O-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖新城疫减毒活疫苗纳米粒的制备方法
摘要：本发明提供了一种O-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖负载新城疫病毒纳米粒（NDV/La Sota-O-2-HACC-NPs）的制备方法。近年来对载药壳聚糖纳米微粒的研究取得了重大进展，成为载体药物技术领域的重要发展方向，但此类载体仍存在下列问题。首先，壳聚糖的溶解性较差，不溶于水和有机溶剂，仅在稀酸中少量溶解，而酸性条件制备壳聚糖纳米药物载体势必对大分子药物的活性产生影响，也在很大程度上限制了纳米药物的产业化制备。因此，对壳聚糖予以改性，改善壳聚糖的水溶性，在适宜(或不影响药物活性)条件下制备纳米药物载体急需研究的课题。壳聚糖是一种亲水性物质，它仅能包裹一些亲水性大分子，而对于疏水性药物，壳聚糖要作为载体还存在难度。
疏水性强的纳米粒易与肠上皮细胞进行生物粘附，而离子化和具有强亲水链表面的纳米粒不易被胃肠道粘膜粘附。疏水性强的纳米粒易于被摄取，因为疏水性纳米粒易于被生物粘附并且对M细胞有更强亲和力。
为解决上述问题，本论发明过对壳聚糖进行一定改性，得到带有正电荷的壳聚糖季铵盐：O-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖（O-2-hydroxypropyltrimcthyl ammonium chloride chitosan，O-2-HACC）作为制备载药微球的材料。所得材料在水中及醇溶剂中皆具有良好的水溶性，且与药物模型新城疫病毒液（NDV）通过离子交联的方法进行更好的结合，得到一种新型的载药微球O-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖负载新城疫病毒纳米粒（NDV/La Sota-O-2-HACC-NPs）。这种方法简便易操作，制备过程中所需溶剂均为常用试剂，容易获得，成本低，后续处理也较为简单。该载药微球带正电荷因此具有黏膜渗透性和生物黏附性，可以使抗原穿过黏膜屏障与黏膜下的淋巴细胞产生作用，也可以延长其抗原与黏膜的作用时间，延缓抗原被清除。
权利要求书
一种O-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖负载新城疫病毒的新城疫减毒活疫苗纳米粒，其特征在于包括以下步骤：
1、O-2-HACC的合成
将壳聚糖保护氨基保护，采用ETA与壳聚糖O上的氨基开环反应合成
O-2-HACC。
2、NDV/La Sota-O-2-HACC-NPs制备
采用离子交联法制备NDV/La Sota-O-2-HACC-NPs。
3、根据权利要求1所述的O-2-HACC的合成方法，其特征在于该方法的具体步骤为：
（1）N-苯亚甲基壳聚糖(b)的合成
取壳聚糖粉末a3.0g溶于120ml的10%醋酸溶液中，缓慢加入乙醇60ml 后，室温下搅拌30min内逐渐滴加苯甲醛15.8g(149mmol)，继续搅拌1h后，所得产物于烘箱(35℃~50℃)中放置20h。
缓慢滴加稀1.2mol/L的NaOH溶液将溶液调至中性，真空抽滤析出的沉淀，并用甲醇多次洗涤所得固体除去未反应的苯甲醛，得纤维状浅黄色固体b。
（2）O-季铵盐-N-苯亚甲基壳聚糖(c)的合成
b2.75g置于圆底烧瓶中，加入异丙醇50ml和2，3-环氧丙基三甲基氯化铵9.0g，水浴70℃搅拌反应16h，过滤，依次用甲醇、丙酮洗涤沉淀，得乳白色固状物c。
（3）O-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖(d)的合成
50ml 0.25mol/L的HCl乙醇溶液中加入c3.0g，室温搅拌24h后蒸去大部分乙醇，得胶状物，加入15ml H2O充分溶解，再用丙酮沉淀，过滤，固体于烘箱(80℃)中烘干，得浅灰色固状物d。下图为d的结构式。
O
NH 2
OH
O
O
O
N
Cl
*
*
413
4
561
2
2344*
*
*
*
（4）样品精制
取d 1.0g 溶于20ml 蒸馏水中，用足量的丙酮进行沉淀，抽滤，得到的沉淀以少量蒸馏水溶解，置于透析袋中透析48h ，并时常更换蒸馏水。待浓缩到一定体积时，加入足量的丙酮重新沉淀，抽滤，固体真空干燥，所得样品供IR 和NMR 分析用，类似方法精制c 。
4、根据制备权利要求2所述的NDV/La Sota-O-2-HACC-NPs 的制备方法，其特征在于该方法的具体步骤为：
（1）取O-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖配制成浓度为1.2mg/ml 的溶液，然后取5ml 并滴加6ml 新城疫病毒液，磁力搅拌3min ，获得溶液A ；
（2）溶液A 在室温、无菌条件下以1200r/min 磁力搅拌30s ，然后滴加3.5ml 浓度为1.5mg/ml 的三聚磷酸钠（TPP ），维持在5min 内匀速滴完，继续磁力搅拌15min ，再滴加1ml 的PBS ，维持在5min 内匀速滴完，继续磁力搅拌5min ，然后滴加1ml 的司班-80，维持在5min 内匀速滴完，继续磁力搅拌5min ，获得溶液B ；
（3）将溶液B 于4℃、12000r/min 离心20min ，取沉淀并用PBS 洗三次，然后加入浓度为0.01mol/L 的PBS 悬浮，获得载新城疫病毒O-2′-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖纳米粒；
（4）在NDV/La Sota-O-2-HACC-NPs 悬液中体积比1∶1加入质量浓度为5%的蔗糖脱脂奶（含1%的海藻糖），真空冷冻干燥24h ，获得新城疫O-2′-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖纳米粒La Sota 系活疫苗，简称为NDV/La
Sota-O-2′-HACC-NPs/LV。
5、根据权利要求1或3所述的方法，其特征在于权利要求3的步骤（1）所述的壳聚糖的脱乙酰度大于85％。
6、根据权利要求1或3所述的方法，其特征在于权利要求3的步骤（1）所述的醋酸溶液的体积分数为5-15%。
7、根据权利要求1或3所述的方法，其特征在于权利要求3的步骤（1）所述的所得产物N-苯亚甲基壳聚糖于烘箱(35℃~50℃)中放置20h。
8、根据权利要求1或3所述的方法，其特征在于权利要求3的步骤（1）所述的NaOH溶液为1.0-2.0mol/L，真空抽滤析出的沉淀，用甲醇多次洗涤除去未反应的苯甲醛。
9、根据权利要求1或3所述的方法，其特征在于权利要求3的步骤（2）所述的ETA与N-苯亚甲基壳聚糖的质量比为1∶1-9∶1。
10、根据权利要求1或3所述的方法，其特征在于权利要求3的步骤（2）所述的反应温度为60-85℃，反应时间为12-20h。
11、根据权利要求1或3所述的方法，其特征在于权利要求3的步骤（2）所述的采用分批加料的方式逐滴加入ETA的异丙醇溶液，整个反应在N2保护条件下进行，反应结束后冷却至室温，加入冷藏处理的无水乙醇浸泡，抽滤后使用冷冻干燥。
12、根据权利要求1或3所述的方法，其特征在于权利要求3的步骤（3）所述的HCl乙醇溶液为0.2-0.5mol/L。
13、根据权利要求1或3所述的方法，其特征在于权利要求3的步骤（4）所述的O-2-HACC采用去离子水溶解，3G砂芯漏斗过滤，冷藏处理的丙酮沉淀的方法进行精制。
14、根据权利要求2或4所述的方法，其特征在于所述的模型药物为20-300nm 的L系新城疫病毒粒子。
15、根据权利要求2或4所述的方法，其特征在于权利要求4的步骤（1）所述的模型药物新城疫病毒液在制备纳米粒子前经过了去离子化处理。
16、根据权利要求2或4所述的方法，其特征在于权利要求4的步骤（1）所述的O-2′-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖的浓度为0.5～2mg/ml。
17、根据权利要求2或4所述的方法，其特征在于权利要求4的步骤（1）所述的滴加新城疫病毒液的体积为1.25～7.5ml。
18、根据权利要求2或4所述的方法，其特征在于权利要求4的步骤（2）所述的搅拌速度900～1300r/min。
19、根据权利要求2或4所述的方法，其特征在于权利要求4的步骤（2）所述的三聚磷酸钠（TPP）的浓度为0.5～3mg/ml，维持在5min内匀速滴完。
