实验二PEG/磷酸盐双水相体系相图的绘制及萃取分配平衡实验
一、实验目的
1．掌握双水相相图的制作方法。
2．掌握双水相萃取过程中分配系数的测定。
二、实验原理
常用的形成双水相系统的成相组分有可由两种高聚物，或一种高聚物和一种无机盐。高聚物与高聚物形成两相的原因是高聚物的不相容性，高聚物与盐形成两相的原因是无机盐的盐析作用。两水相的成相条件和定量关系，用相图表示，
α-淀粉酶能将淀粉分子链中的α-1,4葡萄苷键随机切断成长短不一的短链糊精、少麦芽糖和葡萄糖，而使淀粉对碘呈蓝紫色的特异性反应逐渐消失，呈红棕色，其颜色消失的速度与酶活性有关，可通过固定反应后的吸光度计算其酶活力。
三、仪器和药品
PEG （1000，2000， 4000， 6000），NaH2PO4，K2HPO4?12H2O，NaCl，柠檬酸，碘，碘化钾各，α-淀粉酶。分光光度计，离心机，恒温水浴锅（温度计），量筒，烧杯，移液管，试管，试管架，试剂瓶。
四、实验步骤
20 g/L可溶性淀粉溶液：称取可溶性淀粉（以绝干计）2.00 g，精确至0.001 g，用水调成浆状物，搅动下缓缓倾入70 mL沸水中，然后以30 mL水分几次冲洗装淀粉的烧杯，洗液并入其中，加热至完全透明，冷却，定容至100 mL，此溶液需要当天配制。
1. 将一种分子量的40%的PEG 和无机盐母液制成一定浓度原液：准确量取5 mL的一种PEG 原液加入到50 mL或100 mL的量筒中，称重。用移液管不断加入无机盐原液，混合，直至试管开始出现混浊并分层为止，称重，计算加入无机盐的量，算出PEG 和无机盐在系统中的重量百分浓度，再加入适量水（1～5 mL），使体系澄清，计量加入的水，并继续加入无机盐，使系统再次变混浊并分层为止，如此反复操作。计算达到混浊时PEG 和无机盐在系统中的重量百分含量，以磷酸盐浓度为横坐标、PEG浓度为纵坐标，绘出PEG和磷酸盐的双节线相图。
2. 双水相萃取分配平衡实验
根据相图在分层临界点处，按照相应的PEG无机盐和水（含有相应的酶）的体积比配制两相，等待静置分层分别得到两相的体积，并测定酶活力，求出K值：
K＝C上相酶活/ C下相酶活
称取α-淀粉酶，精确至0.0002 g，加水稀释，过滤，取澄清滤液供测定用。
实验用的瓶装的酶活大概在4000 U/g 左右，最后在分光光度计中测定的酶活力应在3.7-5.6 U/mL范围内。
3. α-淀粉酶活性的测定方法
定义：于60℃、pH=6.0条件下，1小时液化1g可溶性淀粉，所需的酶量规定为1个酶活力单位，酶浓度以U/g（U/mL）表示。
测定：吸取20.00 mL可溶性淀粉溶液于试管中，加入5.00 mL缓冲液摇匀后，于60±0.2℃恒温水浴中预热5 min。加入稀释好的待测酶液1.00 mL，立刻计时，摇匀，准确反应5min。
立即吸取1.00 mL反应液于5.00 mL稀碘液中，摇匀，并以稀碘液作空白，于660 nm波长下，用10 mm 比色皿，迅速测定其吸光度（A），根据其吸光度查表，求得测试酶液的浓度（c U/mL）。吸光度（A）与测试酶液浓度（c）对照表：
计算：X＝c×n
式中：X—样品的酶活力，U/g（U/mL）；c—测试酶液的浓度，U/mL；n—样品的稀释倍数。
所得的结果表示至整数。平行试验相对误差不得超过2%。
五、实验结果整理
①绘出一种PEG/磷酸盐的双节线相图。
②求出α-淀粉酶在一种PEG/磷酸盐体系中的分配系数
表1 吸光度（A）与测试酶液浓度（c）对照表
A c A c A c A c A c
0.100 4.694 0.235 4.074 0.370 3.665 0.505 3.324 0.640 3.068 0.105 4.669 0.240 4.056 0.375 3.651 0.510 3.313 0.645 3.060 0.110 4.644 0.245 4.037 0.380 3.637 0.515 3.302 0.650 3.052 0.115 4.619 0.250 4.019 0.385 3.623 0.520 3.291 0.655 3.045 0.120 4.594 0.255 4.002 0.390 3.610 0.525 3.280 0.660 3.037 0.125 4.569 0.260 3.984 0.395 3.596 0.530 3.270 0.665 3.030 0.130 4.544 0.265 3.968 0.400 3.583 0.535 3.260 0.670 3.022 0.135 4.518 0.270 3.951 0.405 3.569 0.540 3.249 0.675 3.015 0.140 4.492 0.275 3.935 0.410 3.554 0.545 3.239 0.680 3.008 0.145 4.467 0.280 3.919 0.415 3.541 0.550 3.229 0.685 3.001 0.150 4.442 0.285 3.915 0.420 3.528 0.555 3.219 0.690 2.994 0.155 4.418 0.290 3.900 0.425 3.515 0.560 3.209 0.695 2.998 0.160 4.394 0.295 3.885 0.430 3.502 0.565 3.200 0.700 2.981 0.165 4.370 0.300 3.869 0.435 3.485 0.570 3.190 0.705 2.975 0.170 4.347 0.305 3.854 0.440 3.477 0.575 3.181 0.710 2.968 0.175 4.324 0.310 3.839 0.445 3.464 0.580 3.171 0.715 2.962 0.180 4.301 0.315 3.824 0.450 3.452 0.585 3.162 0.720 2.956 0.185 4.279 0.320 3.809 0.455 3.440 0.590 3.153 0.725 2.950 0.190 4.257 0.325 3.794 0.460 3.427 0.595 3.144 0.730 2.944 0.195 4.235 0.330 3.779 0.465 3.415 0.600 3.135 0.735 2.938 0.200 4.214 0.335 3.765 0.470 3.404 0.605 3.126 0.740 2.932 0.205 4.193 0.340 3.750 0.475 3.392 0.610 3.118 0.745 2.927 0.210 4.172 0.345 3.736 0.480 3.380 0.615 3.109 0.750 2.921 0.215 4.152 0.350 3.721 0.485 3.369 0.620 3.101 0.755 2.916 0.220 4.132 0.355 3.707 0.490 3.357 0.625 3.094 0.760 2.911 0.225 4.112 0.360 3.693 0.495 3.346 0.630 3.084 0.765 2.905 0.230 4.093 0.365 3.679 0.500 3.335 0.635 3.076
