CYP2C19基因多态性与氯吡格雷抗凝作用的相关性研究
蔡泓敏1，陈 珲2，赵冠人2，李 素2，冯端浩2（1.河北北方学院，河北 张家口 075000；2.解放军309医院药剂科，北京 100091）
[摘要] 目的：探讨细胞色素P450（CYP ）2C19基因多态性与氯吡格雷抗凝作用的关系，为氯吡格雷个体化用药提供参考。方法：选取诊断为急性冠脉综合征并接受经皮冠状动脉介入治疗术（PCI ）的患者，采取血标本并提取外周血基因组DNA ，将提取后的总DNA 进行PCR 扩增，扩增产物经基因芯片杂交法确定基因型，根据不同的基因型对患者进行分组。176例入选病例共分为3组，A 组：快代谢基因组（CYP2C19*1/*1）；B 组：中等代谢基因组（CYP2C19*1/*2、CYP2C19*1/*3）；C 组：慢代谢基因组（CYP2C19*2/*2、CYP2C19*2/*3或CYP2C19*3/*3），测定各组ADP 抑制率。应用SPSS 13.0软件对数据进行统计分析。结果：176例入选病例三组之间ADP 抑制率差异无统计学意义（P > 0.05），127例首次行PCI 患者中C 组与B 组和A 组相比，ADP 抑制率差异有统计学意义（P < 0.05和P < 0.01）。结论：首次经皮冠状动脉介入治疗术后CYP2C19慢代谢基因型患者常规使用氯吡格雷疗效较差。
[关键词] CYP2C19；基因多态性；氯吡格雷；ADP 抑制率
[中图分类号] R973+.2 [文献标识码] A [文章编号] 1672 – 8157(2013)05 – 0254 – 04
Correlation study of gene polymorphism of CYP2C19 and anticoagulation effect of clopidogrel
CAI Hong-min 1, CHEN Hui 2, ZHAO Guan-ren 2, LI Su 2, FENG Duan-hao 2(1. Hebei North University, Zhangjiakou 075000, China;
2. Department of Pharmacy, the 309th Hospital of PLA, Beijing 100091, China )
[ABSTRACT] Objective: To explore the correlation between the gene polymorphism of CYP2C19 and anticoagulation effect
of clopidogrel, and provide the reference for individualized medication of clopidogrel. Methods: The peripheral bloods of 176 post-PCI patients who were diagnosed with acute coronary syndromes were drawn, genomic DNAs were extracted and ampli ? ed by PCR, and then the genotypes of those samples were identi ? ed by gene chips hybridization. The subjects were divided into three groups by genotype. Group A consisted of patients with the genotype of extensive metabolism (CYP2C19*1/*1), group B consisted of patients with the genotype of intermediated metabolism (CYP2C19*1/*2 and CYP2C19*1/*3), and group C consisted of patients with the genotype of poor metabolism (CYP2C19*2/*2, CYP2C19*2/*3 and CYP2C19*3/*3). The ADP inhibition rates in different groups were evaluated. The data were analyzed by SPSS 13.0 software. Results: There were no signi ?
cant differences of ADP inhibition rate among the three groups (P > 0.05), but when compared to group B and group A, the ADP inhibition rates in group C were signi ? cantly lower in 127 patients with ? rst PCI (P < 0.05 and P < 0.01). Conclusion: The anticoagulant effect of clopidogrel in the CYP2C19 poor metabolism genotype patients with ? rst PCI was poor.
[KEY WORDS] CYP2C19; Gene polymorphism; Clopidogrel; ADP inhibition rate
[基金项目] 解放军309医院课题项目（2013MS-020）
[通信作者] 冯端浩，男，主任药师，研究方向：临床药学与药理学。E-mail ：fdh62@https://www.doczj.com/doc/ee17363689.html,
[作者简介] 蔡泓敏，女，在读药理学硕士研究生。E -m a i l ：chmyx640054@https://www.doczj.com/doc/ee17363689.html,
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2013-06-09 修回日期：2013-08-22）
血小板聚集是冠状动脉综合征、心肌梗死、心肌缺血等疾病的重要病因，抗血小板治疗是防治这类疾病的主要方法。氯吡格雷是一种抑制ADP受体的噻吩吡啶类抗血小板药物，目前已经广泛应用于急性冠脉综合征（acute coronary syndrome，ACS）和PCI术后治疗，可以有效地预防ACS患者缺血事件的发生。然而临床研究显示，一部分患者在使用75 mg常规剂量氯吡格雷时，并未得到足够的抗血小板效果[1]，从而导致支架内血栓再发心肌梗死。
氯吡格雷是一种前体药物，必须经过一系列生物转化，才能发挥抗血小板凝集的作用[2]。CYP2C19基因在氯吡格雷转化为活性代谢产物的过程中发挥着重要作用。研究发现，CYP2C19酶存在多种突变等位基因，中国人群CYP2C19的变异主要是CYP2C19*2和CYP2C19*3两种类型，这两种突变基因型均能造成CYP2C19酶活性的降低或完全丧失，从而对氯吡格雷的疗效产生重要的影响[3-7]。2010年3月美国FDA发布警告，建议医师在给患者使用氯吡格雷之前进行CYP2C19基因型检测，以便于了解患者对氯吡格雷的代谢能力，及时调整给药剂量。
本研究通过分析CYP2C19基因型与ADP抑制率之间的关系，确定氯吡格雷抗凝效果与基因型间的关系。
1 资料和方法
1.1 研究对象
选择2010年1 – 12月在我院心内科接受冠状动脉支架植入术的患者，所有患者肝肾功能正常，术后服用氯吡格雷作为抗凝药，共入选病例176例，其中127例为首次行PCI术患者。
