阿托品与乙酰胆碱对豚鼠离体肠平滑肌的作用 及PA2、PD2测定 年级：2006年药学专业 学生：苏鹤桂 学号：2006038068 【实验目的】 通过离体器官实验，观察药物对M胆碱受体的激动作用和竞争性拮抗作用，加深理解受体的亲和力、内在活性概念以及受体动力学参数K D、pD2、Emax及pA2的计算和意义。 【实验意义】 1 建立方法研究药物拮抗作用 2 观察药物的拮抗性作用 【实验原理】 M胆碱受体激动药卡巴胆碱能剂量依赖性地激动肠管平滑肌上的M胆碱胆碱受体，产生平滑肌收缩效应，M胆碱受体阻断药阿托品可竞争性拮抗卡巴胆碱对M胆碱受体的激动作用。通过累积剂量效应曲线，以及曲线直线化方法，可求得受体动力学常用参数。 实验材料 乙酰胆碱（mol/L）：10-6、10-5、10-4、10-3、10-2 阿托品（mol/L）：3 10-7 台氏液配制1000ml台氏液含：NaCl 8.0g、10% KCl 2.0ml(0.2g)、10% MgSO4.7H2O 2.6ml(0.26g)、5% NaH2PO4 .2 H2O 1.3ml(0.065g)、NaHCO3 1.0g、1M CaCL2 1.8ml（0.2g）、葡萄糖 1.0g。 离体器官浴池及恒温装置、PowerLab系统、混合气体（95％O2＋5％CO2）、负荷500 mg、加液器、培养皿、缝针、线、眼科镊子、剪刀。 【实验步骤】 1．离体肠肌的制备
猛击豚鼠头部至昏，立即剖开腹腔，自幽门下5cm剪取空肠和回肠上段，迅速置于台氏液液中。小心剪去肠系膜，用吸管吸取台氏液液缓慢冲洗肠内容物；将空肠段分割成2 cm的小段备用，然后用缝针在肠段两端各穿一根线，作为固定肠肌之用。 2．实验装置 将制成的标本一端固定于通气钩上，另一端连接于肌力换能器并接入PowerLab系统的桥式放大器上，浴池内放20ml 台氏液液，加500mg负荷，恒温37±1?C，浴池内持续通入95％O2与5％CO2的混合气体。 3．累积剂量－效应曲线的制作 实验装置完毕以后，打开PowerLab系统，按“操作指南”设置参数： （1）选择channel 1 （2）记录速度10 /s （3）Bridge Amplifer中“rang”选择20 mv，“Low Pass”选择50 Hz （4）调零“zero” 描记肠肌收缩曲线，待收缩基线平稳后，按下列（表6-2）次序在浴池中加入预先配好的不同分子浓度的乙酰胆碱。 表6-2 累积剂量法加药顺序
GC法测定丁香罗勒油中丁香酚的含量 摘要：目的建立用GC法测定丁香罗勒油中丁香酚的含量。方法OV-1弹性石英毛细管色谱柱（30m×0.32mm×0.25μm）为固定相，FID检测器，进样口温度230℃，检测器温度250℃，采用程序升温，柱温100℃，保持1min，然后以15℃/min的速率升至220℃保持8min；载气为氮气，以正十八烷为内标，按内标法计算丁香酚含量。结果丁香酚进样量在0.5～4.5 mg /ml 范围内其峰面积与进样量呈良好线性关系。y=0.1311x-0.054，（r=0.9994）；加样回收率为100.96%，RSD为0.74%（n=9）。结论该方法灵敏、简便，结果准确可靠，可作为控制丁香罗勒油质量的方法。 关键词：GC法；丁香罗勒油；丁香酚 丁香罗勒油为唇形科植物丁香罗勒Ocimum gratissimum L. 的全草经水蒸气蒸馏提取的挥发油[1]。 参照《中国药典》2010年版一部丁香罗勒油标准，考虑到生产和检验实际，我们在方法中使用了毛细管柱，测定法为内标法。丁香罗勒油中成分复杂，成分有三十多种以上[2]，使用了毛细管柱相对填充柱更能有效分离丁香酚，更具专属性，有效缩短了检验时间。 经实验证明该毛细管柱内标法的峰分离度、理论塔板数都符合《中国药典》2010年版要求，且优于（药典）填充柱法，本毛细管柱内标法的准确度、重复性、精密度、线性均符合要求；两方法相比：采用毛细管柱方法提高了准确度和工作效率，分析时间短、专属性强、色谱峰形良好。 1 仪器与材料 Agilent GC1790F 气相色谱仪，氢离子火焰检测器（FID）；sartorius BP211D 电子天平，丁香酚对照品批号：110725-200610，购于中国药品生物制品检定所；正己烷为分析纯（广州市化学试剂厂），正十八烷内标物[东京化成工业株式会社（TCI）]，丁香罗勒油（佛山市南海中南药化厂提供，批号：060701、060702、060703）。 2 方法与结果 2.1 色谱条件与系统适用性 气相色谱条件：30m×0.32mm×0.25μm OV-1石英毛细管柱；程序升温：起始温度100℃，保持1min，15℃/min升温至220℃，保持8min，FID检测器温度250℃，进样器温度230℃。理论板数按丁香酚峰计算应不低于30000（见图1）。 图1 丁香罗勒油空白溶剂、系统适用性、对照品GC图谱、供试品GC图谱