实验室安全管理制度及流程 一、实验室安全管理制度 ㈠要严格执行医疗管理法律、法规、医院医疗安全管理规定.加强实验室安全的监督和管理.对可能影响检验工作的安全隐患进行控制。 ㈡实验室和楼道内必须配置足够的安全防火设施。消防设备要品种合适.定期检查保养.大型精密仪器室应安装烟火自动报警装置。 ㈢走廊、楼梯、出口等部位和消防安全设施前要保持畅通.严禁堆放物品.并不得随意移位、损坏和挪用消防器材。 ㈣易燃、易爆药品专人专柜存放保管.并符合危险品的管理要求。剧毒药品应由两人保管.双锁控制.存放于保险箱内。建立易燃、易爆、剧毒药品的使用登记制度。 ㈤普通化学试剂库设在检验科内.由专人负责.并建立试剂使用登记制度。领用时应符合审批手续.并详细登记领用日期、用量、剩余量.并有领用人签字备案。 ㈥凡使用高压、燃气、电热设备或易燃、易爆、剧毒药品试剂时.操作人员不得离开岗位。 ㈦各种电器设备.如电炉、干燥箱、保温箱等仪器.以实验室为单位.由专人保管.并建立仪器卡片。 ㈧做好电脑网络安全工作.防止病毒侵入.防止泄密。 ㈨每天下班时.各实验室应检查水、电安全.关好门窗。等方
面进行安全检查.确保无隐患后.方可锁门离开。值班人员要做好节假日安全保卫工作。 ㈩检验过程中产生的废物、废液、废气、有毒有害的包装容器和微生物污染物均应按属性分别妥善处理.以保证环境和实验室人员的安全和健康。 （十一）任何人发现有不安全因素.应及时报告.迅速处理。 （十二）科主任要定期检查安全制度的执行情况.并经常进行安全教育。每月一次.召开医疗安全工作全员会议.总结发生的差错或事故.分析原因.排查医疗安全隐患和实验室不安全因素.提出整改措施。 二、实验室安全管理流程： ㈠工作人员和实验室安全的一般要求 1、实验室工作区内绝对禁止吸烟.杜绝易燃液体的潜在火种和传染细菌和接触毒物的途径。 2、实验工作区内不得有食物、饮料及可能摄入的其它物质。实验室工作区内的冰箱禁止存放食物。 3、眼睛和面部的防护：处理腐蚀性或毒性物质时.须使用安全镜其它保护眼睛和面部的防护用品。使用、处理能够通过粘膜和皮肤感染的试剂.或有可能发生试剂溅溢的情况时.必须佩 带护目镜、面罩。被血液或其它体液溅到,立即用大量的生理盐水冲洗 4、服装和个人防护装备：除要求符合实验室工作需要的
双水相萃取技术 早在1896年,Beijerinck发现,当明胶与琼脂或明胶与可溶性淀粉溶液相混时,得到一个混浊不透明的溶液,随之分为两相,上相富含明胶,下相富含琼脂(或淀粉,这种现象被称为聚合物的不相溶性(incompatibility,从而产生了双水相体系(Aqueous two phase system,ATPS。 传统的双水相体系是指双高聚物双水相体系,其成相机理是由于高聚物分子的空间阻碍作用,相互无法渗透,不能形成均一相,从而具有分离倾向,在一定条件下即可分为二相。一般认为只要两聚合物水溶液的憎水程度有所差异,混合时就可发生相分离,且憎水程度相差越大,相分离的倾向也就越大。可形成双水相体系的聚合物有很多,典型的聚合物双水相体系有聚乙二醇(polyethylene glycol,略作PEG/葡聚糖(dextran,聚丙二醇(polypropylene glycol/聚乙二醇和甲基纤维素(methylcellulose/葡聚糖等。另一类双水相体系是由聚合物/盐构成的。此类双水相体系一般采用聚乙二醇(polyethylene glycol作为其中一相成相物质,而盐相则多采用硫酸盐或者磷酸盐。 萃取原理 双水相萃取与水-有机相萃取的原理相似,都是依据物质在两相间的选择性分配。当萃取体系的性质不同时,物质进入双水相体系后,由于表面性质、电荷作用和各种力(如憎水键、氢键和离子键等的存在和环境因素的影响,使其在上、下相中的浓度不同。物质在双水相体系中分配系数K可用下式表示: K= C上/ C下 其中K为分配系数,C上和C下分别为被分离物质在上、下相的浓度。 分配系数K等于物质在两相的浓度比,由于各种物质的K值不同,可利用双水相萃取体系对物质进行分离。其分配情况服从分配定律,即,“在一定温度一定压强下,如果一个物质溶解在两个同时存在的互不相溶的液体里,达到平衡后,该物质在两相中浓度比等于常数”,分离效果由分配系数来表征。
双水相萃取和超临界萃取的方法与特点 专业生物工程092 课程酶工程 老师王明力 学生吴志洪 学号 0908110342 2012年12月25日
双水相萃取和超临界萃取的方法与特点 摘要：双水相萃取技术是一种高效温和的新分离技术，它与传统的萃取及其它分离技术相比具有操作条件温和、处理量大、易于连续操作等优点，从而使其能广泛应用于生物分离工程中。同时文章简要介绍了超临界流体萃取的基本原理和特点及其应用，其中超临界CO2萃取是最常用的.随着研究的深入和认识的加强，超临界流体技术作为一项可持续的绿色工艺，将具有广泛的应用前景。 关键词：双水相萃取超临界流体萃取 Abstract: Phasepartitioning technology is a kind of high efficient mild new separation technique ，and the traditional extraction and other separation technology compared with mild conditions, large quantity of operation, easy for operation, which makes its advantages such as extensively applied in biological separation engineering.And his article introduces the basic principle of supercritical fluid extraction and it,s application ,The supercritical CO2extraction is the most commonly used.With the deepening of research and understanding of the strengthen, supercritical fluid technology as a sustainable green technology, has a broad prospect of application.