1.2 实验分组
A组：快代谢组（CYP2C19*1/*1）；B组：中等代谢组（CYP2C19*1/*2和CYP2C19*1/*3）；C 组：慢代谢组（CYP2C19*2/*2、CYP2C19*3/*3和CYP2C19*2/*3）。
1.3 仪器与试剂
DNA提取试剂盒（QIAGE公司）；CYP2C19杂交显色试剂盒（上海百傲科技有限公司）；TEG 5000型血栓弹力图分析仪（美国Haemoscope公司）；Tanon-1600R数据凝胶图像处理系统（上海天能科技有限公司）；GTR22-1高速台式冷冻离心机（北京时代北利离心机有限公司）；Applied Biosystems 2720 Thermal Cycler（Applied Biosystems）；Sigma 1-14高速离心机（德国Sigma公司）；e-Hyb全自动杂交仪（上海百傲科
技有限公司）；BE-2.0生物芯片识读仪（上海百傲科技有限公司）；DYY-6C型电泳仪（北京六一仪器厂）。1.4 基因型检测方法
应用DNA提取试剂盒，从外周血中提取基因组全血DNA，将提取的DNA在– 20 ℃存储备用。提取的总DNA应用0.8%的琼脂糖凝胶进行电泳，紫外检测其纯度与浓度。
利用基因芯片试剂盒，根据说明书进行PCR扩增，将PCR产物与固定基因探针的基因芯片进行特异性杂交，经过酶促显色反应，测定患者基因中单核苷酸（single nucleotide polymorphism，SNP）信息，确定CYP2C19基因型。
1.5 血小板聚集率的测定
抽取纳入试验的PCI术后患者的静脉血，将规定量的全血加入真空采血管中，2 h之内应用TEG分析仪进行检测，最后利用TEG软件根据测试结果自动计算出最大振幅（max amplitude，MA ) 值：1通道MA代表由凝血酶诱导的血凝块强度（MA THROMBIN），2通道MA代表缺少凝血酶和血小板激活状态下的纤维蛋白网的强度（MA FIBRIN），3通道和4通道MA代表纤维蛋白网和被激活剂激活的血小板所形成的血凝块的强度（MA AA 或MA ADP）。血小板抑制率公式MA ADP% = [（MA ADP – MA
FIBRIN
） / （MA THROMBIN – MA FIBRIN）] ×100，由上述公式最终得出服用氯吡格雷后二磷酸腺苷诱导的血小板抑制率。
1.6 数据处理
应用SPSS 13.0统计软件进行分析，计量资料以± s
x表示，不同基因型组间比较采用单因素方差分析，P≤0.05为差异具有统计学意义。
2 结果
2.1 总DNA提取、基因芯片杂交检测基因型
通过对样本DNA提取，利用0.8%的琼脂糖凝胶电泳检测所提取的DNA，在凝胶成像系统下可见DNA电泳带整齐，荧光较强。将总DNA进行PCR扩增并用基因芯片杂交的方法进行基因型的检测，根据芯片上的位点排列顺序确定基因型。见图1。
2.2 基因型分析
在176例患者中，C Y P2C19*1/*1有74例（42.05%），CYP2C19*1/*2有58例（32.95%），CYP2C19*1/*3有16例（9.09%），CYP2C19*2/*2有17例（9.66%），CYP2C19*2/*3有11例（6.25%），CYP2C19*3/*3有0例。约有32.39%的患者ADP抑制率小于20%，ADP抑制率介于20% ~ 50%的患者约43.75%。
2.3 基因多态性对服用氯吡格雷患者的影响
176例行PCI术后患者CYP2C19三组不同基因型相比，ADP抑制率差异无统计学意义（F =1.083 < F
0.05
，P > 0.05），127例首次行PCI术患者三组不同基因型相比，ADP抑制率差异有统计学意义（P < 0.05），见表1。
表1 首次行PCI术患者中CYP2C19基因型与ADP抑制率之间的关系
Tab 1 The relationship between the CYP2C19 genotype and ADP inhibition rate in patients undergoing PCI for the first time
分组基因型人数平均ADP抑制率
A CYP2C19*1/*153 0.45±0.30**
B CYP2C19*1/*260 0.37±0.27*
CYP2C19*1/*3
C CYP2C19*2/*2140.19±0.19
CYP2C19*2/*3
CYP2C19*3/*3
注：与C组比较，*P < 0.05，**P < 0.01
Note: compared with group C, *P < 0.05, **P < 0.01
3 讨论
氯吡格雷为前体药物，大部分前体药物通过酯酶代谢为无活性物质经肠道排出，只有不到15%给药剂量的氯吡格雷被肝脏CYP系统分两步氧化为有效的活性代谢产物。在形成中间代谢产物及最终代谢产物的氧化过程中分别有45%和20%是由CYP2C19基因编码的CYP2C19蛋白介导[8]。本研究利用血栓弹力图的方法测定氯吡格雷对血小板ADP的抑制率，探讨氯吡格雷与CYP2C19基因多态性之间的关系。
有研究显示CYP2C19 681G > A位点基因多态性与氯吡格雷血药浓度及氯吡格雷的疗效有关[9]。
CYP2C19*1/*2和CYP2C19*1/*3由于只有1条有效的CYP2C19等位基因而使CYP2C19酶活性降低[10]，因此CYP2C19*2等位基因携带者比野生型基因携带者更易发生氯吡格雷抵抗[11]。Mega等[1]发现在162名服用氯吡格雷的健康受试者中，约有30%的个体至少携带1个功能缺失等位基因，其血浆氯吡格雷代谢产物浓度较非携带者降低32.4%（P < 0.001），故含有*2或*3等位基因的患者残余血小板聚集率明显高于野生纯合型[12]。而同样有研究不支持CYP2C19基因多态性与氯吡格雷抵抗有关[13]。
本试验对176例行P C I术后患者研究表明，CYP2C19三组不同基因型的患者之间相比，ADP抑制率差异无统计学意义（P > 0.05）。其中28例慢代谢基因组患者的ADP抑制率方差分析所得结果与其他两组相比，差异无统计学意义，但该组大部分患者（89.29%）的ADP抑制率小于50%，ADP诱导下血小板聚集50%为阈值[14]，即ADP抑制率小于50%即对氯吡格雷不敏感，若常规服用氯吡格雷进行抗血小板治疗效果较差。
对纳入研究的数据进一步分析发现，127例首次行PCI术后快代谢基因型的患者与中等代谢基因型的患者相比，ADP抑制率差异无统计学意义，而慢代谢基因型的患者，由于体内CYP2C19酶活性完全丧失，其ADP抑制率明显低于前两组。大量研究证实，肥胖、高血压、糖尿病、高脂血症等作为冠心病危险因素经常与冠心病同时存在，对于多次行PCI术的患者，其合并用药较多，如：地西泮、奥美拉唑、伏立康唑等，这些药物均由CYP2C19酶代谢，可能会对氯吡格雷的代谢产生竞争性抑制，从而影响氯吡格雷的临床疗效[15]。
可见，CYP2C19基因多态性对氯吡格雷抗凝作用的影响在首次行PCI术后患者中较明显。此类患者可根据基因型调整氯吡格雷的剂量，对于携带功能缺陷性CYP2C19变异基因的患者可通过增加氯吡格雷剂量来提高其抗血小板效果[16]，或使用氯吡格雷、阿司匹林、西洛他唑三联药物进行抗血小板治疗。多次行PCI术的患者对于氯吡格雷服用剂量的调整，除对基因型进行检测外还应考虑其他因素（年龄、性别、体质量、并发症）等，以实现临床用药的个体化。
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图1 总DNA电泳图及CYP2C19基因芯片图
A –总DNA,
B – CYP2C19*1/*1，
C – CYP2C19*1/*2，
D – CYP2C19*1/*3，
E – CYP2C19*2/*2，
F – CYP2C19*2/*3