20、根据权利要求2或4所述的方法，其特征在于权利要求4的步骤（2）所述的三聚磷酸钠（TPP）加完后继续磁力搅拌8～30min，再滴加1ml的PBS，维持在5min内匀速滴完。
21、根据权利要求2或4所述的方法，其特征在于权利要求4的步骤（2）所述的PBS加完后继续磁力搅拌8～30min，滴加1ml的司班-80，维持在5min 内匀速滴完，继续磁力搅拌8～30min，获得溶液B。
22、根据权利要求2或4所述的方法，其特征在于权利要求4的步骤（3）所述的离心速度为8000-13000r/min ，时间为10-30min，
23、根据权利要求2或4所述的方法，其特征在于权利要求4的步骤（4）所述的NDV/La Sota-O-2-HACC-NPs悬液与5%的蔗糖脱脂奶（含1%的海藻糖）的体积比1∶1。
24、根据权利要求2或4所述的方法，其特征在于NDV/La
Sota-O-2′-HACC-NPs制备完成后需要离心，用PBS洗三次，然后加入浓度为0.01mol/L的PBS悬浮。
25、根据权利要求2或4所述的方法，其特征在于NDV/La
Sota-O-2′-HACC-NPs制备完成后需真空冷冻干燥24h。
26、根据权利要求2或4所述的方法，其特征在于制备的NDV/La
Sota-O-2′-HACC-NPs平均粒径为303.5nm。
27、根据权利要求2或4所述的方法，其特征在于所述的NDV/La
Sota-O-2′-HACC-NPs表面平均电位为+46.36mv。
28、根据权利要求2或4所述的方法，其特征在于所述的纳米粒子的包封率可达95.68%。
说明书
技术领域
本发明涉及O-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖的合成方法及O-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖新城疫减毒活疫苗纳米粒的制备方法。
背景技术
壳聚糖以其独特的结构使壳聚糖以及壳聚糖衍生物在医药农业食品及非食品工业方面都有广泛的用途，被认为是一种新型的发挥高超功能的生理学材料所有这些用途源于它们多样的生物学功能特别是生物相容性和完整的降解能力及降解过程中代谢产物极低的毒性。
近年来对载药壳聚糖纳米微粒的研究取得了重大进展，成为载体药物技术领域的重要发展方向，但此类载体仍存在下列问题。首先，壳聚糖的溶解性较差，不溶于水和有机溶剂，仅在稀酸中少量溶解，而酸性条件制备壳聚糖纳米药物载体势必对大分子药物的活性产生影响，也在很大程度上限制了纳米药物的产业化制备。因此，对壳聚糖予以改性，改善壳聚糖的水溶性，在适宜(或不影响药物活性)条件下制备纳米药物载体急需研究的课题。其壳聚糖是一种亲水性多仅能包裹一些亲水性大分子，而对于疏水性药物，壳聚糖要作为载体还存在难度。
疏水性强的纳米粒易与肠上皮细胞进行生物粘附，而离子化和具有强亲水链表面的纳米粒不易被胃肠道粘膜粘附。疏水性强的纳米粒易于被摄取，因为疏水性纳米粒易于被生物粘附并且对M细胞有更强亲和力。
本论发明过对壳聚糖进行一定改性，得到带有正电荷的壳聚糖季铵盐：O-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖（O-2-hydroxypropyltrimcthyl ammonium chloride chitosan，O-2-HACC）作为制备载药微球的材料。所得材料在水中及醇溶剂中皆具有良好的水溶性，且与药物模型新城疫病毒液（NDV）通过离子交联的方法进行更好的结合，得到一种新型的载药微球O-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖负载新城疫病毒纳米粒（NDV/La Sota-O-2-HACC-NPs）。此法简便易操作，制备过程中所需溶剂均为常用试剂，易获得，成本低，后续处理也较为简单。该载药微球带正电荷因此具有黏膜渗透性和生物黏附性，可以使抗原穿过黏膜屏障与黏膜下的淋巴细胞产生作用，并且可以延长其抗原与黏膜的作用时间，延缓抗原被清除。
发明内容
1、本发明的目的是提供一种采用氨基保护法将壳聚糖N上的氨基保护，ETA 与壳聚糖O上的氨基开环反应合成O-2-HACC，并利用该纳米粒负载病毒的纳米疫苗制备方法。
2、本发明的技术方案是把2,3-环氧丙基三甲基氯化铵（ETA）连接到氨基保护后的壳聚糖（CS）上，形成O-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖
（O-2-hydroxypropyltrimcthyl ammonium chloride chitosan，O-2-HACC）；之后，再用离子聚合法制备O-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖纳米粒
（O-2-HACC/N,O-CMC-NPs）。该发明采取新城疫病毒（L系）作为模型药物。
3、本发明包括以下步骤：
（1）O-2-HACC的合成
1）N-苯亚甲基壳聚糖(b)的合成
取壳聚糖粉末a3.0g溶于120ml的10%醋酸溶液中，缓慢加入乙醇60ml 后，室温下搅拌30min内逐渐滴加苯甲醛15.8g(149mmol)，继续搅拌1h后，所得产物于烘箱(35℃~50℃)中放置20h。
缓慢滴加稀1.2mol/L的NaOH溶液将溶液调至中性，真空抽滤析出的沉淀，并用甲醇多次洗涤所得固体除去未反应的苯甲醛，得纤维状浅黄色固体b。
2）O-季铵盐-N-苯亚甲基壳聚糖(c)的合成
b2.75g置于圆底烧瓶中，加入异丙醇50ml和2，3-环氧丙基三甲基氯化铵9.0g，水浴70℃搅拌反应16h，过滤，依次用甲醇、丙酮洗涤沉淀，得乳白色固状物c。
3）O-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖(d)的合成
50ml 0.25mol/L的HCl乙醇溶液中加入c3.0g，室温搅拌24h后蒸去大部分乙醇，得胶状物，加入15ml H2O充分溶解，再用丙酮沉淀，过滤，固体于烘箱(80℃)中烘干，得浅灰色固状物d。
4）样品精制
取d 1.0g溶于20ml蒸馏水中，用足量的丙酮进行沉淀，抽滤，得到的
沉淀以少量蒸馏水溶解，置于透析袋中透析48h，并时常更换蒸馏水。待浓缩到一定体积时，加入足量的丙酮重新沉淀，抽滤，固体真空干燥，所得样品供IR和NMR分析用，类似方法精制c。
在步骤（1）1）中壳聚糖的脱乙酰度大于85％；醋酸溶液的体积分数为5-15%；所得产物N-苯亚甲基壳聚糖于烘箱(35℃~50℃)中放置20h；NaOH
溶液为1.0-2.0mol/L，真空抽滤析出的沉淀，用甲醇多次洗涤除去未反应的苯甲醛。
在步骤（1）2）中ETA与N-苯亚甲基壳聚糖的质量比为1∶1-9∶1；反应温度为60-85℃，反应时间为12-20h，采用分批加料的方式逐滴加入ETA的异丙醇溶液，整个反应在N2保护条件下进行，反应结束后冷却至室温，加入冷藏处理的无水乙醇浸泡，抽滤后使用冷冻干燥。
在步骤（1）3）中HCl乙醇溶液为0.2-0.5mol/L。
在步骤（1）4）中O-2-HACC采用去离子水溶解，3G砂芯漏斗过滤，冷藏处理的丙酮沉淀的方法进行精制。
本发明所使用的壳聚糖来源丰富，季铵化原料2,3-环氧丙基三甲基氯化铵(ETA)已有工业化生产，生产成本低，适宜大规模生产。使用本方法合成的O-2-HACC 水溶性良好。
（2）NDV/La Sota-O-2-HACC-NPs的制备
1）取O-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖配制成浓度为1.2mg/ml的溶液，然后取5ml并滴加6ml新城疫病毒液，磁力搅拌3min，获得溶液A；
2）溶液A在室温、无菌条件下以1200r/min磁力搅拌30s，然后滴加3.5ml浓度为1.5mg/ml的三聚磷酸钠（TPP），维持在5min内匀速滴完，继续磁力搅拌15min，再滴加1ml的PBS，维持在5min内匀速滴完，继续磁力搅拌5min，然后滴加1ml的司班-80，维持在5min内匀速滴完，继续磁力搅拌5min，获得溶液B；
3）将溶液B于4℃、12000r/min离心20min，取沉淀并用PBS洗三次，然后加入浓度为0.01mol/L的PBS 悬浮，获得载新城疫病毒O-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖纳米粒；
4）在NDV/La Sota-O-2-HACC-NPs悬液中体积比1∶1加入质量浓度