双水相萃取技术应用 摘要：双水相萃取技术作为一种新型的分离技术日益受到重视，它与传统的萃取方法相比有独特的优点。本文总结了双水相萃取形成的原理，萃取过程的基本理论、萃取体系的特点，综述了双水相萃取技术在生化工业、分析检测、稀有金属分离等方面的应用，介绍了该技术的最新进展，指出了该技术工业化存在的问题，并对今后的发展作了展望。 关键词：双水相萃取分离应用 引言 双水相萃取技术（Aqueous two—phase extraction，简称ATPE）与传统的萃取分离技术不同，有其独特的优点，是一种新型的分离技术。双水相萃取在诸多方面有着广泛的应用，具有良好的应用前景。 1、双水相萃取技术的基本原理 1．1双水相体系的形成 当一定浓度的某种有机物水溶液与其它有机物水溶液，或者有机物水溶液与无机盐水溶液以一定体积比混合时，能够自然分相并形成互不相溶的双水相或者多水相体系，这就是双水相体系。 从溶液理论来说，当2种有机物或者有机物与无机盐混合时，是分相还是混合成一相，取决于混合时的熵变和分子间的相互作用力。由于双水相体系本身的复杂性，体系的熵很难准确计算，分子间的相互作用力也不清楚，所以双水相的形成机理很复杂。对于高聚物／高聚物双水相体系，用传统的理论来解释，是由于界面张力等因素形成两相之间的不对称，使得在空间上产生阻隔效应，使两相之间无法相互渗透，不能形成均一相，从而具有分离倾向，一般这种分离倾向的大小和形成双水相的2种物质的疏水性成线性关系。对于有无机盐存在的双水相体系，以及新开发的表面活性剂双水相体系，这种解释就无能为力了。 表1是各种双水相体系的成相原理。由表1可知，不同的成相原理可以解释不同组成的双水相体系．但各种原理并不能普遍适用。而且各种原理问的相互关
第七章双水相萃取 第一节概述 基因工程产品如蛋白质和酶往往是胞内产品，需经细胞破碎后才能提取、纯化，细胞颗粒尺寸的变化给固—液分离带来了困难，同时这类产品的活性和功能对pH值、温度和离子强度等环境因素特别敏感，由于它们在有机溶剂中的溶解度低并且会变性，而且大部分蛋白质分子有很强的亲水性，不能溶于有机溶剂中，因此传统的溶剂萃取法并不适合。采用在有机相中添加表面活性剂产生反胶束的办法可克服这些问题，但同样存在相的分离。因此基因工程产品的商业化迫切需要开发适合大规模生产的、经济简便的、快速高效的分离纯化技术。其中双水相萃取技术，又称水溶液两相分配技术是近年来出现的引人注目、极有前途新型分离技术。双水相萃取就是针对生物活性物质的提取所开发的一种新型液一液萃取分离技术。 双水相萃取法的特点是能够保留产物的活性，整个操作可以连续化，在除去细胞或细胞碎片时，还可以纯化蛋白质2～5倍，与传统的过滤法和离心法去除细胞碎片相比，无论在收率上还是成本上都要优越得多见表11．1所示。双水相萃取法和传统的酶粗分离方法(如 盐析或有机溶剂沉淀等)相比也有很大的优势，如以 -半乳糖苷酶为例，用沉淀或双水相萃 取纯化的比较见表11．2。除此以外，处理量相同时，双水相萃取法比传统的分离方法，设备需用量要少3～10倍，因此已被广泛地应用在生物化学、细胞生物学和生物化工领域，进行生物转化、蛋白质、核酸和病毒等产品的分离纯化和分析等。用此法来提纯的酶已达数十种，其分离过程也达到相当规模，如甲酸脱氢酶的分离已达到几十千克湿细胞规模，半乳糖苷酶的提取也到了中试规模等。 近年来又进行了双水相萃取小分子生物活性物质，如红霉素、头孢菌素C、氨基酸的研究和亲和双水相萃取的研究，大大扩展了应用范畴并提高了选择性；使双水相萃取技术具有更大的潜力和宽阔的前景。 双水相萃取现象最早是1896年由Beijerinck在琼脂与可溶性淀粉或明胶混合时发现的这种现象被称为聚合物的“不相溶性”。本世纪60年代瑞典Lund大学的AlbertssonPA及其同事们最先提出双水相萃取技术并做了大量的工作。70年代中期西德的KulaMR和KronerKH 等人首先将双水相系统应用于从细胞匀浆液中提取酶和蛋白质，大大改善了胞内酶的提取效果。虽然双水相技术在应用方面取得了很大的进展，但几乎都是建立在实验基础上，至今还没有一套比较完善的理论来解释生物大分子在体系中的分配机理。1989年，Diamond等以Ftory—Huggins理论为基础，推导出生物分子在双水相体系中的分配模型，但尚有局限性，仍需继续探索，不断完善。 双水相萃取技术真正工业化的例子也很少，其原因是成本较高，使它在技术上的优势被削弱。双水相萃取中，原材料成本占了总成本的85％以上并且总成本随生产规模的扩大而增加很多。因此产业化成了问题，若要发挥其技术优势，降低原材料成本是关键。合成价格低廉并且具有良好的分配性能的聚合物及将其从后续的操作过程中回收是双水相萃取技术研究中的一个主要方向。 一、双水相的形成 在聚合物—盐或聚合物—聚合物系统混合时，会出现两个不相混溶的水相，典型的例子如在水溶液中的聚乙二醇(PEG)和葡聚糖，当各种溶质均在低浓度时，可以得到单相匀质液体，但是，当溶质的浓度增加时，溶液会变得浑浊，在静止的条件下，会形成两个液层，实际上是其中两个不相混溶的液相达到平衡，在这种系统中，上层富集了PEG，而下层富集了葡聚糖。
㈢走廊、楼梯、出口等部位和消防安全设施前要保持畅通严禁堆放物品并不得随意移位、损坏和挪用消防器材。㈣易燃、易爆药品专人专柜存放保管并符合危险品的管理要求。剧毒药品应由两人保管双锁控 制存放于保险箱内。建立易燃 实验室安全管理制度及流程一、实验室安全管理制度㈠要严格执行医疗管理法律、法规、医院医疗安全管理规定加强实验室安全的监督和管理对可能影响检验工作的安全隐患进行控制。㈡实验室和楼道内必须配置足够的安全防火设施。消防设备要品种合适定期检查保养大型精密仪器室应安装烟火自动报警装置。㈢走廊、楼梯、出口等部位和消防安全设施前要保持畅通严禁堆放物品并不得随意移位、损坏和挪用消防器材。㈣易燃、易爆药品专人专柜存放保管并符合危险品的管理要求。剧毒药品应由两人保管双锁控制存放于保险箱内。建立易燃、易爆、剧毒药品的使用登记制度。㈤普通化学试剂库设在检验科内由专人负责并建立试剂使用登记制度。领用时应符合审批手续并详细登记领用日期、用量、剩余量并有领用人签字备案。㈥凡使用高压、燃气、电热设备或易燃、易爆、剧毒药品试剂时操作人员不得离开岗位。㈦各种电器设备如电炉、干燥箱、保温箱等仪器以实验室为单位由专人保管并建立仪器卡片。 ㈧做好电脑网络安全工作防止病毒侵入，防止泄密。㈨每天下班时各实验室应检查水、电安全.关好门窗等方面进行安全检查,确保无隐患后,方可锁门离开。值班人员要做好节假日安全保卫工作。 ㈩检验过程中产生的废物、废液、废气、有毒有害的包装容器和微生物污染物均应按属性分别妥善处理,以保证环境和实验室人员的安全和健康。 (十一)任何人发现有不安全因素应及时报告迅速处理。（十二）科主任要定期检查安全制度的执行情况并经常进行安全教育。每月一次召开医疗安全工作全员会议,总结发生的差错或事故;分析原因,排查医疗安全隐患和实验室不安全因素提出整 改措施。二、实验室安全管理流程 ㈠工作人员和实验室安全的一般要求 1、实验室工作区内绝对禁止吸烟杜绝易燃液体的潜在火种和传染细菌和接触毒物的途径。 2、实验工作区内不得有食物、饮料及可能摄入的其它物质。实验室工作区内的冰箱禁止存放食物。 3、眼睛和面部的防护处理腐蚀性或毒性物质时须使用安全镜其它保护眼睛和面部的防护用品。使用、处理能够通过粘膜和皮肤感染的试剂或有可能发生试剂溅溢的情况时必须佩带护目镜、面罩。被血液或其它体液溅到,立即用大量的生理盐水冲洗 4、服装和个人防护装备除要求符合实验室工作需要的着装外,工作服应干净、整洁。所有人员在各一实验区内必须穿着遮盖前身的长袖隔离服或长袖长身的工作服。当工作中有危险物喷溅到身上的可能时应使用一次性塑料围裙或防渗外罩。必要时佩戴手套、护目镜或面罩等。个人防护服装应定期更换以保持清洁,遇被危险物品严重污染;则应立即更换。盛放于能防渗的容器内。 5、在有可能发生液体溅溢的工作岗位可加套一次性防渗漏鞋套。 6、工作人员佩戴工作帽头发不外露。实验室操作不准佩戴首饰,防止污染。 7、洗手实验室工作人员在脱下手套后、离开实验室前、接触患者前后、以及在进食或吸烟前都应该洗手。接触血液、体液或其它污染物时应立即洗手。 8、呼吸防护在操作粉尘有毒气体、烟雾、蒸气时,工作人员配戴呼吸面具,以防止吸人有害气体和污染的空气。。 9、移液所有实验室操作禁止用口移液具应使用助吸器。 10、锐利物品谨慎处理针头、刀片和碎玻璃等锐利物品。使用后的针具不要折断、弯曲、破损、重复使用或用手重装在针管上的。一次性注射器上的针头用后不要取下,锐利物品应立即放置在不易刺破的容器内,在完全装满之前就应及时丢弃。 11、垃圾处理每天清理垃圾,医用垃圾按规定收集送至医院焚化炉焚化城市医疗废物转运车处置。 <二>工作环境与设备 1.实验室分区：根据具体工作情况确定“清洁”区和“非清洁”区。被指定为“清洁”的区域，则应努力保
实训1 双水相萃取相图的制作 一、实训目的 1. 学习双水相分离萃取的原理和方法 2. 学习双水相萃取相图的制作 二、实训原理 双水相萃取法是利用物质在互不相容的两个水相间分配系数的差异来进行萃取的方法。 两水相的形成：高聚物与无机盐在水中由于盐析的作用会形成两个相，如PEG 与硫酸盐或碱性磷酸盐。两种亲水性高聚物在水中由于聚合物的不相容性也会形成两个相。但是它们只有达到一定的浓度时，才能形成两相，双水相形成的定量关系可用相图来表示。 相图是一根双节线, 把均匀区和两相区分隔开来。 当成相组分的配比取在：线的下方时，为均相区； 曲线的上方时，为两相区；在曲线上，则混合后，溶液恰好从澄清变为浑浊。 相图中TMB 称为系线；T 代表上相组成；B 代表下相组成；同一条系线上各点分成的两相具有相同的组成，但体积比不同。 V T / V B = BM / MT 三、实训器材、试剂、材料 1.器材：试管，离心机，天平，离心管，三角瓶，滴定管。 2.试剂：聚乙二醇2000（PEG2000），硫酸铵。 四、实训操作步骤 1.PEG2000（NH 4)2SO 4双水相体系相图的测定 （1）取10%（g/ mL ）PEG2000溶液10mL 于三角瓶中。 （2）用40%（g/mL ）（NH 4)2SO 4溶液装入滴定管中滴定至三角并中溶液出现浑浊，记录）NH4)2SO 4溶液消耗的体积。加入1mL 水使溶液澄清，继续用（NH 4)2SO 4溶液滴定至浑浊，重复7～8次，记录每次（NH 4)2SO 4溶液消耗的体积，计算每次出现浑浊时体系中PEG2000和（NH 4)2SO 4的浓度（g/mL ）。 （3） 以（NH 4)2SO 4的浓度（g/mL ）为横坐标，PEG2000的浓度（g/mL ）为纵坐标，绘制PEG2000- （NH 4)2SO 4双水相体系相图。 2. 相图制作表 10%PEG2000 10mL 温度T=20℃ PEG2000 % (NH 4)2SO 4 % 两相 均相
《生物资源开发与利用专题》 双水相萃取技术及应用 152310018 杨云梅 双水相萃取（Aqueous two phase extraction，英文缩写ATPE）是利用物质在互不相容的两水相间分配系数的差异来进行萃取的方法。如：葡聚糖（dextran）与聚乙二醇（PEG)按一定比例与水混合，溶液混浊，静置平衡后,分成互不相溶的两相，上相富含PEG,下相富含葡聚糖。当两种聚合物或一种聚合物与一种盐溶于同一溶剂时，由于聚合物之间或聚合物与盐之间的不相容性，当聚合物或无机盐浓度达到一定值时，就会分成不互溶的两相。因使用的溶剂是水，因此称为双水相，在这两相中水分都占很大比例(85％一95％),活性蛋白或细胞在这种环境中不会失活，但可以不同比例分配于两相,这就克服了有机溶剂萃取中蛋白容易失活和强亲水性蛋白难溶于有机溶剂的缺点。 双水相萃取的优点： 1、操作条件温和，在常温常压下进行；不会引起生物活性物质的失活或变性。 2、两相的界面张力小，萃取时两相能高度分散,传质速度快。 3、排除了使用有毒、易燃的有机溶剂，能够提供温和的水环境，避免被萃取成分的脱水变性。 4、溶质对目标组分选择性强，大量杂质能与所有固形物一同除去，使分离操作 5、过程简化，易于连续操作，处理量大，适合工业应用。 缺点：系统易乳化，成相聚合物的成本较高，水溶性高聚物大多数粘度较大，不易定量控制，高聚物回收困难。 一：双水相萃取技术的发展趋势 目前，分离生物物质经常采用的双水相系统主要有2类：非离子型聚合物/ 水系统（最常用的为聚乙二醇/葡聚糖）和非离子型聚合物/无机盐/水系统（常用的如聚乙二醇/盐体系）原因在于此2类双水相系统采用的是无毒性的聚合物，且其多元醇、多元糖结构能够保证生物大分子的稳定性但在实际应用中，2类双水相系统各有弊端，非离子型聚合物/水系统能够保证生物活性物质的活性,且界面吸附少，但所用聚合物材料如葡聚糖成本较大，且体系黏度大，制约大规模的工业生产过程；相对于前者，非离子型聚合物/无机盐/水系统成本低，体系黏度小，但该系统会导致某些敏感生物活性物质失活，此外还会产生大量的高浓度盐废水。因此，寻求新型双水相体系成为日后的主要研究方向。目前，新型双水相体系的开发主要有廉价的双水相系统及其他新型功能双水相系统。