Fig 1 Electrophoretogram of total DNA and gene chip diagram of CYP2C19
A – total DNA,
B – CYP2C19*1/*1,
C – CYP2C19*1/*2,
D – CYP2C19*1/*3,
E – CYP2C19*2/*2,
F – CYP2C19*2/*3
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（收稿日期：2013-05-01 修回日期：2013-08-01）
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撰写要求：资料与方法中应包括患者入选、排除标准、分组及给药方法、疗效评价标准、观察指标、统计学方法等具体内容；结果部分应有较充分的观察指标相关数据；讨论应结合近3 ~ 5年内相关文献，探讨主要的结果数据对临床的指导意义。
图书馆管理系统需求分析报告 1引言 1.1、编写目的 编写本报告的目的是明确软件需求、安排项目规划与进度、组织软件开发与测试，供用户确认系统的功能和性能，并作为软件设计人员的设计依据和使用单位的验收标准。 1.2、项目背景 2.1所建设开发软件系统的名称：图书馆管理系统。 2.2用户：图书馆工作人员及读者。 1.3、定义 图书管理系统是对图书的流量进行准确、及时、快速地管理系统，其管理流程可由数据流程图来描述。数据流程图（DFD）是为描述软件系统中的信息流提供了一个图形方法。箭头代表数据流，方框代表数据的源点或终点，圆框代表数据流的交换，双杠代表数据存储的地方。 2 任务概述 2.1目标 图书管理系统通过计算机技术给图书管理人员和读者借、还书带来便利，减少人力资源的使用和降低管理费用，同时提高信息准确度和可靠性，本系统包括了图书馆管理的一般功能。主要就图书馆的借书和还书模块进行开发。 2.2 用户特点 由于图书馆管理人员和借阅的学生老师都是比较熟悉计算机的群体，因此只需进行简单的培训就可以很熟悉地进行操作。该系统的界面尽量会设计的友好一些，满足大多数人的视觉喜好，所以应该能够很好的投入使用。 2.3假定和约束 系统应该在进行充分的前期准备后开始开发，在开发期间所有的开发人员应该严格按照预先规定的步骤进行，不允许中途有任何疏忽，同时应该及时与图书馆管理人员进行沟通，了解他们的真正想法，尽量满足他们的需要，项目一旦完工，就很难进行改动，所以每一步的进行，都应该根据数据字典等工具进行，严格每一个人员的开发流程。 3需求规定 3.1对功能的规定 经过以上详细的用户调查，在现行业务流程和数据分析的基础上，基本可以确定系统设计必须达到的目标。 图书管理系统必须具备的功能有： （1）新进图书的登记功能 （2）图书的查询修改功能 （3）借阅的登记
氯毗格雷和华法林代谢相关基 因多态性检测及临床 检验通讯第60期 北京积水潭医院检验科主办2017年4月 氯吡格雷和华法林代谢相关基因多态性检测及 临床应用 一、概述 氯吡格雷是心血管疾病中广泛用于抗血小板的药物。多项研究表明，CYP2C佃*2功能缺 失型突变在亚洲人种出现频率约为29%-35%，而CYP2C19*3出现频率约为2%-9%，均高于白种人和
非洲人。FDA建议，临床医生在使用氯吡格雷前应检测患者的CYP2C佃基因型，对已证实的氯吡格雷代谢不良者应考虑增加剂量，或使用其他抗血小板药物。 华法林是一种双香豆素衍生物，是目前临床 上应用最广泛的口服抗凝药物之一，用于预防和治疗深静脉血栓、肺栓塞、心脏瓣膜置换术及房颤导致的血栓形成。华法林治疗窗较窄，很小的剂量都可能导致不良反应的发生，且在不同个体
达到相同作用效果，高低剂量者之间可相差10倍以上。CYP2C9基因多态性对华法林剂量影响较大。VK0RC1是维生素K循环中的关键酶，华法林因抑制该酶而阻断维生素K以辅因子形式参与羧化酶的催化反应，抑制了凝血因子U、 %、区、X 的功能活性，从而产生抗凝作用。 FDA指出：在使用华法林时，建议检测CYP2C9 和VKORC1基因型。 检测方法 Sulfurylase APS+PPi ATP lucirerin oxy Luciferin Luciferase ATP Light nucleotide incorporation light seen as a peak in Pyrvgmm 图1、焦磷酸测序检测原理 本实验室采用PCR-焦磷酸测序法”进行该 项目的检测。本法是由4种酶催化的同一反应体系中的酶级联化学发光反应。实验时，一条生物素标记的测序引物与单链模板DNA退火后，在DNA聚合酶、ATP硫酸化酶、荧光素酶和三磷酸腺苷双磷
氯吡格雷用药指导的基 因检测 公司标准化编码 [QQX96QT-XQQB89Q8-NQQJ6Q8-MQM9N]
氯吡格雷用药指导的基因检测 氯吡格雷是治疗急性冠状动脉综合征和经皮冠状动脉介入术后抗栓的基础药物，但4%~30%患者在治疗期间出现氯吡格雷疗效下降，甚至出现氯吡格雷抵抗。氯吡格雷为前体药，主要依赖于CYP2C19代谢生成活性代谢产物，发挥抗血小板疗效。CYP2C19基因存在多态性，其酶有四种不同的代谢类型：快代谢型(RM，*1/*1)；超快代谢型(UM，*17/*17)；中间代谢型(IM，*1/*2，*1/*3，*17/*2，*17/*3)；慢代谢型(PM，*2/*2，*2/*3，*3/*3)。中国人群中14%为CYP2C19慢代谢型，常规剂量的氯吡格雷在慢代谢型患者中产生的活性代谢物减少，抑制血小板聚集作用下降，形成血栓风险增加；而在超快代谢型患者中产生活性代谢产物增加，抑制血小板聚集作用增强，出血风险增加。2010年美国FDA修改的氯吡格雷说明书中黑框警示：CYP2C19基因型检测结果应作为医生调整治疗策略的参考，对于CYP2C19PM型患者，建议考虑调整治疗方案或治疗策略。此外，ABCB1-3435C>T影响到氯吡格雷在肠道的吸收，突变型(TT型)肠道吸收减少，生物利用度降低，心血管事件发生率明显高于野生型(CC型)。同时携带ABCB1突变基因和CYP2C19突变基因与携带ABCB1和CYP2C19野生型等位基因相比，其心血管事件发生风险比达到。最新研究证实，PON1在氯吡格雷生物转化上起着关键作用。PON1-G576A基因多态性可影响氯吡格雷中间代谢产物2-氧代-氯吡格雷转化为活性硫醇衍生物的能力，从而影响氯吡格雷抗血小板活性。与PON1-576GG型比较，GA型患者半年后出现支架内血栓的风险比为，出现心肌梗死的风险比为，而AA型患者发生的风险比分别为和，携带此等位基因的患者往往存在氯吡格雷抵抗风险。因此，建议在使用氯吡格雷前进行PON1、CYP2C19和ABCB1基因检测，依据患者基因型确定合适给药方案。 该项目收费为1600元，每个患者只需检测1次即可。临床医生可按照相应流程提出检测申请，并采用EDTA抗凝真空采血管（紫色帽头）采集外周静脉血2ml（无需空腹，无论是否用药，随时抽取血标本），检测人员将在2个工作日内出具基因检测报告，并提供个体化给药建议供临床参考。 医院在用的氯吡格雷规格：
