm，宽1cm，内轮3片略小，倒卵形或长椭
圆形，长2-2.5cm，宽1cm，橘黄色，有暗红色斑点；雄蕊3，贴生于外花被片基部，花药外向；雌蕊1，子房下位，3室，中轮胎座，柱头3浅裂。葫果倒卵形或长椭圆形，长2-4cm，具3纵棱，成熟时室背开裂，果瓣向外弯曲。种子多数，近圆形，黑紫色，有光泽，直径约5mm。花期6-8月，果期7-9月。 [原料分布-KinGreen]: 生态环境：生于山坡、草原、田野旷地、杂木林缘，常见栽培。资源分布：分布于全国各地 [ Product—Brand ]: 西安金绿-Xi’an KinGreen [化学成分-KinGreen]: 根及根茎含异黄酮类成分。 [药理作用-KinGreen]: 1．抗病原微生物作用：在试管内，射干煎剂或浸剂（1:10）对常见的致病性皮肤癣菌有较强的抗菌作用；在体外，1:20 的浓度对外感及咽喉疾患中的某些病毒（腺3病毒、ECHO11），也有抑制或延缓其发病的作用． 2．抗炎作用：鸢尾黄酮甙和鸢尾黄酮，在试管中有抗透明质酸酶的作用，且不为半胱胺酸所阻断．对大鼠的透明质酸酶性浮肿有抑制作用，但不能抑制角叉菜胶性浮肿．对大鼠因腹腔注射氮芥引起的腹水渗出也有抑制作用．射干醇提取物给小鼠灌服，能显著抑制组胺所致小鼠皮肤及醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性亢进，并抑制巴豆油所致之小鼠耳部水肿；给大鼠灌服，对透明质酸酶、甲醛等所致大鼠脚爪水肿及大鼠棉球性肉芽组织增生有显著抑制作用；尚能显著对抗大鼠巴豆油性肉芽囊的炎性渗出和炎性增生．
影响酶活性的因素 a.温度： 温度（temperature）对酶促反应速度的影响很大，表现为双重作用：（1）与非酶的化学反应相同，当温度升高，活化分子数增多，酶促反应速度加快，对许多酶来说，温度系数（temperature coefficient）Q10多为1～2，也就是说每增高反应温度10℃，酶反应速度增加1～2倍。（2）由于酶是蛋白质，随着温度升高而使酶逐步变性，即通过酶活力的减少而降低酶的反应速度。以温度（T）为横坐标，酶促反应速度（V）为纵坐标作图,所得曲线为稍有倾斜的钟罩形。曲线顶峰处对应的温度，称为最适温度（optimum temperature）。最适温度是上述温度对酶反应的双重影响的结果，在低于最适温度时，前一种效应为主，在高于最适温度时，后一种效应为主，因而酶活性迅速丧失，反应速度很快下降。动物体内的酶最适温度一般在35～45℃，植物体内的酶最适温度为40～55℃。大部分酶在60℃以上即变性失活，少数酶能耐受较高的温度，如细菌淀粉酶在93℃下活力最高，又如牛胰核糖核酸酶加热到100℃仍不失活。 最适温度不是酶的特征性常数，它不是一个固定值，与酶作用时间的长短有关，酶可以在短时间内耐受较高的温度，然而当酶反应时间较长时，最适温度向温度降低的方向移动。因此，严格地讲，仅仅在酶反应时间已经规定了的情况下，才有最适温度。在实际应用中，将根据酶促反应作用时间的长短，选定不同的最适温度。如果反应时间比较短暂，反应温度可选定的略高一些，这样，反应可迅速完成；若反应进行的时间很长，反应温度就要略低一点，低温下，酶可长时间发挥作用。 各种酶在最适温度范围内，酶活性最强，酶促反应速度最大。在适宜的温度范围内，温度每升高10℃，酶促反应速度可以相应提高1～2倍。不同生物体内酶的最适温度不同。如，动物组织中各种酶的最适温度为37～40℃；微生物体内各种酶的最适温度为25～60℃，但也有例外，如黑曲糖化酶的最适温度为62～64℃；巨大芽孢杆菌、短乳酸杆菌、产气杆菌等体内的葡萄糖异构酶的最适温度为80℃；枯草杆菌的液化型淀粉酶的最适温度为85～94℃。可见，一些芽孢杆菌的酶的热稳定性较高。过高或过低的温度都会降低酶的催化效率，即降低酶促反应速度。 最适温度在60℃以下的酶，当温度达到60～80℃时，大部分酶被破坏，发生不可逆变性；当温度接近100℃时，酶的催化作用完全丧失。 一般而言，温度越高化学反应越快，但酶是蛋白质，若温度过高会发生变性而失去活性，因而酶促反应一般是随着温度升高反应加快，直至某一温度活性达到最大，超过这一最适温度，由于酶的变性，反应速度会迅速降低。 热对酶活性的影响对食品很重要，如，绿茶是通过把新鲜茶叶热蒸处理而得，经过热处理，使酚酶、脂氧化酶、抗坏血酸氧化酶等失活，以阻止儿茶酚的氧化来保持绿色。红茶的情况正相反，是利用这些酶进行发酵来制备的。
