一、名词解释
1 capacity fact：容量因子，也称分配容量或容量比，用k′表示。其定义为：一定温度与压力下两相达平衡后，溶质在固定相和流动相中分配量（质量或摩尔数）之比.
2 分配系数：K,一定温度与压力下两相达平衡后，组分在固定相和流动相中浓度的比值;
3 extra-column effect：柱外效应，即除柱内多种因素产生的色谱峰扩张外，其它产生峰扩张的因素之和：进样系统，系统连接管，检测器及其它柱外因素引起的峰扩张。
4 gradient elution：梯度洗脱，在HPLC分析中，控制流动相组成或洗脱强度随时间的改变而改变，以使极性差异较大的多个组分均能分离,同时谱峰间隔较均匀，分析时间尽量短。
5 HPSEC：高效体积排阻色谱法,即以多孔性填料为固定相，依据样品组分分子体积大小的差别进行分离的液相色谱方法。常用于肽和蛋白质的分子量分布测定及多步分离纯化程序中。其填料一般有硅胶基质和合成高聚物基质以及高交联多糖型凝胶三种。
6 ODS：十八烷基键合硅胶，又称C18. 典型的反相色谱柱，表面键和的基团为非极性羟基，适于分离弱极性，中等极性，较强极性及可电离的酸碱性有机物。
7 基线：在正常操作条件下，仅有流动相通过检测器系统时所产生的连续的响应信号，一般是一条直线;
8 峰面积：色谱曲线与基线间所包围的面积;
9 半峰宽：亦称半宽度,半峰宽度,指色谱峰高一半处的宽度
10 标准偏差σ：正态分布曲线x=±1时（拐点）的峰宽之半。正常峰宽的拐点在峰高的0.607倍处。标准偏差的大小说明组分在流出色谱柱过程中的分散程度。σ小，分散程度小、峰形瘦、柱效高；反之，σ大，峰形胖、柱效低。
11 死时间t0:流动相流过色谱柱所需时间(不保留组分流过色谱柱所需时间)
12 调整保留时间:tR’=tR-t0，指扣除死时间后的保留时间。
13 保留时间tR—进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值的时间。
14 相对保留值:(用γ或α表示,也称分离因子)两个组分调整保留值之比=tR2’/tR1’=VR2’/ VR2’;
15 分离度: 相邻两峰的保留时间之差与平均峰宽的比值，也叫分辨率，表示相邻两峰的分离程度。
16 色谱柱效：每米柱长具有的理论塔板数定义为色谱柱效，它是衡量色谱柱分离效能高低的一种量度。
1.在进行HPLC分析时，为防止分析柱污染，应采取哪些措施？
1）．加一个保护柱（预柱），其固定相性质应与分离柱一样或相近。
2）．样品要尽量净化，如沉淀蛋白，去除色素和无机盐等。
3). 样品分析结束后,应及时用适当溶剂清洗色谱柱.
2.乙醇的沸点为78.3℃，丁酮的沸点为79.6℃，在气相色谱柱上是否一定是乙醇先出峰，丁酮后出峰，为什么？
不一定.因为保留值除与样品组分的沸点有关外，还与样品及固定相的极性有关。乙醇（bp 78℃）和丁酮（bp 80℃）二个组分在非极性柱上，因为组分出峰的顺序由蒸汽压决定，沸点高的保留时间长，所以乙醇先出峰，丁酮后出峰；在极性柱上，沸点和分子之间作用力同时作用，在强极性柱上分子间的作用力其主要作用，按极性大小出峰，乙醇的极性比丁酮大，所以丁酮先出峰，乙醇后出峰。
4.电喷雾离子化的原理是什么?离子化过程分哪三步？
原理：在喷针针头与施加电压的电极之间形成强电场，该电场使液滴带电，带电的溶液在电场的作用下向带相反电荷的电极运动，并形成带电的液滴。由于小液滴的分散比表面积增大，在电场中迅速蒸发，结果是带点液滴表面单位面积的场强极高，从而产生液滴的“爆裂”。重复此
过程，最终产生分子离子。
ESI离子化可分为一下三个步骤：1）形成带电液滴：在ESI高压电极处施以正的高电压，小液滴从毛细管高速喷出而带有过量的正电荷，从而产生电化学反应，通过溶剂组分氧化而去掉负离子或通过毛细管自身的氧化而增加正离子，当在ESI高电压极处施以负的高压，小液滴从毛细管高速喷出而带有过量的负电荷；
2）溶剂蒸发和小液滴破裂：随着溶剂蒸发，液滴半径缩小，液滴表面电荷斥力增大，达到一定半径时，克服表面张力而裂解，重复此过程形成非常小的液滴；
3）形成气相离子：对于半径<=10nm液滴，电荷的斥力作用导致离子从液滴表面蒸发而不是液滴的分裂
9、HPLC与GC比较，其特点？
分析对象及范围：GC分析只限于气体和低沸点的稳定化合物，而这些物质只占有机物总数的20%；HPLC可以分析较高沸点、较高分子量的、稳定或不稳定化合物，这类物质占有机物总数的80%。
流动相的作用：GC采用的流动相为有限的几种“惰性”气体，只起运载作用，与组分之间基本没有作用；HPLC采用的流动相为液体或各种液体的混合，可供选择的条件自由度较大。它除了起运载作用外，还可与组分作用，并与固定相对组分的作用产生竞争，即流动相对分离的贡献很大，可通过流动相组成来控制和改进分离。
操作温度：GC需高温；HPLC常常在室温下进行。
10、UVD紫外,FLD荧光,RID示差折光,ELSD蒸发光散射-这些检测器哪些是通用型的检测器？哪些是选择性检测器？哪些可与梯度洗脱兼容？哪些不兼容？
UVD紫外: 由于不是所有化合物都有UV吸收，因此不是通用检测器;与梯度洗脱兼容
FLD荧光: 许多有机化合物，特别是芳香族化合物、被一定强度和波长的紫外光照射激发后，发射出较激发光波长要长的荧光。
ELSD蒸发光散射：适合于无紫外吸收、无电活性和不发荧光的且挥发性较小的样品组分的检测。RID示差折光：是一种通用型检测器,只要被测组分与流动相的折光率有差别就可使用。与梯度洗脱不兼容,价格较高。
RID，ELSD是通用型检测器。UVD,FLD,是选择性检测器。
UVD, FLD, ELSD与梯度洗脱兼容。RID与梯度洗脱不兼容。
11、气相色谱分析中样品的衍生化处理的目的及作用?
待试样品在适当条件下与所选试剂作用使其转化成为满足色谱分析要求的衍生物后再进行色谱分析。目的：（1）增加试样的挥发性和稳定性，从而扩大气相色谱的应用范围（2）改善分离效果，改进组分吸咐特性。（3）帮助未知物定性，增加检测灵敏度和增加定量可靠性
12、请简述气相色谱法分析油脂的脂肪酸组成样品前处理过程?
取约3～5滴植物油样品于20ml试管中，加入0.5mol/L的NaOH甲醇溶液2ml，60℃水浴中加热至油珠完全溶解（约30min），冷却后加入25%BF3甲醇溶液2ml，60℃水浴酯化20min，冷却后加入2ml正已烷，振摇，加入2ml饱和NaCl溶液振摇，离心取上层有机相于一只干燥试管中并加入少量无水硫酸钠以除去微量的水，供分析使用。
13、什么样的反相柱不会发生“疏水塌陷”？
对于硅胶基质填料上的反相键合相---内嵌极性基团的反相键合相，极性基团增加了表面水的浓度即改善与水的浸润性；如果硅胶表面未湿润，那么有效的色谱表面积会减少95%，被分析物的保留时间会显著降低，即“疏水塌陷”。保留时间与填料表面积及配体（内嵌极性基团）有关。注意：几乎所有的表面积都在孔内！
14、流动相脱气的目的？有哪几种脱气方式？
流动相脱气的目的
①使色谱泵的输液准确：输液量均匀准确，并且脉动减小；保留时间及色谱峰面积的重现性提高②提高检测的性能：防止气泡引起的尖峰；基线稳定，信噪比增加；溶剂的紫外吸收本底降低③保护色谱柱：减少死体积；防止填料的氧化
在线脱气装置用于脱去溶解在流动相中的气体，流动相先经过脱气装置再输送到色谱柱。脱气不好时有气泡，导致流动相流速不稳定，造成基线漂移，噪音增加。除在线脱气装置外，目前也有采用离线超声脱气、真空脱气、氦气脱气等方式。
五．应用题
1.离子抑制色谱技术在食品分析中应用较广，请举出一实例说明其技术的原理，并写出色谱条件和样品处理方法。
红葡萄酒中酚类化合物
样品预处理：将25ｍL红葡萄酒样品通过聚酰胺柱（259ｍｍ×17mmi.d.）,用5ｇPolgamid-6(Serva)装填，并先用pH2.5的酸性水平衡），以100ｍL蒸馏水淋洗，再用150ｍL30％的甲醇（酸化至PH2.5）洗脱，洗脱液真空浓缩至5ｍL左右，并用15％甲醇定容至10ｍL。
色谱柱：ODS柱（125mm×4mmI.D.,），室温
流动相：体积比为85:15的水－甲醇（用HClO3调PH2.5）
流速：1.0ml/min 检测：UV-280nm 样品：红葡萄酒
原理: 多酚、有机酸。pH2-3,酸性条件下，电离受到抑制，保留值增大，就可以得到分离，不在酸性条件下，阴离子状态不保留，流出色谱柱，就不能分离。
2. 请简述检测果酒或黄酒中的中性酚和酸性酚的样品处理方法和色谱条件(选用什么色谱柱和流动相及检测器?检测波长大致多少nm。
预处理: (1) 去除大分子,蛋白,用乙醇沉淀
(2)中性酚或酸性酚:中性条件下用液液萃取(乙醚,乙酸乙酯萃取) 。酸性条件下,也可用乙醚,乙酸乙酯. 或固相萃取法.
色谱条件：C18柱流动相：乙腈:水:三氟乙酸紫外检测器检测波长270-280nm
称取一定量的酚类物质，溶于少量水，在棕色容量瓶中定容至10 mL，浓度分别为：儿茶素52.0 mg/L，绿原酸40.0 mg/L，咖啡酸44.0 mg/L，表儿茶素44.0 mg/L，香豆酸60.0 mg/L，阿魏酸44.0 mg/L，摇匀，放入冰箱4°C避光储存备用。配制标准溶液时，采用逐级稀释法配成一系列浓度的混合标准溶液。
取25 mL原料用1 mol/L NaOH溶液调pH值至7.0，加入25 mL乙酸乙酯，用混合摇床震荡10 min，然后转移到分液漏斗中分离，水相再用25 mL乙酸乙酯萃取1次，合并酯相为中性酚。水相再用6 mol/L 的HCl溶液调pH值至2.0，再分别用25 mL乙酸乙酯萃取2次，合并酯相为酸性酚。将中性酚和酸性酚合并后浓缩至干，残渣溶于水中，并在棕色容量瓶中定容至25 mL，用0.22 μm滤膜过滤，滤液于冰箱4℃储存待测。
色谱柱：Eclipse XDB C１8 (150 mm×4.6 mm i．d．，5 μm)，流动相：A为甲醇；B为1％乙酸水溶液(V/V)；梯度洗脱程序：溶剂A在40 min 内由5％上升到30％，然后变为100％，并维持5 min，最后再返回到初始状态。柱温：30℃；流速：1.0 mL/min光电二极管阵列检测器；检测波长：280 nm；进样量：20 μL。
3.请设计出测定某一多糖样品的分子量分布或单糖组成的色谱分析方法（包括样品处理方法和色谱条件）。
高效液相色谱法测定果汁的糖类组分含量
1）、标准溶液系列配制
分别准确称取各种糖标准品100mg左右于10ml容量瓶中，用超纯水溶解定容摇匀后，即得10mg/ｍＬ左右的标准溶液，再以此逐级稀释成8mg/mＬ, 6mg/mＬ, 4mg/mＬ, 2mg/mＬ,1mg/mＬ的标准溶液系列，均经0.45μm微孔膜过滤，滤液供进样用。
2）、样品处理
准确量取3ml果汁至10ml容量瓶中用无水乙醇定容至刻度，离心后取上清液在热水浴条件下用氮气将乙醇吹去，再用水定容，并用0.45um有机相微孔膜过滤，滤液颜色若较深，再用Sep-Pak C18固相萃取小柱处理去除色素等杂质，处理后的样液上机测定。
3）、上机测定
色谱柱：Sugarpak1,6.5mmid×300mm
流动相：纯水
检测器灵酸敏度： 4
柱温：85℃
流速：0.4ml/min
进样体积：10μL
4.分析多糖或多肽的分子量分布应采用何种色谱分离模式?请简述该色谱模式的基本原理.
