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系统性红斑狼疮患者血清基质金属蛋白酶-9及其组织抑制物的检测及临床意义

系统性红斑狼疮患者血清基质金属蛋白酶-9及其组织抑制物的检测及临床意义
系统性红斑狼疮患者血清基质金属蛋白酶-9及其组织抑制物的检测及临床意义

浙江大学硕士学位论文

系统性红斑狼疮患者血清基质金属蛋白酶一9及其组织抑制物的检测和临床意义

中文摘要浙江大学医学院皮肤病与性病学硕士研究生

导师

殷文浩

郑敏教授

I基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinases,MMPs)是一组在结构上具有极大急源性、能降解细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)蛋白的内肽酶的总称。金属蛋白酶组织抑制物(tissueinhibitorsofmetalloproteinases,TIMPs)是MMPs的内源性特异性抑制因子,TIMPs以1:1的比例与MMPs形成MMP—TIMP复合体,阻断MMPs与底物的结合,也可与酶原结合阻止其活化。MMPs—TIMPs是参与ECM降解和重建的主要蛋白酶系统,它参与了机体多种生理和病理过程,包括胚胎发育、妊娠分娩、组织重建修复、炎症反应以及肿瘤侵袭和转移等。基质金属蛋白酶一9(MMP一9)是萋质金属蛋白酶家族的重要成员,又称明胶酶B(gelatinaseB),是MMPs家族中分子结构最复杂者,主要降解Ⅳ、V、Ⅶ、X、Ⅺ型胶原、明胶、纤维连接蛋白和弹性蛋白、粘结蛋白、层粘连蛋白等,TIMP一1是其主要抑制剂。MMP一9主要由中性粒细胞、单核细胞、成纤维细胞、内皮细胞等分泌,能降解完整的基底膜,在炎症细胞的移行和肿瘤细胞的侵袭中起了重要作用。y

系统性红斑狼疮(systemiclupuserythematosus,SLE)是一种病因未明的自身免疫性结缔组织病,表现为体内产生大量的自身抗体,受累脏器出现免疫复合物沉积及各种白细胞浸润,引起一系列炎症反应,并最终导致多系统多脏器

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损害。炎症细胞浸润、血管炎性损伤、细胞外基质代谢紊乱和异常沉积是狼疮性肾小球病变发生机制的一个重要环节,由此推测,MMP一9和TIMP.1可能在SLE的病理生理过程中发挥作用。为了解MMP.9和TIMP一1在SLE发病机制中的作用,我们检测了46例SLE患者的血清MMP一9和TIMP—l水平,并探讨其临床意义。

材料和方法

一、研究对象

包括SLE患者和正常对照组,SLE诊断符合美国风湿病协会1982年修订的诊断标准。共收集到临床资料较完整的SLE血清标本46例,其中女性42例,男性4例;平均年龄(30.91±13.90)岁(1l~6l岁),平均病程(53.9±71.3)个月(15d至30年),其中11例经正规皮质类固醇激素治疗(剂量相当于泼尼松40--80rag/d)的患者在治疗后3~4周再次留取血清标本。正常对照组30例,取自健康体检者,其中女性27例,男性3例,平均年龄(30.57-1-5.55)岁(21~40岁),两组在性别和年龄构成上差异无显著性。

根据SLE疾病活动指数(SLEDAI)对SLE患者的疾病活动程度进行评分,参照郑敏等标准判断是否为疾病活动期,以尿蛋白>t0.59/24h作为有无肾损害的判断标准。

二、实验方法

血清MMP.9及TIMP—l检测:采用MMP-9试剂盒和TIMP.1试剂盒(均购自美国R&DSystemsInc.),应用ELISA方法,实验操作严格按试剂盒说明书进行。

三、统计方法

所有数据均在SPSSl0.O统计软件包上处理。血清MMP.9和TIMP.1含量为偏态计量资料,用中位数和四分位数(25%、75%)表示,其组间差异比较用Mann—WhitneyU检验,治疗前后比较用Wilcoxon检验,与某些临床和实验指标的相关性采用Spearman相关和线性回归(经对数转换)分析方法,显著性

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检验水平n=O.05。

结果

一、SLE患者组与对照组血清MMP一9、TIMP.1水平的比较

1.SLE患者组血清MMP-9水平明显低于正常对照组,其差别具有非常显著的统计学意义(P<0.001),而TIMP一1水平两组差异无显著性(尸>O.05)。

2.相关分析表明,SLE患者组MMP.9与TIMP.1水平无明显相关关系(r=O.006,P>0.05),正常对照组MMP.9与TIMP.1水平也无明显相关关系(r=一0.052,P>0.05)。

二、血清MMP.9、TIMP一1水平与SLE疾病活动程度的关系

1.SLE活动期患者MMP.9水平明显低于非活动期(尸<0.05),而TIMP一1水平活动组与非活动组比较差异无显著性(JP>0.05)。

2.相关分析显示,SLE患者血清MMP.9水平与SLEDAI评分呈负相关(r=一O.41,P<0.01),血清TIMP一1水平与SLEDAI评分呈正相关(r-o.32,P<O.05)。

三、不同临床特点SLE患者血清MMP.9、TIMP.1水平的比较

肾损害组患者血清MMP.9水平显著低于无肾损害组患者(P<0.01),而关节炎组、蝶形红斑组和光敏组患者与无上述表现的患者组之间血清MMP一9水平差异无显著性(尸>O.05):TIMP-1水平在肾损组与无肾损组、关节炎组与无关节炎组、蝶形红斑组与无蝶形红斑组、光敏组与无光敏组之间比较差异无显著性(P>O.05)。

四、SLE患者血清MMP.9、TIMP—l水平与免疫学指标的关系

1.血清MMP。9水平在抗dsDNA阳性与阴性组、抗Sm阳性与阴性组、抗RNP阳性与阴性组、抗SSA阳性与阴性组、抗SSB阳性与阴性组、IgG增高组与非IgG增高组之间比较差异无显著性(P均>O.05),而在补体C3降低组MMP-9水平低于非补体c3降低组(P<0.05)。