影响酶活性的条件 1．实验原理 (1)探究温度对酶活性的影响 ①反应原理 ②鉴定原理：温度影响酶的活性，从而影响淀粉的水解，滴加碘液，根据是否出现蓝色及蓝色的深浅来判断酶的活性。 (2)探究pH 对酶活性的影响 ①反应原理(用反应式表示)：2H 2O 2――――→过氧化氢酶 2H 2O ＋O 2。 ②鉴定原理：pH 影响酶的活性，从而影响氧气的生成速率，可用带火星的卫生香燃烧的情况来检验O 2的生成速率。 2．实验步骤和结果 (1)探究温度对酶活性的影响
(2)探究pH对酶活性的影响 考点一：“梯度法”探究酶的最适pH (1)设计思路 (2)设计方案 例一、为了探究某种淀粉酶的最适温度，某同学进行了如图所示的实验操作。实验步骤如下：
步骤①：取10支试管，分为五组。每组两支试管中分别加入1 mL某种淀粉酶溶液和2 mL 质量分数为5%的淀粉溶液。 步骤②：将每组淀粉酶溶液和淀粉溶液混合并摇匀。 步骤③：将装有混合溶液的五支试管(编号1、2、3、4、5)分别置于15 ℃、25 ℃、35 ℃、45 ℃、55 ℃水浴中。反应过程中每隔1分钟从各支试管中取出一滴反应液，滴在比色板上，加1滴碘液显色。 回答下列问题： (1)实验原理：淀粉在淀粉酶的催化作用下分解成还原糖；淀粉酶的活性受温度影响；用碘液可检测淀粉，因为淀粉遇碘液变蓝，根据蓝色深浅来推断淀粉酶的活性。 (2)该实验的设计存在一个明显的错误，即步骤②前应__________________________ ________________________________________________________________________。(3)在本实验中，各组溶液的pH要保证______________，该实验能否选用斐林试剂检测实验结果？__________，理由是________________________________________________ ________________________________________________________________________。(4)纠正实验步骤后，进行操作。一段时间后，当第3组试管中的反应物与碘液混合开始呈棕黄色时，各组实验现象如下表所示(“＋”表示蓝色程度)： 分析上述实验结果，可以得出该淀粉酶的最适温度在____________之间。某同学在进行本实验的过程中，发现反应时间过长。为缩短反应时间，请你提出合理的改进措施：________________________________________________________________________。 考点二：“梯度法”探究酶的最适温度 (1)设计思路 (2)设计方案 例一、下面的表格分别是某兴趣小组探究温度对酶活性影响的实验步骤和探究过氧化氢酶作用的最适pH的实验结果。据此回答下列问题：
酵母抽提物 通过自溶作用和其他几种技术，可以将酵母细胞部分或全部地溶解。经过进一步的加工，酵母泥可以转化成各种制剂和产品，它们可以提供给实验室中使用，还可以作食品、饲料和发酵培养基的各种成分。生要的产品中含有浓缩的酵母转化酶和β－半乳糖苷酶，液体状、膏状、粉状或预粒状的可溶性酵母成分，另外还有酵母细胞成分中分离出的成份，比如通过机械粉碎细胞而释放出的蛋白质和细胞壁（聚糖）。 生要的工业产品是澄清的、可溶于水的提取物，一般称之为酵母抽提物，自溶酵母抽提物，酵母水解物。有些厂家用谷氨酸一钠（味精）和5'－核苷酸来强化抽提物，或将抽提物和水解植物蛋白（Rosenthal和Pinkalla，1960）和改变性的乳清固体（Corbeff，1978）混合起来生产出不同风味的混合物。