农杆菌的活化培养及介导的遗传转化 一、目的要求 通过实验掌握农杆菌的活化与培养技术与农杆菌介导获得目的基因的转化植株。 二、基本原理 农杆菌共培养法最早是由Marton 等（1979 年）以原生质体为受体建立起来的，经过一系列改进后，目前已经成为最常用的转化方法。共培养法是利用Ti 质粒系统，将农杆菌与植物原生质体、悬浮培养细胞、叶盘、睫段等共同培养的一种转化方法。 三、材料及方法 1.含目的基因共整合载体或双元载体的根癌农杆菌。 2.植物幼苗。 （一）细菌培养液直接浸染法 操作︰ （1）无菌受体材料的准备︰叶片、睫段、胚轴、子叶等均可做受体材料，有两种来源。取自无菌试管苗。 取自田间或温室栽培植株︰叶片、睫尖、睫段用蒸馏水冲冼1 遍后，70％乙醇洗45 秒，0.1％升汞消毒6～8 分钟，无菌水冲洗三遍，无菌滤纸吸干水分。 （2）受体材料预培养︰将无菌叶片剪成0.5cm×0.5cm 的小块或用6mm 打孔器凿成圆盘，无菌胚轴、睫切成约0.8～1cm 长的切段，接种在愈伤组织诱导或分化培养基上进行预培养，注意叶片近轴面向下︰预培养2～3 天，材料切口处刚刚开始膨大时即可进行侵染。 （3）农杆菌培养︰从平板上挑取单菌落，接种到20mL 附加相应抗生素的细菌培养液体培养基（pH7.0）中，在恒温摇床上，于27℃, 180r/ min 培养至OD600 为0.6～0.8。 取OD600 为0.6～0.8 的菌液，按1％～2％的比例，转入新配制的无抗生素的细菌培养液体培养基中，可在与上相同的条件下培养6 小时左右，OD600 为0.2～0.5 时即可用于转化；或同时加入100～500μmol/的AS； （4）侵染︰于超净工作台上，将菌液倒入无菌小培养皿中（可根据材料对菌液的敏感情况进行不同倍数的稀释）。从培养瓶中取出预培养过的外植体，放入菌液中，浸泡适当时间（一般1～5 分钟，不同材料处理时间不同）。取出外植体置于无菌滤纸上吸去附着的菌液。 （5）共培养︰将侵染过的外植体接种在愈伤组织诱导或分化培养基上（烟草为MS 十 IAA0.5mg/L + BA2.0mg/L) ，在28℃暗培养条件下共培养2～4 天（光对某些植物的转化有抑制作用，故需暗培养，共培养时间因不同植物而异）。
丁香油的用法丁香油的作用与功效 相信很多人应该都见过丁香花吧，那么对于丁香油大家是否都认识呢?丁香油的使用方法大家都知道吗?今天就带着我们去了解关于丁香油的知识吧，让我们去了解除了生活中的丁香花之外的丁香油吧。 1、食用丁香油 食用的丁香油是可以用来进行烹调的，可以进行直接的食用。 2、药用丁香油 可内服外擦，用法请遵医嘱。 3、香料用丁香精油 用于香熏疗法，浓度很高，食用可致命，请勿尝试!严格来说丁香油又可分为丁香叶油、丁香茎油、丁香花蕾油。在香料工业中，一般说丁香油大都为丁香叶油。 【】
丁香为桃金娘科植物丁香(Syzygium aromaticum.异名Eugenia aromaticum.或 Eugenia caryophyllata.)的一种干燥的花蕾(公丁香)经过蒸馏之后所得到的挥发性的油，在古代的时候多为母丁香所榨出的油。 【植物形态】 丁香树是一种常绿乔木，高达10-20米，叶椭圆形，单叶大，对生，革质;花为红色，聚伞花序，花蕾初起白色，后转为绿色，当长到1.5-2厘米长时转为红色，这时就可以收获，花蕾入药称公丁香。萼托长，花萼和花瓣4;果实为长椭圆形，名为母丁香。具体见右图。 【产地】 丁香原产印度尼西亚，目前出产丁香的地区主要有印度尼西亚、桑给巴尔和马达加斯加岛，印度、巴基斯坦和斯里兰卡也出产丁香，xx年，印度尼西亚生产的丁香约占世界总产量的80%。我国的海南、广东、广西、云南南部也有少量种植. 【药材】
为淡黄或无色得澄明油状物，有丁香的特殊芳香气。露置空气中或贮存日久，则渐浓厚而色变棕黄。不溶于水，易溶于醇、醚或冰醋酸中。比重为1.038～1.060。 丁香油为淡黄色或者是无色的澄明的油状型的物质，具有丁香特有的特殊的气味。露置在空气中或者是存储的时间长了，就会渐渐的浓厚而颜色变为棕黄。这种物质不溶于水，易溶于醇、冰醋酸以及醚中，比重为1.038～1.060。 内服：以少许滴入汤剂中或和酒坎。外用：涂擦患处。 提取方法确定(挥发油提取装置与普通蒸馏装置比较)： 实验思路：按批件方法提取，存在以下问题：(1)蒸馏得的油水混合物分离困难，必须继续借助分液漏斗分离;(2)蒸馏过程中，水沸腾冷凝到收集器中，提取溶剂水不断减少，造成提取不完全。故选用用挥发油提取装置重复回收使用水和普通蒸馏分次加溶剂方法提取。 2.1.1试验方案： 方法一：取药材40g，加纯化水240ml，浸泡2h，用挥发油测定装置提取7h，收集油层，减压蒸馏，T:80℃，将收集的挥发油静置24h。
农杆菌介导转化法的概述 自从1983年转基因植物诞生以来，植物基因工程成为发展最快、应用潜力最大的生物技术领域之一。植物转基因技术是指把从动物、植物或微生物中分离到的目的基因，通过各种方法转移到植物的基因组中，使之稳定遗传并赋予植物新的农艺性状，如抗虫、抗病、抗逆、高产、优质等。[1] 目前，应用于植物转基因较多的方法有基因枪轰击法和农杆菌介导法。由于基因枪轰击的随机性，容易出现突变、丢失和引起基因沉默等不利于外源基因在宿主植物的稳定表达的缺点，而农杆菌介导法是一种天然的植物遗传转化系统,外源基因在转基因植物中的拷贝数低、遗传稳定，是最常用的转基因技术[2]。农杆菌介导法起初只被用于双子叶植物中，近年来，农杆菌介导转化法在一些单子叶植物（尤其是水稻）中也得到了广泛应用。本文对农杆菌介导转化法进行综述。 1 关于农杆菌 农杆菌[3-5]是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌，它能在自然条件下趋化性的感染大多数双子叶植物的受伤部位，并诱导产生冠瘿瘤或发状根。