实验五DNA片段的回收与纯化
一、实验目的
1、了解DNA回收的原理。
2、掌握从琼脂糖中回收目的DNA片段的方法
二、实验原理
PCR得到的DNA片断经过电泳后，按分子量大小被分开，排列在琼脂糖凝胶中，在紫外灯下切下目的DNA片段，用特殊的试剂加热熔解凝胶，使DNA 溶到溶液中，再经过过吸附柱吸附DNA片段，用清洗液清洗DNA片段，最后用洗脱液洗脱目的DNA片段，即得到所需目的DNA片段。
三、实验仪器及药品耗材
1、主要仪器：水浴锅、移液器、电子天平、量筒、微波炉、电泳仪、水平电泳槽和凝胶成像系统等。
2、主要药品及耗材：一次性手套、1.5 ul离心管、移液器吸头、柱式DNA 胶回收试剂盒、Goldview染料、DNA Marker 2000和溴酚蓝等。
四、实验步骤
1、通过琼脂糖凝胶电泳将目的DNA片段分开，在紫外灯下用手术刀将含目的DNA片段的的琼脂糖凝胶块切下，放入1.5ml离心管中。
2、加入500ul Buffer B2，将离心管置于50℃水浴10min,混匀，直至胶块完全融化（其间可拿出摇晃一下，时间不能过长，否则会使DNA损伤）
3、将溶化好的溶液全部移入吸附柱，8000r/min离心30s，倒掉收集管中的液体，将吸附柱放入同一个收集管中。
4、向吸附柱中加入500ul Wash Solution，9000r/min离心30s，倒掉收集管中的液体，将吸附柱放入同一个收集管中。
5、重复步骤4一次。
6、将空吸附柱和收集管放入离心机，9000r/min离心1min。
7、在吸附膜中央加入25ul Elution Buffer，室温静置1-2min，9000r/min离心1min。
8、取5 ul得到的DNA回收液，加入1 ul溴酚蓝，用1%琼脂糖凝胶检测。
9、将所得的DNA溶液置于-20℃保存用于后续实验。
五、作业
绘画出回收DNA电泳图，标明DNA Marker 位置及检测DNA位置，并根据DNA Marker位置及亮度估算回收DNA的大小及浓度。