一、判断题 1.测试是调试的一个部分（╳） 2.软件测试的目的是尽可能多的找出软件的缺陷。（√） 3.程序中隐藏错误的概率与其已发现的错误数成正比（√） 测试是验收测试的一种。（√） 5.测试人员要坚持原则，缺陷未修复完坚决不予通过。（√） 6.项目立项前测试人员不需要提交任何工件。（╳） 7.单元测试能发现约80%的软件缺陷。（√） 8.测试的目的是发现软件中的错误。（√） 9.代码评审是检查源代码是否达到模块设计的要求。（√） 10.自底向上集成需要测试员编写驱动程序。（√） 11.测试是证明软件正确的方法。（╳） 12.负载测试是验证要检验的系统的能力最高能达到什么程度。（√） 13.测试中应该对有效和无效、期望和不期望的输入都要测试。（√）验收测试是由最终用户来实施的。（√） 14.测试人员要坚持原则，缺陷未修复完坚决不予通过。（√） 黑盒测试也称为结构测试。（╳） 集成测试计划在需求分析阶段末提交。（╳）15.软件测试的目的是尽可能多的找出软件的缺陷。(√) 16.自底向上集成需要测试员编写驱动程序。(√) 17.负载测试是验证要检验的系统的能力最高能达到什么程度。(╳) 18.测试程序仅仅按预期方式运行就行了。(╳) 19.不存在质量很高但可靠性很差的产品。(╳) 20.软件测试员可以对产品说明书进行白盒测试。(╳) 21.静态白盒测试可以找出遗漏之处和问题。(√) 22.总是首先设计白盒测试用例。(╳) 23.可以发布具有配置缺陷的软件产品。(√)24.所有软件必须进行某种程度的兼容性测试。(√) 25.所有软件都有一个用户界面，因此必须测试易用性。(╳) 26.测试组负责软件质量。(╳) 27.按照测试实施组织划分，可将软件测试分为开发方测试、用户测试和第三方测试。(√) 28.好的测试员不懈追求完美。(×) 29.测试程序仅仅按预期方式运行就行了。(×) 30.在没有产品说明书和需求文档的条件下可以进行动态黑盒测试。(√) 31.静态白盒测试可以找出遗漏之处和问题。(√) 32.测试错误提示信息不属于文档测试范围。(×) 33.代码评审是检查源代码是否达到模块设计的要求。(√) 34.总是首先设计黑盒测试用例。(√) 35.软件测试是有风险的行为，并非所有的软件缺陷都能够被修复。（∨） 36.软件质量保证和软件测试是同一层次的概念。（x） 37.程序员兼任测试员可以提高工作效率。（x） 38.在设计测试用例时，应当包括合理的输入条件和不合理的输入条件。（∨） 39.传统测试是在开发的后期才介入，现在测试活动已经扩展到了整个生命周期。（∨）40.传统测试以发现错误为目的，现在测试已经扩展到了错误预防的范畴。∨ 41.软件测试的生命周期包括测试计划、测试设计、测试执行、缺陷跟踪、测试评估。（∨）42.软件生存周期是从软件开始开发到开发结束的整个时期。（x） 43.测试用例的数目越多，测试的效果越好。（x） 44.只要能够达到100％的逻辑覆盖率，就可以保证程序的正确性。（x） 45.单元测试属于动态测试。（∨） 46.验收测试是以最终用户为主的测试。（∨） 47.没有发现错误的测试是没有价值的。（∨） 48.可以把不合格的开发人员安排做测试。（x）
氯吡格雷个体化用药基因检测 通过CYP2C19基因分型，指导氯吡格雷个体化用药，提高药物临床疗效，降低毒副作用。 临床研究证实，CYP2C19*2、*3、*17位点多态性影响氯吡格雷的代谢速率，从而影响药物的疗效。权威机构推荐： 2012年，中国国家食品药品监督管理局（CFDA ）在氯吡格雷说明书中增添了药物基因组学意见， 指出CYP2C19慢代谢情况与氯吡格雷的作用降低相关。 美国FDA 、欧盟药品局（EMA ）、日本药品与医疗器械管理局（PDMA ）、加拿大健康局 （HCSC ）强调CYP2C19慢代谢者使用氯吡格雷的疗效降低，发生副作用的风险增加。 2015年，国家卫计委个体化医学检测技术专家委员会发布《药物代谢酶和药物作用靶点基因检测技术指南（试行）》， 肯定了CYP2C19基因检测在氯吡格雷个体化用药中作用。检测技术：荧光定量PCR 探针法，技术成熟可靠。重复性高：批内及批间重复性均达95%以上。准确度高：探针引物特异性高，准确性达95%以上。 杭州中翰金诺医学检验所 地 址：浙江省杭州市余杭经济开发区兴国路519号电 话：4000 919 220 传真：0571-8902 8159网 址：https://www.doczj.com/doc/ee17363689.html, 邮 箱：info@https://www.doczj.com/doc/ee17363689.html, 注： * 表示用药建议仅供临床医生参考，不作为最终治疗依据，具体药物选择及用法用量请遵医嘱。1. SA Scott, K Sangkuhl, EE Gardner, et al. Clinical Pharmacogenetics Implementation Consortium guidelines for cytochrome P450-2C19 (CYP2C19) genotype and clopidogrel therapy. Clin Pharmacol Ther. 2011,90(2):328-32. 2. Holmes D R, Dehmer G J, Kaul S, et al. Journal of the American College of Cardiology, 2010, 56(4): 321-341. 3. 丁力平, 胡桃红,马会利等. CYP2C19基因分型指导下的支架血栓治疗一例.中国心血管病研.2010,8(12):926-927 4. 4. 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会. 药物代谢酶和药物作用靶点基因检测技术指南(试行)概要[J]. 实用器官移植电子杂志, 2015, 3(5):257-267. 样本要求：EDTA 抗凝外周血 2ml 保存及运输条件：2～8℃低温保存、运输
CYP2C19基因多态性检测 项目简介：CYP2C19是CYP450酶第二亚家族中的重要成员，是人体重要的药物代谢 酶，在肝脏中有很多表达。CYP2C19基因座位于染色体区10q24.2上，由9个外显子构成。CYP2C19具有很多SNP位点，最常见的是CYP2C19*2和CYP2C19*3。CYP2C19*2会导致转录蛋白的剪切突变失活，而CYP2C19*3能构成一个终止子，破坏转录蛋白的活性。据统计，CYP2C19*2和CYP2C19*3两个突变位点能解释几乎100%的东亚人和85%的高加索人种的相关弱代谢遗传缺陷，而其他两种等位基因CYP2C19*4和CYP2C19*5主要在高加索人种中分布。大量证据证实，不同人种在CYP2C19的底物的代谢能力有很大差异；2–5%高加索人是弱代谢者，而13–23%的亚洲人是弱代谢者。这是由于在亚洲人口中CYP2C19*2和CYP2C19*3等位基因的高频率造成的。通过CYP2C19基因检测，判断患者对相关药物的代谢能力，可以指导临床用方案的制定，实现个体化用药治疗。 临床上常用的经由CYP2C19酶代谢的药物： 1、治疗胃酸相关性疾病：如质子泵抑制剂：奥美拉唑（omeprazole）、兰索拉唑（lansoprazole）、泮托拉唑（pantoprazole）、 雷贝拉唑（rabeprazole）、埃索美拉唑 （Esomeprazole）。 2、治疗心血管疾病：Clopidogrel、氯吡格雷、抗凝血药物。 3、抗真菌药物：Voriconazole、伏立康唑、广谱抗真菌药物。 4、神经类药物：①S-美芬妥英mephenytoin为乙内酰脲类抗癫痫药，在体内的羟化代谢主要由单基因CYP2C19编码表达的CYP2C19酶蛋白介导，由羟化酶CYP2C19氧化生成4’-羟基美芬妥英；②地西泮diazepam，一种长效的镇静、安眠药；③丙米嗪imipramine ，抗抑郁药，N-去甲基化和2-羟化；④苯巴比妥phenobarbital，传统的抗癫痫药；⑤抗心律失常药,抗抑郁药,抗精神病药，β受体阻断剂,抗高血压药和止痛剂。 5、抗肿瘤药：环磷酰胺。 6、抗结核药：利福平。 7、孕激素：黄体酮。 8、抗疟疾药：氯胍。 9、HIV蛋白酶抑制剂。 10、抗移植排斥药物：他克莫司、兰索拉唑。 CYP2C19基因多态性检测标本采集及出报告时间：病人抽静脉血2ml（用 EDTA-K2抗凝）送检验科分子生物诊断室，4个工作日出报告。 电话：8801063 手机：余宗涛65327 高波 64444 CYP2C19基因多态性检测临床意义： 1、基因剂量效应。 2、CYP2C19基因多态性，导致了个体间酶活性的多样性。等位基因的突变使酶活性降低，对药物代谢的能力随着等位基因的不同组合而呈现出一定的规律性，表现出正常基因纯合子>正常基因与突变基因杂合子> 突变基因纯合子或杂合子的变化趋势。 3、对于不同代谢能力的个体，运用不同的药物剂量等策略是非常必要的，可达到更好的治疗效果。 4、根据CYP2C19基因型给予个性化的药物和剂量可以降低副作用发生率-安全性；提高治