2.血清TIMP一1水平在抗dsDNA阳性与阴性组、抗Sm阳性与阴;生组、

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抗SSA阳性与阴性组、IgG增高组与非IgG增高组之间比较差异无显著性(尸均>O.05),在抗RNP阳性组TIMP。1水平低于抗RNP阴性组(P<O.05),而在抗SSB阳性组和补体C3降低组TIMP一1水平高于抗SSB阴性组和非补体C3降

低组(P<O.05)。

3.相关分析表明,血清MMP-9水平与ANA对数值、IgG水平未见明显相关(,值分别为一O.083、一0.115,P均>O.05),而与补体C3值呈正相关(,=O.32,P<0.05):血清TIMP一1水平与ANA对数值、IgG水平未见明显相关(,值分别为一O.253、O.088.尸均>O,05),而与补体C3值呈弱负相关(,=一O.317.P<0.05)。

五、某些血液学指标与血清MMP一9、TIMP一1水平的关系

1血白细胞计数(WBC)降低组和血清白蛋白(ALB)降低组血清MMP.9水平显著低于无上述表现者(P分别<0.01、<O.05),血沉(ESR)增高组与ESR正常组血清MMP一9水平差异无显著性(P>0.05)。

2.皿清TIMP.1水平在上述各组之间比较差异无显著性(户>O.05)。

3.相关分析表明,血清MMP.9水平与WBC呈正相关(,=O.41,P<0.01),与ESR呈弱负相关(r=一O.30,P<0.05),与ALB未见明显相关(,=0.13,P>0.05),与白蛋白/球蛋白(A/G)比例呈正相关(r=0.34,P<0.05)。血清TIMP.1水平与WBC、ESR、ALB、A/G水平末见明显相关(,值分别为一O.13、0.26,一O.18,一O.14,P均>O.05)。

六、11例患者治疗前后MMP一9、TIMP一1水平的比较

经皮质类固醇激素治疗后SLE患者血清MMP.9水平高于治疗前,其差异

有显著性(e<%Q5),而患者血清TIMP一1水平治疗前后比较差异无显著性。,

(P>o.05)。y

结论

一、血清MMP一9水平在SLE患者组显著低于正常对照组,SLE活动期显著低

于非活动期,肾损害组显著低于无肾损害组,说明MMP一9参与了SLE的

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发病机制。?

二、血清MMP-9水平可作为反映SLE疾病活动性的一个指标。

三、血清MMP一9水平可作为SLE患者肾损害的一个间接指标。

四、血清MMP-9水平可作为糖皮质激素治疗后SLE病情改善的一个信号。

五、TIMP一1在SLE发病机制中的作用尚不明了。

关键词:红斑寂舞,系统性:基质金窟蠢白酶~9:金属蛋白酶猹1巍抑制物一l

塑婆丕堂堡主堂堡笙壅

SerumLevelsofMatrixMetalloproteinase一9(MMP一9)andTissueInhibitorofMetalloproteinase-1(TIMP一1)inPatientswithSystemicLupusErythematosusandTheirClinicalSignificanees

AbstractDepartmentofDermatologyandVenerologyMedicalschoolofZhejiangUniversity

Postgraduate:YIN

Wenhao

Tutor:Prof.ZHENGMin

Matrixmetalloproteinases(MMPs)aremembersofafamilyofZn—dependentendopeptidasesthatareresponsiblefordegradationofvariousproteincomponentsoftheextracellularmatrix(ECM).TheactivityofMMPsiscontrolledbythetissueinhibitorsofmetalloproteinases(TIMPs),whichinhibitactiveMMPsbybindingina1:lmolarratiotoformtightnon—covalentcomplexes.ThebalancebetweenMMPsandTIMPsplayanimportantroleinphysiologicalandpathologicalprocesses,includingembryonicdevelopment,pregnancyandparturition,extraceliularmatrixturnover,tissueremodelingandrepair,infiammatoryreaction,tumorinvasionandmetastasis.OftheMMPsfamily,matrixmetalloproteinase?9(MMP一9)isthelargestandmostcomplexmemberidentifiedSOfar,whichcandegradetypeIV,V’VII,XandXIcollagens,fibronectin,laminin,vitronectinaggrecan,gelatinandelastin.ThespecificinhibitorofMMP-9isthetissueinhibitorofmetalloproteinase一1(TIMP—1).

浙江大学硕士学位论文—————————————^——————————_————_————————————————,_——————————————_———————————————————一一

MMP.9issynthesizedandsecretedbyneutrophils,macrophages,fibroblastsand

animportantroleinmigrationofinflammatorycellsandendotheliocytes.Itplay

invasionoftumorcellsbydegradethebasementmembranes.

Systemiclupuserythematosus(SLE)isasystemicautoimmunediseasecharacterizedbytheincreasedproductionofabroadspectrumofautoantibodies

andimmunecomplexesdepositionsinthekidneysandagainstseveralself-antigens

otherorgansThelatterareassociatedwiththeinfiltrationofleucocyteandproductionofinflammatoryreaction.ThecauseofthediseasehasnotyetbeendefinedyetTheinfiltrationofinflammatorycells,vascularlesionsandabnormalityofECMmetabolismhavebeenshowntObeinvolvedinlupusnephritis.TheinvolvementofMMPsinautoimmunediseaseshasbeendemonstratedinmultiplesclerosis,rheumatoidarthritis,experimentalbullouspemphigoidandexperimentalautoimmuneneuritis.Thus,MMP一9andTIMP?1mayalsoplayaroleinthepathogenesisofSLE.Inthisstudy,serumlevelsofMMP一9andTIMP一1in46patientswithSLEand30healthycontrolsweremeasured,andtheirclinicalsignificanceswerediscussedinthispaper.