为5%的蔗糖脱脂奶（含1%的海藻糖），真空冷冻干燥24h，获得新城疫
O-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖纳米粒La Sota系活疫苗，简称为NDV/La Sota-O-2-HACC-NPs/LV。
在步骤（2）1）中模型药物为20-300nm的L系新城疫病毒粒子；模型药物新城疫病毒液在制备纳米粒子前经过了去离子化处理；O-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖的浓度为0.5～2mg/ml；滴加新城疫病毒液的体积为1.25～7.5ml；搅拌速度900～1300r/min。
在步骤（2）2）中三聚磷酸钠（TPP）的浓度为0.5～3mg/ml，维持在5min 内匀速滴完，加完后继续磁力搅拌8～30min，再滴加1ml的PBS，维持在5min内匀速滴完，继续磁力搅拌8～30min，滴加1ml的司班-80，维持在5min内匀速滴完，继续磁力搅拌8～30min，获得溶液B。
在步骤（2）3）中离心速度为8000-13000r/min，时间为10-30min，
在步骤（2）4）中NDV/La Sota-O-2-HACC-NPs悬液与5%的蔗糖脱脂奶（含1%的海藻糖）的体积比1∶1，NDV/La Sota-O-2-HACC-NPs制备完成后需真空冷冻干燥24h。
与壳聚糖纳米粒子相比，本发明制备的NDV/La Sota-O-2-HACC-NPs粒径容易控制，平均粒径为303.5nm，平均电位为+46.36mv，纳米粒子的最大包封率可达95.68%。
具体实施方式
1、O-2-HACC的合成
（1）N-苯亚甲基壳聚糖(b)的合成
取壳聚糖粉末a3.0g溶于120ml的10%醋酸溶液中，缓慢加入乙醇60ml 后，室温下搅拌30min内逐渐滴加苯甲醛15.8g(149mmol)，继续搅拌1h后，所得产物于烘箱(35℃~50℃)中放置20h。
缓慢滴加稀1.2mol/L的NaOH溶液将溶液调至中性，真空抽滤析出的沉淀，并用甲醇多次洗涤所得固体除去未反应的苯甲醛，得纤维状浅黄色固体b。
（2）O-季铵盐-N-苯亚甲基壳聚糖(c)的合成
b2.75g置于圆底烧瓶中，加入异丙醇50ml和2，3-环氧丙基三甲基氯化铵9.0g，水浴70℃搅拌反应16h，过滤，依次用甲醇、丙酮洗涤沉淀，得乳白色固状物c。
（3）O-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖(d)的合成
50ml 0.25mol/L的HCl乙醇溶液中加入c3.0g，室温搅拌24h后蒸去大部分乙醇，得胶状物，加入15ml H2O充分溶解，再用丙酮沉淀，过滤，固体于烘箱(80℃)中烘干，得浅灰色固状物d。
（4）样品精制
取d 1.0g溶于20ml蒸馏水中，用足量的丙酮进行沉淀，抽滤，得到的沉淀以少量蒸馏水溶解，置于透析袋中透析48h，并时常更换蒸馏水。待浓缩到一定体积时，加入足量的丙酮重新沉淀，抽滤，固体真空干燥，所得样品供IR和NMR分析用，类似方法精制c。
2、NDV/La Sota-O-2-HACC-NPs的制备
（1）取O-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖配制成浓度为1.2mg/ml的溶液，然后取5ml并滴加6ml新城疫病毒液，磁力搅拌3min，获得溶液A；
（2）溶液A在室温、无菌条件下以1200r/min磁力搅拌30s，然后滴加3.5ml浓度为1.5mg/ml的三聚磷酸钠（TPP），维持在5min内匀速滴完，
继续磁力搅拌15min，再滴加1ml的PBS，维持在5min内匀速滴完，继续磁力搅拌5min，然后滴加1ml的司班-80，维持在5min内匀速滴完，继续磁力搅拌5min，获得溶液B；
（3）将溶液B于4℃、12000r/min离心20min，取沉淀并用PBS洗三次，然后加入浓度为0.01mol/L的PBS悬浮，获得载新城疫病毒O-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖纳米粒；
（4）在NDV/La Sota-O-2-HACC-NPs悬液中体积比1∶1加入质量浓度为5%的蔗糖脱脂奶（含1%的海藻糖），真空冷冻干燥24h，获得新城疫O-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖纳米粒La Sota系活疫苗，简称为NDV/La Sota-O-2-HACC-NPs/LV。
附图说明
图1为接枝季铵化改性法合成O-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖的主要反应过程。
图2为壳聚糖和O-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖的傅立叶转换红外线光谱分析。
图3为O-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖的1H NMR谱图。
图4为O-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖的XRD谱图。
图5为O-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖的取代度测定。
图6为O-2-羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖和壳聚糖溶液的透光率对pH的依赖关系。
图7为此条件下制备的NDV/La Sota-O-2-HACC-NPs的释放曲线图。
图8为此条件下制备的NDV/La Sota-O-2-HACC-NPs的透射电镜图。
图9为此条件下制备的NDV/La Sota-O-2-HACC-NPs的Zeta电位图。
图10为此条件下制备的NDV/La Sota-O-2-HACC-NPs的粒径分布图。
O
O
N
O
OH
H C
*
*
HO
O
O NH 2
O
OH
*
*
HO
CHO
MeOH
O
N
CH 3
H 3C
H 3C
Cl
OH
O
O NH
O
O
H 2C
*
*
HO
H 2C C H
H 2
C OH N CH 3
CH 3CH 3
HCl,EtOH
O
O
NH 2
O
O
*
*
HO
H 2C C H
H 2
C OH N CH 3
CH 3CH 3
n
n
n
n
图 1
4000
3500
3000
2500
2000
1500
1000
500
020
40
60
80
100
T r a n s m i s s i o n (a .u .)
Wavenumber (cm -1)
Chitosan O-2'-HACC
1640
1090
760
3450
3420
2875
29321638
1432
870
图 2
5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5
chemical shift(ppm)
Real
2.672
3.226
3.6463.715
4.550
3.5812.527
4.2233.4143.770T r i t e n s i t y (a .u .)
图 3
1020304050607080
I n t e n s i t y (a .u .)
CS
O-2-HACC
20.06
20.86
16.36
2θ（degree ）
图 4
4
6
8
10
12
14
16
18
8000
10000
12000
14000
16000
18000
μS (c m )
V (ml)
图 5
2468
101214
20
40
60
80
100
pH
T (%)
HACC
chitosan
图 6
01020304050607080
20
40
60
80100120
140
160
180
检测时间/h
N D V 累积释放量（%）
图 7
图8
图 9
图10
专利人：李波 专利申请号：201310467331.1 文献出处：盐城市志达化工有限公司 本发明提供了一种制备3-氯-2-氨甲基-5-三氟甲基吡啶的方法，包括以下步骤：（a）使式（I）化合物甘氨酸乙酯盐酸盐与二苯甲酮在有机溶剂中发生 反应，得到式（II）化合物二苯亚甲基甘氨酸乙酯；（b）使式（II）化合物与式（III）化合物2, 3-二氯-5-三氟甲基吡啶在有机溶剂中发生反应，得到式（IV）化合物；（c）使式（IV）化合物与盐酸在20~25℃下发生反应，得到式（V）化合物；（d）使式（V）化合物与盐酸在90~110℃下发生反应，得到式（VI）化合物3-氯-2-氨甲基-5-三氟甲基吡啶；本发明的方法原料廉价易得，反应过程绿色环保，溶剂和二苯甲酮均可回收，成本低而产率高，非常适合于工业化生产； 。