高效凝胶过滤色谱（HPGFC）分析
基本原理：按分子体积大小洗脱，凝胶色谱柱的选择主要取决于被分离样品的性质和糖组分分子量大小，以凝胶过滤色谱分析多糖的流动相一般为盐溶液。用多个不同分子量的标准品作分子校正曲线(分子量对数对保留时间或保留体积作图，一般为线性)，其分子量测定结果是一相对值，不是绝对分子量。6、计算题: 若在一个色谱图上,测得tr=5.37cm,tm=0.52cm,w=1.32cm,假定柱长为1m,计算:
(1) 理论塔板数和有效理论塔板数.（2）塔板高度及有效塔板高度（3）分配比（1）265，216（2）3.77mm,4.63mm（3）9.3
注：N=5.54( )2=16( )2 根据色谱柱长L和理论塔板数N，可求出每个塔板高度H=L/N Neff=16( )2 =5.54 ( )2 TR’=TR-TM Heff= k=(tr-tm/)tm
7、三聚氰胺的化学结构如下，请据此结构特点和本课程所学知识，选择一种可用于三聚氰胺检测的HPLC分离模式，并说明理由。
答：从结构式可以看出三聚氰胺是非极性有机化合物，呈弱碱性，容易结合H+形成带正电的阳离子，在以水-甲醇或水-乙腈为流动相的反相柱（C18）上保留时间比较短，由于杂质的影响还会出现严重的拖尾现象。若在流动相中加入庚烷磺酸钠试剂，则可以与样品中的阳离子形成离子对，使其成为电中性分子，利于延长样品的保留时间，分离效果会得到提高。因而可选择分离模式为反相离子对色谱对其进行分离。
8、对于单糖和低聚糖的HPLC测定，有多种柱系统（包括色谱柱和流动相）可供选择，请简述其中两种柱系统的组成，并说明其分离机制（即分离模式）
分离柱流动相分离模式
氨基键合相
C18耐碱性柱
环糊精键合相
石墨化碳柱乙腈－水或乙腈－甲醇－水
稀NaOH溶液（Ph11）
乙腈-水（0.1%甲酸）
2~15%乙醇，含1mmol/lNaOH 正相分配
反相色谱
正相色谱
吸附，反相分配
阳离子交换柱（Ca2+、Ag+、Pb2+、K+型或或H+型）水或稀酸（pH2）空间排阻，配位交换15、HPLC主要分为哪几种类型？
答：正相色谱、反相色谱、凝胶色谱、离子凝胶色谱、手性色谱、亲和色谱
按分离机理可以将HPLC分为五类：分配色谱—基于被分离组分在两相中的分配系数不同(根据固定相和流动相相对极性的差别,又可分为正相色谱和反相色谱)；吸附色谱—基于被分离组分对活性的固定相表面吸附力的不同；离子交换色谱—利用不同离子与固定相上的相反电荷离子间作用力大小的不同进行分离；体积排阻色谱—利用固定相孔径的不同，把被分离的组分按分子大小分开的一种色谱分离方法；亲和色谱—依据生物分子与固定相上键合的配位体之间存在的特异性亲和作用能力的差别，而实现对具有生物活性的物质进行分离
16、简述正相色谱和反向色谱的特点（包括：固定相和流动相的相对极性，不同极性化合物的出峰顺序，流动相极性大小与洗脱强度的关系）。
答：正相色谱：固定相极性较强，流动相极性较弱；样品极性越强出峰越晚；流动相极性越强，洗脱强度越大
反向色谱：固定相极性较弱，流动相极性较强；样品极性越强出峰越早；流动相极性越强，洗脱强度越小。17、对于HPLC,影响分离度的k′、α、N三要素分别与哪些色谱条件有关?
k′与流动相组成(主要是溶剂比例、pH等)、固定相的性质和用量及柱温有关。
α由流动相组成(特别是有机溶剂种类和pH值等)、固定相的性质及柱温等因素决定。
N（或H）由板高方程各项参数决定，一般随色谱柱长、
填料粒径、填充均匀度、流速和温度等操作条件的变化而变。
18．请简述气相色谱气路系统中的“隔膜吹扫气”和“尾吹气”的作用。
答：隔膜吹扫气是通过进样器隔垫下面将隔垫(即密封垫)因高温产生的挥发物带去机外所用的气体,可以防止对分析结果的影响，可以减少峰的拖尾，但流量太大时，峰面积会变小。
尾吹气是从色谱柱出口直接进入检测器的一路气体，又叫补充气或辅助气。其作用是减少FID 入口至检测器的死体积，缩短气体的停留时间，从而消除检测器的死体积的柱外效应。
3.何谓反相离子对色谱？影响其保留值的因素主要有哪些？离子对试剂的链长和有机溶剂的比例如何影响保留值？
答：反向离子对色谱是将与被分析离子带相反电荷的离子(配对离子或反离子)加到流动相中，与溶质离子结合形成弱极性离子对，此离子对在流动相中不易离解而迅速转移到键合相中，进而在固定相和流动相间进行分配，最终实现分离的一种反向色谱模式。
如三聚氰胺的分离，三聚氰胺是弱碱性有机物，在溶液中主要以阳离子存在，在以水-甲醇或水-乙腈为流动相的反相柱（C18）上保留时间比较短，由于杂质的影响还会出现严重的拖尾现象。若在流动相中加入庚烷磺酸钠试剂，则可以与样品中的阳离子形成离子对，使其成为电中性分子，这样样品的保留时间会增大，分离效果会得到提高。
影响因素：
1)介质：反相过程常用的介质上以水为主体的缓冲溶液，其中pH值影响最大，PH则更加阴离子的保留增加，阳离子则相反。另外，缓冲液中离子类型和浓度也是重要选择性参数。2)对离子浓度：增加反离子的浓度可增加保留，但这种关系并非是线性的
3)有机改性剂：以水为主体的流动相中通常增加极性有机溶剂，如甲醇，乙腈等做改进剂，有机溶剂的加入改善了缔和分子在两相中的分配
4)温度：它影响容量因子和离子化平衡的PK值
离子对试剂的链长越短，其稳定性就越差。链长不同，形成离子对的能力不同。
有机溶剂的加入会影响原有缓冲溶液的PH值，另外对肽的离子化程度和缔和分子在两相中的分配起改善作用。比例，影响离子对的强度。
5. 理论塔板数和有效理论塔板数的计算公式？两者的区别？
两者的区别：由于在色谱柱中存在着死体积（在组分的保留时间中包括了死时间），因此，从分配平衡理论计算出来的理论塔板数n并不能完全反映柱效，利用扣除死体积（或扣除死时间）
后的调整保留体积（时间）计算的有效理论塔板数neff能更真实地反映柱效。
6、速率理论方程，其中H,A,B,及u各表示什么意思？
H—塔板高度;A—涡流扩散项，指固定相填充不均匀引起的扩散;B--纵向分子扩散项，分子沿色谱柱轴向扩散引起的色谱谱带展宽;C--传质阻力项，指组分在流动相和固定相之间传质的阻力，由于溶质分子与固定相、流动相分子间相互作用，阻碍溶质分子快速传递实现分布平衡，导致有限传质速率的分子间作用力称为传质阻力，固定相传质阻力+流动相传质阻力; u——流动相流动的线速度.