与植物基因转化有关的有根瘤农杆菌和发根农杆菌这两种类型。 1.1根癌农杆菌 根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)含有Ti质粒，能诱导被侵染的植物细胞形成肿瘤，即诱发冠瘿瘤；Ti质粒是农杆菌染色体外的遗传物质，为双链共价闭合环状DNA分子，大小约200-250kb。 依据Ti质粒诱导的植物细胞产生的冠瘿碱的种类不同，根癌农杆菌可分为4种类型：章鱼碱型（Octopine）、胭脂碱型（Nopaline）、农杆碱型（Agropine）和琥珀碱型（Succinamopine）。 原始的Ti质粒根据其功能的不同可分为4个区： 1.1.1T-DNA区(Transfer—DNA region)：不同来源的菌株，T-DNA的长度在12~24 kb，它是在农杆菌侵染细胞时，从Ti质粒上切割下来转移到植物基因组中的一段DNA，其携带的基因与肿瘤的形成有关，但与T-DNA本身的转移与整合无关．T-DNA上最重要的是T-DNA区两端的边界各为25 bp的重复序列．其中14 bp 是完全保守的，分10 bp(CAGGAATATAT)和4 bp(GTAA)不连续的2组．左右2个
乙酰胆碱（ACh）为胆碱能神经递质。其性质不稳定，极易被体内AChE水解，故毒性较小。因作用广泛，选择性差，主要用于动物实验。 【药理作用与机制】 1.心血管系统 （1）血管舒张：静脉注射小剂量本药可使全身血管舒张而造成血压短暂下降，并伴有反射性心率加快。其舒血管作用主要机制是由于激动血管内皮细胞M3亚型，导致内皮依赖性舒张因子（EDRF）即一氧化氮（NO）释放，从而引起邻近平滑肌细胞松弛。 （2）减慢心率：亦称负性频率作用。ACh能使窦房结舒张期自动除极延缓、复极化电流增加，从而延长动作电位达阈值的时间，导致心率减慢。 （3）减慢房室结和浦肯野纤维传导：即为负性传导作用。ACh可延长房室结和浦肯野纤维的不应期，使其传导减慢。 （4）减弱心肌收缩力：即为负性肌力作用。心室的胆碱能神经支配较少，因此，尽管ACh对心室肌有一定抑制作用，但它对心房收缩的抑制作用大于心室。ACh除了对心室肌的直接抑制作用以外，还能间接通过减弱支配心室的交感神经活动，抑制心室收缩力。这是由于迷走神经末梢与交感神经末梢紧密相邻，迷走神经末梢所释放的ACh可激动交感神经末梢突触前膜M胆碱受体，抑制交感神经末梢NA释放，从而使心室收缩力减弱。 （5）缩短心房不应期：ACh不影响心房肌的传导速度，但可使心房不应期及动作电位时程缩短（即为迷走神经作用）。 2.胃肠道 乙酰胆碱可明显兴奋胃肠道，增加其收缩幅度和张力，也可增加胃肠平滑肌蠕动，并可促进胃肠分泌，产生恶心、暧气、呕吐、腹痛及排便等症状。 3.泌尿道 乙酰胆碱可增强泌尿道平滑肌的蠕动和膀胱逼尿肌的收缩，使膀胱最大自主排空压力增加，降低膀胱容积，同时舒张膀胱三角区和外括约肌，导致膀胱排空。 4.其他 乙酰胆碱可增加多种腺体的分泌、收缩支气管、兴奋颈动脉窦和主动脉弓的化学感受器。当ACh局部滴眼时，可致瞳孔收缩，调节于近视。此外，ACh尚可作用于自主神经节和骨骼肌的神经肌肉接头的胆碱受体，使交感、副交感神经节兴奋，肌肉收缩。由于ACh不易进人中枢，故尽管中枢神经系统有胆碱受体存在，外周给药很少产生中枢作用。
农杆菌介导转化法的概 述 集团公司文件内部编码：（TTT-UUTT-MMYB-URTTY-ITTLTY-
学年第学期 2014级硕士生生物化学期末论文任课老师： 开课学院： 课程名称： 学院： 专业： 学号： 姓名： 2015年6月20日
农杆菌介导转化法的概述 摘要：自从1983年转基因植物诞生以来，植物基因工程成为发展最快、应用潜力最大的生物技术领域之一。植物转基因技术是指把从动物、植物或微生物中分离到的目的基因，通过各种方法转移到植物的基因组中，使之稳定遗传并赋予植物新的农艺性状，如抗虫、抗病、抗逆、高产、优质等。[1]? 目前，应用于植物转基因较多的方法有基因枪轰击法和农杆菌介导法。由于基因枪轰击的随机性，容易出现突变、丢失和引起基因沉默等不利于外源基因在宿主植物的稳定表达的缺点，而农杆菌介导法是一种天然的植物遗传转化系统,外源基因在转基因植物中的拷贝数低、遗传稳定，是最常用的转基因技术[2]。农杆菌介导法起初只被用于双子叶植物中，近年来，农杆菌介导转化法在一些单子 叶植物（尤其是水稻）中也得到了广泛应用。本文对农杆菌介导转化法进行综述。 关键词：农杆菌转化方法转化效率 1?关于农杆菌 农杆菌[3-5]是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌，它能在自然条件下趋化性的感染大多数双子叶植物的受伤部位，并诱导产生冠瘿瘤或发状根。与植物基因转化有关的有根瘤农杆菌和发根农杆菌这两种类型。 1.1??根癌农杆菌