1. 一种制备3-氯-2-氨甲基-5-三氟甲基吡啶的方法，其特征在于，包括以下步骤： （a）使式（I）化合物甘氨酸乙酯盐酸盐与二苯甲酮在有机溶剂中，在碱存在和催化剂作用的条件下发生反应，得到式（II）化合物二苯亚甲基甘氨酸乙酯，所述反应的温度为90~110℃，所述碱选自三甲胺、三乙胺、异丙基胺、二异丙基乙基胺、丙二胺、丁胺、苯胺、苄胺、二甲基苯胺中的一种或几种，所述催化剂选自邻甲苯酚、对甲苯酚、苯磺酸、磺基水杨酸、对甲苯磺酸、邻甲基水杨酸、对氯邻甲苯酚中的一种或几种； （b）使步骤（a）中得到的式（II）化合物二苯亚甲基甘氨酸乙酯与式（III）化合物2, 3-二氯-5-三氟甲基吡啶在有机溶剂中，在碱存在和催化剂作用的条件下发生反应，得到式（IV）化合物，所述反应的温度为90~110℃，所述碱选自氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化钾、碳酸钾中的一种或几种，所述催化剂选自苄基三乙基氯化铵、四乙基溴化铵、四丁基溴化铵、四丁基氯化铵、四丁基硫酸氢铵、三辛基甲基氯化铵、十二烷基三甲基氯化铵、十四烷基三甲基氯化铵中的一种或几种； （c）使步骤（b）中得到的式（IV）化合物与盐酸在20~25℃下发生反应，得到式（V）化合物； （d）使步骤（c）中得到的式（V）化合物与盐酸在90~110℃下发生反应，所得产物经碱中和得到式（VI）化合物3-氯-2-氨甲基-5-三氟甲基吡啶；
2010年20(5)生 物 技 术 [6]封丽,阎瑞香,冯春雨,等.两种功能化磁性载体固定重组几丁质酶的研究[J].食品科学,2010,(03):173-176.[7]H.H.W eeta,l R .D .M ason .S t ud ies on i m m ob iliz ed papain[J].B-i o technology ,1973,15(3):455-466. [8]李红.壳聚糖微球制备及其固定木瓜蛋白酶的应用研究[D ].广东:华南农业大学,1999:35-50. [9]张寒飞.磁性固定化漆酶的制备及其应用研究[D].雅安:四川农业大学,2005:32-45.[10]陈石根,周润琦.酶学[M ].上海:复旦大学出版社,2001:154 [11]吴显荣.木瓜蛋白酶的开发与应用[J].中国农业大学学报,2005,10(6):11-15 [12]王秋雨,钦传光,张秋禹.自组装磁性聚苯乙烯微球固定化木瓜蛋白酶[J].应用化学,2009,5(5):557-561. [13]曾力希,刘琳琳,杨旭.新型磁性高分子多孔微球固定化木瓜蛋白酶活性与稳定性研究[J].湖南师范大学:自然科学学报,2007,30(1):101-106. 巯基化壳聚糖包裹人参纳米颗粒的制备 周纲 1,2 ,牛天水1,2,张龙1,刘勇1,3,杨建设 1 (1.中国科学院西北特色植物资源化学重点室和甘肃省天然药物重点室中科院兰州化学物理研究所,甘肃兰州730000; 2.西北师范大学生命科学学院,甘肃兰州730070; 3.中国科学院研究生院,北京100039) 摘要:目的:制备巯基化壳聚糖包裹的且具有良好的荧光敏感性的人参纳米颗粒。方法:采用分子嫁接法和溶剂挥发法,合成巯基化壳聚糖。利用得到的巯基化壳聚糖包裹人参纳米颗粒,制备巯基化壳聚糖人参纳米颗粒。加入对巯基敏感的荧光试剂,利用荧光显微镜对其荧光活性进行检测。结果:巯基化壳聚糖包裹的人参纳米颗粒形状规则,具有核-壳结构,湿态下平均粒径约为300n m;同时在生理p H 下具有很强的荧光活性。结论:巯基化壳聚糖包裹的人参纳米颗粒具有良好的缓释作用和荧光敏感性。 关键词:巯基化壳聚糖;分子嫁接;溶剂挥发;人参纳米颗粒;荧光标记 中图分类号:R944.1 文献标识码:A do:i 10.3969/.j i ss n.1004-311X .2010.05.172 Preparati on of G i nseng nano Particles Coated w ith M ercaptoacetic Chitosan Z HOU Gang 1,2,N IU T ian-shui 1,2,Z HANG Long 1,LIU Yong 1,3,YANG Jian-she 1 (1.Key Laboratory ofC he m i stry ofNorthw es t Plant Resou rce and K ey Laborat ory f or NaturalM ed i ci n e ofGan s u Prov i nce Insti tute of Che m ical Physics , C h i nese A cade m y of S ci ences ,Lan z hou 730000,C h i na ;2.L ife Sci en ce C ollege ofNorthw es tNor m alUn i versit y ,Lan z hou 730070,C h i na ; 3.G raduate School of Ch i nes e A cade m y of S ci en ces ,B eiji ng 100039,Ch i na) Abstrac t :Ob jec ti ve :Prepa ration o f G i nseng nano partic l es coa ted w i th m ercaptoaceti c ch it o san w it h fl uorescence sensiti v ity .M ethod :By usi ng mo lecu l es graft and solven t evaporati on m ethod ,achieved the m ercaptoacetic ch it o san ,then coa ted the m on t o the surface of g i nseng nano particles .furt her l y added fl uorescence reagent to the s ur face of chitosan-coated G i nseng nano parti c les .Resu lt :T he m ercaptoacetic ch it o san-coa ted G i nseng nano particles have regua lr sphere shape and co re-s he ll structure ,w it h the d i ame ter o f about 300n m under hu -m i dity cond iti on and w ith strong fl uorescent ac ti v ity at physi o log ical status .Conc l usion :T he m ercaptoacetic ch it o san -coated G i nseng nano parti c les own the w e ll capac ity of slow -re leased charac ter and fl uo rescence sensiti v ity .K ey word s :m ercaptoaceti c ch it o san ;m o l ecules g ra ft ;so l vent evaporati on ;G i nseng nano particles ;fl uorescence 收稿日期:2009-12-28;修回日期:2010-01-29 基金项目:中科院优秀人才计划项目(070430SRC 1);中科院西部之光项目(20090037);西北师范大学科技创新项目(NWNU -K J CXGC -03-57,NWNU -KJ CXGC -03-49)资助 作者简介:周纲(1988-),男,学士,从事纳米生物学、细胞生物学研究。*通讯作者:杨建设,博士,副研究员,硕导,从事天然产物化学、纳米生物学及化学生物学研究,T e:l 0931-*******,Fax :0931-*******,Em ai:l yangjs @i m pcas .ac .cn 。 近年来,中药现代化逐步加强,尤其是对纳米中药的研究与开发倍受重视[1,2]。