商业中将水解植物蛋白称为HVP（这些东西是从大豆渣，小麦谷蛋白，玉米谷蛋白，大米人谷蛋白酵母以及酪蛋白的Hydrolysed Vergetable Proteins ）和HPP（Hydrolysed Plant Protein）酸水解过程中而得到的。 酵母抽提物作为食品和药物管理局所批准使用的天然调味品（Aron，1973a，b）可在肉制品、汤类、卤汁、干酪烘焙食品、调味料、蔬菜制品和海味品中用作调料。酵母抽提物作为多肽、氨基酸、微量元素、B族维生素的可靠而经济的来源，在食品保健、儿童食品、饲料营养补充剂，以及微生物生产和培养基和其他生物培养系统的营养补充剂中，是营养添加剂。当和酚醛抗氧化剂配合时，自溶物和水解物具有增效剂的作用（Bishor 和Henick，1975）。 制取酵母抽提物的生物体生要取自啤酒厂过剩的啤酒，其次取自初生酵母，其中包括可以在糖蜜中生长的面包酵母（Saccharomyees Cerersiae），在乳清液中生长的Kluyveromyces Fragilis 和乳酸酵母（Sacch Lactis）以及在木糖和乙醇中生产的产朊假丝酵母（Cardida Utclis）。 酵母细胞组分的释放和分解可以通过许多方法来实现，其中包括细胞的机械破碎、化学和酶处理，巴氏杀菌、自溶、质壁分离和水解。在这些方法中，一般将后四种方法结合起来，用于制取工业酵母抽提物。在适当的热处理、自溶、和质壁分离过程中，细胞中的胞内酶，主要是糖酶和蛋白酶，分解蛋白质成分。实际上这种分解作用相对较慢（1～20小时不等）它需要无菌条件，而产量很低（约为原始酵母固溶物的48％）在制取酵母水解物时，浓缩酵母浆与强酸一起加热（100℃）直到50%～60％的蛋白质转化为多肽和氨基酸。经过中和和浓缩后干燥的成噪中含有多到50％的氯化钠。 由于工业上设有普遍使用的标准（Select Commiffee On Generally Regarded At Safe Substances 1976），蛋白质的水解制品的规格和成分在不同的制品厂是不同的，并且同一工厂生产的产品也不尽相同。但对本章讨论的酵母抽提物，国际水解蛋白委员
甘草是一种豆科植物，源产于亚洲和欧洲一些地方。这种植物的根部有甜味，其名字也是由此而来。除了作为糖果的甜味剂，甘草还有广泛的保健功效。古希腊人和罗马人深知这种植物的治疗用途。希帕克拉底的医学文献里曾经提到过这种草药，此外，在中国古代也一直用这种植物的根茎治疗各种疾病。 甘草的功效作用包括可以治疗咳嗽，胃溃疡，口腔溃疡，回肠炎，漏肠综合征，肠易激综合征和克罗恩病。如今，甘草提取物有固体和液体两种形式，其主要成分是甘草酸，这也是甘草有甜味的原因所在。 甘草的功效主要有： 1.用于心气虚，心悸怔忡，脉结代，以及脾胃气虚，倦怠乏力等。前者，常与桂枝配伍，如桂枝甘草汤、炙甘草汤。后者，常与党参、白术等同用，如四君子汤、理中丸等。 2.用于痈疽疮疡、咽喉肿痛等。可单用，内服或外敷，或配伍应用。痈疽疮疡，常与金银花、连翘等同用，共奏清热解毒之功，如仙方活命饮。咽喉肿痛，常与桔梗同用，如桔梗汤。 若农药、食物中毒，常配绿豆或与防风水煎服。 3.用于气喘咳嗽。可单用，亦可配伍其他药物应用。如治湿痰咳嗽的二陈汤；治寒痰咳喘的苓甘五味姜辛汤；治燥痰咳嗽的桑杏汤；治热毒而致肺痈咳唾腥臭脓痰的桔梗汤；治咳唾涎沫的甘草干姜汤等。另风热咳嗽、风寒咳嗽、热痰咳嗽亦常配伍应用。 4.用于胃痛、腹痛及腓肠肌挛急疼痛等，常与芍药同用，能显着增强治挛急疼痛的疗效，如芍药甘草汤。 5.用于调和某些药物的烈性。如调味承气汤用本品缓和大黄、芒硝的泻下作用及其对胃肠道的刺激。另外，在许多处方中也常用本品调和诸药。