1定义： 单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP），主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。它是人类可遗传的变异中最常见的一种。占所有已知多态性的90%以上。SNP在人类基因组中广泛存在，平均每500～1000个碱基对中就有1个，估计其总数可达300万个甚至更多。SNP所表现的多态性只涉及到单个碱基的变异，这种变异可由单个碱基的转换（transition）或颠换（transversion）所引起，也可由碱基的插入或缺失所致。但通常所说的SNP并不包括后两种情况。单核苷酸多态性（SNP）是指在基因组上单个核苷酸的变异，包括置换、颠换、缺失和插入。所谓转换是指同型碱基之间的转换,如嘌呤与嘌呤( G2A) 、嘧啶与嘧啶( T2C) 间的替换;所谓颠换是指发生在嘌呤与嘧啶(A2T、A2C、C2G、G2T) 之间的替换。从理论上来看每一个SNP 位点都可以有4 种不同的变异形式，但实际上发生的只有两种，即转换和颠换，二者之比为2：1。SNP 在CG序列上出现最为频繁，而且多是C转换为T ，原因是CG中的C 常为甲基化的，自发地脱氨后即成为胸腺嘧啶。一般而言，SNP 是指变异频率大于1 %的单核苷酸变异。在人类基因组中大概每1000 个碱基就有一个SNP ，人类基因组上的SNP 总量大概是3 ×106个。依据排列组合原理,SNP 一共可以有6种替换情况,即A/ G、A/ T、A/ C、C/ G、C/ T 和G/ T ,但事实上,转换的发生频率占多数,而且是C2T 转换为主,其原因是Cp G的C 是甲基化的,容易自发脱氨基形成胸腺嘧啶T , Cp G 也因此变为突变热点。理论
精品文档 精品文档脱氧核糖核酸（DNA）位点测定报告单 NO. 姓名：性别：年龄：身高：体重：民族： 科室：病历号： 病床号： 送检医生： 送检日期： 临床诊断: DNA序列测定结果：（氯吡格雷用药相关基因） 序号检测基因检测位点 检测结果 1 CYP2C19*2 681G>A（rs4244285）GA 2 CYP2C19*3 636G>A（rs4986893）GG CYP2C19*1/*2突变杂合型3 CYP2C19*17 806C>T (rs12248560) CC 4 PON1 576 G > A (rs662) GA：PON1突变纯合型 检测结论：该患者PON1为突变杂合型此基因型氯吡格雷活性代谢物水平减弱，血小板活性较少被抑制。CPY2C19酶活性表达弱，因此，从理论上认为该患者使用常规剂量(75mg/d)的氯吡格雷有一定抵抗风险，应关注血小板等指标，临床可根据实际情况调整方案。 个体化用药建议： 1)目前可使用氯吡格雷标准方案进行抗血小板治疗，但使用氯吡格雷血栓风险中等，特别是半年后引发 支架血栓与心肌梗死风险。应持续关注抗凝效果，如抵抗应及时调整方案，换用其他抗血小板药物。 2)如发生抵抗，建议治疗卒中等脑血管狭窄等可将氯吡格雷换为西洛他唑或双嘧达莫阿司匹林复合剂 型，如心血管狭窄可换用替格瑞洛或使用三抗治疗； 3)或上调氯吡格雷剂量至150mg/d持续1至3个月后根据血小板情况调整方案。 4)如患者同型半胱氨酸水平较高，建议同时补充叶酸,VB6,VB12等药物控制水平。治疗期间应密切关注 患者有无皮肤黏膜及消化道等部位出血的发生，若出现则应调整给药方案，并加用保护胃黏膜药物或PPI类药物，该患者如继续使用氯吡格雷，应尽量避免同时使用奥美拉唑等PPI类药物，可选择如雷贝拉唑等不经CYP2C19代谢的药物； 5)调整给药方案后，应检测血小板聚集率或血栓弹力图以评价临床疗效； 本结论仅根据基因检测结果和循证医学证据得出，具体用药方案，尚需结合患者血小板反应等具体情况综合判断。 说明：氯吡格雷为前体药，主要依赖于CYP2C19代谢生成活性代谢产物，发挥抗血小板疗效。CYP2C19基因存在多态性，其酶有四种不同的代谢类型：快代谢型(RM，*1/*1)；超快代谢型(UM，*1/*17，*17/*17)；中间代谢型(IM，*1/*2，*1/*3，*17/*2，*17/*3)；慢代谢型(PM，*2/*2，*2/*3，*3/*3)。常规剂量的氯吡格雷在慢代谢型患者中产生的活性代谢物减少，抑制血小板聚集作用下降，形成血栓风险增加；在超快代谢型患者中产生活性代谢产物增加，抑制血小板聚集作用增强，出血风险增加。2010年美国FDA修改的
脱氧核糖核酸（DNA）位点测定报告单 NO. 姓名：性别：年龄： 身高：体重：民族： 科室：病历号：病床号： 送检医生：送检日期：临床诊断: DNA序列测定结果：（氯吡格雷用药相关基因） 序号检测基因检测位点检测结果 1 CYP2C19* 2 681G>A（rs4244285）GA 2 CYP2C19* 3 636G>A（rs4986893）GG CYP2C19*1/*2突变杂合型 3 CYP2C19*17 806C>T (rs12248560) CC 4 PON1 576 G > A (rs662) GA：PON1突变纯合型 检测结论：该患者PON1为突变杂合型此基因型氯吡格雷活性代谢物水平减弱，血小板活性较少被抑制。CPY2C19酶活性表达弱，因此，从理论上认为该患者使用常规剂量(75mg/d)的氯吡格雷有一定抵抗风险，应关注血小板等指标，临床可根据实际情况调整方案。 个体化用药建议： 1)目前可使用氯吡格雷标准方案进行抗血小板治疗，但使用氯吡格雷血栓风险中等，特别是半年后引发 支架血栓与心肌梗死风险。应持续关注抗凝效果，如抵抗应及时调整方案，换用其他抗血小板药物。 2)如发生抵抗，建议治疗卒中等脑血管狭窄等可将氯吡格雷换为西洛他唑或双嘧达莫阿司匹林复合剂 型，如心血管狭窄可换用替格瑞洛或使用三抗治疗； 3)或上调氯吡格雷剂量至150mg/d持续1至3个月后根据血小板情况调整方案。 4)如患者同型半胱氨酸水平较高，建议同时补充叶酸,VB6,VB12等药物控制水平。治疗期间应密切关注 患者有无皮肤黏膜及消化道等部位出血的发生，若出现则应调整给药方案，并加用保护胃黏膜药物或PPI类药物，该患者如继续使用氯吡格雷，应尽量避免同时使用奥美拉唑等PPI类药物，可选择如雷贝拉唑等不经CYP2C19代谢的药物； 5)调整给药方案后，应检测血小板聚集率或血栓弹力图以评价临床疗效； 本结论仅根据基因检测结果和循证医学证据得出，具体用药方案，尚需结合患者血小板反应等具体情况综合判断。 说明：氯吡格雷为前体药，主要依赖于CYP2C19代谢生成活性代谢产物，发挥抗血小板疗效。CYP2C19基因存在多态性，其酶有四种不同的代谢类型：快代谢型(RM，*1/*1)；超快代谢型(UM，*1/*17，*17/*17)；中间代谢型(IM，*1/*2，*1/*3，*17/*2，*17/*3)；慢代谢型(PM，*2/*2，*2/*3，*3/*3)。常规剂量的氯吡格雷在慢代谢型患者中产生的活性代谢物减少，抑制血小板聚集作用下降，形成血栓风险增加；在超快代谢型患者中产生活性代谢产物增加，抑制血小板聚集作用增强，出血风险增加。2010年美国FDA修改的氯吡格雷说明书中黑框警示：CYP2C19基因型检测结果应作为医生调整治疗策略的参考。此外，ABCB1-3435C>T为氯吡格雷第二独立风险因素，突变型(TT型)肠道吸收减少，心血管事件发生率明显高于野生型(CC型)。最新研究证实，PON1在氯吡格雷生物转化上起着关键作用，PON1-576G>A基因多态性可影响PON1活性表达，是氯吡格雷疗效重要预测因子。与野生型(GG型)比较，GA型和AA型氯吡格雷抵抗风险增加，其半年后发生支架内血栓风险亦明显增加。