Materialsandmethods

1.Clinicaldata

Thirtyhealthycontrolsandforty-sixpatientswithSLEwereevaluatedinthisstudy.AllpatientsfulfilledtheAmericanRheumatismAssociation1982revisedcriteriaforthediagnosisofSLE.Thepatientsincluded42femalesand4maleswhoseagerangedfrom11to61withanaverageof30.91±13.90(SD)years.durationfrom15daystO30years.Elevenserumsampleswerecollectedfrompatientstakingeorticosteroidafterthreeorfourweeks.Thehealthycontrolsincluded27femalesand3maleswhoseagerangedfrom21to40withanaverageof3057±5.55(SD)years.Theageandsexofhealthycontrolsmatchedthatofthepatients.

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DiseaseactivityofpatientswithSLEwasevaluatedusingtheSLEDAIstandard.ActiveSLEwasdefinedaccordingtOtheZhengmin’Scriteria,andrenallupuswasconfirmedbyurineanalysis(proteinuriahigherthan500mg/24h).

2.Laboratorystudies

Theserurnsampleswerestoredat-70"Cuntiluse.SerumlevelsofMMP一9andTIMP一1weremeasuredbyenzyme-linkedimmunosorbentassay(ELISA).ELISAkitsforMMP一9andTIMP-1werepurchasedfromR&DsystemsInc.AssayswereperformedaccordingtOthemanufacturer’Sinstructions.

3Statisticalanalysis

AlldataanalyseswereperformedusingSPSSIO.0software.BecauseserumlevelsofMMP一9andTIMP-1didnotfollowaGaussiandistribution,resultsareexpressedasmedianvalueswiththe25--75centiles(interquartilerange).Betweengroupdifferenceswereanalysedwiththenon-parametricMann—WhitneyUtest.TheWilcoxonranksumtestwasusedtocomparepairedgroups.CorrelationsweredeterminedbySpearman’Srankordercorrelationandlinear

regressionafterlogarithmictransformation.PvaluesoflessthanO.05wereconsideredsignificant.

Results

1.SerumlevelsofMMP一9andTIMP-1inpatientswithSLEandhealthycontrols1)SerumlevelsofMMP?9butnotTIMP一1,weresignificantlydecreasedinpatientswithSLEascomparedwithcontrols(P<0.001).

2)NocorrelationwasfoundbetweenserumlevelsofMMP一9andTIMP.1inpatientsorcontrols(r20.006,P>O.05,F-O.052,P>0.05,respectively).

2.InfluenceofdiseaseactivityonserumlevelsofMMP一9andTIMP一11)SerumlevelsofMMP一9inpatientswithactiveSLEweresignificantlylowerthanthoseoftheinactive(P<0.05),butserumlevelsofTIMP—lshowedno

significantdifferencesbetweenactiveandinactivepatients(P>0.05).

—————'————————————————一———————————————————————————————————_—————————————_—————●———————_————●————一2)AsignificantlynegativecorrelationbetweenMMP一9levelsandSLEDAIscoreswasfoundinpatientswithSLE(Y=-0.41,P<0.01),butTIMP-1levels

showedpositivecorrelationwithSLEDAIscores(r=0.32,P<0.05).

andserumlevelsofMMP-9and3.Relationshipsbetweenclinicalmanifestations

TIMP.1.

SerumlevelsofMMP一9butnotTIMP—1weresignificantlylowerinpatientswithrenalinvolvementthanthosewithoutrenalinvolvement(P<O.011.However,MMP一9andTIMP—llevelsdidnotdiffersignificantlybetweengroupsofpatientswithorwithoutthefollowingclinicalfindings:arthritis,malarerythema,photosensitivity(P>0.05)

4RelationshipsbetweenserumlevelsofMMP一9andTIMP一1andimmunologicparametersinpatientswithSLE.

1)SerumlevelsofMMP-9inSLEpatientswithdecreasedC3levelsweresignificantlylowerthanthosewithoutdecreasedC3levels(P<0.05).

However,itdidnotshowsignificantdifferencesbetweengroupsofpatients

withorwithoutthefollowingimmunologicparameters:anti—dsDNA

antibody,anti—Smantibody,anti—RNPantibody,anti—SSAantibody,anti—SSB

antibodyandincreasedIgGlevelsfP>0.05).

2)SerumlevelsofTIMP-1inSLEpatientswithpositiveanti—RNPantibodyweresignificantlylowerthanthosewithnegativeanti—RNPantibody

f.P<O.05).SerumlevelsofTIMP-1inSLEpatientswithpositiveanti—SSB

antibodyanddecreasedC3levelsweresignificantlyhigherthanthose

withoutanti—SSBantibodyanddecreasedC3levels(P<0.05).However,it

didnotshowsignificantdifferencesbetweengroupsofpatientswithor

withoutthefollowingimmunologicparameters:anti—dsDNAantibody,

anti—Smantibody,anti—SSAantibodyandincreasedIgGlevels(F>O.05).3)SerumlevelsofMMP-9andTIMP-1didnotshowsignificantcorrelationswithlogarithmofANAtiterandserumIgGlevels(P>0.05).Asignificantly

MMP一9levelsandC3levelsandanegativepositivecorrelationbetween

correlationbetweenTIMP一1levelsandC3levelswerefoundinpatientswith

SLE(r=0.32,P<0.05,F一0.317,P<0,05,respectively).

andsomeblood5.RelationshipsbetweenseruinlevelsofMMP-9andTIMP一1

routineparametersinSLEpatients

1)SerumlevelsofMMP-9inpatientswithleucocytopeniaandhypoalbuminemiaweresignificantlylowerthanthosewithnormalwhite

bloodcellcountandserunlalbuminlevels(P<0.叭,P<0.05,respectively).

However,nosignificantdifferencewasfoundinMMP一9levelsbetween

patientswithincreasederythrocytesedimentationrate(ESR)andthosewith

normalESRfP>0.05).

2)NosignificantdifferencewasfoundinserumlevelsofTIMP一1betweengroupsofpatientswithoutorwiththefollowingabnormalities:

leucocytopenia,hypoalbuminemiaorincreasedESRfp0.05).3)SerumMMP一9levelsshowedpositivecorrelationswithwhitebloodcellcountandtheratioofserllmalbumintoglobulin(r=0.41,P<0.叭,,=O.34,

P<0.05,respectively),andnegativecorrelationwithESR(严一0.30,P<0.05),

butnosignificantcorrelationwithserumalbuminlevels(r=0.13,P>0.05).