依据Ti质粒诱导的植物细胞产生的冠瘿碱的种类不同，根癌农杆菌可分为4种类型：章鱼碱型（Octopine）、胭脂碱型（Nopaline）、农杆碱型（Agropine）和琥珀碱型（Succinamopine）。? 原始的Ti质粒根据其功能的不同可分为4个区： —DNA?region)：不同来源的菌株，T-DNA的长度在12~24?kb，它是在农杆菌侵染细胞时，从Ti质粒上切割下来转移到植物基因组中的一段DNA，其携带的基因与肿瘤的形成有关，但与T-DNA本身的转移与整合无关．T-DNA上最重要的是T-DNA区两端的边界各为25?bp的重复序列．其中14?bp是完全保守的，分10?bp(CAGGAATATAT)和4?bp(GTAA)不连续的2组．左右2个边界(LB和RB)是T—DNA转移所必需的，只要其存在，T-DNA可以将携带的任何基因转移并整合到植物基因组中，转移的方向是从右向左，T-DNA的右边界在T-DNA的整合中对于靶DNA位点的识别具有重要作用?，因此，尤以右边界更为重要。 位于T-DNA以外的1个30-40kb的区域内，该区段编码的基因虽然并不整合进植物基因组中，但对T-DNA的转移和整合非常重要。这些基因也称为Ti质粒编码毒性基因(vir)。目前，对章鱼碱型农杆菌Ti质粒 pTi15955和胭脂碱型农杆菌Ti质粒pTiC58的vir区进行了全序列分析，在章鱼碱型Ti质粒的vir区发现了8个操纵子，分别为virA-vjrH，共包括23个基因(virA，virB1-virB11，virC1，virC2，virD1-virD4，virE1，virE2，virF，virG，virH)．而胭脂碱型Ti质粒的vir 区不含vjrF和virH操纵子，它含有另一个基因tzs?，也有学者认为有大约35个vir基因成簇排布于vir区。
丁香花蕾泡水喝的功效 丁香花泡水是比较常见的一种饮品，而且很多女生都希望通过丁香花泡水让自己的皮肤有所改善。丁香花泡水不仅可以改善女生的内分泌，而且对于肌肤也是有促进作用，不仅可以消除肌肤表面的痘痘，而且对皮肤的色泽也有一定的调节作用，让皮肤变白。那么，丁香花蕾泡水喝的功效有哪些？ 1、止咳化痰的功效 丁香叶桂花茶具有止咳化痰之功。丁香叶桂花茶可以养阴润肺，可以舒缓喉咙，改善多痰、咳嗽症状，对感冒引起的咽喉肿痛及咳嗽有一定的辅助治疗作用。 2、暖胃的功效 丁香叶桂花茶有一定的暖胃作用。在丁香茶里面加入桂花，能够起到很好的温中散寒，暖胃止痛的作用。对于胃寒胃痛的患者可适当饮用丁香叶桂花茶来保健。丁香叶桂花茶也非常适合老年人饮用。 3、润肠通便的作用 丁香叶桂花茶还能润肠通便的作用。丁香叶桂花茶可以减轻胀气等肠胃不适，对便秘患者有一定的缓解作用。 4、除口臭 丁香叶桂花茶可用于除口臭。桂花气味芳香宜人，而茶叶中所含有的茶多酚，可以溶解脂肪，消除口中的异味。有口臭的人群常喝丁香叶桂花茶可以让口气更清新。
丁香桂花泡水喝的功效 5、美容的作用 丁香叶桂花茶具有美白肌肤、排解体内毒素、润肠通便的作用，因此，女性朋友常喝丁香叶桂花茶有美容养颜的作用。 6、提神的作用 丁香叶桂花茶具有提神的功效。丁香叶桂花茶浓郁的花香能够舒缓紧张的情绪，饮用丁香叶桂花茶可以平衡神经系统，达到提神醒脑的作用。所以当人们感到很疲惫精神不好及压力过大的时候可以喝杯丁香叶桂花茶来缓解调理。 7、清热的作用 丁香叶桂花茶还具有清热的功效。饮用丁香叶桂花茶可以清热消毒，润肠通便。丁香叶桂花茶对口腔炎，牙周炎，声音沙哑等都有一定的疗效。 丁香桂花泡水喝的功效 丁香叶桂花茶的作用和功效很多，营养价值很高，是养生保健的不错的茶饮品。长期饮用让人神清气爽，充满活力。
农杆菌介导水稻遗传转化相关的讨论 羧苄青霉素的作用 羧苄青霉素在农杆菌介导法对水稻进行遗传转化的过程中起到抑制农杆菌生长的作用。根据前人的研究经验，浓度为250mg/L时候抑制效果最好且不会影响愈伤组织的再生。本实验过程中我们发现，经过经验用量的羧苄青霉素抑制处理，转移至筛选培养基后一周左右即可见到少量愈伤农杆菌复发，有的甚至在第二次筛选时仍然生长出农杆菌，并未达到很好的抑制农杆菌生长的目的。这有可能是在长期的实验过程和进化过程中，农杆菌对苏氨苄青霉素产生了耐受性。因此，在遵循不影响愈伤组织生长的原则下，可以适当增加羧苄青霉素的用量，或者与头孢霉素配合使用，可以达到很好的抑制效果。 潮霉素作为筛选剂的最适宜浓度 本实验采用潮霉素基因作为筛选标记，经过长期经验积累，发现潮霉素浓度梯度25mg/L,35mg/L和45mg/L进行多轮筛选，假阳性最低，筛选效果最好，为最适筛选浓度。 各个阶段不同添加物的作用 水稻遗传转化过程中的碳源有多种选择，主要有葡糖糖，麦芽糖和蔗糖，糖类除作能源外,还可以作为渗透调节剂对愈伤组织的的质量起重要作用。根据转化受体的不同，碳源的种类和浓度也有区别。本实验室研究中发现，粳稻作为转化受体时，蔗糖为最佳的碳源，而在籼稻的遗传转化中，麦芽糖和蔗糖配合使用，效果最好。 植物激素是愈伤组织诱导和绿苗分化的关键性因素。2 ,4-D 的质量浓度至关重要,对于愈伤组织诱导来说,低浓度及高浓度的 2 ,4-D 都不适宜水稻成熟胚愈伤组织的诱导。在籼稻的遗传转化中，2 ,4 -D与6 -BA 配合使用更有利于愈伤组织的诱导及分化。 潮霉素和除草剂均可以作为筛选剂。适宜的筛选浓度有利有抗性愈伤组织的生长，潮霉素浓度过高，阳性愈伤组织也有可能被筛死，浓度过低，又会有较高的假阳性出现。实验证明，只用潮霉素筛选所得的抗性愈伤和先用潮霉素筛选后用除草剂筛选所得的抗性愈伤，在分化再生过程中有显著差异。前者分化出芽所
乙酰胆碱的应用 乙酰胆碱（ACh）为胆碱能神经递质。其性质不稳定，极易被体内乙酰胆碱酯酶（AChE）水解，且其作用广泛，选择性差，故无临床实用价值；但由于其为内源性神经递质，分布较广，具有非常重要的生理功能，因而必须熟悉该递质。 药理作用 （一）心血管系统 ACh对心血管系统主要产生以下作用： 1.扩张血管：静注小剂量本品可由于全身血管扩张而造成血压短暂下降，并伴有 反射性心率加快。在用过阿托品后，大剂量ACh静注则可见血压升高，此乃由于药物促进肾上腺髓质儿茶酚胺释放和交感神经节兴奋所致。