实验室安全管理制度和流程及安全准则 (一)实验室安全管理制度 1、要严格执行医疗管理法律、法规、医院医疗安全管理规定，加强实验室安全的监督和管理，对可能影响检验工作的安全隐患进行控制。 2、实验室和楼道内必须配置足够的安全防火设施。消防设备要品种合适，定期检查保养，大型精密仪器室应安装烟火自动报警装置。 3、走廊、楼梯、出口等部位和消防安全设施前要保持畅通，严禁堆放物品，并不得随意移位、损坏和挪用消防器材。 4、易燃、易爆药品专人专柜存放保管，并符合危险品的管理要求。剧毒药品应由两人保管，双锁控制，存放于保险箱内。建立易燃、易爆、剧毒药品的使用登记制度。 5、普通化学试剂库设在检验科内，由专人负责，并建立试剂使用登记制度。领用时应符合审批手续，并详细登记领用日期、用量、剩余量，并有领用人签字备案。 6、凡使用高压、燃气、电热设备或易燃、易爆、剧毒药品试剂时，操作人员不得离开岗位。 7、各种电器设备，如电炉、干燥箱、保温箱等仪器，以实验室为单位，由专人保管，并建立仪器卡片。 8、做好电脑网络安全工作，防止病毒侵入，防止泄密。 9、每天下班时，各实验室应检查水、电安全，关好门窗。确保
无隐患后，方可锁门离开。值班人员要做好节假日安全保卫工作。 10、检验过程中产生的废物、废液、废气、有毒有害的包装容器和微生物污染物均应按属性分别妥善处理，以保证环境和实验室人员的安全和健康。 11、任何人发现有不安全因素，应及时报告，迅速处理。 12、科主任要定期检查安全制度的执行情况，并经常进行安全教育。每月一次，召开医疗安全工作全员会议，总结发生的差错或事故，分析原因，排查医疗安全隐患和实验室不安全因素，提出整改措施。 （二）实验室安全管理流程 A、工作人员和实验室安全的一般要求 1、实验室工作区内绝对禁止吸烟，杜绝易燃液体的潜在火种和传染细菌和接触毒物的途径。 2、实验工作区内不得有食物、饮料及可能摄入的其它物质。实验室工作区内的冰箱禁止存放食物。 3、眼睛和面部的防护：处理腐蚀性或毒性物质时，须使用安全镜及其它保护眼睛和面部的防护用品。使用、处理能够通过粘膜和皮肤感染的试剂，或有可能发生试剂溅溢的情况时，必须佩带护目镜、面罩。被血液或其它体液溅到,立即用大量的生理盐水冲洗。 4、服装和个人防护装备：除要求符合实验室工作需要的着装外，工作服应干净、整洁。所有人员在各一实验区内必须穿着遮盖前身的长袖隔离服或长袖长身的工作服。当工作中有危险物喷溅到身上的可
实验室安全管理制度 一．目的：在规范临床实验室的安全管理。 二．适用范围：实验室和工作人员安全的一般要求，防火、用电、化学危险物品、微生物的安全要求，以保证实验室的安全运作，将事故控制在最低限度。 三．实验室安全管理程序 一．目的：在规范临床实验室的安全管理。 二．适用范围：实验室和工作人员安全的一般要求，防火、用电、化学危险物品、微生物的安全要求，以保证实验室的安全运作，将事故控制在最低限度。 三．工作程序： l工作人员和实验室安全的一般要求 1．1吸烟 实验室工作区内绝对禁止吸烟。点燃的香烟是易燃液体的潜在火种；香烟、雪茄或烟斗都是传染细菌和接触毒物的途径。 1．2食物、饮料及其它 实验工作区内不得有食物、饮料及存在“手接触可能的其它物质。实验室工作区内的冰箱禁止存放食物。食物应放置在允许进食、喝水的休息区内。 1．3化妆品 实验工作区内禁止使用化妆品或进行化妆，并建议经常洗手的实验人员使用护手霜。 1．4眼睛和面部的防护 处理腐蚀性或毒性物质时，须使用安全镜其它保护眼睛和面部的防护用品。但允许面罩或工作人员在实验室的危险区内不要佩戴隐形眼镜，除非同时使用护目镜或面罩。使用、处理能够通过粘膜和皮肤感染的试剂，或有可能发生试剂溅溢的情况时，必须佩带护目镜、面罩或面具式呼吸器。 1．5服装和个人防护装备 除要求符合实验室工作需要的着装外，工作服应干净、整洁。所有人员在各一实验区内必须穿着遮盖前身的长袖隔离服或长袖长身的工作服。当工作中有危险物喷溅到身上的可能时，应使用一次性塑料围裙或防渗外罩。有时还需要佩戴其它防护装备如：手套、护目镜、披肩或面罩等。个人防护服装应定期更换以保持清洁，遇被危险物品严重污染，则应立即更换。盛放被污染的实验服和工作服，应用合适的、有标识并能防渗的包装。清洗时应用足够高的温度和足够长的时间以获得良好的去污效果。 不得在实验室内设值班床，严禁在实验室内住宿。 1．6鞋 在各工作区内，应穿舒适、防滑、软底并能保护整个脚面的鞋。在有可能发生液体溅溢的工作岗位，可加套一次性防渗漏鞋套。帆布鞋可吸收化学物品和有传染性的液体。 1．7头发和饰物 留长发的工作人员应将头发盘在脑后，佩戴帽子。以防止头发接触到被污染物和避免人体脱屑落人工作区，不得佩戴有可能被卷入机器或可随人传染性物质的饰物。 1．8胡须 蓄有胡须的男性工作人员必须遵守上项(1.7)规定。 1．9洗手 实验室工作人员在脱下手套后、离开实验室前、接触患者前后、以及在进食或吸烟前都应该洗手。接触血液、体液或其它污染物时，应立即洗手。 1．10眼睛冲洗