氯吡格雷（Clopidogrel），属于噻吩吡啶类抗血小板药物，第二代ADP受体拮抗剂。氯吡格雷为无活性的药物前体，需经肝细胞内细胞色素P450酶系活化，其中约85%被酯化为无活性的代谢产物经肠道代谢，仅有约15%氯吡格雷被活化生成具有活性的代谢产物发挥其抗血小板药理作用。 主要机制：为选择性的、不可逆的抑制二磷酸腺苷（ADP）与血小板受体P2Y12的结合及继发ADP介导的糖蛋白GPIIIb/IIIa复合物的活化从而抑制血小板聚集。火化后的氯吡格雷主要是与血小板P2Y12受体结合，阻断其与ADP结合位点，从而持久的抑制继发的腺苷酸环化酶的激活，抑制血小板的活性。 氯吡格雷反应多样性的定义：氯吡格雷在临床上作为抗血小板制剂其疗效使大多数患者明显受益，然而，仍有一部分患者不可避免的出现并发症，研究发现，不同患者对氯吡格雷的反应呈现明显的个体差异，这种对氯吡格雷呈现低应答（Low responder）或无应答（Clopidogrel nonresponse）的现象称之为氯吡格雷抵抗（Clopidogrel resistance，CR）。目前学者们将临床上患者对氯吡格雷呈现不同应答状态的现象称之为氯吡格雷反应多样性（Clopidogrel Response Diversity，CRD）。 氯吡格雷反应多样性的定义：？ CRD的相关因素：CYP2C19酶基因多态性、糖尿病、体重指数等因素有关。脂溶性他汀类药物包括阿托伐他汀、辛伐他汀等和除泮托拉唑外的质子泵抑制剂可通过竞争性抑制影响氯吡格雷活化、增加氯吡格雷应答和无应答几率。 CYP2C19酶作为细胞色素P450药物代谢酶家族中的重要成员，在不同种族和人群中具有显著差异。有研究指出，CYP2C19酶基因多态性与该酶活性密切相关。不同研究对氯吡格雷翻一个多样性产生的机制看法不同，目前大多数学者认为导致氯吡格雷反应多样性的原因有以下几个方面： 1、C YP2C19基因多态性与氯吡格雷反应多样性 所谓基因多态性(polymorphism )，是指在一个生物群体编码的基因序列中，存在由一个或多个不连续等位基因(allele)发生突变。这种多态性是导致编码的蛋白质（尤其是酶）生物活性产生差异的重要原因。细胞色素P450 酶系中多种代谢酶具有基因多态性，CYP2C19为其中之一。 CYP2C19酶主要在肝细胞微粒体中编码生成，主要存在于肝细胞中，具有明显的器官特异性。CYP2C19基因序列位于人类第10号常染色体上，整个蛋白质分子由490个氨基酸组成，分子量约55933，其中全部顺序包括9个外显子和8个内含子，序列已清楚，具有明显的分
氯吡格雷是一种前体药物，本身无抗血小板作用，需要经过细胞色素P450将其转化为活性代谢产物才能实现其血小板抑制效应。部分患者在长期服用氯吡格雷后，血小板活性未得到有效控制导致严重支架内血栓形成、再发心肌梗死等不良心血管事件发生，临床上称这种现象为氯吡格雷抵抗。CYP2C19是氯吡格雷活性代谢产物生成过程中的主要酶，而CYP2C19基因多态性是导致氯吡格雷抵抗的最重要的因素[1]。 2010 年3 月, 美国食品药品监督管理局(FDA) 宣布氯吡格雷抵抗的“黑框警告”，提醒应用氯吡格雷后出现心血管不良事件与CYP2C19 功能缺失的等位基因有关。 CYP2C19 不同位点的等位基因对氯吡格雷的代谢的作用强度不同, 在各等位基因中,*1 为正常功能等位基因；*2 和*3 为功能缺陷型等位基因（其在亚洲人群中突变频率分别为30％～50％和5％～10％）；*17 是功能增强等位基因（其在我国人群中的突变频率为1.2％～3％），携带CYP2C19*2 和*3 等位基因者为CYP2C19 慢代谢型，此类人群氯吡格雷体内活化速率降低、活性代谢产物减少、抗血小板活性降低。Meta 分析的结果表明，在服用氯吡格雷的患者中，携带1～2 个CYP2C19 功能缺陷型等位基因的患者发生不良临床事件的危险性可能会增加55~76％[2]。
建议（1）基因多态性所致血小板反应性差异对个体临床结果的影响尚不能肯定，不推荐常规进行CYP2C19基因型检测。（2）这些个体化用药建议主要用于行PCI 的ACS 患者。目前还没有数据支持CYP2C19基因型检测用于其他场合的用药指导[3]。 常用经由CYP2C19代谢的药物： ①质子泵抑制剂：奥美拉唑、兰索拉唑、泮托拉唑、雷贝拉唑 ②抗抑郁药：氟西汀、西酞普兰、艾司西酞普兰 ③抗癫痫药：丙戊酸钠、苯妥英钠、苯巴比妥、地西泮 ④其他：伏立康唑、利福平 [1]张丽娜,王浩然,丁虎,等.氯吡格雷吸收和代谢通路相关基因变异与临床个体化用药实践.分子诊断与治疗杂志,2013,5(5):289-294 [2]刘俊,朱艳虹,栾佳杰,等.基因型检测在氯吡格雷个体化抗血小板治疗中的应用价值.中国药房,2014,25(12):1097-1098. [3]钟诗龙,韩雅玲,陈纪言,等.氯吡格雷抗血小板治疗个体化用药基因型检测指南解读.中国实用内科杂志,2015,35(1):38-41
一、选择题。 1．软件测试的目的是（）。 A)表明软件的正确性B) 评价软件质量 C) 尽可能发现软件中的错误D) 判定软件是否合格 2、导致软件缺陷的最大原因是：（） A．软件需求说明书B．设计方案 C．编码D．维护 3．关于白盒测试与黑盒测试的最主要区别，正确的是（）。 A) 白盒测试侧重于程序结构，黑盒测试侧重于功能 B) 白盒测试可以使用测试工具，黑盒测试不能使用工具 C) 白盒测试需要程序参与，黑盒测试不需要 D) 黑盒测试比白盒测试应用更广泛 4、（）是一种关注变量定义赋值点（语句）和引用或使用这些值的点（语句）的结构性测试，主要用作路径测试的真实性检查。 A、基本路径测试 B、逻辑覆盖 C、决策表 D、数据流测试 5．软件测试类型按开发阶段划分( ) 。 A）需要测试﹑单元测试﹑集成测试 B）单元测试﹑集成测试﹑确认测试﹑系统测试﹑验收测试 C）单元测试﹑集成测试﹑确认测试 D）调试﹑单元测试﹑功能测试 6．测试的关键问题是（）。 A）如何组织软件评审B）如何选择测试用例 C）如何验证程序的正确性D）如何采用综合策略 7．下列几种逻辑覆盖标准中，查错能力最强的是（）。 A）语句覆盖 B）判定覆盖 C）条件覆盖 D）条件组合覆盖 8．软件测试用例主要由输入数据和（）两部分组成。 A）测试计划B）测试规则C）预期输出结果D）以往测试记录分析
9. 单元测试主要针对模块的几个基本特征进行测试，该阶段不能完成的测试是（）。 A) 系统功能B) 局部数据结构 C) 重要的执行路径D) 错误处理 10. 增量式集成测试有3种方式：自顶向下增量测试方法，（）和混合增量测试方式。A）自中向下增量测试方法B）自底向上增量测试方法 C）多次性测试D）维护 11．不属于白盒测试的技术是( ) A) 路径覆盖B) 判定覆盖 C)边界值分析D) 条件覆盖 12．下列模型哪个是软件测试过程模型( ) A) W模型B) 漠布模型 C) L模型D) G模型 13．下面( ) 方法能够有效地检测输入条件的各种组合可能引起的错误。 A) 等价类划分B) 边界值分析 C) 错误推测D) 因果图 14．在Junit中，testXXX()方法就是一个测试用例，测试方法是（）。 A）private void testXXX()B）public void testXXX() C）public float testXXX()D）public int testXXX() 15．软件测试不需要了解软件设计的( ) A) 功能B) 内部结构C) 处理过程D) 条件 16．下面说法正确的是( ) A) 经过测试没有发现错误说明程序正确 B) 测试的目标是为了证明程序没有错误 C) 成功的测试是发现了迄今尚未发现的错误的测试 D) 成功的测试是没有发现错误的测试 17. 在测试具有层次结构的大型软件时，有一种方法是从下层模块开始，由下到上进行测试。此时，有必要用一些模块替代尚未测试过的上层模块。（） A) 桩B) 模拟器C) 原型D) 驱动 18．软件测试按照测试层次可以分为( ) A．黑盒测试、白盒测试 B. 功能性测试和结构性测试 C．单元测试、集成测试和系统测试