NosignificantcorrelationwasfoundbetweenTIMP一1andwhitebloodcell

count,ESR,serulnalbuminlevelsandtheratioofserumalbumintoglobulin

fP>O.05).

6.Influenceoftherapy(steroid)onMMP一9andTIMP一1

Aftertreatmentwithsteroid,serulnMMP一9levelsweremarkedlyincreased

inI1patientswithSLE(P<0.05),butTIMP一1levelsshowednodifferencesfP>0.05).

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Conclusions

1.SerumlevelsofMMP一9weresignificantlydecreasedinpatientswithSLEascomparedwithcontrols.InpatientswithactiveSLEandrenallupus,serumMMP一9levelsweremarkedlydecreasedthanthoseofinactiveSLEandwithoutrenallupus.TheseresultssuggestthatMMP-9mayplayaroleinthepathogenesisofSLE.

2.SerumMMP一9levelcouldbeusedasensitiveindicatorforthediseaseactivityofSLE.

3.SerumMMP-9levelmightbeusedanindirectindicatorforlupus

nephritis.

4.SerumMMP一9levelmightbeamarkerofdiseaseameliorationinSLE

patienttakingsteroid.

5.TheroleofTIMP一1inthepathogenesisofSLEwasnotclear.

Keywords:Lupuserythematosus,systemic;Matrixmetalloproteinase一9Tissueinhibitorofmetalloproteinase一1

系统性红斑狼疮患者血清基质金属蛋白酶一9及其组织抑制物的检测和临床意义

浙江大学医学院

硕士研究生

导师皮肤病与性病学殷文浩

郑敏教授

前言

基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinases,MMPs)是一组在结构上具有极大同源性、能降解细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)蛋白的内肽酶的总称,因其含金属离子锌而得名。金属蛋白酶组织抑制物(tissueinhibitorsofmetalloproteinases,TIMPs)是MMPs的内源性特异性抑制因子,TIMPs以l:1的比例与MMPs形成MMP.TIMP复合体,阻断MMPs与底物的结合,也可与酶原结合阻止其活化。MMPs.TIMPs是参与ECM降解和重建的主要蛋白酶系统,其协调控制除了使ECM保持不断产生和降解的动态平衡,还对细胞、血管、组织具有复杂的调节作用,它参与机体多种生理和病理过程,包括人体发育、妊娠分娩、组织重建修复、免疫应答、炎症反应以及肿瘤的侵袭和转移等““…。基质金属蛋白酶一9(matrixmetalloproteinase.9,MMP一9)是基质金属蛋白酶家族的重要成员,主要降解Ⅳ、V、Ⅶ、X、XI型胶原、明胶、纤维连接蛋白等,TIMP-l(tissueinhibitorofmetalloproteinase—1)是其主要抑制剂。MMP.9主要由中性粒细胞、单核细胞、成纤维细胞、内皮细胞等分泌,能降解完整的基底膜,在炎症细胞的移行、肿瘤细胞的侵袭和组织破坏中起了重要作用“’…。

系统性红斑狼疮(systemiclupuserythematosus,SLE)是一种病因未明的自身免疫性结缔组织病,表现为体内产生大量的自身抗体,受累脏器出现免疫复

合物沉积及各种白细胞浸润,引起一系列炎症反应,并最终导致多系统多脏器损害。炎症细胞浸润、血管炎性损伤、细胞外基质代谢紊乱和异常沉积是狼疮性’肾小球病变发生机制的一个重要环节,由此推测,MMP.9和TIMP一1可能在SLE的病理生理过程中发挥作用。为了解MMP.9和TIMP.1在SLE发病机制中的作用,我们检测了46例SLE患者的血清MMP.9和TIMP—l水平,并探讨其临床意义。

材料和方法

一、研究对象

SLE患者均为2001年6月至2002年10月我院住院患者,诊断符合美国风湿病协会1982年修订的SLE诊断标准。共收集到临床资料较完整的SLE血清标本46例,其中女性42例,男性4例;平均年龄(30.91±13.90)岁(11~61岁),平均病程(53.9--71.3)个月(15d至30年);活动期29例,非活动期17例;有肾损害者20例,无肾损害者26例;其中11例经正规皮质类固醇激素治疗(剂量相当于泼尼松40~80mg/d)的患者在治疗后3~4周再次留取血清标本。正常对照组30例,取自健康体检者,其中女性27例,男性3例,平均年龄L30.57±5.55)岁(21~40岁),两组在性别和年龄构成上差异无显著性。

根据SLE疾病活动指数(SLEDAI)[6】对SLE患者的疾病活动程度进行评分,参照郑敏等‘71标准判断是否为疾病活动期,以尿蛋白i>0.59/24h作为有无肾损害的判断标准。

三、实验方法

㈠标本采集:抽取SLE患者及正常人对照组静脉血约2ml,普通离心机(2000rpm)离心5分钟分离血清,置一70℃冰箱冻存备测。

㈢主要仪器:酶标仪(ImmunoMiniNJ.2300),普通离心机、水平振荡器、点样枪(10~1000u1),移液管、量筒、烧杯,试管等常规实验仪器。

㈢血清MMP一9及TIMP—l检测:采用MMP一9试剂盒(购自美国R&DSystemsInc.,CatalogNo:DMP900)和TIMP-1试剂盒(购自美国R&DSystems

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No:DTMl00)进行检测,应用ELISA方法,实验操作严格按试Inc.,Catalog

剂盒说明书进行。

1.MMP.9检测操作步骤

(1)取出血清标本,室温下冻融,取出试剂并置于室温(本实验室温度为21℃)。

(2)标本准备:血清用稀释液(calibratordiluentRD5一lO)稀释100倍。

(3)准备洗涤缓冲液:washbufferconcentrate20ml+蒸馏水480ml,混匀。

(4)制备标准品:totalMMP一9standard20ng+lml蒸馏水,轻摇15分钟以充分溶解,原液浓度20ng/ml,进一步以calibratordiluentRD5-10为