有人对100多种中药进行研究,获得了平均粒径仅有17n m 的血竭、23n m 的蜂胶等的纳米颗粒[3]。 壳聚糖是一种天然聚阳离子碱性多糖,其研究侧重于生物医学及药物制剂等领域,证实了壳聚糖具有生物黏附性和多种生物活性,它能与活体组织相容,不会引起过敏反应和排斥现象,其被体内的溶菌酶、胃蛋白酶降解后,降解产物能完全地被人体吸收,无毒、无副作用,较适于作为缓控释辅料[4,5]。利用壳聚糖制备缓释、控释制剂已成为近年来新剂型 研究的热点[6] 。本文以巯基乙酸作为巯基供体,对壳聚糖进行化学修饰,并以人参纳米颗粒作为模型药物进行包裹,应用巯基敏感的荧光探针进行荧光标记,制备了荧光标记的巯基化的壳聚糖包裹人参纳米颗粒,对其进行了相关的性质的表征和检测。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 试剂 壳聚糖(Ch itosan):(C 6H 11NO 4)n ,脱乙酰度91%,上海中秦化学试剂有限公司;巯基乙酸:C 2H 4O 2S (AR ),天津市光复精细化工研究所;碘标准液配制:I 2,国药集团化学试剂有限 公司;中药颗粒:人参纳米颗粒,甘肃省天然药物重点实验室制备。三聚磷酸钠:N a 5P 3O 10,烟台双双化工有限公司;荧光探针:D y li ght 549马来酰亚胺,美国T he r mo 公司;对甲基苯磺酸:国药集团化学试剂有限公司; 淀粉指示剂(1g 可溶性淀粉:5m g 红色碘化汞);N,N -二甲基甲酰胺:天津市巴斯夫化工有限公司。其它试剂均为分析纯。1.1.2 仪器 JS M -6701F 冷场发射型扫描电镜,日本电子株式会社。O l ympus Bx51荧光显微镜,日本奥林巴斯仪器公司;飞鸽牌离心机上海安亭科学仪器厂。81-2恒温磁力搅拌器,上海司乐仪器厂;予华DZF -6020真空干燥箱,巩义市英峪予华仪器厂。1.2 方法1.2.1 巯基化壳聚糖制备的基本反应过程 使巯基乙酸的羧基与壳聚糖的伯氨基发生反应形成酰氨键,脱去1分子水,从而形成巯基化壳聚糖。基本反应过程见图1。1.2.2 巯基化壳聚糖制备的实验条件 巯基化壳聚糖采用分子嫁接法制备,具体过程如下:称取1g 壳聚糖,溶于40m l 乙酸溶液(0.1mo l/L ),利用加热或超声使壳聚糖完全溶解。再加入20m l 巯基乙酸和0.08g 对甲基苯磺酸作为催化剂。在25e ,磁力搅拌器以180r/m i n 条件下反应24h ,使壳聚糖和巯基乙酸能够充分反应。反应结束后用,低浓度的氨水溶液(0.1mo l/L )对上述混合液冲洗,此时溶液颜色变为粉红色并生成絮状沉淀。在4000r /m i n 条件下离心10m i n ,过滤,收集沉淀物,然后用蒸馏水将沉淀物冲洗,再次离心过滤收集沉淀物,重复多次,直至含有沉淀物溶液的p H 81
品名CAS号分子式 十二烷基三甲基溴化铵1119-94-4 C12H25(CH3)3 NBr 十二烷基三甲基氯化铵112-00-5C12H25(CH3)3 NCl 十四烷基三甲基溴化铵1119-97-7C14H29(CH3)3NBr 十四烷基三甲基氯化铵4574-04-3C14H29(CH3)3 NCl 十六烷基三甲基溴化铵57-09-0C16H33(CH3)3 NBr 十六烷基三甲基氯化铵112-02-7C16H33(CH3)3 NCl 十八烷基三甲基氯化铵112-03-8 C18H37(CH3)3NCl 十八烷基三甲基溴化铵1120-02-1 C18H37(CH3)3NBr 苯扎氯铵63449-41-2 C17H30NCl 苯扎溴铵7281-04-1 C21H38BrN 四甲基氯化铵75-57-0(CH3)4NCl 四甲基溴化铵64-20-0(CH3)4NBr 四甲基硫酸氢铵103812-00-6(CH3)4NHSO4 四甲基醋酸铵10581-12-1(CH3)4CH3COON 四甲基碘化铵75-58-1(CH3)4NI 四乙基溴化铵71-91-0(C2H5)4NBr 四丙基氯化铵5810-42-4(C3H7)4NCl 四丙基溴化铵1941-30-6(C3H7)4NBr 四丁基氯化铵37451-68-6(C4H9)4NCl 四丁基溴化铵1643-19-2(C4H9)4NBr 四丁基硫酸氢铵32503-27-8(C4H9)4NHSO4
四丁基氟化铵87749-50-6(C4H9)4NF 四丁基醋酸铵10534-59-5(C4H9)4CH3COON 四丁基碘化铵311-28-4(C4H9)4NI 甲基三乙基氯化铵10052-47-8CH3(C2H5)3NCl 甲基三丁基氯化铵56375-79-2CH3(C4H9)3NCl 甲基三辛基氯化铵5137-55-3CH3(C8H17)3NCl 甲基三辛、癸基氯化铵63393-96-4CH3[(CH2)7CH3]3NCl 甲基三辛基氯化铵水溶液5137-55-3CH3(C8H17)3NCl 双十烷基二甲基氯化铵7173-51-5 (C10H21)2(CH3)2NCl 双十二烷基二甲基氯化铵3401-74-9 (C12H25)2(CH3)2NCl 双十八烷基二甲基氯化铵107-64-2 (C18H37)2(CH3)2NCl 双十烷基二甲基溴化铵2390-68-3 (C10H21)2(CH3)2NBr 双十二烷基二甲基溴化铵3282-73-3 (C12H25)2(CH3)2NBr 双十八烷基二甲基溴化铵3700-67-2 (C18H37)2(CH3)2NBr
塑料(PVC)生产行业的劳动者慎防急性三甲基氯化锡中毒 来源:中国职业健康发布时间:2017-02-13 关键词: 案例 聂某等3人为某PVC水管生产企业的工人，由于天气炎热，车间内的温度高，通风设施差，部分男工为方便操作，经常脱掉上衣裸露上身工作，某天中午磨粉车间的周某在操作的时候晕倒在磨粉机旁，被紧急送到医院救治，次日谭某、曾某亦出现头晕、胸闷、四肢无力等症状先后被车间主管送到医院就诊，而后三人均被诊断为急性三甲基氯化锡中毒。 专家解析 有机锡类化合物中以三烃基锡毒性(TMT)最大，国内常报道TMT 中毒死亡的事件，TMT中毒多与有机锡用做塑料稳定剂有关，从事有机锡塑料稳定剂研究、生产、使用(特别是塑料或回收塑料的加热成型)等工作可产生TMT中毒；国内还曾发生多起误食被有机锡塑料稳定剂污染的食品(如猪油)的群体中毒事件，也有因饮用TMT污染的地下水、皮肤接触含TMT的蒸汽或液体而发生中毒的报道。 TMT可通过呼吸道、消化道、皮肤粘膜进入机体,工人在高温环境下裸露上身操作，增加空气中TMT通过皮肤吸收的机会。多数中毒
患者有低钾血症，出现头痛、头晕、四肢乏力、幻视、幻听、胸闷、心悸、腹痛、腹泻等表现。 中毒救治 目前尚无特效解毒剂,主要采取一般急救措施及对症支持治疗。 1.立即脱离事故现场,卧床休息。凡有确切TMT接触史者,应进行医学监护5-7天,必要时给予对症处理,皮肤或眼睛受污染者,应立即用水彻底冲洗。 2.积极纠正低钾血症,维持体内电解质及酸碱平衡。 3.积极防治脑水肿,控制液体摄入量,注意控制精神症状及抽搐。 4.加强心、肝、肾等重要器官的保护治疗。 5.观察对象经医学监护痊愈后,可恢复原工作,轻症中毒治愈后可从事正常工作,但应调离有机锡作业,中、重毒中毒根据病情,可延长休息时间,酌情安排工作,但不应再从事有毒作业。 防控措施 1.加强上岗前培训和职业卫生知识教育。 2.尽量使用不含TMT的稳定剂替代有机锡塑料稳定剂。 3.有机锡塑料稳定剂生产、使用的作业场所，尤其是回收塑料的破碎、成型、加热工艺应加强通风、排毒，做好工人卫生防护,防止毒物经呼吸道和皮肤吸收。
四官能团巯基化合物工艺路线合成简介 一.概述： 是一种新型的高折射率和低色散的光学树脂单体。其反应机理：由环氧氯丙烷（ECH ）和巯基乙醇反应制得2,3-二羟基乙基-1-丙醇（DHEP ），然后将DHEP 经盐酸/硫脲法合成了分子结构中硫含量高，含有4个巯基的光学树脂单体。 单体通过均聚、共聚技术可制备性价比更高的新型的光学树脂，如BES-XDI 、BES-XDTI-XDI 等聚氨酯光学树脂，在光盘、光纤、建材、树脂镜片、精密透镜等方面得到广泛的应用。 二.合成路线： 1、第一步：开环加成 O SH OH OH Cl SCH 2CH 3OH 3 2、第二步： OH Cl SCH 2CH 2OH 2 SCH 2CH 2OH SCH 2CH 2OH OH S OH Na 2S·9H 2O 3、第三步： SCH 2CH 2OH SCH 2CH 2OH OH S OH s SH 2CH 2CS s HN H 2N HCl HN H 2N HCl S NH NH 2 HCl SCH 2CH 2S NH NH 2 HCl S NH 2 2 4、第四步：中和、酸解 s SH 2CH 2CS s HN H 2N HCl HN H 2N HCl S NH NH 2 HCl SCH 2CH 2S NH NH 2 HCl NaOH HCl 60S SH SH SCH 2CH 2SH 2CH 2SH 三.产品性能简介： 分子式：C 10H 22S 7 结构式：