2.减慢心率：此作用亦称负性频率。ACh能使窦房结舒张期自动除极延缓、复极化电流增加，使动作电位达阈值的时间延长，导致心率减慢。 3.减慢房室结和普肯野纤维传导：即为负性传导。ACh可延长房室结和普肯野纤维的不应期，使其传导减慢。当使用强心苷使迷走神经张力增高或全身给药法使用大剂量胆碱受体激动药时所出现的完全性心脏传导阻滞常与房室结传导明显抑制有关。 4.减弱心肌收缩力：即为负性肌力。一般认为胆碱能神经主要分布于窦房结、房室结、普肯耶纤维和心房，而心室较少有胆碱能神经支配。故认为ACh对心房收缩的抑制作用大于心室。但对心室肌仍有一定抑制作用。由于迷走神经末梢与交感神经末梢紧密相邻，迷走神经末梢所释放的ACh可激动交感神经末梢突触前M胆碱受体， 抑制交感神经末梢去甲肾上腺素释放，使心室收缩力减弱。 5.缩短心房不应期：ACh不影响心房肌的传导速度，但可使心房不应期及动作电位时程缩短（即为迷走神经作用）。 （二）胃肠道
ACh可明显兴奋胃肠道，使其收缩幅度、张力增加，胃、肠平滑肌蠕动增加，并可促进胃、肠分泌，导致恶心、嗳气、呕吐、腹痛及排便等症状。 （三）泌尿道 ACh可使泌尿道平滑肌蠕动增加，膀胱逼尿肌收缩，使膀胱自主排空压力增加，降低膀胱容积，同时膀胱三角区和外括约肌舒张，导致膀胱排空。 （四）其他 ACh可使泪腺、气管和支气管腺体、唾液腺、消化道腺体和汗腺分泌增加，使支气管收缩，颈动脉和主动脉体化学受体兴奋。当ACh 局部滴眼时，可致瞳孔收缩，调节于近视。ACh尚可作用于自主神经节和骨骼肌的神经肌肉接头的胆碱受体，引起交感、副交感神经节兴奋，肌肉收缩。由于ACh不易进入中枢，故尽管中枢神经系统有胆碱受体存在，但外周给药很少产生中枢作用。
农杆菌介导法转基因杨树 摘要： 杨树品种已发展为一种植物转化和再生系统。叶植，从稳定发芽培养的一个杨树杂交NC - 5339（银白杨标本），被共培养用于农杆菌遗传转化关于一个烟草的看护培养。致瘤的和无防备的农杆菌株隐藏包含一个双元载体，其中包含两个新霉素磷酸转移酶II(NPT II')和细菌5莽草酸3-磷酸合酶（EPSP）（AROA）嵌合基因融合。没有开发芽，叶外植体时，双元缴械拉力的根癌农杆菌菌株共培养。然而，转化的植物，没有野生型的T-DNA获得使用农杆菌株原癌基因的二进制。NPT II '酶的活性检测，Southern印迹法分析和免疫学检测证实了遗传转化成功细菌EPSP合酶Western印迹。这是首次报道成功收回转化植株森林树，也是第一个记录的插入和重要农艺性状的外源基因的表达成木本植物物种。 关键词：白杨；转化；农杆菌 前言 基因工程树种的能力将是特别有用的遗传改良，如大型成熟的植物并长期有性世代倍(Nelson and Haissig 1984; Sederoff and Ledig 1985)。森林树种的应用重组DNA技术的一个先决条件是发展的基因转移系统。方法，例如显微注射(Crossway et al.1986)和直接DNA摄入(Paszkowski et al. 1985; Fromm et al. 1986) 已被用于外源基因引入到草本作物物种，但是，最有效的基因转移的方法，利用自然感染冠瘿病的机制造成的有机体，农杆菌(Bevan et al. 1983 ; Fraley et al. 1983 ; Herrera-Estralla, 1983). 。根癌农杆菌的自然感染周期期间，细菌的T-DNA 整合到宿主植物的染色体，从而导致肿瘤对植物的生产（奇尔顿等人，1980）。可以删除和替换而不影响根癌农杆菌的T-DNA转移到植物（DeGreve等，1982）的能力，由异源基因的肿瘤诱导基因。这些修改后的根癌农杆菌菌株的原生质体，悬浮细胞，外植体组织的共培养，可导致转化植物缺乏致癌基因性状的隔离。因此，我们着手开发一个混合型杨树无性系，银白杨x grandidentata的（NC - 5339 ）作为载体的农杆菌转化体系。 有许多特征能使杨树NC-5339得到理想的转化研究首先，杨树是一个重要的全球森林树种。这是一个快速增长的落叶阔叶树，栽培主要用于纸浆生产。对
第31卷第2期 唐山师范学院学报 2009年3月 Vol. 31 No. 2 Journal of Tangshan Teachers College Mar. 2009 ────────── 收稿日期：2008-12-23 作者简介：郑素玲（1962-），女，河北唐山人，唐山师范学院生物系副教授，研究方向为动物生理。 -75- 乙酰胆碱对心肌和平滑肌的生理作用机制 郑素玲1，王淑元2，王亚亚1 （1.唐山师范学院 生命科学系，河北 唐山 063000；2.唐山市第三十八中学，河北 唐山 063000） 摘 要：乙酰胆碱（acetylcholine. Ach ）对心肌和胃肠道平滑肌的生理效应差异显著，Ach 引起心肌产生负性的变时、变力、变传导反应，却使胃肠平滑肌兴奋收缩；心肌和胃肠道平滑肌分布着多种Ach 受体，心肌的主要功能受体为M 2，胃肠平滑肌的主要功能受体为M 3。 