稀释液作倍比稀释,浓度依次为20ng/ml,10ng/ml,5ng/ml,2.5ng/ml,

1.25ng/ml,O.625ng/ml,O.312ng/ml,以calibratordiluentRD5一l0液

作为零标准。

(5)给96孔板(已包被抗MMP-9单克隆抗体)每孔加100ulassaydiluent

RDl.34液。

(6)每孔加标准品或血清标本100ui,胶带覆盖,室温,水平振荡器振荡2h。

(7)吸去每孔液体,用洗涤缓冲液400111冲洗、倾倒、再冲洗、共4次,

用吸液纸吸干。

(8)每孔加200ulMMP一9结合液(MMP一9conjugate,结合有辣根过氧化物

酶的MMP一9多克隆抗体),胶带覆盖,室温,水平振荡器振荡1h。

(9)重复步骤(7)。

00)制备底物溶液(substratesolutionl:colorreagentA12.5ml+colorreagentB12.5ml,混匀,避光,15分钟内使用。

OD每孔加200ul底物溶液,室温,30分钟,避光。

∞每孔加50ul终止液(stopsolution),轻轻摇动,保证颜色均衡。

(13)96孔板插入酶标仪(波长450rim),测出OD值。

2.TIMP.1检测操作步骤

(1)取出试剂并置于室温(本实验室温度为21℃),制备稀释液(calibrator

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diluentRD5P1×):calibratordiluentRDSP20ml+蒸馏水80ml,混匀。

(2)标本准备:已冻融的血清用稀释液(calibratordiluentRD5P1×)稀释100倍。

(3)准备洗涤缓冲液:washbufferconcentrate20ml+蒸馏水480ml,混匀。(4)制备标准品:TIMP一1standard20ng+2ml蒸馏水,轻摇15分钟以充分溶解,原液浓度10ng/ml,进一步以calibratordiluentRD5P1×为稀释液作倍比稀释,浓度依次为10ng/ml,5ng/ml,2.5ng/ml,1.25ng/ml,O.625ng/ml,O.312ng/ml,O.156ng/ml,以calibratordiluentRD5P1X液作为零标准。

(5)给96孔板(已包被抗TIMP-l单克隆抗体)每孔加100ulassaydiluentRDlx液。

(6)每孔加标准品或血清标本50ul,胶带覆盖,室温,水平振荡器振荡2h。(7)吸去每孔液体,用洗涤缓冲液400ul冲洗、倾倒、再冲洗、共3次,用吸液纸吸干。

(8)每孔加200ulTIMP一1结合液(TIMP—lconjugate,结合有辣根过氧化物酶的TIMP.1多克隆抗体),胶繁覆盖,室温,水平振荡器振荡1h。

(9)重复步骤(7)。

⑩制备底物溶液(substratesolution):colorreagentA12.5ml+colorreagentB12.5ml,混匀,避光,15分钟内使用。

0D每iL加200ul底物溶液,室温,30分钟,避光。

∞每孔加50ul终止液(stopsolution),轻轻摇动,保证颜色均衡。

03)96孔板插入酶标仪(波长450nm),测出OD值。

3.根据标准品浓度及对应的OD值绘制标准曲线(以标准品浓度对数值为横坐标,OD值为纵坐标),然后根据标准曲线(见图1、图2)求出MMP.9和TIMP.1值,再乘以100(稀释倍数)即为待测血清标本MMP.9和TIMP—l的实际含量。

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图1MMP一9标准曲线

MMP,9对数值

(直线回归参数:bO=O0353,bl=O.0852,P<O.001)图2-I-IMP.1标准曲线

q'IMP.1对数值

(直线回归参数:bO=O.0402,bl=O.0626,P<O.001)

㈣其它项目检测:ANA、抗dsDNA抗体、抗Sm抗体、抗RNP抗体、抗SSA抗体、抗SSB抗体、补体C3、免疫球蛋白(Ig)、血常规、尿常规、24h尿蛋白定量、血沉(ESR)、肝功能、肾功能、血脂等实验指标按本院常规方法测定,结果均由本院化验室提供。

三、统计方法

所有数据均在SPSSl0.0统计软件包上处理。血清MMP.9和TIMP.1含量为偏态计量资料,用中位数和四分位数(25%、75%)表示,其组间差异比较用Mann.WhitneyU检验,治疗前后比较用Wilcoxon检验,与某些临床和实验指标的相关性采用Spearman相关和线性回归(数据经对数转换)分析方法,显著性检验水平12,=O.05。

结果

一、SLE患者组与对照组血清MMP一9、TIMP.1水平的比较

我们检测了SLE患者组和正常对照组血清MMP一9水平,结果发现SLE患者组血清MMP一9水平明显低于正常对照组,其差别具有非常显著的统计学意义(P<0.001),而TIMP一1水平两组差异无显著性(P>O.05)(见表1)。相关分析表明,SLE患者组MMP.9与TIMP.1水平无明显相关关系(,=O.006,P>0.05),在正常对照组MMP.9与TIMP一1水平也无明显相关关系(r=一O.052,P>0.05)(直线回归见图3、4)。

表1SLE患者组与对照组血清MMP一9、TIMP.1水平的比较

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图3SLE患者MMP.9与TIMP一1的相关性

MMP.9对数值

(直线回归参数:b0=1.309,bl=0.0886,P>0.05)图4正常对照组MMP.9与TIMP一1的相关性

MMP.9对数值

(直线回归参数:b0=1.0086,bl=0.1990,P>0.05)