分子量：366.74 外观：无色或透明微黄色粘性液体CAS No：553664-68-9 四.原材料物性参数： 六．合成工艺：见实验工艺1-3
A a-SAA 阴离子表面活性剂 AACG 烷基两性羧基甘氨酸盐 AACP 烷基两性丙氨酸盐 AAG 烷基两性甘氨酸盐 AAOA 烷基酰胺丙基氧化胺 AAP 烷基丙氨酸盐 AAPB 烷基酰胺丙基甜菜碱 AASB 烷基酰胺丙磺基甜菜碱 ARS 支链烷基苯磺酸盐 AEO(n) 脂肪醇聚氧乙烯醚(n) AEC 醇醚羧酸盐 AS 烷基硫酸盐 AESS 脂肪醇聚氧乙烯醚琥珀酸酯磺酸钠AE 脂肪醇聚氧乙烯醚 AES 脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸盐 ABS 硬性苯磺酸盐 AOS 烯基磺酸盐 AG 烷基甘氨酸盐 AGS 烷基甘油醚磺酸盐 APG 非离子烷基糖苷 AIDA 烷基亚氨基二乙酸盐 AIDP 烷基亚氨基二丙酸盐 Ale(2)S 月桂醇醚(2)硫酸铵盐 ALs 月桂醇硫酸酯铵盐 Am/DIFAG乙酸甘油单、二酸酯 AMT 长链酰基-N-甲基牛磺酸钠(1gepon T) AOS a -烯烃磺酸盐 APAC 长链烷基低聚氨基酸,烷基聚胺羧酸盐APG 烷基低聚糖苷 APES 烷基酚聚氧乙烯醚硫酸盐 C CAPG 阳离子烷基糖苷 CHSB 十六烷基羟基磺丙基甜菜碱 CAPB 椰油酰胺丙基甜菜碱 CAB 椰油酰胺甜菜碱 CAMA 椰油基咪唑啉甜菜碱 CAPO 椰油酰胺丙基氧化胺 CoACG 椰油基两性羧基甘氨酸盐 c-SAA 阳离子表面活性剂 CCACP 椰油基两性羧基丙氨酸盐 CoAG 椰油基两性甘氨酸盐 CoAHSB 椰油酰胺丙基羟基磺基甜菜碱CoAP N-椰油基-b-丙氨酸盐
CoAPB 椰油酰胺丙基甜菜碱CoASB 椰油酰胺磺丙基甜菜碱CoB 椰油基甜菜碱 CoDEA 椰油基二乙醇酰胺 CoIDP 椰油亚氨基二丙酸盐CCMEA 椰油单乙醇酰胺 CoMT 椰油酰基-N-甲基牛磺酸钠CoNnAa 椰油基低聚丙基甘氨酸CoSB 椰油基磺丙基甜菜碱 CM/DFAG 柠檬酸甘油单、二酸酯CPC 十六烷基氯化吡啶 CSB 十六烷基磺基甜菜碱 CAPG 阳离子烷基糖苷 CMEA 椰油酸单乙醇酰胺 CAPB 椰油酰胺丙基甜菜碱 CAB 椰油酰胺甜菜碱 CAMA 椰油基咪唑啉甜菜碱 CTAB 十六烷基三甲基溴化铵CTAC 十六烷基三甲基氯化铵 D DAC5 十二烷基两性羧基甘氨酸盐DAES 十二胺乙基磺酸钠 DAP N-十二烷基-b-丙氨酸盐DAPB 十二酰胺丙基甜菜碱DAPSB 十二酰胺丙基磺基甜菜碱DB 十二烷基甜菜碱 DDBAC 十二烷基二甲基苄基氯化铵DDEAC 双十烷基双甲基氯化铵DDG 十二烷基二(氨乙基)甘氨酸DEACG 癸基两性羧基甘氨酸盐DEAP N-十烷基-b-丙氨酸盐 DEB 十烷基甜菜碱 DEEO(n) 十烷基聚氧乙烯醚(n) DEO(n) 十二醇聚氧乙烯醚(n) DETAC 十烷基三甲基氯化铵 DG 十二烷基甘氨酸 DHSB 十二烷基羟基磺丙基甜菜碱DIC 十二烷基咪唑啉阳离子 DIDP 十二烷基亚氨基二丙酸盐DMBB 十二烷基甲基苄基甜菜碱DMG 十二烷基氨乙基甘氨酸 DMT 十二酰基-N-甲基牛磺酸钠DOA 十二烷基二甲基氧化胺 DPB 十二烷基二甲基丙基甜菜碱
文章编号:1001-9731(2014)06-06140-04 巯基化壳聚糖衍生物自组装纳米球的制备与表征? 刘英杰1,段瑞平1,刘玲蓉1,杜一博1,王静洁1,熊青青1,张其清1,2 (1.中国医学科学院北京协和医学院生物医学工程研究所,天津市生物医学材料重点实验室,天津300192; 2.福州大学生物和医药技术研究院,福州350002) 摘一要:一以N-羟基琥珀酰亚胺(N H S)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(E D C四H C l)为催化剂,将制备的双羧基聚乙二醇(C O O H-P E G-C O O H)和部分巯基化聚乙烯亚胺(P E I-S H x)先后接枝于壳聚糖分子,得到巯基化壳聚糖衍生物(C S-P E G-P E I)三利用傅立叶红外光谱仪(F T-I R)和核磁共振仪(1H NM R)对其结构进行表征;通过透析法制备自聚集纳米粒,透射电子显微镜(T E M)和动态激光粒度分析仪(D L L S)分析测试自聚集纳米粒显示,自聚集纳米粒为球状纳米胶束,该纳米球有望成为纳米药物及基因的载体三 关键词:一壳聚糖;聚乙二醇;巯基化聚乙烯亚胺;自组装 中图分类号:一O629文献标识码:A D O I:10.3969/j.i s s n.1001-9731.2014.06.030 1一引一言 巯基化合物是一类重要的医药中间体而受到人们的广泛研究,主要集中应用于纳米药物载体[1]二生物凝胶材料制备[2]二基因载体[3]以及与纳米金结合[4]等方面三巯基化壳聚糖因其良好的生物特性得到广大研究者的青睐三壳聚糖(C h i t o s a n,C S)又叫脱乙酰甲壳素,是自然界存在的唯一碱性多糖,具有良好的生物相容性二低毒性二可降解性及粘附性,被广泛应用于化工二食品二化妆品二生物医药等方面三但是壳聚糖在水中的溶解性小,限制了其在生物医药材料方面的应用,通过与壳聚糖分子中的活性基团反应引入改性基团如胆甾醇[5]二聚乙二醇[6]二巯基等可以改变其物理化学性能,有利于其在生物医学材料领域的应用三聚乙二醇(P E G)是一种应用广泛的水溶性聚醚,它可用于医药二卫生二食品二化工等行业三本课题组已报道了聚乙二醇单甲醚接枝壳聚糖自组装纳米球用于甲氨蝶呤缓释释放的研究[6],该研究表明壳聚糖经聚乙二醇改性后,壳聚糖水溶性增加并能够自组装成胶束三 低分子量聚乙烯亚胺(P E I)具有较低的生物毒性,其大分子链上拥有大量可与多种活性基团反应的氨 基三因此,本文将低分子量聚乙烯亚胺与巯基乙酸甲酯反应得到部分巯基化的聚乙烯亚胺,并用羧基化聚乙二醇和部分巯基化聚乙烯亚胺接枝到壳聚糖上,得到巯基化壳聚糖衍生物,利用其在水溶液中自组装的性质制备成纳米球三由于巯基化壳聚糖衍生物中含有丰富的羧基和氨基,可进一步与其他活性基团或药物反应,可作为一种新型的药物载体在药物制剂研究中得到应用三 2一实一验 2.1一主要原料与仪器 壳聚糖(C S,M w=200k D a,脱乙酰度为90.1%,浙江澳兴生物技术有限公司),采用先酸化溶解,再碱化沉淀的方法纯化;聚乙烯亚胺(P E I,M w=800D a, M n=600D a,S i g m a);5,5 二硫代双(2-硝基苯甲酸) (D T N B,S i g m a);4-二甲氨基吡啶(D MA P,F l u k a);N-羟基琥珀酰亚胺(N H S,F l u k a);1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(E D C四H C l,上海延长生化科技发展有限公司);巯基乙酸甲酯(F l u k a);聚乙二醇(P E G,M n=2000D a,上海生工生物工程有限公司);丁二酸酐(天津市福晨化学试剂厂),其它试剂均为市售分析纯,实验用水均为纯水三 探头超声仪(UH-500A,A u t o m a t i cS c i e n c eI n-s t r u m e n tC O.,L T D);透射电子显微镜(T E M,J E M-100C XⅡ,J a p a n);紫外-可见分光光度计(U V-V i s, L a m b d a35,P e r k i n e l m e r);冷冻干燥机(G O L D-S I M, S I M);透析袋(MW C O8000-14000,U S A);核磁共振仪(NM R,V a r i a n I n o v a500,U S A);傅立叶变换红外光谱仪(F T-I R,N i c o l e tN e x u s470-E S P,U S A);动态激光粒度分析仪(D L L S,M a l v e r nN a n o-Z S,U K)三2.2一聚乙二醇基壳聚糖(C S-P E G)的合成 按文献[7-8]方法制备双羧基聚乙二醇,再以双羧基聚乙二醇与壳聚糖为原料通过NH S/E D C催化反应[9-10]合成聚乙二醇基壳聚糖三称取0.2g(0.91m m o l N H2)纯化壳聚糖溶于磷酸盐缓冲液(0.1m o l/L, P B S,p H值=6.0)中,搅拌溶解过夜,充分溶解后向溶 0416 02014年第6期(45)卷 ?基金项目:国家自然科学基金资助项目(31271023,91323104);中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金资助项目(院所1304) 收到初稿日期:2013-09-18收到修改稿日期:2013-11-10通讯作者:张其清,E-m a i l:z h a n g q i q@126.c o m 作者简介:刘英杰一(1989-),女,河南禹州人,在读硕士,师承张其清教授,主要从事纳米药物缓控释制剂方面研究三