实验室安全管理程序 1、本文所有内容文字图片和音视频资料，版权均属作者所有，任何媒体网站或个人未经作者协议授权不得转载、转贴、链接或以其他方式复制发布发表。已经作者协议授权的媒体、网站，在下载使用时必须注明来源，违者作者将依法追究责任。 2、转载或引用本文内容必须是以新闻性或资料性公共免费信息为使用目的的合理、善意引用，不得对本文内容原意进行曲解、修改。 3、个人付费下载本文后依法享有使用权和二次创作权，但禁止擅自同意他人继续转载、引用本文内容。 1. 目的为保障检测工作过程人身和仪器设备等的安全，切实执行有关健康、安全环保的规定。 2. 适用范围适用于本单位各项安全管理工作。 3. 职责 a) 部门职责? 办公室负责定期组织安全检查和安全防范工作，并组织人员培训学习各项安全法规和安全防护知识；? 各部门负责本部门相关安全管理规定的实施；? 检测部门负责协助办公室组织学习实验室安全防护培 训； b) 人员职责? 质量负责人负责实验室安全管理工作；? 部门负责人负责本部门各项安全管理工作； 4. 程序 a) 日常安全管理规 定实验室走廊、楼梯、出口应保持畅通，每幢楼层应配备一定数量的消防器材，特别是液化气贮藏室、化学实验室等更应添置足够的消防器材，消防安全设施存放处严禁堆放物品，消防器材不得随意移位、损坏和挪用。检测人员进入实验室必须穿戴必要的工作服，进入无菌室必须穿隔离服、工作鞋、工作帽；进行危害物质、挥发性有机溶剂、特定化学物质或其他毒性化学物质等化学药品操作实验时，必须穿戴防护具(防护口罩、防护手套、防护眼镜)，且须在通风橱内进行操作，同时务必遵守操作规程，勿自行改变实验流程；在进行化学实验时，严禁戴隐形眼镜，以防止化学试剂溅入眼镜而腐蚀眼睛。避免在实验室吃喝食物且使用化学药品后需先洗净双手方能进食，食物不得储藏在储有化学药品之冰箱或储藏柜内。工作人员离开实验室前要检查水、电和门窗，做好安全、防火、防盗工作，防止意外事故发生。
双水相萃取技术 姓名：小行星学号： 2015xxxx专业：化工工艺 摘要：双水相萃取是一种新型的萃取分离技术，本文介绍了双水相体系的形成 及特点，重点介绍了双水相萃取技术的应用和双水相萃取的主要设备， 对双水相萃取技术应用前景及展望 关键字：双水相萃取分离技术应用展望 1、引言 溶剂萃取法是分离技术中最重要的方法之一。传统的溶剂萃取分离是依据被分离物质在两个互不相溶液相中的溶解性不同而达到分离目的。一般的萃取体系包括有机相和水相两部分,迄今为止,已有若干种分类方法。随着近年来分离技术在生命科学、天然药物提纯及各类抗生素药物等方面应用的迅速发展,新型的萃取技术应运而生。例如对于生物物质来说,分离的对象复杂,既包括可溶物,如蛋白质和核酸,也包括悬浮的小颗粒,如细胞器和整个细胞;由于生物物质极易变性和失活,传统的有机相和水相的两相萃取不能解决生物物质失活等问题，给分离带来很大的难度，而双水相萃取技术能够很好的解决这一难题。 双水相萃取(Aqueoustwo-phase extraction, ATPE)[1]是两种水溶性不同的聚合物或者一种聚合物和无机盐的混合溶液,在一定的浓度下,体系就会自然分成互不相容的两相，被分离物质进入双水相体系后由于表面性质、电荷间作用和各种作用力(如憎水键、氢键和离子键)等因素的影响,在两相间的分配系数K不同,导致其在上下相的浓度不同,达到分离目的，这种现象在1896年被 B eijerinck首次发现,随后双水相萃取技术作为一种新型的分离技术日益受到重视,与传统的萃取及其他分离技术相比具有操作条件温和、处理量大、易于连续操作等优点,随着生物、医药等行业的蓬勃发展，从而使双水相萃取技术能越来越广泛应用于生物工程、药物分析和金属分离等方面。 2、双水相体系 简而言之，双水相萃取是利用溶质在两个互不相溶的水相中的溶解度不同
实验室安全管理体系 建设大纲 一、安全管理手册 二、相关程序文件 三、各种说明及操作规程（SOP文件） 四、第三层文件（有关作业文件和记录文件） 广州市安杰生物技术有限公司 一、安全管理手册 说明：对实验室生物安全管理体系管理核心及其相互关系的描述，反映组织整个实验室生物安全管理体系的总体框架；是对组织的实验室生物安全方针、重大危害因素以及安全目标、安全计划的描述，展示组织在实验室生物安全管理上的原则、总的目标和管理上的重点；明确组织各个不同部门和岗位之间的责任和权利，为体系的运行提供应有的组织保证；提供查询相关文件的途径。 其内容通常包括：①安全方针、安全目标和安全计划； ②实验室生物安全体系管理、运行、内部评审及评审工作的岗位职责、权限和相互关系； ③有关程序文件的说明和查询途径； ④关于安全管理手册的评审、修改和控制规定。 1．实验室安全管理方针 至少应包括三个基本承诺：①承诺持续改进； ②承诺遵守实验室生物安全法律法规及其它要求； ③承诺预防实验室事故、保护实验人员安全健康。 实验室生物安全方针应指明实现上述承诺的途径，如向全体实验人员传达，以文件化的方式予以发布或公布，可为公众所获取，并接受监督。 2．实验室安全管理目标 考虑因素：组织实验室生物安全方针；法律法规及其他要求；重大风险；技术可行性； 运行要求及相关方的观点等。 目标应设参照基准和参数，可进行检测、评估，能体现持续改进的思想，并符合方针的要求（目标可以是行为绩效改进型，如提高设备安全防护率达到100%；也可以是管理绩效改进型，如安全达标率100%）。 3．实验室安全管理计划
实验室生物安全计划是实现安全目标的行动方案，是组织对实验室生物安全承诺的具体化，其制定和执行市体系成功的关键。 其中包括（但不限于）： 3.1实验室年度工作安排的说明和介绍 3.2安全和健康管理目标 3.3风险评估计划 3.4演习计划（泄漏处理、人员意外伤害、设施设备失效、消防、应急预案等） 3.5程序文件与操作规程的制定与定期评审计划 3.6人员教育、培训及能力评估计划 3.7监督及安全检查计划（包括核查表） …… 4．实验室的组织结构 5．实验室人员构成及职责 6．安全及安保要求 7．安全管理体系（生物安全委员会） 8．实验室安全管理体系文件构架 9．生物安全管理体系运作的基本原则与要求 其他需要的文件：1程序文件清单 2实验室生物安全法律、法规、标准及要求清单 3实验室平面图 4重要设施设备布置图 二、相关程序文件 说明：程序文件是对安全管理手册的支持，为各级部门、岗位和操作人员队实验室生物安全事项的管理和提供有效的指导。 程序的具体内容是列出开展此项活动的步骤，保持合理的编写顺序，明确各项活动的接口关系、职责、控制措施；明确每个过程中各项因素由谁做（Who）、什么时间做（When）、在什么场合（地点）做（When）、如何做（How）、如何控制及所要达到的要求，须形成的记录和报告的内容；出现例外情况的处理措施等，必要时辅以流程图。 其中包括（但不限于）： 1．实验室人员准入程序