7、B = 2 r Dm，其中Dm表示什么？在GC还是HPLC中可以忽略B？为什么？
Dm—组分在流动相中的扩散系数。HPLC中可以忽略，纵向分子扩散显著存在于GC中.由于组分在液相中的扩散系数只有气体中的1/105，因此在液相色谱中B可以忽略。(该扩散是由浓度梯度造成的。组分从柱入口加入，其浓度分布的构型呈“塞子”状。。随着流动相向前推进，由于存在浓度梯度，“塞子”必然自发地向前和向后扩散，造成谱带展宽)
8、在UPLC超高效液相色谱（Ultra Performance LC?）中，为什么高流速仍能得到很高的柱效？从van Deemter曲线可以看出，u对纵向扩散项（B/u）和传质阻力项(Cu)的影响不一致，H先随u的增加而降低，达到最小值后随着u的增加而增加。由于UPLC系统采用1.7μm颗粒，即颗粒度非常小，理论塔板高达不会随着线性流速的增加而明显增加，柱长可以比用5μm颗粒时缩短3倍而保持柱效不变，而且使分离在高3倍的流速下进行，结果使分离过程快了多倍而分离度保持不变。
9、何为反相离子抑制色谱的分离模式？举例说明。
答：在反相色谱法中，通过调节流动相的pH值，抑制样品组分的解离，增加它在固定相中的溶解度，以达到分离有机弱酸、弱碱的目的，这种技术称为离子抑制色谱法。
以葡萄酒中酚类物质的测定为例，由于酚类物质均有弱酸性，极性较强，在水和甲醇中有较大溶解度。因此，在甲醇/水为流动相并且pH=7时，多数组份保留时间很短，无法完全分离。若采用离子抑制色谱法可较好的分离。
样品处理：将25mL红葡萄酒样品通过聚酰胺柱（259mm×17mmid,用5ｇPolgamid-6(Serva)装填，并先用pH2.5的酸性水平衡），以100ｍL蒸馏水淋洗，再用150mL30％的甲醇（酸化至PH2.5）洗脱，洗脱液真空浓缩至5ｍL左右，并用15％甲醇定容至10ｍL。色谱柱：ODS柱（125mm ×4mmiD）
流动相：体积比为85:15的水－甲醇（用HClO3调PH2.5）流速为1ｍL/min；检测波长为280nm。
10.液相色谱分析鸡精中的肌苷酸和鸟苷酸含量
采用反相高效液相色谱，按分子极性大小，使鸡精中各种组分同时得到分离，利用紫外检测器测定肌苷酸钠和鸟苷酸钠组分含量。
1).标准溶液系列配制
分别准确称取肌苷酸钠和鸟苷酸钠标准品20mg左右于100ml容量瓶中，用超纯水溶解定容摇匀后，即得0.2mg/ｍＬ左右的标准溶液，再以此逐级稀释成0.1mg/mＬ, 0.05mg/mＬ, 0.01mg/mＬ, 0.005mg/mＬ,0.001mg/mＬ的标准溶液系列，均经0.45μm微孔膜过滤，滤液供进样用。2).样品处理
准确称取200mg左右鸡精至10ml容量瓶中用3ml水溶解，然后用无水乙醇定容至刻度，充分摇匀，静置，过滤后取3ml滤液用N2吹至0.5ml以下，再用水定容至3ml，摇匀后用0.45um 有机相微孔膜过滤，滤液再用C18固相萃取小柱处理去除色素等弱极性杂质，处理后的样液上机测定。
3).色谱条件色谱柱：Diamosil C18, 4.6mmid×250mm，5um流动相：甲醇：0.05％H3PO4溶液5：95
检测：254nm，DAD柱温：30℃流速：1.0ml/min进样体积：5μL
4).上机测定
4.1标准曲线制作
将不同浓度的系列标准品分别上机进样分析，以峰面积为横坐标（x），浓度为纵坐标（y）作线性回归，得到肌苷酸钠和鸟苷酸钠的标准曲线方程、相关系数及线性范围。
4.2样品测定
将三个平行样品溶液分别进样，每个样均重复进样3次取其峰面积平均值代入标准曲线方程或单点校正计算含量。
11.请简述分析果汁中葡萄糖、果糖及蔗糖的色谱条件与样品处理方法，并说明样品处理的主要步骤的目的
答：色谱条件：色谱柱：Sugarpak1,6.5mmid×300mm
流动相：纯水检测器灵酸敏度：4 柱温：85℃流速：0.4ml/min 进样体积：10μL
样品处理方法：(1)准确量取3ml果汁至10ml容量瓶中用无水乙醇定容至刻度，目的是提取果汁中的葡萄糖、果糖及蔗糖，沉淀蛋白质和大分子糖。(2)离心，取上清液在热水浴条件下用氮气将乙醇吹去，用水定容至刻度。除去乙醇，以防HPLC分析时影响糖的分离。(3)用0.45um有机相微孔膜过滤，滤液颜色若较深，再用Sep-Pak C18固相萃取小柱处理去除色素等杂质。目的是除去蛋白质和大分子糖沉淀，消除色度对分析的影响。(4)处理后的样液上机测定
12、HPLC测定茶多酚中儿茶素含量（实验2）所使用的是什么色谱分离模式？流动相中为何要加酸？对于普通硅胶基质键合相C18柱，pH最低不能小于多少？
离子抑制色谱法，选用Zorbax SBC18色谱柱，以甲醇－水－三氟醋酸（或醋酸）为流动相。在流动相中加入酸，目的是改变流动相的pH值，抑制溶质电离，使溶质在色谱过程中以中性分子保留。
对于普通硅胶基质键合相C18柱，pH最低不能小于2。
梯度洗脱是在一个分析周期内程序控制流动相的组成，如溶剂的极性、离子强度和pH值等，用于分析组分数目多、性质差异较大的复杂样品。采用梯度洗脱可以缩短分析时间，提高分离度，改善峰形，提高检测灵敏度，但是常常引起基线漂移和降低重现性。
梯度洗脱有两种实现方式：低压梯度（外梯度）和高压梯度（内梯度）。
两种溶剂组成的梯度洗脱可按任意程度混合，即有多种洗脱曲线：线性梯度、凹形梯度、凸形梯度和阶梯形梯度。线性梯度最常用，尤其适合于在反相柱上进行梯度洗脱。
在进行梯度洗脱时，由于多种溶剂混合，而且组成不断变化，因此带来一些特殊问题，必须充分重视：
①要注意溶剂的互溶性，不相混溶的溶剂不能用作梯度洗脱的流动相。有些溶剂在一定比例内混溶，超出范围后就不互溶，使用时更要引起注意。当有机溶剂和缓冲液混合时，还可能析出盐的晶体，尤其使用磷酸盐时需特别小心。
②梯度洗脱所用的溶剂纯度要求更高，以保证良好的重现性。进行样品分析前必须进行空白梯度洗脱，以辨认溶剂杂质峰，因为弱溶剂中的杂质富集在色谱柱头后会被强溶剂洗脱下来。用于梯度洗脱的溶剂需彻底脱气，以防止混合时产生气泡。
③混合溶剂的粘度常随组成而变化，因而在梯度洗脱时常出现压力的变化。例如甲醇和水粘度都较小，当二者以相近比例混合时粘度增大很多，此时的柱压大约是甲醇或水为流动相时的两倍。因此要注意防止梯度洗脱过程中压力超过输液泵或色谱柱能承受的最大压力。
④每次梯度洗脱之后必须对色谱柱进行再生处理，使其恢复到初始状态。需让10~30倍柱容积的初始流动相流经色谱柱，使固定相与初始流动相达到完全平衡。
1. 色谱法按分离原理分类, 可分为吸附色谱，分配色谱，排阻色谱和离子交换色谱。
2. 所采用流动相的密度与液体接近, 粘度又与气体接近的色谱方法称超临界流体色谱法。
3. 1956年范德姆特提出色谱速率理论方程。其方程简式表示为H＝A＋B／u＋Cu
4.分离非极性组分, 可选择非极性固定液, 组分分子与固定液分子之间的作用力主要为色散力
5.目前常用的色谱柱有填充柱和空心毛细管柱两种。
6.根据范氏方程，试简要分析要实现色谱快速分析应注意哪些操作条件？
答:要兼顾到提高柱效和加快分析速度两个方面。提高载气流速可加快分析速度，抑
制分子扩散(B/u)，但将使传质阻力增加( Cg+ Cs) 为此，可采用降低固定液用量，减少液层厚度df，同时应用轻质载气提高Dg来减少气相传质阻力等措施。因此，结论是：选用轻质载气，减少固定液用量，提高载气流速。
7.试预测下列操作对色谱峰形的影响, 并简要说明原因。
(1) 进样时间超过10 s (2) 气化温度太低，以致试样不能瞬间气化
(3) 加大载气流速很多(4) 柱长增加一倍
答: 1. 谱峰变宽,柱外分子扩散加剧。 2. 谱峰变宽，柱外分子扩散加剧。
3. 峰形变窄，保留时间缩短。
4. 峰形变宽,增加0.4倍，保留时间增加。
8.试预测下列实验条件对色谱峰宽的影响, 并简要说明原因.
(1) 柱温增加(2) 相比减小(3) 分配比增加(4) 试样量减小很多
答: (1) 峰宽减小，因为分配系数减小。(2) 峰宽增加，传质阻力增加。
(3) 峰宽增加，传质阻力增加。(4) 峰宽减小，柱外初始带宽减小。
第一章1.由俄国植物学家茨维特创立的色谱法, 应该是属于(4)液-固色谱
2.什么叫气-固色谱法? 气-固色谱法是流动相为气体, 固定相为固体吸附剂。分离原理是利用组分与固体吸剂的吸附与脱附能力不同进行分离。可适用于气体及低沸点烃类
3.什么叫气-液色谱法? 气-液色谱法是流动相为气体, 固定相为液体。分离原理是利用组分与固定液的溶解挥发能力不同进行分离。可适用于在固定液中有一定溶解度的试样。
4.试比较气相色谱法与高效液相色谱法的优缺点。
H PLC法不受试样挥发度和热稳定性的限制, 更适合于分析生物大分子、离子型化合物、热不稳定的天然产物和其它高分子化合物。另外H PLC的流动相不仅有使试样沿柱向前移动的作用, 且可与被测组分分子发生相互作用, 使选择条件增加一个。但相对而言, GC法分析速度较快, 方法灵敏度较高、方便且耗资较低。
第二章1.色谱图上的色谱峰流出曲线可说明什么问题？
解：可说明（1）根据色谱峰的数目，可判断样品中所含组分的最少个数。（2）根据峰的保留值进行定性分析。（3）根据峰的面积或高度进行定量分析。（4）根据峰的保留值和区域宽度，判断色谱柱的分离效能。（5）根据两峰间的距离，可评价固定相及流动相选择是否合适。
2.反映色谱柱柱型特性的参数是：C.相比
3.什么叫死时间？用什么样的样品测定？
解：不被固定相吸附或溶解的组分，从进样开始到柱后出现最大值所需要的时间。通常对于热导池检测器用空气作为测试样品，对于氢火焰离子化检测器，常用甲烷（CH4）作为测试样
4.对某一组分来说，一定柱长下，色谱峰的宽或窄主要决定于组分在色谱柱中的B. 扩散速度
5.指出下列哪些参数改变会引起相对保留值增加？为什么？C.降低柱温
6.色谱法按固定相的固定方式分类, 除柱色谱法以外, 还有纸色谱和薄层色谱。
7.某一色谱柱从理论上计算得到的理论塔板数n 很大，塔板高度H很小，但实际上分离效果却很差，试分析原因。
解：n是通过保留值来计算的，没有考虑到死时间的影响，实际上t m对峰的影响很大，特别是K′≤3时，扣除死时间算出的n eff，有效塔板高度H eff很大，因而实际分离效能很差。
第三章1.为什么要测定定量校正因子？
解：由于组分的峰面积不等于其重量或百分含量，也就是说，在同一类型的检测器上，重量或浓度相同的不同种物质产生的信号是不一样的；在不同类型的检测器上，同一种物质产生的信号也是不一样的，因此，为了使产生的响应信号能定量代表物质的含量，就要测定校正因子。
2.测苯二甲酸混合物中间苯二甲酸含量，称取样品0.3578g,内标物癸二酸0.1029g ，将样品及内标物甲酯化后进行气相色谱分析，测得间苯二甲酸二甲酯的峰面积为2
3.7单位，癸二酸二甲酯的峰面积为2
4.5单位，已知这两种酯的重量校正因子分别为0.77和1.00，求间苯二甲酸的含量 解：查出癸二酸分子量为202，癸二酸二甲酯为230，间苯二甲酸分子量为166，间苯二甲酸甲酯分子量为194。