浙江大学硕士学位论文

二、血清MMP.9、TIMP.I水平与SLE疾病活动程度的关系

为了了解不同疾病程度的SLE患者血清MMP.9和TIMP.1水平的差异,我们根据郑敏等【71标准,把SLE患者分为活动组和非活动组,同时根据SLEDAI评分标准对每个患者的疾病活动程度进行评分。结果表明SLE活动期患者MMP一9水平明显低于非活动期(P<O.05),而TIMP—l水平活动组与非活动组比较差异无显著性(P>O.05)(见表2)。相关分析显示,SLE患者血清MMP一9水平与SLEDAI评分里负相关(,=一0.41,P<0.01):血清TIMP-1水平与SLEDAI评分呈正相关(r=O.32,P<0.05)(直线回归见图5、6)。

表2SLE活动组与非活动组血清MMP.9与TIMP.1水平的比较

三、SLE患者不同临床特点血清MMP一9、TIMP.1水平的比较

为了解不同临床表现与血清MMP.9、TIMP.1水平的关系,我们把SLE患者分为肾损组与非肾损组、关节炎组与无关节炎组、蝶形红斑组与无蝶形红斑组,光敏组与无光敏组。结果显示肾损害组患者血清MMP一9水平显著低于无肾损害组患者(P<0。01),两关节炎组、蝶形红斑组和有光敏组患者与无上述表现的患者组之间血清MMP,9水平差异无显著性(P>0.05);TIMP.1水平在肾损组与无肾损组、关节炎组与无关节炎组、蝶形红斑组与无蝶形红斑组、光敏组与无光敏组之间比较差异无显著性(P>O.05)(见表3)。相关分析表明,血清MMP一9水平与患者年龄和病程未见明显相关(r值分别为一0.039、0.156,P均>0.05),血清TIMP.1水平与患者年龄和病程未见明显相关(,值分别为O.018,一0.133,P均>0.05)。

浙江大学硕士学位论文

Cnmo≥亳冷

c,)mo≥瑙津

图5MMP.9与SLEDAI评分的相关性

MMP。9对数值

(直线回归参数;b0=19,1966,bl=一4.5287,P<0.05)图6TIMP.1与SLEDAI评分的相关性

TIMP—l对数值

(直线回归参数:b0=7.7330,bl=2.0849,P>0.05)

常见蛋白酶抑制剂

当前位置:生物帮 > 实验技巧 > 生物化学技术 > 正文 蛋白酶及蛋白酶抑制剂大全 日期:2012-06-13 来源:互联网 标签: 相关专题:解析蛋白酶活性测定聚焦蛋白酶研究新进展 摘要 : 破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶,这些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白质不被降解。在蛋白质提取过程中,需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。以下列举了5种常用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点,因为各种蛋白酶对不同蛋白质的敏感性各不相同,因此需要调整各种蛋白酶的浓度 恩必美生物新一轮2-5折生物试剂大促销! Ibidi细胞灌流培养系统-模拟血管血液流动状态下的细胞培养系统 广州赛诚生物基因表达调控专题 蛋白酶抑制剂 破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶,这些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白质不被降解。在蛋白质提取过程中,需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。以下列举了5种常用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点,因为各种蛋白酶对不同蛋白质的敏感性各不相同,因此需要调整各种蛋白酶的浓度。由于蛋白酶抑制剂在液体中的溶解度极低,尤其应注意在缓冲液中加人蛋白酶抑制剂时应充分混匀以减少蛋白酶抑制剂的沉淀。在宝灵曼公司的目录上可查到更完整的蛋白酶和蛋白酶抑制剂表。 常用抑制剂 PMSF 1)抑制丝氨酸蛋白酶(如胰凝乳蛋白酶,胰蛋白酶,凝血酶)和巯基蛋白酶(如木瓜蛋白酶); 2)10mg/ml溶于异丙醇中; 3)在室温下可保存一年; 4)工作浓度:17~174ug/ml(0.1~1.0mmol/L); 5)在水液体溶液中不稳定,必须在每一分离和纯化步骤中加入新鲜的PMSF。 EDTA 1)抑制金属蛋白水解酶; 2)0.5mol/L水溶液,pH8~9;

基质金属蛋白酶及其抑制物与子宫内膜异位症的研究进展

基质金属蛋白酶及其抑制物与子宫内膜异位症的研究进展 子宫内膜异位症是妇科的常见疾病,其发病机制至今未明。近年来研究发现,基质金属蛋白酶(MMPs)及其抑制物(TIMPs)在该病的发生及发展中起了重要作用,现就MMPs及其抑制物TIMPs在子宫内膜异位症中的研究进展做一综述。 [Abstract] Endometriosis,a disease in which endometrial tissue grows outside of the uterus usually within the pelvic cavity,is one of the most persistent and enigmatic disorders affecting reproductive health. Recent studies suggest that the altered expression of MMP and TIMP may play an important role in pathogenesis of endometriosis. This summary will present general knowledge of the MMP system relative to the pathophysiology of the endometriosis as well as address its potential value to the treatment of the disease. [Key words]Endometriosis;Matrix metalloproteinase;Tissue inhibitors of metalloproteinase;TNF-α 子宫内膜异位症(Endometriosis,EMs)是指具有活性的子宫内膜组织(腺体和间质)出现在子宫内膜以外的部位,以子宫内膜细胞异位生长为特征,是育龄期妇女的常见病,且其发病率呈逐年上升的趋势。子宫内膜异位症虽为良性病变,但其生物学行为却具有类似恶性肿瘤的种植、侵蚀及远处转移能力。EMs 的病因至今未阐明,近年来研究发现,异位的子宫内膜必须通过黏附、侵袭和血管生成才能生长并引起病变。基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMPs)作为细胞外基质降解的重要酶类,在子宫内膜异位症的发生及发展中发挥重要作用。 1基质金属蛋白酶(MMPs)与金属蛋白酶组织抑制物(TIMPs) 基质金属蛋白酶系统包含了酶组份即MMPs以及其组织抑制物即TIMPs两部分。基质金属蛋白酶是一组钙及锌依赖的中型蛋白酶家族,它能降解细胞外基质中的所有成分,包括胶原蛋白、明胶、纤维连接蛋白以及层粘连蛋白。这种降解见于体内许多生理过程,如创伤愈合、血管生成以及生殖过程的各方面。迄今为止,已发现20余种基质金属蛋白酶(表1)。除模型金属蛋白酶直接以酶活性形式分泌至细胞外,其他MMPs均以水溶性酶原形式分泌,在激活剂(如胰蛋白酶、纤溶酶等蛋白酶,十二烷基硫酸鈉,有机汞等)作用下脱去前肽才有酶活性。基质金属蛋白酶的主要特点如下:(1)蛋白酶以酶原形式合成;(2)细胞外酶原的激活;(3)激活过程中伴随10kμ分子量的丢失;(4)所有的DNA片段均显示与胶原酶同源;(5)每种酶能裂解一种或多种细胞外基质;(6)其活性可被TIMPs抑制。 基质金属蛋白酶组织抑制物(TIMPs)是MMPs体内天然的抑制物。目前发现四种:TIMP-1、-2、-3、-4。TIMP-1、-2、-4是可溶性分泌蛋白,TIMP-3是