此外，现代用于胃及十二指肠溃疡，常与乌贼骨、瓦楞子等同用。本品尚兼有利尿作用，故常以干草梢作治疗热淋尿痛的的辅助药。 与大豆合用有解毒的功效。 同时，甘草还广泛应用于食品工业，精制糖果、蜜饯和口香糖。甘草浸膏是制造巧克力的乳化剂，还能增加啤酒的酒味及香味，提高黑啤酒的稠度和色泽，制作某些软性饮料和甜酒；香烟矫味。在化工、印染工业中，甘草也广有用途. 甘草的副作用： 据认为，甘草的副作用是由于摄入量过高引起的。其中一些不免影响包括： *甘草提取物中的甘草酸可以引起称作假性醛固酮增多症的疾病，其特点是体内叫做醛甾酮的激素水平过高。正常情况下，这种激素有助于平衡体内钾和钠的水平。这种激素的水平过高会阻碍钠的排泄，并导致钾从尿液中排出，从而导致血压升高和肌肉损伤。损失钾可导致心脏和肌肉运作异常。它也导致保水，造成水肿。 *根据欧盟2008年的报告，过度使用甘草可以导致血压升高，肌肉无力，慢性疲劳，头痛，肿胀，男性睾酮水平降低等问题。 *人们还认为，孕妇过量使用甘草可以引起大量出血，甚至导致早产。 *还有报告显示，长期使用甘草，还会引起体重异常增加等副作用。 患有血压过高，肥胖，糖尿病，肾脏疾病，心脏病，或肝脏和月经问题的人应避免摄入甘草。 孕妇和哺乳期女性，以及存在性功能障碍的男性也应避免这种草药。正在使用血管紧张素抑制剂和利尿剂药物（如阿司匹林，地高辛，皮质类固醇，胰岛素，口服避孕药和泻药）的人也应该避免使用甘草。 尽管，人们认为消费含有甘草提取物的糖果没有害处，但是过量消费也同样可以产生副作用。
瑤藥(民族藥物) 瑤族人民主要居住在我國南方山區。由于亞熱帶地區特有的溫和气候，充足的雨量，肥沃的土地，繁茂的植被等自然條件；由于西南、華中地區動物資源丰富，這种多層次、多門類的生態環境類型，造就了瑤族地區丰富的自然資源，這里的瑤族人民不僅改造了自然，而且利用當地動、植、礦物資源創造了瑤族醫藥。 受歷史條件限制，至今沒有任何記載以資証明瑤藥种類。据一些瑤族地區的藥物資源調查報告統計，瑤醫使用藥物品种約836种，土石草木，鳥獸虫魚，無所不包。對836种藥物基源考証，隸屬于186科，瑤醫應用較多的藥用植物有水龍骨科、蓼科、薔薇科、豆科、唇形料、菌科、葫蘆科、百合科、蘭科等。 隨著醫學科學事業的發展，瑤醫藥寶貴的經驗正在被挖掘、研究。一些典型的、臨床常用的瑤藥，現代藥理研究証明：确有可靠療效，大有開發价值。如：冬心威：為杜鵑花科植物真白珠（Franch．）Rehd．的全株或根。用于產后或風濕性關節炎、慢性气管炎，泡酒服或煎水洗澡。根、莖、葉均含揮發油，其主要成分是水楊酸甲酯。現代藥理研究表明其揮發油有祛痰作用及抗菌、抗病毒的作用。這表明瑤胞用瑤婆風治療慢性气管炎与現代藥理研究結果是相吻合的。董醬背：為茜草科植物玉葉金花的根或全株。用于腸炎、腹瀉，預防中暑，煎水服。莖、葉含豆甾醇、B－谷甾醇、三酸類阿江酸 （arjunolicacidC30H48O5）。本品經預試有氨基酸酚類、甾醇類等反應。
釀摸勉：為菊科植物地膽草的全草。具有清熱解毒之功，主要用于慢性肝炎、黃疸型肝炎、目赤腫痛、癰腫瘡毒。江華高灘仲醫院，用地膽草、虎杖等配伍使用，治療肝炎，效果較佳。地膽草60克，海金沙葉60克，水梅柳葉60克，冰片6克，將前三味侵入淘米水內，揉爛，過濾后放人冰片，用鴨毛將藥水涂患處，治療天瘡；鮮地膽草适量，搗爛外敷治目赤疾病。全草含表無羈醇（epifriedeli 一nol）、蛇麻脂醇（lupeol）、豆甾醇（stigmasterol）、三十烷醇（triacontan －1－01）、三十二烷醇（dotri－cotan－1－01）、乙酸蛇麻脂醇脂（lupeolacetate）、去氧地膽草素（deoxgelepha一ntopin）及异去氧地膽草素（isodeoxyelephantopin）。現代藥理研究表明：地膽草注射液對金黃色葡萄球菌、大腸杆菌、傷寒杆菌、痢疾杆菌均有抑制作用。 山慈姑：為防己科植物青牛膽或纖梗青牛膽金果欖的塊根。用于治療痤瘡。塊根加米醋磨漿，醋漿涂抹于臉部，每天3～4次，效果很好。塊根含巴馬亭（Palmation）和加倫賓（Columbin）。現代藥理研究表明塊根對鉤端螺旋體有抑制作用。 地雷：為毛莨科植物單葉鐵線蓮的塊根。用于跌打損傷疼痛、腹痛、癌症疼痛；外傷醋磨外敷。曾將地雷制成注射液在臨床上使用，對消化道平滑肌痙攣等所致腹痛及各种癌症疼痛，均取得很好的效果。化學成分測試：有酚性成分及皂類成分的反應。現代藥理研究表明：地雷提取液能緩解腸、胃平滑肌痙攣。