关键词：乙酰胆碱：毒蕈碱：M 受体：G 蛋白 中图分类号： R 962 文献标识码：A 文章编号：1009-9115(2009)02-0075-02 Physiological Mechanism of Acetylcholine on Myocardial and Smooth Muscle ZHENG Su-ling 1, WANG Shu-yuan 2, WANG Ya-ya 1 (1. Department of Life Science, Tangshan Teachers College, Tangshan Hebei 063000, China; 2. No.38 Middle School of Tangshan, Tangshan Hebei 063000, China) Abstract: Significantly different physiological effects of acetylcholine on cardiac and gastrointestinal smooth muscle were found. Acetylcholine caused negative inotropic, chronotropic, dromotropic response in myocardial acetylcholine, while casused excitation and contraction in gastrointestinal smooth muscle. A variety of M-receptors distributed in myocardial and gastrointestinal smooth muscle. The major functional receptor was M 2 receptor in myocardium and M 3 receptor in gastrointestinal smooth muscle. Key words: acetylcholine; Muscarine; M-receptor; G-protein 1921年Otto Loewi 发表了经典的双心实验，第一个清楚地证明了迷走神经释放的化学物质对突触传递的化学介导作用[1]。这种化学物质后来被分离，并且是第一个被定义的神经递质——乙酰胆碱（acetylcholine. Ach ）。迷走神经兴奋，末梢释放的Ach 作用到所支配的效应器官心脏和胃肠道时，可使心脏发生负性变时、负性变力和负性变传导的作用即抑制作用；而在胃肠道，Ach 却导致胃肠平滑肌的兴奋与收缩。为什么同是乙酰胆碱，作用到不同的效应器官引起的生理反应有如此大的差异？ 近年来随着分子生物学技术的进步，很多学者在多种动物的心肌和平滑肌细胞膜上发现了不同种类的Ach 受体，它们同属于G 蛋白偶联受体家族[2]。 正是由于分布在心肌和平滑肌细胞膜上Ach 受体种类的不同，导致了迷走神经兴奋后，末梢释放的Ach 引起的生理效应差异显著，即出现了心肌活动被抑制，平滑肌却兴奋收缩的现象。 1 M 受体的种类 Ach 是胆碱能神经系统的递质，与Ach 结合的受体称为 乙酰胆碱受体（Ach-R ）。依据受体结构和对药物反应的不同，Ach 受体分为两大类：毒蕈碱型Ach 受体（M 受体），烟碱型Ach 受体（N 受体）。 M 受体主要分布在副交感神经节后纤维所支配的效应器细胞，如心脏、胃肠平滑肌、瞳孔括约肌、消化腺等。目前M 受体家族已较明确地按药理分型为M 1，M 2，M 3，M 4等4种受体，或按分子生物学分为m 1，m 2，m 3，m 4，m 5等5种受体，其中M 1和m 1被认为是同一种物质，M 2和m 2被认为是同一种物质，M 3和m 3被认为是同一种物质[1]；m 4的基因产物也与M 4一致。m 5尚未找到与之相对应的药理学分型[3]。 哺乳动物M 受体的亚型可多种并存，功能上以某种亚型为主，其他亚型起一定的辅助作用。 1.1 心肌中的 M 受体 长期以来，M 2受体一直被认为是哺乳动物心肌M 受体的唯一功能性亚型[4]，用于调节心率和心脏的收缩力，控制动作电位。最近的研究表明，心肌细胞上，还存在多种M 受体亚型，在小鸡心肌细胞中发现了M 2，M 3，M 4亚型的
温白丸的功效与作用 温白丸，作为传统中药方剂在我国应用的历史已很悠久。我国很多的药物学著作中都将其列为上品，且记述了温白丸的神奇功效。我们一起来看一下。 【处方】 紫菀22克吴茱萸22克菖蒲15克柴胡15克厚朴15克（炙）桔梗15克皂角22克（去皮、籽，炙）乌头75克（熬）茯苓 15克桂心15克干姜15克黄连15克蜀椒15克（汗）巴豆7.5克（熬）人参15克 【制法】 上十五味，合捣下筛，加白蜜和匀，更捣二千杵，为丸如梧桐子大。 【功能主治】 温里祛寒，消症除癖。治心腹积聚、症癖。 【用法用量】 一服2丸，不知，渐增至5丸，以知为度。
【摘录】 《外台秘要》卷十二引崔氏方 【处方】 半夏60克（为末，生姜汁和作饼，曝干）白术30克丁香7.5克 【制法】 上三味，捣罗为末，用生姜汁煮面糊为丸，如梧桐子大。 【功能主治】 治脾胃虚寒，宿食不消，痰饮留滞，小儿久泻，脾虚不食，食即泻下，米谷不化。 【用法用量】 每服20丸，空腹时煎生姜汤送下；如腹痛并呕逆，食后服。小儿每服3～5丸。 【摘录】 《圣济总录》卷四十四 【处方】