实验室安全管理制度与流程 一．目的：规范临床实验室的安全管理。 二．适用范围：实验室和工作人员安全的一般要求，防火、用电、化学危险物品、微生物的安全要求，以保证实验室的安全运作，将事故控制在最低限度。 三．工作程序： l工作人员和实验室安全的一般要求 1．1吸烟 实验室工作区内绝对禁止吸烟。点燃的香烟是易燃液体的潜在火种；香烟、雪茄或烟斗都是传染细菌和接触毒物的途径。 1．2食物、饮料及其它 实验工作区内不得有食物、饮料及存在“手接触可能的其它物质。实验室工作区内的冰箱禁止存放食物。食物应放置在允许进食、喝水的休息区内。 1．3化妆品 实验工作区内禁止使用化妆品或进行化妆，并建议经常洗手的实验人员使用护手霜。 1．4眼睛和面部的防护 处理腐蚀性或毒性物质时，须使用安全镜其它保护眼睛和面部的防护用品。但允许面罩或工作人员在实验室的危险区内不要佩戴隐形眼
镜，除非同时使用护目镜或面罩。使用、处理能够通过粘膜和皮肤感染的试剂，或有可能发生试剂溅溢的情况时，必须佩带护目镜、面罩或面具式呼吸器。 1．5服装和个人防护装备 除要求符合实验室工作需要的着装外，工作服应干净、整洁。所有人员在各一实验区内必须穿着遮盖前身的长袖隔离服或长袖长身的工作服。当工作中有危险物喷溅到身上的可能时，应使用一次性塑料围裙或防渗外罩。有时还需要佩戴其它防护装备如：手套、护目镜、披肩或面罩等。个人防护服装应定期更换以保持清洁，遇被危险物品严重污染，则应立即更换。盛放被污染的实验服和工作服，应用合适的、有标识并能防渗的包装。清洗时应用足够高的温度和足够长的时间以获得良好的去污效果。 不得在实验室内设值班床，严禁在实验室内住宿。 1．6鞋 在各工作区内，应穿舒适、防滑、软底并能保护整个脚面的鞋。在有可能发生液体溅溢的工作岗位，可加套一次性防渗漏鞋套。帆布鞋可吸收化学物品和有传染性的液体。 1．7头发和饰物 留长发的工作人员应将头发盘在脑后，佩戴帽子。以防止头发接触到被污染物和避免人体脱屑落人工作区，不得佩戴有可能被卷入机器或可随人传染性物质的饰物。 1．8胡须
编号：SY-AQ-01448 ( 安全管理) 单位：_____________________ 审批：_____________________ 日期：_____________________ WORD文档/ A4打印/ 可编辑 实验室安全管理程序 Laboratory safety management procedures
实验室安全管理程序 导语：进行安全管理的目的是预防、消灭事故，防止或消除事故伤害，保护劳动者的安全与健康。在安全管理的四项主要内容中，虽然都是为了达到安全管理的目的，但是对生产因素状态的控制，与安全管理目的关系更直接，显得更为突出。 1.目的 为保障检测工作过程人身和仪器设备等的安全，切实执行有关健康、安全环保的规定。 2.适用范围 适用于本单位各项安全管理工作。 3.职责 a)部门职责 ?办公室负责定期组织安全检查和安全防范工作，并组织人员培训学习各项安全法规和安全防护知识； ?各部门负责本部门相关安全管理规定的实施； ?检测部门负责协助办公室组织学习实验室安全防护培训； b)人员职责 ?质量负责人负责实验室安全管理工作；
?部门负责人负责本部门各项安全管理工作； 4.程序 a)日常安全管理规定 实验室走廊、楼梯、出口应保持畅通，每幢楼层应配备一定数量的消防器材，特别是液化气贮藏室、化学实验室等更应添置足够的消防器材，消防安全设施存放处严禁堆放物品，消防器材不得随意移位、损坏和挪用。 检测人员进入实验室必须穿戴必要的工作服，进入无菌室必须穿隔离服、工作鞋、工作帽；进行危害物质、挥发性有机溶剂、特定化学物质或其他毒性化学物质等化学药品操作实验时，必须穿戴防护具(防护口罩、防护手套、防护眼镜)，且须在通风橱内进行操作，同时务必遵守操作规程，勿自行改变实验流程；在进行化学实验时，严禁戴隐形眼镜，以防止化学试剂溅入眼镜而腐蚀眼睛。 避免在实验室吃喝食物且使用化学药品后需先洗净双手方能进食，食物不得储藏在储有化学药品之冰箱或储藏柜内。 工作人员离开实验室前要检查水、电和门窗，做好安全、防火、
编订：__________________ 单位：__________________ 时间：__________________ 实验室安全管理程序(正 式) Standardize The Management Mechanism To Make The Personnel In The Organization Operate According To The Established Standards And Reach The Expected Level. Word格式 / 完整 / 可编辑
文件编号：KG-AO-1377-43 实验室安全管理程序(正式) 使用备注：本文档可用在日常工作场景，通过对管理机制、管理原则、管理方法以及管 理机构进行设置固定的规范，从而使得组织内人员按照既定标准、规范的要求进行操作， 使日常工作或活动达到预期的水平。下载后就可自由编辑。 1. 目的 为保障检测工作过程人身和仪器设备等的安全，切实执行有关健康、安全环保的规定。 2. 适用范围 适用于本单位各项安全管理工作。 3. 职责 a) 部门职责 ?办公室负责定期组织安全检查和安全防范工作，并组织人员培训学习各项安全法规和安全防护知识； ?各部门负责本部门相关安全管理规定的实施； ?检测部门负责协助办公室组织学习实验室安全防护培训； b) 人员职责 ?质量负责人负责实验室安全管理工作；
?部门负责人负责本部门各项安全管理工作； 4. 程序 a) 日常安全管理规定 实验室走廊、楼梯、出口应保持畅通，每幢楼层应配备一定数量的消防器材，特别是液化气贮藏室、化学实验室等更应添置足够的消防器材，消防安全设施存放处严禁堆放物品，消防器材不得随意移位、损坏和挪用。 检测人员进入实验室必须穿戴必要的工作服，进入无菌室必须穿隔离服、工作鞋、工作帽；进行危害物质、挥发性有机溶剂、特定化学物质或其他毒性化学物质等化学药品操作实验时，必须穿戴防护具(防护口罩、防护手套、防护眼镜)，且须在通风橱内进行操作，同时务必遵守操作规程，勿自行改变实验流程；在进行化学实验时，严禁戴隐形眼镜，以防止化学试剂溅入眼镜而腐蚀眼睛。 避免在实验室吃喝食物且使用化学药品后需先洗净双手方能进食，食物不得储藏在储有化学药品之冰