先计算间苯二甲酸二甲酯的量（m 1）：
第四章1.在气相色谱分析中为了测定下面组分，宜选用哪种检测器？为什么？（1）蔬菜中含氯
农药残留量；（2）测定有机溶剂中微量水；（3）痕量苯和二甲苯的异构体；（4）碑酒中微量硫化物 解（1）蔬菜中含氯农药残留量选用电子捕获检测器，因为根据检测机理电子捕获检测器对含有电负性化合物有高的灵敏度。残留农药是含有电负性化合物，选用电子捕获检测器检测。
（2）有机溶剂中的微量水选用热导池检测器检测，因为热导池检测器是通用型检测器，只要有导热能力的组分均可测定，故可测定微量水。而气相色谱其它几种检测器如氢焰、电子捕获、火焰光度检测器根据检测机理均不能测定水。（3）痕量苯和二甲苯的异构体可用氢火焰离子化检测器，因为氢火焰离子化检测器对含C 、H 元素的有机化物有高的响应信号，特别适合。（4）啤酒中微量硫化物选用火焰光度检测器，因为火焰光度检测器是只对硫、磷有响应信号，且灵敏度特高，故为首选。
2.相对保留值和保留指数都是表示某组分的相对保留能力的大小，二者不同的是什么？
解：相对保留值和保留指数二者不同的是，相对保留值以任意选定的单个化合物作为参比标准，而保留指数则以正构烷烃系列作为参比标准，把物质的保留行为用两个紧靠近它的两个正构烷烃来标定。
3.已知苯的沸点为80.1℃，环已烷的沸点为80.8℃，采用非极性固定液能分离开吗？采用中等极性或更强极性的固定液能分离开吗？为什么？
解：苯和环已烷的沸点很相近，若采用非极性固定液（SE －30，液体石腊）是很难将它们分离的。但苯比环已烷容易极化，如果用中等极性的邻苯二甲酸二壬酯固定液（DNP ），使苯产生诱导偶极，此时苯的保留时间是环已烷的1.5倍，能将苯与环已烷很好分离。苯后出峰，若选用强极性的β，β′－氧二丙腈固定液，则苯的保留时间是环已烷的6.3倍，很容易分离。
4.对于永久性气体的分离为什么常采用气固色谱？
答：尽管气液色谱应用面广，但是H 2、O 2、N 2、Ar 2等永久性气体在气液色谱柱上，不能得到分离，由于它们在固定液上的溶解度都极小，使分配系数几乎一样，没有差别，即固定液对永久性气体无选择性，而固体吸附剂对永久性气体有好的吸附能力，使得永久性气体组分在气固色谱中有较大的分配系数，彼此可分离
5.推荐两种分离脂肪酸甲酯的固定相，丁二酸二乙二醇聚酯（DEGS ）和丁二酸新戊二醇聚酯（NGPS ），对于分离饱和与不饱和脂肪酸甲酯，哪一种固定液更好呢？
固定液 x ′ y ′ z ′ u ′ s ′
DEGS 496 746 590 837 835
NPGS 272 469 366 559 472
087.000.15.24)202/230(1092.077.07.23)202/230(1=????=?=s s s i i f A m f A m 9.201003578.0)194/166(0837.0100)194/166(%1
=??=??=m m p i
答：对于饱和与不饱和脂肪酸甲酯的分离，我们必须考虑有高的z′值使其对酯基有好的保留外，还要从不饱和度的分离考虑柱子的选择，要选择x′值高的固定液，因为x′值是表示芳烃和烯烃物质在固定液上的滞留程度，x′值越高，说明烯烃物质在该固定液上的滞留时间长，从上面两组数据可看出，DEGS的x′与z′均比NPGS高得多，因而选用DEGS固定液，分离效果更好些。
6.试对下列试样设计气相色谱分析操作条件：（1）丙酮中微量水的测定；（2）超纯氮中微量氧的测定；（3）蔬菜中含有机磷农药的测定；（4）微量苯、甲苯、二甲苯异构体的测定。
答：（1）采用气－固色谱法，高分子多孔微球（GDX）为固定相，氢气为流动相，热导池检测器。（2）采用气－固色谱法，5A分子筛为固定相，氢气为流动相，热导池检测器。（3）采用气－液色谱法，OV－210为固定相，氮气为流动相，火焰光度检测器。（4）采用气－液色谱法，邻苯二甲酸二壬酯＋有机皂土为固定相，氮气为流动相，氢火焰离子化检测器。
7.对色谱固定液有何要求？固定液有哪些分类法？
答：1. 选择性好，对各组分的分配系数有较大的差别。
2. 在使用条件下蒸气压低，否则固定液流失引起噪声及柱寿命短、保留值重现性差。
3. 操作温度下呈液态，粘度小，凝固点低。
4. 热稳定性和化学稳定性好。在高温下不分解，不与载体发生化学反应。
5. 对载体具有一定的浸润能力，能形成均匀的液膜。
固定液的分类方法主要有，按固定液的相对极性、按固定液的特征常数及按固定液的化学结构和所含官能团等分类方法。
第五章1.采用相同固定液的毛细管柱和填充柱上分离同一样品，欲达到相同的分离度，为什么毛细管柱比填充柱要求更高的理论塔板数？
解：毛细管柱与填充柱的本质差别之一是毛细管柱的相比远高于填充柱的相比，填充柱的相比值β一般是4－40，而毛细管柱在50－1500之间，所以，当r is、K′一定时，在一定温度下，分离相同的物质，达到相同的分离度，毛细管柱所需的理论塔板数比填充柱多。
第六章1.高效液相色谱是如何实现高效、快速、灵敏的？
答：气相色谱理论和技术上的成就为液相色谱的发展创造条件，从它的高效、高速和高灵敏度得到启发，采用5－10μm微粒固定相以提高柱效，采用高压泵加快液体流动相的流速；设计高灵敏度、死体积小的紫外、荧光等检测器，提高检测灵敏度，克服经典液相色谱的缺点，从而达到高效、快速、灵敏。
2.什么叫离子色谱？
解：在低交换容量的分离柱上，分离样品离子，而在高效换容量的抑制柱上，通过化学反应，把具有高电导的流动相转变为低电导的流动相，这样就可以在电导检测器上对被分离样品离子进行高灵敏度的检测。这种采用分离柱、抑制柱和电导相结合的离子交换色谱称为离子色谱。
3.为了测定邻氨基苯酚中微量杂质苯胺，现有下列固定相：硅胶、ODS键合相，下列流动相：水－甲醇、异丙醚－已烷，应先用哪种固定相、流动相？为什么？
解：邻氨基苯酚中微量杂质苯胺测定，为了良好分离，应让苯胺先出峰，由于苯胺的极性小于邻氨基苯酚，因此采用正相色谱法，应选硅胶为固定相，异丙醚－已烷为流动相。
4.何谓梯度淋洗，适用于哪些样品的分析？与程序升温有什么不同？
解：梯度淋洗就是在分离过程中，让流动相的组成、极性、pH值等按一定程序连续变化。使样品中各组分能在最佳的K′下出峰。使保留时间短、拥挤不堪、甚至重叠的组分，保留时间过长而峰形扁平的组分获得很好的分离，特别适合样品中组分的K′值范围很宽的复杂样品的分析。梯度淋洗十分类似气相色谱的程序升温，两者的目的相同。不同的是程序升温是通过程序改变柱温，而液相色谱是通过改变流动相组成、极性、pH值来达到改变K′的目的。
5.指出下列物质在正相液相色谱中的洗脱顺序:
(1) 正己烷, 正己醇, 苯(2) 乙酸乙酯, 乙醚, 硝基丁烷
答：(1) t R(正己烷) < t R (苯) < t R(正己醇) (2) t R (乙醚) < t R(乙酸乙酯) < t R(硝基丁烷) 6.与气相色谱法相比高效液相色谱有哪些优点和不足？
答：气相色谱的分析对象是在柱温下具有一定的挥发性、对热稳定的化学物质。因此它只限于分析气体和沸点低的化合物或挥发性的衍生物。而高效液相色谱由于以液体作为流动相，只要被分析物质在选用的流动相中有一定的溶解度，便可以分析，所以适用性广，不受样品挥发性和热稳定性的限制，特别适合于那些沸点高、极性强、热稳定性差的化合物。气相色谱中流动相是惰性的，它对组分没有作用力，仅起运载作用，而高效液相色谱的流动相不仅起运载作用，而且流动相对组分有一定亲合力，可以通过改变流动相各类和组成提高分离的选择性，另外可作流动相的化合物多，选择余地广。高效液相色谱的另一个优点是样品比较容易，只要开口容器放在柱子末端，就可以很容易地将所分离的各组分收集。回收是定量的，可用来提纯和制备具有足够纯度的单一物质。
高效液相色谱的不足是，目前检测器的灵敏度不及气相色谱。必须特别注意“柱外效应”对柱效率及色谱分离的影响。
7.流动相为什么要预先脱气？常用的脱气方法有哪几种？
解：流动相中溶解气体存在以下几个方面的害处，气光进入检测器，引起光吸收或电信号的变化，基线突然跳动，干扰检测；溶解在溶剂中的气体进入色谱柱时，可能与流动相或固定相发生化学反应；溶解气体还会引起某些样品的氧化降解，对分离和分析结果带来误差。因此，使用前必须进行脱气处理；常用的脱气方法有以下几种（1）加热脱气法；（2）抽吸脱气法；（3）吹氦脱气法；（4）超声波振荡脱气法。
8.按固定相孔径大小分类，液相色谱固定相有哪几类?各有什么特性及适用范围？
从固定相孔隙深度考虑,分为表面多孔型和全多孔型两类。
表面多孔型固定相多孔层厚度小，孔浅，相对死体积小，出峰迅速，柱效高，颗粒较多，渗透性好，由于孔浅，梯度淋洗时，当流动相成分改变后，孔内外流动相能迅速达到平衡，机械强度高，装柱容易，其不足的是由于多孔层厚度小，因而柱容量小，最大允许样品量受到限制，适用于比较简单的样品分析及快速分析。
全多孔型固定相，由于颗粒很细，孔仍然很浅，传质速度较快，柱效高。梯度淋洗时孔内外流动相成分的平衡速度仍然较快，其最大特点是柱容量大，最大允许样品量是表面多孔型的5倍，但装填的柱子渗透性低，因而需要更高的操作压力，制柱比表面多孔型的难。这种固定相特别有利于痕量组分及多组分复杂混合物的分离分析。
9.什么叫化学键合色谱？与液－液色谱相比有何优点？
解：通过化学反应，将固定液键合到载体表面，此种固定相称为化学键合固定相；采用化学键合固定相的色谱法，称为化学键合色谱。
与液－液分配色谱相比，键合色谱法的主要优点：（1）化学键合固定相非常稳定，在使用过程中不流失。（2）适宜用梯度淋洗。（3）适合于K′范围很宽的样品。（4）由于键合到载体表面官能团，既可是非极性的，也可是极性的，因此应用很广。
10.某人用凝胶色谱分离一高聚物样品，分离情况很关，他改变的组成后，分离情况大为改进，这种说法对吗？为什么？
这种说法不对。在凝胶色谱中流动相只起运载的作用，不能依靠改变流动相的性质和组成来发问色谱体系的选择性。凝胶色谱的选择性只能通过选择合适的固定相，根据固定相孔隙的大小以及孔径分布范围的最佳化来实现。
色谱试题及答案 一、填空（每题2分） 1气相色谱分析是一种分离分析方法，它的特点是适合于多组分混合物的定性和定量分析。 2气相色谱定性法：是利用同一种物质在相同条件之下，在一根色谱柱上保留时间相同。 3在实验条件恒定时，峰面积或峰高与组分的含量成正比，因此可以利用峰面积或峰高来进行定量。 4色谱柱是气相色谱法的核心部分，许多组成复杂的样品，其分离过程都是在色谱柱内进行的，色谱柱分为两类：填充柱和毛细管柱。 5色谱柱老化的方法由固定液的性质而定，老化的最高温度应低于固定液的最高使用温度20~30℃，但要高于实际工作温度。 6装柱老化时，应将柱的入口端与色谱仪的气化室相连接（柱不能接反，否则固定相将在柱中移动，使柱效发生变化）。开始老化时出口不得接检测器，以免流出物沾污检测器。 7 色谱分析各组分保留时间变短和分离变坏，说明柱子失效，原因来自样品和载气的污染。活化的方法是提高柱温，增加载气流速，让色谱柱内污染物流出。 8 载气纯度不符合要求时，会使基线不稳，噪声大。 9 氢气表和氢气钢瓶嘴是反扣螺纹，逆时针方向松开；而氮气表和氮气瓶嘴及其他气体的瓶嘴都是正扣螺纹。 10气相色谱定量方法有归一化法、内标法、外标法等方法。