天麻（生）15克白僵蚕（炮）白附子（生）干蝎（去毒）天南星（锉，汤浸七次，焙）各7.5克 【制法】 上药同研为末，汤浸寒食面和丸，如绿豆大。 【功能主治】 治小儿脾虚，泄泻瘦弱，及因吐泻或久病后而成慢惊，身冷瘈疭者。 【用法用量】 再于寒食面内养七日取出。每次服5～7丸，加至20～30丸，空腹时煎生姜米饮送下。 【摘录】 《小儿药证直诀》卷下 从上面的介绍中我们可以看出温白丸为传统中药方剂。应用历史悠久，影响和普及范围甚广。足可见它的药用价值和正确性。
农杆菌转化法原理 This manuscript was revised on November 28, 2020
农杆菌转化法原理： 农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌，它能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物的受伤部位(受伤处的细胞会分泌大量酚类化合物,从而使农杆菌移向这些细胞)，并诱导产生冠瘿瘤或发状根。 根癌农杆菌和发根农杆菌中细胞中分别含有Ti质粒和Ri质粒，其上有一段T-DNA，农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后，可将T-DNA插入到植物基因组中,并且可以通过减速分裂稳定的遗传给后代，这一特性成为农杆菌介导法植物转基因的理论基础。 人们将目的基因插入到经过改造的T-DNA区，借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合，然后通过细胞和组织培养技术，再生出转基因植株。农杆菌介导法起初只被用于双子叶植物中，近年来，农杆菌介导转化在一些单子叶植物（尤其是水稻）中也得到了广泛应用。 农杆菌转化植物细胞涉及一系列复杂的反应，主要包括：①受伤的植物细胞为修复创伤部位，释放一些糖类、酚类等信号分子。②在信号分子的诱导下，农杆菌向受伤组织集中，并吸附在细胞表面。③转移DNA上的毒粒基因被激活并表达，同时形成转移DNA的中间体。④转移DNA进入植物细胞，并整合到植物细胞基因组中。 方法：（根据不同受体环境基因要求而不同） 1．农杆菌准备 2．外植体的准备（愈伤组织、悬浮细胞系、幼嫩茎段或叶片）; 3．用 MS-AS液体培养基稀释原菌液15倍（1.5ml / 20ml）或离心后稀释3倍; 4．外植体与菌液共培养20 分钟; 5．放置在带滤纸的培养皿上（注意充分吸干多余的菌液）; 6．将外植体接种到MS-AS固体诱导培养基，培养2－3天 ; 7．移至含卡那霉素（Kan）300mg/L和羧苄青霉素（Cb 300mg/L）的固体筛选培养基上进行Kan抗性愈伤组织的筛选; 8．隔20天，进行第二次筛选； 9．抗性愈伤组织在固体筛选培养基上分化成苗； 10 在生根培养基上生根，获得完整的再分化植株。
实验三根癌农杆菌介导的植物遗传转化 一实验目的 了解植物遗传转化的方法和理论 掌握根癌农杆菌介导的遗传转化技术 二原理 植物遗传转化技术是指通过物理的，化学的或生物学的方法，将外源的基因导入受体植物细胞中获得再生植株的转基因技术。自1983转基因植物问世以来，至今不到20年时间里，植物转基因技术发展迅速，除了占指导地位，运用最为广泛的农杆菌介导法，还发展了10多种转基因方法，如物理方面的基因枪法，电激法，显微注射法，超声波法，激光微束法，炭化硅纤维介导法，电泳法等；化学方面PEG介导转化，脂质体介导转化；生物学方面的种质系统法如花粉介导法，花粉管通道法等。 农杆菌介导法 土壤农杆菌（Agrobacterium）是一种革兰氏阳性菌，有两个种与植物转基因有关，即根癌农杆菌（Agrobacterium Tumefaciens）和发根农杆菌（Agrobacterium Rhizogenes）.它们在自然状态下具有趋化性地感染大多数双子叶植物的受伤部位，并诱导产生冠缨瘤或发状根，在离体条件下，可以在不加任何生长素的培养基中持续生长，研究表明根癌农杆菌和发根农杆菌细胞中分别含有Ti 和Ri质粒,上面有一段T-DNA区，可以通过一系列过程进入植物细胞并将这一段T-DN插入到植物基因组中，这是农杆菌侵染植物后产生冠缨瘤或发状根的根本原因，因此农杆菌是一种天然的植物遗传转化体系，人们可将所构建的目的基因插入到去除了致瘤基因的Ti(Ri)质粒的T-DNA区，借助农杆菌侵染受体植物细胞后T-DNA向植物基因组的高频转移和整合特性，实现目的基因对受体植物细胞的转化，然后通过植物细胞合和组织培养技术，利用植物细胞的全能性获得转基因再生植株。农杆菌介导法转基因技术的关键是T-DNA整合受体植物基因组的过程，这一过程依赖与Ti质粒上的T-DNA区，和Vir区各种基因的表达以及一系列蛋白质和核酸的相互作用。简略地说。其过程是：植物细胞在受伤后细胞壁破裂，分泌高浓度的创伤诱导分子，它们是一些酚类化合物，如乙酰丁香酮（acetosyringone,AS）和羟基乙酰丁香酮（hydroxy- acetosyringone,OH-As）农杆菌对这类物质具有趋化性，首先在植物细胞表面发生贴壁，继而植物创伤分子诱导农杆菌Vir区各种基因的激活和表达。首先是VirA和virG基因的活化，磷酸化的virG蛋白激活一系列vir基因的表达，导致T-DNA被剪切，加工，形成T-链蛋白复合体（T-复合体），通过农杆菌和植物细胞的细胞膜，细胞壁进入植胞内，T-复合体上的核靶向序列可引导T-DNA整合到植物基因组。 三实验材料 烟草KRK26叶片，农杆菌菌株EHA105，质粒的T-DNA含目的基因GFP，卡那霉素抗性基因为选择标记基因，结构如下图所示: LB Bt nos3 MCS nos3 nptII nos5 RB