编订：__________________ 单位：__________________ 时间：__________________ 有毒有机锡的危害与预防 (正式) Deploy The Objectives, Requirements And Methods To Make The Personnel In The Organization Operate According To The Established Standards And Reach The Expected Level. Word格式 / 完整 / 可编辑
文件编号：KG-AO-3798-24 有毒有机锡的危害与预防(正式) 使用备注：本文档可用在日常工作场景，通过对目的、要求、方式、方法、进度等进行具体、周密的部署，从而使得组织内人员按照既定标准、规范的要求进行操作，使日常工作或活动达到预期的水平。下载后就可自由编辑。 有机锡化合物有4种类型：四烃基锡化合物（R4Sn）、三烃基锡化合物（R3SnX）、二烃基锡化合物（R2SnX2）和一烃基锡化合物（RSnX3）,以上通式中R为烃基，可为烷基或芳基等；X为无机或有机酸根、氧或卤族元素等。根据国内外病便报道，引起急性中毒性脑病的主要有机锡化合物有三甲基锡（trimethyltin）,三甲基氯化锡（trimethyltin chloride）、三乙基锡（triethyltin）、三乙基氯化锡（triethyltin chloride）、三乙基溴化锡（triethyltin bromide）、三乙基碘化锡（triethyltin iodide）、三乙基氢氧化锡（triethyltin hydroxide）、三乙基硫酸锡（triethyltin sulfate）、双三乙基硫酸锡（bis(triethyltin) sulfate)、三丁基氯化锡
1.1 季铵盐化合物 1.1.1 结构与性质 季铵盐（又称四级铵盐）是中的4个都被取代后形成的的[3]。季铵盐有4个碳原子通过共价键直接与氮原子相连，阴离子在烃基化试剂作用下通过离子键与氮原子相连，其分子通式为: 结构中4个烃基R可以相同，也可以不相同。取代的或非取代的，饱和的或不饱和的，可以有分支或没有分支，可以为环状结构或直链结构，可以包含醚、酯、酰胺，也可以是芳香族或芳香族取代物。通过离子键与氮原子相连的多为阴 －、RCOO－等），以氯和溴最为常见[4]。离子（F－、Cl－、Br－、I－）或酸根（HSO 4 1.1.2 合成与分析方法 1.1.3 应用研究概况 季铵盐化合物特有的分子结构赋予其乳化、分散、增溶、洗涤、润湿、润滑、发泡、消泡、杀菌、柔软、凝聚、减摩、匀染、防腐和抗静电等一系列物理化学作用及相应的实际应用[8]，这些独特性能使其在造纸、纺织、涂料、染色、医药、农药、道路建设、洗化与个人护理用品和高新技术等领域均显示出了良好的应用前景。 1.2 季铵盐杀生剂研究进展 在季铵盐化合物的诸多独特性能及相应的实际应用中，优异的杀生性能是其中发现最早、应用最广的性能。目前，具有广谱高效、低毒安全、长效稳定等优点的季铵盐杀生剂已在工业、农业、建筑、医疗、食品、日常生活等众多领域得到广泛应用。例如，水处理[43]、造纸[44]、皮革[45]、纺织[46]、印染[47]、采油[48]、涂料[49]等行业的杀菌灭藻、防腐防霉、清洗消毒；农产品和农作物的防霉防病[50]；养殖和畜牧的防病杀菌[51]；木材和建材的防虫防腐[52]；外科手术和医疗器械的杀菌消毒[53]；禽蛋肉类和食品加工的清洗个人家庭和公共卫生的洗涤消毒[55]等均要用到季铵盐杀生剂。 1.2.1 发展历程 人们对季铵盐化合物的认识是从其所具有的杀菌作用上开始的，该类化合物在发展初期主要就是用作杀菌剂[13]。Jacobs W A等于1915年首次合成了季铵盐化合物，并指出这类化合物具有一定的杀菌能力，翻开了季铵盐杀生剂的历史篇章。然而，该研究成果一直未被人们所重视。此后直到1935年，Domagk G[56]发现了烷
新型巯基化合物近红外BODIPY类荧光试剂的合成与应用研究谷胱甘肽(GSH)和半胱氨酸(Cys)等小分子巯基化合物(RSH)广泛分布于生物体中,在新陈代谢活动中起着关键作用。作为主要的还原物质,RSH可清除活性氧和自由基,维持机体的氧化还原平衡；RSH还可与一氧化氮(NO)反应生成S-亚硝基硫醇(RSNO),作为NO的“储存池”,从而间接参与信号转导。 当RSH含量出现异常时,会导致肝损伤、阿尔茨海默病、癌症、艾滋病等疾病。鉴于巯基化合物在生物体内独特的生理病理功能,检测其在生物体内的含量、含量变化及其动态分布意义重大。 荧光分析法因其灵敏度高、选择性好、直观、可视化等优势,在化学、生命科学、医学和环境科学等领域应用广泛。近红外(NIRF,>600nm)荧光由于背景干扰少、组织穿透力强、对生物损伤小等优点逐渐成为人们关注的焦点,而性能优异的有机小分子荧光试剂在近红外荧光中的应用最多。 然而,理想的有机小分子荧光试剂仍然较少。二氟化硼-二吡咯甲烷(Boron dipyrromethene, BODIPY)荧光团的摩尔吸光系数大、荧光量子产率高,荧光不受溶剂、pH值及光照影响。 因此,本论文通过在其3-、5-位引入苯乙烯基扩大共轭体系的方式,设计合成了新型的近红外荧光试剂1,7-二甲基-3,5-二苯乙烯基-8-苯基-(2’-马来酰亚胺基)-二氟化硼-二吡咯甲烷(DMDSPAB-o-M)和1,7-二甲基-3,5-二苯乙烯基 -8-苯基-(4’-碘乙酰胺基)-二氟化硼-二吡咯甲烷(DMDSPAB-I)。结合荧光光度计、高效液相色谱(HPLC)、毛细管电泳(CE)、荧光显微镜等分析手段,利用新合成的近红外荧光试剂,建立了多种测定血液、细胞、组织等动植物样品中巯基化合物及含量变化的新方法,包括可视化同时监测RSH和NO的荧光成像法。
表面活性剂专业缩写词及国内代号 平平加A-20 脂肪醇聚氧乙烯醚,HLB值为16 添加剂AC 脂肪胺聚氧乙烯醚 ADI 每人每天允许摄人量 ADMA 烷基二甲胺 AEO 脂肪醇聚氧乙烯醚 AEEA 羟乙基乙二胺 AES 脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸盐 AGO 氨基酸锗氧化物 AGS N—酰基谷氨酸盐 Alfol 脂肪醇名,美国大陆油品公司商标 AMP 氨基甲基丙醇(喷发胶) 净洗剂AN 脂肪醇聚氧乙烯醚 匀染剂AN 脂肪胺聚氧乙烯醚(尼凡丁) AOS α－烯基磺酸盐 AP 烷基磷酸酯 APE 千基酚聚氧乙烯醚 APG 烷基多糖苷 AR617精炼剂油酸钠、碳酸钠和三聚磷酸钠为主的混合物 AS 脂肪醇硫酸钠 AS-33 含33％脂肪醇硫酸钠的水溶液 ASEA 烷基硫酸酯单乙醇胺盐 ASTM 美国标准试验方法 AV 酸值 BHT 3,5－叔丁基对甲酚；2,6－二叔丁基对甲基苯酚(抗氧剂) 匀染剂BOF 烷基苯酚聚氧乙烯醚 BS—12 甜菜碱；十二烷基二甲基氨基己酸钠 BSL 4,4-二氨基蓖-2,2-二磺酸的三氮杂苯基衍生物(荧光增白剂) BX 拉开粉；丁基萘磺酸钠 Nekal BX 烷基萘磺酸钠 CDE 椰子油脂肪酸二乙醇酰胺 Cmc 临界胶束浓度 CMC 羧甲基纤维素 HEC 羟乙基纤维素 CME 椰子油脂肪酸单乙醇酰胺 Tmc 临界胶束温度 匀染剂CN 阳离子表面活性剂复合物 扩散剂CNF 亚甲基苄基萘磺酸钠 分散剂CS 纤维素硫酸酯钠盐 CTAB 溴化十二烷基三甲基铵