二、判断（每题2分） 1 色谱柱没装上色谱仪之前，两端必须封口，防止和空气接触。柱 子存放期间，应避免剧烈振动、碰撞或弯曲。 2 气相色谱仪使用的各种气体压力为0.2～0.5Mpa。因此需要通过 减压表使钢瓶气源的输出压力下降。 3 减压表一般分为氢气表和氮气表（氧气表）两种。氮气表可以安 装在除了氢、乙炔和其他燃气瓶以外的各种气瓶上。 4 使用钢瓶气时，打开钢瓶阀，再把T形阀杆从全开调到需要的压 力。 5 气相色谱仪的气路要认真仔细检漏。用氢气作载气时，氢气若从 接口漏进柱恒温箱，可能发生爆炸事故。最常用的检漏方法是皂膜检漏法 6 色谱仪开机:打开主机电源，接通载气，开电脑，设置仪器参数。 7 设置所需柱箱温度、进样口温度和检测器温度（FID），检测器的 温度应高于150℃，否则点火后造成检测器内积水而影响基线的稳定性）。 8 打开空气、氢气阀门，分别调节两路气体流量（由流量计显示） 为适当值。操作中气体流速一般控制的比例为：氮气：氢气：空气=1：1：3。 9 测定液化气中硫化氢时，要带防尘面具，残气排放在通风橱内。 10 气体发生器内的水多些少些没太大关系，只要工作就行，硅胶变 红还可用。 二简答（每题10分） 1 简述气相色谱工作原理 利用试样中各组份在气相和固定液液相间的分配系数不同，当汽化后的试样被载气带入色谱柱中运行时，组份就在其中的两相间进行反复多次分配，由于固定相对各组份的吸附或溶解能力不同，因此各组份在色谱柱中的运行速度就不同，经过一定的柱长后，便彼此分
第九章色谱分析 一填空 1.调整保留时间是减去（死时间）的保留时间。 2.色谱分析方法是一种利用各组分在固定相与流动相中受到的（作 用力不同）而将待分析样品中的各组分依次分离，然后顺序检测各组分含量的分离分析方法。 3.色谱分析的特点（分离效率高）（分析速度快）（检测灵敏度高）（样 品用量少）不足之处为（对未知物的定性分析较困难） 4.物质定性分析的方法为（紫外）（红外）（核磁）（质谱） 5.分配系数K为（组分在固定相中的浓度与在流动相中浓度的比值） 6.分配比k是指（平衡时组分在固定相和流动相的质量比）。 二选择 1.相对保留值是指某组分2与某组分1的___A__。 A. 调整保留值之比， B. 死时间之比， C. 保留时间之比， D. 保留体积之比 2.色谱法分离混合物的可能性决定于试样混合物在固定相中_D__的差别。 A. 沸点差， B. 温度差， C. 吸光度， D. 分配系数。 3.选择固定液时，一般根据__C__原则。 A. 沸点高低， B. 熔点高低， C. 相似相溶， D. 化学稳定性。
4.进行色谱分析时，进样时间过长会导致半峰宽___B__。 A. 没有变化， B. 变宽， C. 变窄， D. 不成线性 5分配系数与下列哪些因素有关_D__ A.与温度有关； B.与柱压有关； C.与气、液相体积有关； D.与组分、固定液的热力学性质有关 6、对柱效能n，下列哪些说法正确_ AB___ A. 柱长愈长，柱效能大； B.塔板高度增大，柱效能减小； C.指定色谱柱对所有物质柱效能相同； D.组分能否分离取决于n值的大小。 三判断 1. 描述色谱柱效能的指标是有效塔板数。（√ ） 2。在色谱法中，对目标化合物的定量可以用峰面积，也可以用峰高。（√ ） 3、在色谱图中，如果未知组分的保留值与标准样品的保留值完全相同，则它们是同一种化合物。（╳） 4、在色谱中，各组分的分配系数差别愈大，则各组分分离的可能性也愈大。（√ ） 5、半峰宽是指峰底宽度的一半。（× ） 6基线是在正常操作条件下,仅由流动相所产生的响应信号的曲线。（√） 四简答 1、色谱定性的依据是什么，主要有哪些定性方法。
练习题 一、判断题 1、色谱峰的形状可用塔板理论说明，色谱峰的展宽可用速率理论解释。（） 2、色谱柱理论塔板数n与保留时间t R的平方成正比，组分的保留时间越长，色谱柱理 论塔板数n值越大，分离效果越高。（） 3、色谱分离过程中，单位柱长内，组分在两相间的分配次数越多分离效果越好。 （） 4、氢气具有较大的热导系数，作为气相色谱的载气，具有较高的检测灵敏度，但其分 子量较小也使速率理论中的分子扩散项增大，使柱效降低。（） 5、色谱内标法对进样量和进样重复性没有要求，但要求选择合适的内标物和准确配制 试样。（） 二、选择题 1，对某一组分来说，在一定的柱长下，色谱峰的宽或窄主要决定于组分在色谱峰中的（）A,保留值B,分配系数C，运动情况D，理论塔板数 2，下列有关分离度的描述中，正确的是（）A，由分离度计算式来看，分离度与载气流速无关 B，分离度取决于相对保留值，与峰宽无关 C，色谱峰宽与保留值差决定了分离度大小 D，高柱效一定具有高分离度 3，只要柱温，固定相性质不变，即使柱径，柱长，填充情况及流动相速度有所变化，衡量色谱柱对被分离组分保留能力的参数可保持不变的是（）A,保留值B，校正保留值C，相对校正保留值 D，分配比（或分配容量）E，分配系数 4，在色谱流出曲线上，两峰间距离决定于相应两组分在两相间的（）A, 分配比B，分配系数C，扩散速度 D，理论塔板数E，理论塔高度 5，在范氏方程中，载气的粒度主要影响（）A，载气流速B,涡流扩散C，分子扩散 D，气相传质阻力E，液相传质阻力 6，如果样品比较复杂，相邻两峰间距离太近或操作条件不易控制稳定，要准确测量保留值有一定的困难时，可以（）A，利用相对保留值进行定性 B，用加入已知物以增加峰高的办法进行定性 C，利用文献保留值数据进行定性 D，与化学方法配合进行定性 E，利用选择性检测器进行定性 三、简答题
色谱分析综合体 一．选择题 1．在色谱分析中，用于定量的参数是( B ) A 保留时间 B 调整保留值 C 峰面积 D 半峰宽 2．塔板理论不能用于( D ) A 塔板数计算 B 塔板高度计算 C 解释色谱流出曲线的形状 D 解释色谱流出曲线的宽度与哪些因素有关 3．在气-固色谱分析中, 色谱柱内装入的固定相为( D ) A 一般固体物质 B 载体 C 载体+固定液D固体吸附 剂 4．当载气线速越小，范式方程中，分子扩散项B越大，所以应选下列气体中哪一种 作载气最有利？( D ) A H2 B He C Ar D N2 5．试指出下述说法中, 哪一种是错误的? ( C ) A 根据色谱峰的保留时间可以进行定性分析 B 根据色谱峰的面积可 以进行定量分析 C 色谱图上峰的个数一定等于试样中的组分数 D 色谱峰的区域宽度 体现了组分在柱中的运动情况 6．为测定某组分的保留指数，气相色谱法一般采取的基准物是：( C ) A 苯 B 正庚烷 C 正构烷烃 D 正丁烷和丁二 烯 7．试指出下列说法中，哪一个不正确？气相色谱法常用的载气是（ C ） A N2 B H2 C O2 D He 8．试指出下列说法中，哪一个是错误的？（ A ） A 固定液是气相色谱法固定相 B N2、H2等是气相色谱流动相
C 气相色谱法主要用来分离沸点低，热稳定性好的物质 D 气相色谱法是一个分离效能高，分析速度快的分析方法 9． 在气-液色谱法中, 首先流出色谱柱的组分是 ( A ) A 溶解能力小 B 吸附能力小 C 溶解能力大 D 吸附能力大 10．根据范第姆特议程式，指出下面哪种说法是正确的？ （ A ） A 最佳流速时，塔板高度最小 B 最佳流速时，塔板高度最大 C 最佳塔板高度时，流速最小 D 最佳塔板高度时，流速最大 二．填空题 1．按流动相的物态可将色谱法分为 气相色谱法 和 液相色谱法 。前者的流动相的 气体 ，后者的流动相为 液体 。 2．气相色谱法多用 高 沸点的 有机 化合物涂渍在惰性载体上作为固定相，一般只要在 450 ℃以下，有 1.5 至 10 Kp a 的蒸气压且 稳定 性好的 有机和 无机 化合物都可用气相色谱法进行分离。 3．气相色谱仪由如下五个系统构成：气路系统、进样系统、分离系统、温控系统和检测记录系统。 4．气相色谱常用的检测器有 热导检测器 ， 氢火焰检测器 ， 电子捕获检测器 和 火焰光度检测器 。 三、简答题 1、组分A 、B 在某气液色谱柱上的分配系数分别为495和467。试问在分离时哪个组分先流出色谱柱。 答：根据分配系数的定义： g s c c K = 分配系数小的组分先流出色谱柱，因此B 先流出色谱柱。 2、为什么说分离度R 可以作为色谱柱的总分离效能指标？ 答：由 )2()1()1()2()2()1() 1()2()(2)(21b b R R b b R R W W t t W W t t R +-=+-= 及1,21,2)2(') 1(')2(144r r n t t t n R eff R R R eff -?=-?= 可知 R 值越大，相邻两组分分离越 好。而R 值的大小则与两组分保留值和峰的宽度有关。对于某一色谱柱来说，两组分保留值差别的大小主要取决于固定液的热力学性质，反映了柱选择性的好坏；
色谱分析法定义:色谱(chromatography)分析法：以试样组分固定相(stationary phase )和流动相(mobile phase )间的溶解、吸附、分配、离子交换或其它亲和作用的差异为依据而建立起来的各种分离分析方法称色谱分析法 即利用物质的物理及物理化学性质的差异，将多组分混合物进行分离测定的一种分析方法。色谱分析法是仪器分析常用的方法之一。 应用对象：主要是混合物中有机成分的分离和分析 1.色谱法的由来 2.固定相和流动相的变化 3.色谱柱、分离机制的变化 高效液相色谱仪 色谱分析法的分类 ?1、按两相的聚集状态流动相固定相类型 ?2、按分离的原理分类 ?吸附色谱：吸附性能的差异气固液固 ?分配色谱：分配系数的不同溶解度液体 ?离子交换色谱：分离组分与固定相离子进行可逆交换离子交换树脂 ?空间排阻色谱：分子筛葡聚糖凝胶 ?3、按固定相的材料和使用方式 ?柱色谱(玻璃、不锈钢、石英) 气固液固 ?纸色谱液液 ?薄层色谱(硅胶、聚酰胺) 液固 ?4、按色谱动力学过程分类 ?冲洗法、顶替法、迎头法 ?5、按色谱技术分类 色谱分析法的特点和局限性 一、特点 1、选择性好1理论塔板数高2固定相、流动相3操作温度a沸点相近的混合物b同位素c 同分异构体d对映异构体 2、分离效率高，分析速度快1气相色谱a气体黏度小b长色谱柱2高效液相色谱a高压泵 b多色谱填料 3、灵敏度高、样品用量少检测器a热导池检测器b氢火焰离子化检测器c电子俘获检 测器d火焰光度检测器 4、应用范围广1气相色谱a气体b易挥发的有机物c沸点高d热裂解 2高效液相色谱a不易挥发、高沸点b不稳定c糖类、大分子化合物d药物分析 3石油工业、环境保护、临床化学、药物与药剂、农药、食品、卫生防疫理化检验、司法检验 二、局限性 ?给不出定性结果，需要已知的标物质作对比，或将样品的数据与标准物质的数据进行对比，与质谱、红外等波谱鉴定仪器联用 ?定量时需要标准物质 ?对个别异构体和固体物质分析能力差 色谱图和相关术语 ?1、色谱图(chromatogram)：进样后检测仪器记录下来的检测器响应信号随时间或载气流出体积分布的曲线图。