组织金属蛋白酶及其抑制因子与肝纤维化

组织金属蛋白酶及其抑制因子与肝纤维 化 (作者:__________ 单位:___________ 邮编:___________ ) 【摘要】基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase ,MMP) 是体内重要的水解酶之一,几乎能降解细胞外基质(extracellular matrix ,ECM的所有成分;基质金属蛋白酶组织抑制因子(tissue in hibitor of metalloprote in asas ,TIMPs )是MMP 啲内源性抑制 系统。近年来发现,MMPs/TIMPs调节失衡与肝纤维化的关系密切,可从多方面影响肝纤维化的形成。通过干扰MMP与TIMPs基因的表达,研究肝纤维化的发病机制和药物治疗是有希望的途径。 【关键词】MMPs ;TIMPs;肝纤维化 肝纤维化是许多慢性肝病的共同病理过程,是细胞外基质(ECM)的合 成与降解失衡,导致在细胞间质的过度沉积[1-4 ],肝组织结构改建。 许多细胞因子参与了这一过程,但是MMP是最重要的一种[5]。MMPs 几乎能降解细胞外基质(ECM)的所有成分,而其天然抑制剂-基质金属蛋白酶抑制剂(TIMPs)能与MMPs成员结合成复合物抑制其活性⑹。二者的调节异常将引起ECM合成或降解的失衡,与各种器官纤维化疾病密切相关。研究发现,通过调节MMP与TIMPs基因的表达

来治疗肝纤维化是肝纤维化治疗的新途径。本文就MMPs/TIMPs与肝纤维化的关系及治疗前景作一综述。 1 MMPs分类、功能、结构及活性的调控 MMPs是一组基质金属蛋白酶。M MPs在肝内主要由肝星状细胞(HSC)和Kupffer细胞表达分泌,参与细胞外基质降解的一类锌-钙离子依赖的内源性蛋白水解酶家族,因其需要Ca2+ Zn 2+等金属离 子作为辅助因子而得名,是迄今为止发现的唯一能分解纤维类胶原的酶,几乎能降解除多糖以外的所有ECM成分,在生理病理过程中发挥着重要的作用。MMP家族由24种成员组成,其中有23种存在于人体中。 1. 1 MMPs可被分成六类[7](1)胶原酶类。主要包括MMP-1 MMP-8 MMP-13和MMP-18它们能够降解间质胶原(I、H、皿型胶原),也能消化许多别的ECM及可溶性蛋白[5]。 MMP-1又称成纤维细胞型,是人类主要的间质胶原酶,结缔组织细胞、肝内HSC肝细胞、枯否氏细胞均有分泌,分解底物为胶原蛋白(皿I II)。而MMP-13 是鼠类主要的间质胶原酶。MMP-取称中性粒细胞胶原酶,主要降解I型胶原。(2)明胶酶类(gelatinases)。包括MMP-2阴胶酶A)及MMP-9明胶酶B)。它们可降解明胶(变性胶原)和W、V和幻型胶原、层粘连蛋白、蛋白聚糖等。MMP-2和胶原酶类以相似的方式可以降解I, I,和皿型胶原,但其活性较MMP-1弱[8]。(3)基质分解素(strogylisin)。主要包括MMP-3 MMP-1(和MMP-11 仅有MMP-3在肝脏中存在。底物广泛,包括蛋白多糖、层粘蛋白、纤维连接蛋白、

胃蛋白酶原二项检测的临床意义

胃蛋白酶原二项检测的临床意义 临床检验科 胃蛋白酶原(PG)是由胃粘膜分泌的胃蛋白酶的无活性前体,属于门冬氨酸蛋白酶家族,人胃粘膜有7组胃蛋白酶原同工酶原,按其生化性质和免疫原性不同,可分为两个亚群,即胃蛋白酶原I(PGI,1~5组)和胃蛋白酶原II(PGII,6~7组)。 PGI主要由胃底腺细胞分泌;PGII除由胃底腺细胞分泌外,贲门腺细胞、幽门腺细胞、十二指肠上段的Brunner腺也可分泌PGII。胃几乎是PG的唯一来源,且没有日内变化和季节变化,不受饮食影响,个体有较稳定的值。血清PGI和PGII反映了胃粘膜不同部位的分泌功能,胃液和血液PG水平与活组织病理变化结果常一致。 PG主要用于胃粘膜萎缩和胃癌高风险性筛查,以PGI结果及PGI/ PGII比值降低作为阳性度界限判断标准;通常情况下,PGI结果及PGI/ PGII比值升高为胃粘膜受攻击时的反应。 一、参考区间 PGI: 70~200ng/mL PGII: <25 ng/mL PGI/ PGII: >3 二、PG阳性度是预警早期胃癌的重要指标 胃粘膜萎缩同胃早期癌变高度正相关。正常体检人群有15%PG阳性。 表1 血清PG结果及判断