高校实验室安全管理办法 第一章总则 第一条为进一步加强实验室安全管理，保障师生员工人身安全，维护教学、科研等工作的正常秩序，创建“平安校园”，根据《高等学校实验室工作规程》（原国家教委令第20号）、《高等学校消防安全管理规定》（公安部令第28号）、《危险化学品安全管理条例》（国务院令第344号）等有关法规和规章，以及《安徽省高等学校实验室安全管理办法》（皖教秘科〔2014〕32号）等文件精神，制定本办法。 第二条本办法中的“实验室”是指全校开展教学、科研活动的所有实验场所。实验室安全工作是学校安全稳定与综合治理工作的重要组成部分，包括实验室准入制度与项目安全审核制度建设、危险化学品的安全管理、生物安全管理、辐射安全管理、实验废弃物安全管理、仪器设备安全管理、水电安全管理、安全设施管理、实验室内务管理以及环境保护等多方面的工作。创建安全、卫生的实验室工作环境是各学院、科研平台、各级领导以及广大师生员工的共同责任和义务。 第三条校长是学校实验室安全责任人，全面负责学校实验室安全工作。学校贯彻“以人为本、安全第一、预防为主、综合治理”的方针，实行分管校长领导下的分工负责制；根据“谁使用、谁负责；谁主管，谁负责”的原则，落实分
级负责制（以学校与各单位签订的《安全稳定工作目标责任书》为准）。 第四条各单位要定期组织开展实验室安全教育和宣传工作，丰富师生的安全知识，营造浓厚的实验室安全校园文化氛围，提高教职工、学生安全意识。 第五条实验室安全工作是各单位和教职工年度绩效考核、评奖评优的重要指标之一，并且实行“一票否决制”。 第二章实验室安全管理体系及职责 第六条学校成立实验室安全工作领导小组，负责全校实验室安全管理工作，由分管校领导担任组长，成员由教务处、科研处、保卫处、后勤服务集团、基建处等部门人员组成。领导小组下设办公室，办公室设在教务处，负责学校实验室安全日常管理工作。 领导小组主要职责是：全面贯彻落实国家关于高校实验室安全工作的法律法规，制定学校实验室安全工作责任体系；实验室安全管理工作中的重要事项的决策和督查，筹措相关建设经费。 第七条实验室安全工作领导小组办公室按照上级主管部门相关要求，在学校实验室安全工作领导小组的指导下，组织开展全校实验室安全检查工作。其主要职责为：负责制订、完善全校性实验室安全规章制度，及时发布或传达上级部门的有关文件；指导、督查相关单位做好实验室安全教育培训和安全管理工作，做好危险化学品、辐射源、病源微生物等实验室的重点监管工作。每季度组织实验室安全检查，
三、双水相萃取 3.1 双水相萃取的原理及特点 3.1.1 双水相萃取的原理 双水相萃取与水-有机相萃取的原理相似，都是依据物质在两相间的选择性分配，但萃取体系的性质不同。当物质进入双水相体系后，由于表面性质、电荷作用和各种力(如憎水键、氢键和离子键等)的存在和环境因素的影响，使其在上、下相中的浓度不同。分配系数K等于物质在两相的浓度比，由于各种物质的K值不同，可利用双水相萃取体系对物质进行分离。 3.1.2 双水相萃取的特点 双水相体系萃取具有如下特点：(1)含水量高(70%~90%)，是在接近生理环境的温度和体系中进行萃取，不会引起生物活性物质失活或变性；(2)分相时间短，自然分相时间一般为5~15min； (3)界面张力小(10-7~10-4mN/m)，有助于强化相际间的质量传递；(4)不存在有机溶剂残留问题； (5)大量杂质能与所有固体物质一同除去，使分离过程更经济；(6)易于工程放大和连续操作。由于双水相萃取具有上述优点，因此，被广泛用于生物化学、细胞生物学和生物化工等领域的产品分离和提取。 3.2 双水相萃取在分离和提取各种蛋白质(酶)上的应用 用聚乙二醇(PEG)/羟丙基淀粉酶(Reppal PEG)体系经两步法可从黄豆中分离磷酸甘油酸激酶(PGK)和磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)。在黄豆匀浆中加入PEG4000，可絮凝细胞碎片及大部分杂蛋白。在上清液中加入PEG4000(12%)-ReppalPES(40%)，PGK在上相、GAPGH在下相的收率均在80%以上。萃取过程的放大采用离心倾析机连续处理匀浆液，用离心萃取器完成双水相体系的两相分离，整个工艺具有处理量大、接触时间短、酶收率高的特点。用PEG/(NH4)2SO4双水相体系，经一次萃取从A-淀粉酶发酵液中分离提取α-淀粉酶和蛋白酶，萃取最适宜条件为PEG1000(15%)-(NH4)2SO4(20%)，pH=8，α-淀粉酶收率为90%，分配系数为19.6，蛋白酶的分离系数高达15.1。比活率为原发酵液的1.5倍，蛋白酶在水相中的收率高于60%。通过向萃取相(上相)中加进适当浓度的(NH4)2SO4可达到反萃取。实验结果表明，随着(NH4)2SO4浓度的增加，双水相体系两相间固体物析出量也增加。固体沉淀物既可干燥后生产工业级酶制剂，也可将固体物加水溶解后用有机溶剂沉淀法制造食品级酶制剂. Harris用双水相体系从羊奶中纯化蛋白，研究了牛血清清蛋白(OSA)、牛酪蛋白、β-乳球蛋白在PEG/磷酸盐体系中的分配以及PEG相对分子质量、pH值和盐的加入对3种蛋白分配的影响。实验结果表明。增加NaCl浓度，可提高分配系数，最佳pH为5。对OSA和牛酪蛋白，可得到更高的分配系数。在含有疏水基葡聚糖中，蛋白质和类囊体薄膜泡囊的分配研究表明，苯甲酰基葡聚糖和戊酰基葡聚糖具有疏水性。疏水基影响氨基酸、蛋白质和薄膜泡囊在双水相体系中的分配，在只有磷酸盐缓冲溶液的PEG8000/葡聚糖双水相体系中，大部分β-半乳糖苷酶被分配在上相，但在下相中加入少量的苯甲酰基葡聚糖(取代程度为0.054)或戊酰基葡聚糖(取代程度为0.12)时，β-半乳糖苷酶的分配系数就降低了100倍。在对牛血清清蛋白、溶菌酶、脂肪酶和β-乳球蛋白的分配进行的观察中发现具有相似的现象。类囊体薄膜泡囊的分配受疏水基的影响特别大，薄膜泡囊被分配在含有疏水基的一相中。在含有N，N-二甲基甲酰胺的聚合物双水相中，利用逆流分配可对玉米醇溶蛋白进行分级分离。Miyuki在PEG/K3PO4双水相体系中用两步法对葡糖淀粉酶进行了萃取纯化。用第一步萃取后含有酶的下相和PEG组成双水相作为第二步萃取体系，称作两步法。葡糖淀粉酶的最佳分配条件是PEG4000(第一步)、PEG1500(第二步)，pH=7，纯化系数提高了3倍。