气相色谱分析复习题及参考答案（46题） 参考资料 （1）孙传经，《气相色谱分析原理与技术》，1981年，化学工业出版社。 （2）中国科学院大连化学物理研究所，《气相色谱法》，1989年，科学出版社。 （3）陈尊庆，《气相色谱法与气液平衡原理》，1991年，天津大学出版社。 （4）王永华，《气相色谱分析》，1990年，海洋出版社。 （5）卢佩章，《色谱》杂志，1，2，4卷，色谱技术研究开发中心出版。 （6）牟世芬等，《离子色谱》，1986年，科学出版社。 （7）魏复盛等，《水和废水监测分析方法指南》（中册），1994年，中国环境科学出版社。（8）国家环保局，《水和废水监测分析方法》编委会，《水和废水监测分析方法》第三版。 一、填空题 1、气相色谱柱的老化温度要高于分析时最高柱温℃，并低于的最高使用温度，老化时，色谱柱要与断开。 答：5—10 固定液检测器 《气相色谱分析原理与技术》，P30 2、气相色谱法分析非极性组分时应首先选用固定液，组分基本按顺序出峰，如为烃和非烃混合物，同沸点的组分中大的组分先流出色谱柱。 答：非极性沸点极性 《气相色谱分析原理与技术》，P192 3、气相色谱分析中等极性组分首先选用固定液，组分基本按顺序流出色谱柱。 答：中极性沸点 《气相色谱分析原理与技术》，P192 4、一般说，沸点差别越小、极性越相近的组分其保留值的差别就，而保留值差别最小的一对组分就是物质对。 答：越小难分离 《气相色谱分析原理与技术》，P78 5、气相色谱法所测组分和固定液分子间的氢键力实际上也是一种力，氢键力在气液色谱中占有地位。 答：定向重要 《气相色谱分析原理与技术》，P179 6、分配系数也叫，是指在一定温度和压力下，气液两相间达到时，组分分配在气相中的与其分配在液相中的的比值。 答：平衡常数平衡平均浓度平均浓度 《气相色谱分析原理与技术》，P45
色谱法的分类及其原理 （一）按两相状态 气相色谱法:1、气固色谱法 2、气液色谱法 液相色谱法:1、液固色谱法 2、液液色谱法 （二）按固定相的几何形式 1、柱色谱法(column chromatography) ：柱色谱法是将固定相装在一金属或玻璃柱中或是将固定相附着在毛细管内壁上做成色谱柱，试样从柱头到柱尾沿一个方向移动而进行分离的色谱法 2、纸色谱法（paper chromatography）：纸色谱法是利用滤纸作固定液的载体，把试样点在滤纸上，然后用溶剂展开，各组分在滤纸的不同位置以斑点形式显现，根据滤纸上斑点位置及大小进行定性和定量分析。 3、薄层色谱法(thin-layer chromatography, TLC) ：薄层色谱法是将适当粒度的吸附剂作为固定相涂布在平板上形成薄层，然后用与纸色谱法类似的方法操作以达到分离目的。 （三）按分离原理 按色谱法分离所依据的物理或物理化学性质的不同，又可将其分为：
1、吸附色谱法：利用吸附剂表面对不同组分物理吸附性能的差别而使之分离的色谱法称为吸附色谱法。适于分离不同种类的化合物（例如，分离醇类与芳香烃）。 2、分配色谱法：利用固定液对不同组分分配性能的差别而使之分离的色谱法称为分配色谱法。 3、离子交换色谱法：利用离子交换原理和液相色谱技术的结合来测定溶液中阳离子和阴离子的一种分离分析方法，利用被分离组分与固定相之间发生离子交换的能力差异来实现分离。离子交换色谱主要是用来分离离子或可离解的化合物。它不仅广泛地应用于无机离子的分离，而且广泛地应用于有机和生物物质，如氨基酸、核酸、蛋白质等的分离。 4、尺寸排阻色谱法：是按分子大小顺序进行分离的一种色谱方法，体积大的分子不能渗透到凝胶孔穴中去而被排阻，较早的淋洗出来；中等体积的分子部分渗透；小分子可完全渗透入内，最后洗出色谱柱。这样，样品分子基本按其分子大小先后排阻，从柱中流出。被广泛应用于大分子分级，即用来分析大分子物质相对分子质量的分布。 5、亲和色谱法：相互间具有高度特异亲和性的二种物质之一作为固定相，利用与固定相不同程度的亲和性，使成分与杂质分离的色谱法。例如利用酶与基质（或抑制剂）、抗原与抗体，激素与受体、外源凝集素与多糖类及核酸的碱基对等之间的专一的相互作用，使相互作用物质之一方与不溶性担体形成共价结合化合物，
色谱考试习题及答案 1
色谱思考题与习题 班级姓名学号 一、选择题 1．在色谱分析中，用于定量的参数是 ( ) A 保留时间 B 调整保留值 C 峰面积 D 半峰宽 2．塔板理论不能用于 ( ) A 塔板数计算 B 塔板高度计算 C 解释色谱流出曲线的形状 D 解释色谱流出曲线的宽度与哪些因素有关 3．在气-固色谱分析中, 色谱柱内装入的固定相为 ( ) A 一般固体物质 B 载体 C 载体+固定液 D 固体吸附剂 4．当载气线速越小，范式方程中，分子扩散项B越大，所以应选下列气体中哪一种作载气最有利？ ( ) A H2 B He C Ar D N2 5．试指出下述说法中, 哪一种是错误的? ( ) A 根据色谱峰的保留时间可以进行定性分析 B 根据色谱峰的面积可以进行定量分析 C 色谱图上峰的个数一定等于试样中的组分数 D 色谱峰的区域宽度体现了组分在柱中的运动情况 仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除谢谢2
6．为测定某组分的保留指数，气相色谱法一般采取的基准物是： ( ) A 苯 B 正庚烷 C 正构烷烃 D 正丁烷和丁二烯 7．试指出下列说法中，哪一个不正确？气相色谱法常用的载气是（） A N2 B H2 C O2 D He 8．试指出下列说法中，哪一个是错误的？（） A 固定液是气相色谱法固定相 B N2、H2等是气相色谱流动相 C 气相色谱法主要用来分离沸点低，热稳定性好的物质 D 气相色谱法是一个分离效能高，分析速度快的分析方法 9．在气-液色谱法中, 首先流出色谱柱的组分是 ( ) A 溶解能力小 B吸附能力小 C 溶解能力大 D 吸附能力大 10．根据范第姆特方程式，指出下面哪种说法是正确的？ （） A 最佳流速时，塔板高度最小 B 最佳流速时，塔板高度最大 C 最佳塔板高度时，流速最小 D 最佳塔板高度时，流速最大 11、在气相色谱中，调整保留值实际上反映了哪些部分分子间的相互作用？ A 组分与载气 B 组分与固定相 仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除谢谢3
一、色谱分析法基本原理 色谱法，又称层析法。根据其分离原理，有吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱与排阻色谱等方法。吸附色谱是利用吸附剂对被分离物质的吸附能力不同，用溶剂或气体洗脱，以使组分分离。常用的吸附剂有氧化铝、硅胶、聚酰胺等有吸附活性的物质。分配色谱是利用溶液中被分离物质在两相中分配系数不同，以使组分分离。其中一相为液体，涂布或使之键合在固体载体上，称固定相；另一相为液体或气体，称流动相。常用的载体有硅胶、硅藻土、硅镁型吸附剂与纤维素粉等。离子交换色谱是利用被分离物质在离子交换树脂上的离子交换势不同而使组分分离。常用的有不同强度的阳、阴离子交换树脂，流动相一般为水或含有有机溶剂的缓冲液。排阻色谱又称凝胶色谱或凝胶渗透色谱，是利用被分离物质分子量大小的不同和在填料上渗透程度的不同，以使组分分离。常用的填料有分子筛、葡聚糖凝胶、微孔聚合物、微孔硅胶或玻璃珠等，可根据载体和试样的性质，选用水或有机溶剂为流动相。色谱法的分离方法，有柱色谱法、纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法等。色谱所用溶剂应与试样不起化学反应，并应用纯度较高的溶剂。色谱时的温度，除气相色谱法或另有规定外，系指在室温下操作。分离后各成分的检出，应采用各单体中规定的方法。通常用柱色谱、纸色谱或薄层色谱分离有色物质时，可根据其色带进行区分，对有些无色物质，可在245-365nm的紫外灯下检视。纸色谱或薄层色谱也可喷显色剂使之显色。薄层色谱还可用加有荧光物质的薄层硅胶，采用荧光熄灭法检视。用纸色谱进行定量测定时，可将色谱斑点部分剪下或挖取，用溶剂溶出该成分，再用分光光度法或比色法测定，也可用色谱扫描仪直接在纸或薄层板上测出，也可用色谱扫描仪直接以纸或薄层板上测出。柱色谱、气相色谱和高效液相色谱可用接于色谱柱出口处
色谱分析综合体 填空： 1. 氢火焰离子化检测器和热导池检测器分别属于_质量型__和___温度__型检测器。气相色谱仪的心脏是_色谱柱___。 2. 固定液一般是按照__相似相溶___原理选择；在用极性固定液分离极性组分时，分子间作用力主要是__诱导力____，极性愈大，保留时间就愈___长__。 3. 固定液通常是高沸点的有机化合物，这主要是为了保证固定液在使用温度下有____较好的热稳定性____，防止___发生不可逆的化学反应____。 5. 与填充柱相比，毛细管色谱柱的相比β较大，有利于实现快速分析。但其柱容量_较小_。 6. 在HPLC仪中，为了克服流动相流经色谱柱时受到的阻力，要安装_耐高压的六通阀___。 7. 气相色谱分析中，载气仅起输送作用；而液相色谱分析中，流动相还要直接参加__实际的分配过程__，要想提高高效液相色谱的柱效，最有效的途径是__使用小粒径填料_。 8. 欲分离位置异构体化合物，宜采用的高效液相色谱的分离模式是__梯度洗脱___。 9、色谱法中，将填入玻璃管内静止不动的一相称为固定相，自上而下运动的一相称为流动相，装有固定相的柱子称为 色谱柱。 10、液相色谱检测器一般可用紫外可见分光光度检测器，荧光检测器；气相色谱检测器可用热导检测器，氢火焰离子检测器，电子俘获检测器等。 色谱学分析基础： 1、色谱塔板理论的假设？ 答、(1) 在每一个平衡过程间隔内,平衡可以迅速达到；(2) 将载气看作成脉动（间歇）过程；(3) 试样沿色谱柱方向的扩散可忽略； (4) 每次分配的分配系数相同。(5)所有的物质在开始时全部进入零号塔板 2、色谱定性的方法都有哪些？ 答、(1) 用保留时间定性(2) 用相对值保留定性(3) 用保留指数定性(4)用化学反应配合色谱定性 (5)用不同类型的检测器定性⑹色谱和各种光谱或波谱联用 3、内标法定量分析时，内标物选择应满足那些条件？ 答：①试样中不含有该物质②与被测组分性质比较接近③不与试样发生化学反应④出峰位置应位于被测组分接近，且无组分峰影响 4、色谱分析中，固定相的选择原则是什么？ 固定相的选择：气－液色谱，应根据“相似相溶”的原则 5、色谱定量分析中为什么要用校正因子？在什么情况下可以不用? 