生物技术进展 2011年第1卷第4期260 265 Current Biotechnology ISSN 2095-櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅殯 殯 殯 殯 2341 进展评述 Reviews 收稿日期：2011-08-30；接受日期：2011-10-11基金项目：国家自然科学基因项目（31070139）资助。 作者简介：姚冉，硕士研究生，研究方向为遗传学。*通讯作者：张志芳，研究员，博士，博士生导师，主要从事基因工程研究。E-mail ：zhangzf@mail．caas．net．cn 农杆菌介导的植物遗传转化研究进展 姚 冉1，2，石美丽1，潘沈元1，沈桂芳2，张志芳 2*1．徐州师范大学生命科学学院，江苏徐州2211162．中国农业科学院生物技术研究所，北京100081摘 要：农杆菌介导的转基因方法是目前植物遗传转化的重要方法之一。本文从农杆菌转化原理、菌株比较及载体发 展入手， 系统讨论了植物转化受体对转化效率的影响，同时分别综述了农杆菌介导转化技术在双子叶和单子叶植物转化应用中的最新进展。 关键词：农杆菌；遗传转化；进展 DOI ：10．3969/j．issn．2095-2341．2011．04．06 Progress on Agrobacterium tumefaciens -mediated Plant Transformation YAO Ran 1，2 ，SHI Mei-li 1，PAN Shen-yuan 1，SHEN Gui-fang 2，ZHANG Zhi-fang 2* 1．School of Life Science ，Xuzhou Normal University ，Jiangsu Xuzhou 221116，China 2．Biotechnology Research Institute ，Chinese Academy of Agricultural Sciences ，Beijing 100081，China Abstract ：In current ，Agrobacterium -mediated gene transferring is one of major methods used in genetic transformation of plants．This paper systematically reviewed the effect on plant transformation efficiency based on the introduction of the principle of this transformation ，comparison among different kinds of Agrobacterium strains and the development to transformation vectors．In addition ，the newly progresses on the Agrobacterium -mediated transformation of dicotyledonous and monocotyledons species transformation were also discussed ，respectively． Key words ：Agrobacterium tumefaciens ；genetic transformation ；progress 植物遗传转化（plant genetic transformation ）技术也称植物转基因技术，是应用DNA 重组技术将外源基因通过生物、物理或化学等手段导入植物基因组，以获得外源基因稳定遗传和表达的植物遗传改良的一门技术 ［1］ 。目前最常用的转基 因方法是基因枪法和农杆菌法。基因枪法的基本 原理是利用表面附着有外源DNA 的金属微粒在高压装置中加速后高速运动到受体细胞中，从而达到转化DNA 的目的。但是基因枪法与农杆菌介导法相比，存在着转化率低、外源DNA 整合机 理不清楚、 得到的转化体往往是嵌合体、遗传稳定性较差、转入外源基因的沉默现象突出等缺点。农杆菌属于革兰氏阴性土壤杆菌，分根癌农 杆菌（Agrobacterium tumefaciens ）和发根农杆菌 （Agrobacterium rhizogenes ）。根癌农杆菌中含有Ti 质粒，能诱发冠瘿瘤。发根农杆菌中含有Ri 质粒，可以导致受伤部位产生毛发状根。Ti 质粒（包括Ri 质粒）上有一段转移DNA （transfer DNA ，又称T-DNA ），受伤的植物细胞中产生的化 学复合物可使农杆菌吸附于植物上，使T-DNA 转移到植物细胞内并整合到染色体上。 目前大量研究工作的目标是明确农杆菌将外 源DNA 导入受体细胞的分子机制，从而改进农杆菌菌株、 质粒和转化技术，以进一步提高转化效率。由于植物受体在转化过程中的作用尚不十分明确，所以农杆菌在转化过程中如何进入植物细