2008年4月软件产品测试 一、填空题（每题1分，共15分） 1.分支覆盖准则要求每个分支至少执行________________次。 2.软件危机产生的原因有_______________________和软件开发的方法与技术两个方面。 3.白盒测试与黑盒测试都是_______________测试。 4.边界值分析法是____________________测试用例设计方法。 5.软件测试能做好的三件事是证明，监测和_________________。 6.软件测试的目的是________________________________________________________。 7.软件测试的过程模型有V，W和____________等三种。 8.确认测试又称为__________________。 9.等价类的边界即是___________________的值。 10.文档测试是不可缺少的，它有助于提高软件的_____________________。 11.回归测试的基本思想是使______________________中的每一个用例得到执行。 12.测试组的主要职责是_________________软件程序中的错误。 13.WinRunner是__________________测试的工具。 14.软件测试的工作量占总工作量的__________________。 15.负载测试是一种_____________测试。 二、单项选择题（每小题1分，共10分） 1．性能测试的基本目标是（） A、发现错误 B、提高软件性能 C、纠正错误 D、改正程序结构 2．软件测试与改正错误可以在软件生命周期的（） A、规划阶段 B、任何阶段 C、设计阶段 D、维护阶段 3．在发现缺陷并改正之后开展的软件测试是（） A、回归测试 B、性能测试 C、增长测试 D、功能测试 4．完整性测试的主要目的是（） A、界面是否完整 B、检查文档 C、发现错误 D、与竞争产品比较 5、白盒测试是（）阶段的组成部分 A、规划 B、设计 C、维护 D、编码 6、在为数字输入设计测试用例时，总会用0作为一个用例，该用例是（）用例 A、负载测试 B、等价类 C、错误猜测 D竞争条件 7．用户界面测试一般用（）策略 A、白盒测试 B、黑盒测试 C、灰盒测试 D ABC都可 8．维护阶段的测试大部分是（）的工作 A、功能测试与性能测试 B、功能测试与系统测试 C、集成测试与系统测试 D、性能测试与集成测试 9．文档是软件产品的一部分，有效文档的益处有（） A、改善可用性 B、减少客户支持支出 C、提高可维护性 D、ABC都可 10．测试计划的制定应在（）之后。 A、规划评审 B、需求确定 C、设计完成 D、编码完成 三、名词解释题（每小题3分，共15分） 1．黑盒测试
环磷酰胺对雄性生殖系统的毒副作用的综述 02(医)七任怡2002207221 摘要：通过对1989年至2006年关于环磷酰胺对雄性生殖系统毒副作用资料的查阅，从环磷酰胺对生精细胞，干细胞因子，精原干细胞，精子的发生、形态，数量，以及睾丸染色体的毒副作用等方面分类进行综述，和大家共同探讨一下有关环磷酰胺的生殖毒副作用。 关键词：环磷酰胺生殖系统毒副作用 环磷酰胺（CTX）是一种烷化剂，1958年首次人工合成，主要用于肿瘤免疫，对多种肿瘤有明显的抑制作用，对增殖细胞群的各期均有杀伤作用。进入人体后肝脏或肿瘤组织内存在的过量磷酰胺酶或磷酸酶水解，释放出氮芥基而杀伤抑制肿瘤细胞生长的作用。主要的毒性反应有恶心、食欲减退、脱发、白细胞减少、中毒性膀胱炎、肝功能损伤。我通过对资料文献的查阅发现他对雄性生殖系统有一定的毒副作用，不可忽视，故查阅1989年至今文献现做综述如下： 1对不同发育时期睾丸生精细胞毒性损伤 岳丽琴等将环磷酰胺分别作用于处于不同发育时期的1周龄、3周龄、5周龄、9周龄雄性大鼠，应用HE染色法、TUNEI法和免疫组化法检测急性期生精细胞凋亡，bcl2蛋白表达，细胞增殖能力变化及远期组织学损害结果用药后24h，除1周龄组外，各实验组生精细胞显著凋亡(P<0．()1)，bcl2蛋白表达显著下降(P
软件健壮性测试种类 一、安全测试 安全测试检查系统对非法侵入的防范能力。安全测试期间，测试人员假扮非法入侵者，采用各种办法试图突破防线。 安全测试 - 相关举例 例如，①想方设法截取或破译口令；②专门定做软件破坏系统的保护机制；③故意导致系统失败，企图趁恢复之机非法进入；④试图通过浏览非保密数据，推导所需信息，等等。理论上讲，只要有足够的时间和资源，没有不可进入的系统。因此系统安全设计的准则是，使非法侵入的代价超过被保护信息的价值。此时非法侵入者已无利可图。 二、恢复测试，英文是Recovery testing。 恢复测试是测试一个系统从如下灾难中能否很好地恢复，如遇到系统崩溃、硬件损坏或其他灾难性问题。恢复测试指通过人为的让软件（或者硬件）出现故障来检测系统是否能正确的恢复，通常关注恢复所需的时间以及恢复的程度。 恢复测试主要检查系统的容错能力。当系统出错时，能否在指定时间间隔内修正错误并重新启动系统。恢复测试首先要采用各种办法强迫系统失败，然后验证系统是否能尽快恢复。对于自动恢复需验证重新初始化（reinitialization）、检查点(checkpointing mechanisms)、数据恢复(data recovery)和重新启动(restart)等机制的正确性；对于人工干预的恢复系统，还需估测平均修复时间，确定其是否在可接受的范围内。 三、性能测试 性能测试图线 性能测试是通过自动化的测试工具模拟多种正常、峰值以及异常负载条件来对系统的各项性能指标进行测试。负载测试和压力测试都属于性能测试，两者可以结合进行。通过负载测试，确定在各种工作负载下系统的性能，目标是测试当负载逐渐增加时，系统各项性能指标的变化情况。压力测试是通过确定一个系统的瓶颈或者不能接收的性能点，来获得系统能提供的最大服务级别的测试。 制定目标和分析系统 选择测试度量的方法 学习的相关技术和工具 制定评估标准