答：各种化合物在不同的检测器上都有不同的应答值，所以尽管往色谱仪中注入相同质量的物质，但得到峰面积却不一样，因此峰面积定量时就必须把由色谱仪上得到的峰面积乘上一个系数，得到此成分的质量，在实际分析中，常用某物质做标准，得到一个相对的校正系数，就叫‘相对校正因子’ 试样中不是所有组分 6、总结色谱法的优点。 答：色谱法特点（1）分离效率高（2）灵敏度高（3）分析速度快（4）应用范围广⑸样品用量少⑹分离和测定一次完成⑺易于自动化，可在工业流程中使用 7、色谱流出曲线可解决的问题有哪些？ 8、根据你所学知识，填写下表。 色谱分析法基本原理应用领域分析对象缺点 气相色谱法 液相色谱法 气相色谱 1. 气相色谱的基本设备包括那几部分,各有什么作用? 载气系统去除载气中的水、有机物等杂质 进样装置： 色谱柱：色谱仪的核心部件 检测系统 2．试以塔极高度H做指标讨论气相色谱操作条件的选择。 3. 试述速率方程式中A、B、C三项的物理意义。 答：A、涡流扩散项B、纵向扩散项C、传质阻力项 4. 为什么可用分辨率R作为色谱柱的总分离效能指标。 5. 能否根据理论塔板数来判断分离的可能性？为什么？ 6. 对载体和固定液的要求分别是什么? 答：载体要求:①具有化学惰性②好的热稳定性③有一定的机械强度④有适当的比表面，表面无深沟，以便是固定液成为均匀的薄膜，要有较大的空隙率，以便减小柱压降。对固定液的要求：应对被分离试样中的各组分具有不同的溶解能力，较好的热稳定性，并且不与被分离组分发生不可逆的化学反应。 7. 试比较红色担体和白色担体的性能,它们各使用在哪些方面? 答；红色担体适宜分析非极性化合物；白色单体适宜分析极性化合物； 8. 固定液可分为哪几类？为什么这样划分？如何选择固定液。 答：固定液按分子作用力分为①不易极化非极性固定液②易极化非极性固定液③难成氢键的极性固定液④受质子的极性固定液按极性分类用典型化合物在固定液上的保留性能来表征 固定液的选择原则：①“相似相容”原则，②固定液和被分离物分子之间的特殊作用力，③利用混合物固定液④利用协同效应选择固定液 9. 色谱定性的依据是什么，主要有哪些定性方法。
高效液相色谱习题及参考答案 一、单项选择题 1. 在液相色谱法中，按分离原理分类，液固色谱法属于（）。 A、分配色谱法 B、排阻色谱法 C、离子交换色谱法 D、吸附色谱法2. 在高效液相色谱流程中，试样混合物在（）中被分离。 A、检测器 B、记录器 C、色谱柱 D、进样器 3. 液相色谱流动相过滤必须使用何种粒径的过滤膜？ A、0.5μm B、0.45μm C、0.6μm D、0.55μm 4. 在液相色谱中，为了改变色谱柱的选择性，可以进行如下哪些操作？ A、改变流动相的种类或柱子 B、改变固定相的种类或柱长 C、改变固定相的种类和流动相的种类 D、改变填料的粒度和柱长 5. 一般评价烷基键合相色谱柱时所用的流动相为（） A、甲醇/水（83/17） B、甲醇/水（57/43） C、正庚烷/异丙醇（93/7） D、乙腈/水（1.5/98.5） 6. 下列用于高效液相色谱的检测器，（）检测器不能使用梯度洗脱。 A、紫外检测器 B、荧光检测器 C、蒸发光散射检测器 D、示差折光检测器 7. 在高效液相色谱中，色谱柱的长度一般在（）范围内。 A 、10～30cm B、20～50m C 、1～2m D、2～5m 8. 在液相色谱中, 某组分的保留值大小实际反映了哪些部分的分子间作用力（） A、组分与流动相 B、组分与固定相 C、组分与流动相和固定相 D、组分与组分
9. 在液相色谱中，为了改变柱子的选择性，可以进行（）的操作 A、改变柱长 B、改变填料粒度 C、改变流动相或固定相种类 D、改变流动相的流速 10. 液相色谱中通用型检测器是（） A、紫外吸收检测器 B、示差折光检测器 C、热导池检测器 D、氢焰检测器 11. 在环保分析中，常常要监测水中多环芳烃，如用高效液相色谱分析，应选用下述哪种检波器 A、荧光检测器 B、示差折光检测器 C、电导检测器 D、紫外吸收检测器 12. 在液相色谱法中，提高柱效最有效的途径是（） A、提高柱温 B、降低板高 C、降低流动相流速 D、减小填料粒度 13. 在液相色谱中，不会显著影响分离效果的是（） A、改变固定相种类 B、改变流动相流速 C、改变流动相配比 D、改变流动相种类 14. 不是高液相色谱仪中的检测器是（） A、紫外吸收检测器 B、红外检测器 C、差示折光检测 D、电导检测器 15. 高效液相色谱仪与气相色谱仪比较增加了（） A、恒温箱 B、进样装置 C、程序升温 D、梯度淋洗装置 16. 在高效液相色谱仪中保证流动相以稳定的速度流过色谱柱的部件是（） A、贮液器 B、输液泵 C、检测器 D、温控装置 17. 高效液相色谱、原子吸收分析用标准溶液的配制一般使用（）水
色谱试题 一.选择题: 1. 在液相色谱中,梯度洗脱用于分离（ 4 ） (1) 几何异构体(2) 沸点相近,官能团相同的试样 (3) 沸点相差大的试样(4) 分配比变化范围宽的试样 2. 在色谱分析中通常可通过下列何种方式来提高理论塔板数（ 1 ） (1) 加长色谱柱(2) 流速加快(3) 增大色谱柱的直径(4) 进样量增加 3. 一般气相色谱法适用于（ 4 ） (1) 任何气体的测定 (2) 任何有机和无机化合物的分离、测定 (3) 无腐蚀性气体与在汽化温度下可以汽化的液体的分离与测定 (4) 任何无腐蚀性气体与易挥发的液体、固体的分离与鉴定 4. 对于一对较难分离的组分现分离不理想,为了提高它们的分离效率,最好采用的措施为（ 2 ） (1) 改变载气速度(2) 改变固定液 (3) 改变担体(4) 改变载气性质 5. 为测定某组分的保留指数,气相色谱法一般采用的基准物是（ 3 ） (1) 苯(2) 正庚烷(3) 正构烷烃(4) 正丁烷和丁二烯 6. 选出用气相色谱氢火焰离子化检测器时,与相对校正因子有关的因素是（ 4 ） (1) 固定液的极性(2) 载气的种类 (3) 载气的流速(4) 标准物的选用 7.欲使色谱峰宽减小,可以采取（2, 3 ） (1) 降低柱温(2) 减少固定液含量 (3) 增加柱长(4) 增加载体粒度 8.在用低固定液含量色谱柱的情况下,为了使柱效能提高,可选用（ 4 ） (1) 提高柱温(2) 增加固定液含量 (3) 增大载体颗粒直径(4) 增加柱长 9.在柱温一定时,要使相对保留值增加,可以采取（ 3 ） (1) 更细的载体(2) 最佳线速 (3) 高选择性固定相(4) 增加柱长 10.在气相色谱分析中,要使分配比增加,可以采取（ 1 ） (1) 增加柱长(2) 减小流动相速度 (3) 降低柱温(4) 增加柱温 11.涉及色谱过程热力学和动力学两方面的因素是( 2 ) (1) 保留值(2) 分离度(3) 理论塔板数(4) 峰面积 12. 在色谱流出曲线上,两峰间距离决定于相应两组分在两相间的( 1 ) (1) 分配比(2) 分配系数(3) 扩散速度(4) 理论塔板数 13. 气液色谱中,保留值实际上反映下列( 3 )物质分子间相互作用力 (1) 组分和载气(2) 载气和固定液 (3) 组分和固定液(4) 组分和载气、固定液 14.在以下因素中,不属动力学因素的是( 2 ) (1) 液膜厚度(2) 分配系数(3) 扩散速度(4) 载体粒度 15.根据范第姆特方程式,在高流速情况下,影响柱效的因素是( 1 )
色谱分析综合体 ?选择题 1在色谱分析中，用于定量的参数是（B ） A保留时间B调整保留值C峰面积D半峰宽 2 ?塔板理论不能用于（D ） A塔板数计算B塔板高度计算C解释色谱流出 曲线的形状D解释色谱流出曲线的宽度与哪些因素有关 3. 在气-固色谱分析中，色谱柱内装入的固定相为（ D ） A 一般固体物质B载体C 载体+固定液D固体吸附 剂 4?当载气线速越小，范式方程中，分子扩散项B越大，所以应选下列气体中哪一种作载气最有利？（D） A H2 BHe C Ar D N2 5 ?试指出下述说法中，哪一种是错误的？（C） A 根据色谱峰的保留时间可以进行定性分析 B 根据色谱峰的面积可 以进行定量分析 C 色谱图上峰的个数一定等于试样中的组分数 D 色谱峰的区域宽度 体现了组分在柱中的运动情况 6?为测定某组分的保留指数，气相色谱法一般采取的基准物是：（C ） A苯B正庚烷 C 正构烷烃 D 正丁烷和丁二烯 7?试指出下列说法中，哪一个不正确？气相色谱法常用的载气是（C ） A N2 B H2 C O2 D He 8?试指出下列说法中，哪一个是错误的？（A ） A固定液是气相色谱法固定相B N2、H2等是气相色谱流动相
C 气相色谱法主要用来分离沸点低，热稳定性好的物质 D 气相色谱法 是一个分离效能高，分析速度快的分析方法 9. 在气-液色谱 法中,首先流出色谱柱的组分是 (A ) A 溶解能力小 B 吸附能力小 C 溶解能力大 D 吸附能力大 10. 根据范第姆特议程式，指出下面哪种说法是正确的？ ( A ) A 最佳流速时，塔板高度最小 B 最佳流速时，塔板高度最大 C 最佳塔板高度时，流速最小 D 最佳塔板高度时，流速最大 二?填空题 1 ?按流动相的物态可将色谱法分为 _气相色谱法—和—液相色谱法_。 前者的流动相的—气体 _______ ,后者的流动相为液体_。 2 ?气相色谱法多用_高_沸点的—有机_化合物涂渍在惰性载体上作 为固定相，一般只要在_450 以下，有_1.5 至_ 10 KPa 的蒸气压且 稳定—性好的 ________ 有机和—无机—化合物都可用气相色谱法进行分离。 3. 气相色谱仪由如下五个系统构成： 气路系 统、进样系统、分离系统、温 控系统和检测记录系统。 及 R n eff t R (2) t R(1) n eff r 2,1 1 可知R 值越大，相邻两组分分离 R 4 t R ( 2 ) 4 r 2 ,1 越好。而R 值的大小则与两组分保留值和峰的宽度有关。对于某一色谱柱来说， 两组分保留值差别的大小主要取决于固定液的热力学性质，反映了柱选择性的好 4 ?气相色谱常用的检测器有 —热导检测器，—氢火焰检测器 ，—电子 捕获检测器 __________ 和火焰光度检测器_。 三、简答题 1、组分A 、B 在某气液色谱柱上的分配系数分别为 495和467。试问在分离时哪 个组分先流 出色谱柱。 答：根据分配系数的定义： 分配系数小的组分先流出色谱柱，因此 B 先流出色谱柱。 2、为什么说分离度R 可以作为色谱柱的总分离效能指标? K 乞 C g t R(2 ) t R(1 ) 1 —(W b (1) W b (2)) 2(t R(2) t R ⑴) W b(I)^^W b(2) 由