CTAC 氯化十二烷基三甲基铵 5881D 十二烷基磺酸钠、拉开粉、磷酸氢钠和松节油为主的混合物(渗透剂) DAH 磺化油 DAN 硫酸化蓖麻子油 分散剂DAS 烷基联苯醚磺酸盐 DBS 十二烷基磺酸钠 匀染剂DC 氯化十八烷基二甲基苯乙基铵 D&C 美国药用化妆晶用标准 DCCA 氯异氰尿酸 DDB 十二烷基苯 DDBS 十二烷基苯磺酸盐 DEG 二羟乙基甘氨酸 DETA N,N-二乙基间甲苯甲酰胺(驱虫剂) DHA 脱氢乙酸(防腐剂) DMF N,N-二甲基甲酰胺 DMP 邻苯二甲酸二甲酯(驱虫剂) DSDMAC 氯化双十八烷基二甲基铵 DTPA 二亚乙基三胺五乙酸五钠(整合剂) 渗透剂EA 脂肪醇聚氧乙烷醚(1：1．6) EDTA 乙二胺四乙酸(二钠、四钠) EGF 表皮细胞生长因子(化妆晶添加剂) EL 蓖麻油聚氧乙烯醚 EMPA 标准棉布的预污布(测去污力的布样) EO(n) 环氧乙烷(加合数) 柔软剂ES(EST)咪唑啉阳离子表面活性剂 净洗剂FAE 第二不皂化物醇制成的AE08 FAS 脂肪醇硫酸钠 FD&C 美国食用、药用、化妆品用标准 FFA 游离脂肪酸 乳化剂FO 脂肪醇聚氧乙烯醚(1：0.8) FWA 荧光增白剂 柔软剂GC 脂肪酸聚氧乙烯酯 GLC 气液相色谱 CMS 甘油单硬脂酸酯 匀染剂GS 芳基醚硫酸酯和烷基醚基酯的混合物 H501 羟基亚乙基二膦酸 HA 透明质酸(化妆品添加剂) 促进剂HDF 脂肪酸衍生物 HEDP 1-羟基乙烷-1,1-二膦酸四钠(螯合剂) HEDTA 羟乙二胺四乙酸(螯合剂) HOEDTA 羟乙二胺三乙酸三钠(螯合剂) HRBO 氢化米糠油 Hyaminel622 氯化二异丁基苯氧基乙氧基乙基二甲基苄基铵 IgeponT 牛脂酸—N-甲基牛磺酸酰胺
第20卷第4期油田化学V o l.20N o.4 2003年12月25日O i l f i e l d C h e m i s t r y25D e c， = ============================================================== 2003文章编号：1000-4092（2003）04-0295-04 2-氯乙基三甲基氯化铵C E T A作为 粘土稳定剂的性能研究? 严高云1，姜娜1，张蕊2，朱维群2 （1.中国石化胜利油田公司孤岛采油厂，山东东营257231；2.山东大学胶体与界面化学教育部重点实验室，山东济南250100）摘要：实验测定了2-氯乙基三甲基氯化铵（简称C E T A）作为粘土稳定剂的某些性能。随C E T A浓度的增大，钙蒙脱石在水中的z e t a电位增大，在浓度约为2.5g／L时z e t a电位为零，z e t a电位增大是C E T A吸附的结果。C E T A在钙蒙脱土上的饱和吸附量为0.54m m o l／g。以乙醇作为基准液，吸附和未吸附C E T A的钙蒙脱土粉末上水的相对润湿接触角分别为89.3≠和98.1≠，吸附C E T A使钙蒙脱土的水湿性略有增大。当C E T A的吸附量由0逐步增大到 0.53m m o l／g时，钙蒙脱土的晶层间距由1.5713n m逐渐减小到1.4244n m。页岩在0.1%、0.2%、0.3%的 C E T A水溶液中的一次、二次回收率，大体上分别相当于在1%、2%、3%K C l水溶液中的相应回收率。C E T A作为 粘土稳定剂，可用于水基钻井液，油气层防膨处理及阳离子聚合物驱油前的地层预处理。图3表2参10。 关键词：有机季铵盐；2-氯乙基三甲基氯化铵（C E T A）；钙质蒙脱土；溶液吸附；z e t a电位；晶层间距；表面润湿性；粘土稳定剂 中图分类号：T E39：T E254+.4：O647.3文献标识码：A 蒙脱土是自然界中普遍存在的一种2:1型层状粘土矿物，单位晶胞由两片顶角朝里的S i—O四面体中间夹一片A l—O或M g—O八面体形成一结构层，层与层之间没有共用的氧或羟基，层间结合力很弱，同晶置换现象很普遍，因而具有负电荷［1］。根据电中性原理，层间必然出现相应数量的阳离子。当在蒙脱土悬浮液中加入有机阳离子时，阳离子可以插入晶层之间或吸附在表面上，引起蒙脱土性质的一系列变化，这些变化可以从吸附等温线、z e t a电位、润湿角的测定和X射线衍射分析等得到。 在油田钻井中蒙脱土是水基钻井液的重要组成部分，而在钻井过程中钻井液的稳定性与井壁的稳定性始终是一对不易解决的矛盾。以往为了保证钻井液的稳定性必须增加钻井液的负电性，而为了保证粘土井壁的稳定性，必须加入带正电的页岩稳定剂或抑制剂来抑制地层粘土矿物的水化、分散和膨胀。在上世纪80年代，正电胶钻井液的出现为这一 难题的解决带来了福音，但正电胶钻井液价格昂贵，运输不方便。而大分子量的阳离子聚合物类粘土稳定剂又往往会加重对低渗透油层渗透率的伤害。 正电性钻井液可能从根本上解决这个问题，而效果显著的阳离子系列化合物则成为科学工作者的研究热点［2］。我们研制了小分子量的有机季铵盐粘土稳定剂C E T A，并从吸附、z e t a电位变化、相对润湿接触角、X R D方法和页岩回收率等方面考察了C E T A／蒙脱土体系的基本性质，本文报道这一研究结果。 1实验部分 1.1实验材料 蒙脱土，山东省安丘膨润土厂产品，主要成分为钙质蒙脱土，国家一级膨润土，阳离子交换容量为84.8m m o l／100g，粒径小于0.074m m；2-氯乙基三 ?收稿日期：2003-05-05；修改日期：2003-11-25。 作者简介：严高云（1969-），男，工程师，石油大学（华东）物探专业学士（1992），现从事油田开发工作，通讯地址：257231胜利油田有限公司孤岛采油厂作业一大队，电话：0546-8885554；朱维群（1963-），男，山东大学教授，大连理工大学工学博士（1998），现于 胜利油田博士后流动站从事油田化学方面的研究工作，通讯地址：250100山东济南山东大学胶体与界面化学教育部重点实 验室，电话：138********。
Vol．40No．1（2009） ZHEJIANG CHEMICAL INDUSTRY 文章编号：１００６－４１４８（２００９）０１－００１８－０３ 巯基化合物的制备 赵晓磊，何为（青岛科技大学化工学院,山东青岛266042） 摘要：巯基化合物因其是一类重要的工业原料和重要的医药中间体而受到人们的广泛关注，研究开发其制备技术成为开发该系列化合物的重点。多数产品国内供不应求，极具发展潜力。本文详细综述了巯基化合物的制备方法，同时对制备方法提出了评价。 关键词：巯基;硫醇;硫酚;制备 0前言 巯基化合物因其是一类重要的工业原料和重要的医药中间体，主要有硫醇和硫酚两大类。 硫醇是以硫原子取代醇羟基中的氧原子，而形成的具有巯基(-SH)的一类化合物。它们在性质上与醇相似，有弱酸性，且酸性比相应的醇强，易被氧化成二硫化物。硫醇可用做药物、农药及除草剂的中间体，可做解毒剂，橡胶硫化促进剂等。比如：叔十二碳硫醇是合成橡胶聚合的调节剂。巯基乙醇用于合成农药、医药、染料等，在橡胶、纺织、塑料、涂料中间体，工业中亦可用作助剂。乙硫醇是磺胺类药物和磺酰脲类除草剂的中间体。由于硫醇类化合物具有葱、蒜等特殊气味，它们在食用香精中也占有一席之地。 硫酚是重要的化工原料和有机合成中间体，可广泛用于药物和染料的合成以及高分子合成原料、铝合金缓蚀剂、重金属离子络合分析试剂、感光材料的还原剂以及阻聚剂等。另外，由于它有极臭的臭味，其本身也可用于煤气检漏。 1硫醇的合成 1.1以硫化氢为原料 1．1．1叔十二碳硫醇(TDM)的合成[1-4] 十二烯低温低压法，反应方程式如下： 采用十二烯与硫化氢在AlCl 3等Friedel-Crafts 催化剂存在下直接反应制得TDM 。此法十二烯原料多采用四聚丙烯、三异丁烯，来源丰富。 此法工艺成熟，收率高，无副反应，产品质量好，环境卫生能满足要求，目前国外大多采用此法。 1．1．2环氧乙烷与硫化氢反应制备巯基乙醇[5-7] 反应方程式如下： 由环氧乙烷与硫化氢在一定温度、压力进行反应，产物是巯基乙醇，副产物是硫二甘醇混合物。 目前国内外均采用该法生产，2-巯基乙醇生成量，取决于配料比、反应温度及催化剂和溶剂的选择，按反应压力分又分为常压法和加压法两种常压法采用气相反应，而加压法采用液相反应为主，两者各有利弊。加压法具有投资省、原料转化率高、产品选择性和收率高，而且副产品硫代二甘醇量比较少，设备生产率高，工艺流程短，易于操作，但是加压法要求技术难度大，对设备材质要求高，需要有耐硫化氢腐蚀的高级压缩机和硫化氢钢瓶，目前国内在这些问题技术水平和经济承受能力都存在较大问题。常压法工艺比较容易控制，对设备要求不 修回日期：2008-09-16 作者简介：赵晓磊（1982—），男，山东淄博人，在读硕士研究生，主要从事精细化学品的开发。 -18 -