兼容性测试 一、兼容性测试概述，包括：定义，目的和意义，配置测试和兼容性测试区别，兼容性测试环境 二、兼容性测试方法，包括：硬件兼容性测试，软件兼容性测试，数据兼容性测试 三、兼容性测试工具，包括：浏览器兼容性测试工具 一、兼容性测试概述 1，定义 兼容性测试将验证软件与其所依赖的环境的依赖程度，包括对硬件平台的依赖程度和对软件平台依赖程度，即是通常说的软件的可移植性。简单来说，待测试项目在同一操作系统平台的不同版本、不同的操作系统平台上是否能很好地运行。待测试项目是否能与相关的其他软件和平共处，会不会有相互不良的影响。待测试项目是否能在指定的硬件环境中正常运行，软件和硬件之间能否发挥很好的效率工作，会不会影响或导致系统的崩溃。待测试项目是否能在不同的网络环境中正常运行。 2，目的和意义 兼容性测试主要目的是为了兼容第三方软件，确保第三方软件能正常运行，用户不受影响。由于各类应用软件和系统软件已经到了多如牛毛的地步，而且可以预见还将继续以爆炸式的速度增长，软件之间的数据共享和系统资源分享变成为一个问题，这也是兼容性测试的意义所在。虽然兼容性测试无法做到完全的质量保证，但对于一个项目来讲，兼容性测试是必不可少的一个步骤。 3，配置测试和兼容性测试区别 配置测试和兼容性测试是软件测试中容易混淆的两个概念，他们对软件开发都比较重要，但他们测试和关注的核心内容是有区别的。配置测试的目的是保证软件在其相关的硬件上能够正常运行，而兼容性测试主要是测试软件能否与不同的软件正确协作。 配置测试的核心内容是使用各种硬件来测试软件的运行情况，测试对象是硬件，一般包括：一是软件在不同的主机平台上的运行情况；二是软件在不同的组件上的运行情况；三是不同的外设和不同的接口下的运行情况；最后还有某些可选择的不同软硬件。 兼容性测试是用于检查软件是否能够与其他软件正确协作，测试对象是软件，一般包括：一是测试软件是否能在不同的操作系统平台上兼容，或测试软件是否能在同一操作系统平台的不同版本上兼容；二是软件本身能否向后和向前兼容；三是测试软件能否与其它相关的软件兼容，包括一些用户常见软件；四是数据兼容性测试，主要是指数据能否共享。 总之，我们可以简单的理解：配置测试的对象是硬件，兼容性测试的对象是软件。 4，兼容性测试环境 测试中的硬件环境指进行测试所必需的服务器、客户端、网络链接设备，以及打印机、扫描仪等辅助硬件设备所构成的环境。软件环境则指被测软件运行所需的操作系统、数据库、中间件、浏览器及与被测软件共存的其他应用软件等构成的环境，我们可以通过向硬件厂商
[10]Illouz S,Nakamura T,Webb M,et al1Comparison of University of Wisconsin and ET-Kyoto preservation solutions for t he cryopreservation of primary human hepatocytes1Transplant Proc,2008,40(5):1706～17091 [11]Colaco C,Sen S,Thangavelu M,et al1Extraordinary stability of enzymes dried in trehalose:simplified molecular biolo2 gy1Biotechnology(N Y),1992,10(9):1007～10111 [12]Mat suo T1Trehalose protect s corneal epit helial cells from deat h by drying1Br J Opht halmol,2001,85(5):610～6121 [13]Mat suo T,Tsuchida Y,Morimoto N1Trehalose eye drops in t he treat ment of dry eye syndrome1Opht halmology,2002,109(11): 2024～20291 [14]Mat suo T1Trehalose versus hyaluronan or cellulose in eyedrops for t he treat ment of dry eye1Jpn J Opht halmol,2004,48(4):321～3271 [15]胡宗利,夏玉先,陈国平,等1海藻糖的生产制备及其应用前景 1中国生物工程杂志,2004,24(4):44～481 [16]Takanobu H1Novel functions and applications of trehalose1Pure Appl Chem,2002,74(7):1263～12691 细胞色素CYP2C19基因多态性与药物相互作用 张平平,王明波,张鉴1,李军1 (山东万杰医学院,山东淄博255213;11山东大学附属省立医院临床药理中心,山东济南250012) 摘要:C YP2C19酶是一种重要的药物代谢酶,参与多种药物的体内代谢。本文综述了C YP2C19酶的基因多态性及临床应用方面的研究进展,讨论经C YP2C19代谢的药物在联合用药时药物之间的相互作用及可能出现的临床后果,为临床合理用药提供参考依据。 关键词:C YP2C19 代谢 抑制 诱导 药物相互作用 中图分类号:R968 文献标识码:A 文章编号:1672-7738(2009)06-0352-04 The gene polymorphism of CYP2C19and drug interaction ZHAN G Ping2ping,WAN G Ming2bo,ZHAN G Jian1,L I J un1 (Wanjie Medical College of Shangdong,Zibo255213;11The center of Clinical Pharmacology,Shandong Provincial Hospital Affiliated to Shandong University,Ji′nan250012) ABSTRACT:C YP2C19enzyme is an important drug-metabolizing enzyme involved in the metabolism of a variety of drugs in vivo1This article introduced the progress of the gene polymorphism of CYP2C19enzyme and its application in clinical1The interaction and possible clinical consequences of the drugs metabolized by C YP2C19in combination were also illustrated which provided the reference for the clinical rational administration1 KE Y WOR DS:C YP2C19;metabolism;inhibition;induction;drug interactions 细胞色素P450是由一组结构和功能相关的血红蛋白超家族基因编码的同工酶,是药物在体内的主要代谢酶系。在C YP450超家族中,C YP2是最大的家族,有15个亚家族,而C YP2C是其中最大的亚家族,该亚家族中C YP2C9、2C19与药物代谢关系密切。 1 C YP2C19与药物代谢 现已证实C YP2C19酶主要参与药物在体内的羟化反应。C YP2C19酶活性存在显著的个体差异和种族差异,表现为遗传多态性,导致酶变异,酶活性下降,代谢药物的能力下降,从而使多种药物在体内的代谢产生个体差异,导致血药浓度的个体差异,血药浓度升高,故常引起与血药浓度相关的药物不良反应。同时服用经C YP2C19代谢的药物,可能发生相互作用,从而影响临床治疗效果。 2 C YP2C19的基因突变与表型研究进展 C YP2C19酶又称为S-美芬妥英羟化酶,定位于10号染色体上(10q2411-10q2413),有9个外显子。现已发现其至少存在18种等位基因,较常见的2个等位基因多态性位点为C YP2C19m1和C YP2C19m2。其外显子5发生的单个碱基突变(G→A)称为M1突变,突变的基因称为m1等位基因。其外显子4发生的单个碱基突变(G→A)称为M2突变,突变的基因称为m2等位基因。这些突变导致酶活性下降,代谢能力减低,易引起药物不良反应。另外在研究白种人的C YP2C19基因时,发现了一例较罕见的新突变,即外显子9发生了单碱基突变(C→T),不过该突变频率极低(0125%),其是否会改变个体的酶蛋白含量,有待于进一步研究。 C YP2C19酶具遗传多态性,代谢速度快者为强代谢者(extensive metabolism EM),代谢速度慢者为弱代谢者(poor