色谱思考题与习题 班级姓名学号 一、选择题 1．在色谱分析中,用于定量的参数是 ( ) A 保留时间Ｂ调整保留值Ｃ峰面积 D 半峰宽 2。塔板理论不能用于（) A 塔板数计算 B 塔板高度计算 C 解释色谱流出曲线的形状 D 解释色谱流出曲线的宽度与哪些因素有关 3.在气-固色谱分析中，色谱柱内装入的固定相为 ( ） A 一般固体物质 B 载体 C 载体＋固定液Ｄ固体 吸附剂 4.当载气线速越小，范式方程中,分子扩散项B越大,所以应选下列气体中哪一种 作载气最有利? （） A H２ B HｅＣAr D N2 5．试指出下述说法中，哪一种是错误的？ （ ) A 根据色谱峰的保留时间可以进行定性分析 B 根据色谱峰的面积可以进行定量分析 C 色谱图上峰的个数一定等于试样中的组分数 D 色谱峰的区域宽度体现了组分在柱中的运动情况 ６．为测定某组分的保留指数，气相色谱法一般采取的基准物是：（） A 苯Ｂ正庚烷 C 正构烷烃Ｄ正丁烷 和丁二烯
７．试指出下列说法中，哪一个不正确？气相色谱法常用的载气是（ ) A N2 B H2 C O2 D He 8。试指出下列说法中，哪一个是错误的? ( ） A 固定液是气相色谱法固定相 Ｂ N2、H２等是气相色谱流动相 C 气相色谱法主要用来分离沸点低，热稳定性好的物质 D 气相色谱法是一个分离效能高，分析速度快的分析方法 9。在气－液色谱法中，首先流出色谱柱的组分是 ( ） A 溶解能力小B吸附能力小 C 溶解能力大 D 吸附能力大 1０．根据范第姆特方程式，指出下面哪种说法是正确的? ( ) A 最佳流速时，塔板高度最小 B 最佳流速时，塔板高度最大 C 最佳塔板高度时,流速最小 D 最佳塔板高度时,流速最大 11、在气相色谱中,调整保留值实际上反映了哪些部分分子间的相互作用？ A 组分与载气Ｂ组分与固定相 Ｃ组分与组分 D 载气与固定相 12、恒量色谱柱柱效能的指标是： Ａ分离度 B 容量因子 C 塔板数 D 分配系数 １3、在气相色谱法定量分析中，如果采用热导池检测器，测定相对校正因子,应选用下列哪种物质为基准？ A 苯 B 正己烷 C 正庚烷 D 丙烷 14、在气相色谱法定量分析中,如果采用火焰离子化检测器，测定相对校正因子,应选用下列哪种物质为基准？ A 苯 B 正己烷 C 正庚烷 D 丙烷 15、用色谱法进行定量分析时,要求混合物中每一个组分都出峰的是
色谱分析复习题及答案
色谱分析综合体 一．选择题 1．在色谱分析中，用于定量的参数是( B ) A 保留时间 B 调整保留值 C 峰面积 D 半峰宽 2．塔板理论不能用于( D ) A 塔板数计算 B 塔板高度计算 C 解释色谱流出曲线的形状 D 解释色谱流出曲线的宽度与哪些因素有关 3．在气-固色谱分析中, 色谱柱内装入的固定相为( D ) A 一般固体物质 B 载体 C 载体+固定液D固体吸附 剂 4．当载气线速越小，范式方程中，分子扩散项B越大，所以应选下列气体中哪一种 作载气最有利？( D ) A H2 B He C Ar D N2 5．试指出下述说法中, 哪一种是错误的? ( C ) A 根据色谱峰的保留时间可以进行定性分析 B 根据色谱峰的面积可 以进行定量分析 C 色谱图上峰的个数一定等于试样中的组分数 D 色谱峰的区域宽度 体现了组分在柱中的运动情况 6．为测定某组分的保留指数，气相色谱法一般采取的基准物是：( C ) A 苯 B 正庚烷 C 正构烷烃 D 正丁烷和丁二 烯 7．试指出下列说法中，哪一个不正确？气相色谱法常用的载气是（ C ） A N2 B H2 C O2 D He 8．试指出下列说法中，哪一个是错误的？（ A ） A 固定液是气相色谱法固定相 B N2、H2等是气相色谱流动相
C 气相色谱法主要用来分离沸点低，热稳定性好的物质 D 气相色谱法是一个分离效能高，分析速度快的分析方法 9． 在气-液色谱法中, 首先流出色谱柱的组分是 ( A ) A 溶解能力小 B 吸附能力小 C 溶解能力大 D 吸附能力大 10．根据范第姆特议程式，指出下面哪种说法是正确的？ （ A ） A 最佳流速时，塔板高度最小 B 最佳流速时，塔板高度最大 C 最佳塔板高度时，流速最小 D 最佳塔板高度时，流速最大 二．填空题 1．按流动相的物态可将色谱法分为 气相色谱法 和 液相色谱法 。前者的流动相的 气体 ，后者的流动相为 液体 。 2．气相色谱法多用 高 沸点的 有机 化合物涂渍在惰性载体上作为固定相，一般只要在 450 ℃以下，有 1.5 至 10 Kp a 的蒸气压且 稳定 性好的 有机和 无机 化合物都可用气相色谱法进行分离。 3．气相色谱仪由如下五个系统构成：气路系统、进样系统、分离系统、温控系统和检测记录系统。 4．气相色谱常用的检测器有 热导检测器 ， 氢火焰检测器 ， 电子捕获检测器 和 火焰光度检测器 。 三、简答题 1、组分A 、B 在某气液色谱柱上的分配系数分别为495和467。试问在分离时哪个组分先流出色谱柱。 答：根据分配系数的定义： g s c c K = 分配系数小的组分先流出色谱柱，因此B 先流出色谱柱。 2、为什么说分离度R 可以作为色谱柱的总分离效能指标？ 答：由 ) 2()1()1()2()2()1()1()2()(2)(2 1 b b R R b b R R W W t t W W t t R +-= +-= 及1 ,21,2) 2(') 1(')2(14 4 r r n t t t n R eff R R R eff -? = -? = 可知R 值越大，相邻两组分分离 越好。而R 值的大小则与两组分保留值和峰的宽度有关。对于某一色谱柱来说， 两组分保留值差别的大小主要取决于固定液的热力学性质，反映了柱选择性的
考试题型：名解、填空、选择、问答、计算 《药物色谱分析》复习重点 第三章 气相色谱法 1. 了解气相色谱法的特点及分类； 特点：1、效能高 2、灵敏度高 3、选择性高 4、分析速度快 5、应用范围广，测定高温下可气化的物质 6、样品用量少 分类：1、按固定相分：气-固、气-液 2、按柱子分：填充柱、毛细管柱 3、按分离机制分：吸附、分配 2. 气相色谱的固定液 （1）对固定液的要求 1、热稳定性好，在柱温下不热解， 2、化学惰性，不应与样品组分、担体、柱材料及载气发生不可逆反应。 3、蒸气压低，在操作温度下一般应低于0.1mmHg ，否则固定液易流失，影响柱使用寿命、保留时间及检测器响应。 4、对样品组分有一定的溶解度，否则样品组分不被保留而得不到分离。 5、对样品组分具有选择性，不同的组分有不同的分配系数，以利分离。 6、对担体有湿润性，以利于在担体表面形成均匀液膜，以增加柱效。 （2）样品组分与固定液之间的分子作用力的种类 1、定向力：由极性分子的永久偶极间的静电作用形成的。如极性组分与强极性固定液PEG-20M 等的作用力。 2、诱导力：在极性分子的永久偶极的电场作用下，邻近的可极化的非极性分子可产生诱导偶极，因而两分子间产生相互作用力，这种作用力通常较小。 3、色散力：非极性分子由于原子核和电子的运动，产生瞬间偶极，因而产生相互作用，这种力普遍存在，但非极性分子间的作用力仅此一种。此作用力更弱。 4、特殊作用力：主要来源于组分与固定液形成络合物。例如含有Ag+的固定液与烯烃可形成络合物。 （3）固定液的极性与分离特性评价，主要掌握Rohrschneider 常数，了解McReynolds 常数 组分的结构、性质与固定液相似时，在固定相中的溶解度大，因而保留时间长；反之，溶解度小，保留时间短。 Rohrschneider （罗胥耐得）提出了一种固定相极性的分类法：规定非极性固定液角鲨烷的相对极性为0，强极性固定液β,β’-氧二丙腈的极性为100，其它固定液的极性按下式计算： 112100100x q q P q q -=-? - q 为丁二烯和正丁烷在固定液上的相对保留值之比的对数，即： ''lg R R t q t =（丁二烯） （正丁烷）q 1、q 2、q x 分别为待测物在氧二丙腈、角鲨烷及欲测固定液上的
色谱分析复习题 一、填空题 1 为消除担体表面的活性中心，提高柱效，通常要对其进行预处理，常用的处理方法有: ______________________________(列出至少三种)。 2 液相色谱法中使用的梯度洗提操作是指在分离过程中按一定的程序连续改变载液中溶剂的_______________________;而气相色谱法中使用的程序升温操作是指柱温按________________________________. 这些操作的目的都是为了提高分离效果。 14. 空间排阻色谱法与其它色谱法的不同之处在于它是按_________________进行分离。 ---2-19. 测定矿泉水中,、，、,O和,O含量时, 一般用_______________色谱法。 34 20.在气相色谱分析中, 为测定物质在热导池检测器上的相对定量校正因子, 应选择的标准物质为_____________。 21.在一定温度下, 采用非极性固定液，用气-液色谱分离同系物有机化合物, ____________ 先流出色谱柱, _________后流出色谱柱。 22.气相色谱定量分析中对归一化法要求的最主要的条件是 _______________________ ____________________________________________。 23.气相色谱气化室的作用是将液体或固体试样瞬间气化而不分解。对其总的要求是_______________、________________和_____________________。
24.气相色谱分析中, 分离非极性物质, 一般选用_________________固定液, 试样中各组分按________________分离, _____________的组分先流出色谱柱, ______________的组分后流出色谱柱。 26.在液相色谱中, 流动相在使用之前, 必须进行_________________处理。 27.色谱柱的柱长从 1.0m 增加到 2.0m ，其它操作条件均不变，则 1.0m 柱的分配比 (k') __________ 2.0m 柱的分配比。 28.在气相色谱分析中, 为测定物质在氢火焰离子化检测器上的相对定量校正 因子, 应选择的标准物质为_____________。 30.在气相色谱定量分析中, 对正态流出曲线峰面积的准确测量的公式为 _________________。 32.气相色谱分析中, 分离极性物质, 一般选用______________固定液, 试样 中各组分按 __________________分离, __________________的组分先流出色谱柱, ____________的组分后流出色谱柱。 二、选择题 1 对各种氨基酸的分析，最有效的方法是: A 紫外吸收光谱 B 红外光谱 C 毛细管气相色谱 B 高效液相色谱 2 含氯农药的检测使用哪种色谱检测器为最佳, A 火焰离子化检测器 B 热导检测器 C 电子捕获检测器 D 火焰光度检测器 3 对一定长度的填充柱，为提高柱效，下列哪种说法是对的, A 采用粒度大的填充物 ;B 忽略传质阻力，使用分子量较大的载气作流动相 C 降低线速; D 增加线速 4 相对保留值是指某组分2与某组分1的_______。 A 调整保留值之比; B 死时间之比