三、PG结果解释及建议 1. 大批体检时,近70% PGI结果在40~70ng/mL范围内,而90%以上PGI/ PGII>3。这是因为国人绝大多数有慢性浅表性胃炎,属正常生理性胃酸分泌不足。 2. PG阳性仅代表胃癌风险,不一定是胃癌。PG适用于体检,代替X光及B 超筛查早期胃癌,意义不在诊断,而在于早发现早预防。正常体检人群有15% PG 阳性,当年无胃癌者,经追踪五年后胃癌发病率仅2%左右。 3. PG检测结果应综合分析,PGI/ PGII比值很重要。因胃粘膜分泌PGI受炎症攻击时,分泌变动幅度很大(70~800ng/mL),PGII分泌相对恒定。当 PGI<70ng/mL时,PGI/ PGII >3,根据PGI增高程度确定胃病种类,必须结合临床分析;PGI/ PGII<3时,建议胃镜检查或病理确证(见表2)。

胃蛋白酶原检测(PG技术检测)知识讲解

胃蛋白酶原检测(P G 技术检测)

胃蛋白酶原检测——PG技术新项目 一、胃蛋白酶原含义 胃蛋白酶原是胃黏膜特异性功能酶——胃蛋白酶的前体,分为PGⅠ和PGⅡ两种亚群,血清PG水平可以反映不同部位胃黏膜的形态和功能,联合测定PGⅠ、PGⅠ/PGⅡ的比值可以起到胃黏膜“血清学活检”的作用 二、PG检测特征 1、检出率高最高检出率能达到90% 2、操作简便检测方法简单,一台仪器就可以进行检测 3、无痛苦易耐受只需要2毫升血液就可以进行检测 4、检测费用低低廉的花费就可以判断胃部疾病的进展情况三、PG检测意义 1、胃癌普查的初筛 2、萎缩性胃炎、胃溃疡、HP感染的筛查 3、幽门螺旋杆菌(HP)治疗效果的评价 4、消化性溃疡复发、治愈的判定指标 5、胃癌切除术后复发判定指标 6、个人胃黏膜功能的动态检测 四、PG检测的结果判读和建议 1、PG的正常值 PGⅠ:67-200ug/L;PGⅡ:0-15ug/L;PGR:大于7.5

2、超出正常值的说明 正常值范围超出正常值范围的说明 PGⅠ 67-200ug/L <67ug/L:胃体、胃底黏膜萎缩或受损、可能与浅表性胃炎、萎缩性胃炎等疾病有关 >200ug/L:可能与饮食、药物的刺激或幽门螺旋杆菌感染以及胃溃疡、十二指肠溃疡有关PGⅡ0-15ug/L >15ug/L:可能与幽门螺旋杆菌感染、胃溃疡、十二指肠溃疡以及胃窦部的疾病有关PGR (PGⅠ/PGⅡ) >7.5 <7.5:可能与浅表性胃炎、萎缩性胃炎、幽门螺旋杆菌感染、胃溃疡、十二指肠溃疡以及胃窦部的疾病有关 3、建议 4、1)PGⅠ<67ug/L且PGR<7.5,建议到医院咨询或就医(2)PG Ⅰ<67ug/L或PGR<7.5,建议排除药物和饮食的影响后,3-6 个月内复查,复查结果异常,建议到医院就医。(3)PGⅡ>15ug/L且PGR<7.5,建议进行幽门螺旋杆菌的检测、(4)PGⅡ<30ug/L且PGR<3.0,建议到正规医院进行胃镜和病理检查(5)PG三项检测结果正常,建议每年至少检测一次,以便个人动态检测胃部健康状况。五、PG检测与其它几种检测方法比较

金属基质蛋白酶9与疾病的研究进展

金属基质蛋白酶9与疾病的研究进展 摘要:金属基质蛋白酶(MMPs)是一组可以选择性降解细胞外基质(ECM)的内肽酶,金属基质蛋白酶9(MMP-9)又名明胶酶B,它是MMPs家族中一个重要成员,能水解弹性蛋白、胶原蛋白、明胶、纤维蛋白等多种细胞外基质成分,在生理情况下参与人体的正常发育,是ECM降解的生理性调节因子。所有MMPs都受金属基质蛋白酶抑制剂所抑制,两者的不平衡导致许多疾病的发生。金属基质蛋白酶抑制剂1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)为MMP-9特异性抑制剂,目前认为MMP-9与TIMP-1是调节ECM降解、合成的主要酶类,MMP-9/TIMP-1比值失衡是多种疾病发生、发展的重要机制之一。近年研究发现MMP-9还与全身多系统疾病的发生、发展有关,现就MMP-9与多种疾病的相关研究进展进行综述。 关键词:金属基质蛋白酶9;疾病;研究进展金属基质蛋白酶(matrix metalloteinases,MMPs)是一组锌离子依赖的肽链内肽酶,因含金属离子(锌、钙)而得名,现至少已发现26种MMPs,称为MMPs家族,是构成细胞外基质降解最重要的蛋白水解系统。其抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinases,TIMPs)是调节MMPs的重要因素。MMPs

与TIMPs在维持ECM的动态平衡中起重要作用。细胞外基质(extracellullar matrix,ECM)是一类由胶原、蛋白聚糖及糖蛋白等大分子物质组成的动态网状结构,ECM不仅起细胞与细胞之间机械支持和连接作用,也是细胞与细胞之间信号传递的桥梁,现已识别丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、基质金属蛋白酶均能降解ECM[1]。金属基质蛋白酶9(matrix metalloteinases-9,MMP-9)是MMPs家族分子量最大的明胶酶。TIMP-1是MMP-9的重要的生理性抑制剂,二者在维持ECM的动态平衡中起重要作用。MMP-9/TIMP-1比值失衡是多种疾病发生、发展的重要机制之一。近年许多研究发现MMP-9与多种疾病的发生发展密切相关。 1 MMP-9概述 MMP-9是1974年从人中性粒细胞中首次提纯得到,于1989年的金属蛋白酶学会上被正式命名。MMP-9的分子量为92KD,MMP-9基因长7.7kb,含13个外显子,其长度不一,位于染色体的20q11.2-13.1[2]。MMP-9起源于角质形成细胞、单核细胞、中性粒细胞、巨噬细胞和成纤维细胞。在生理PH值时,在金属锌离子的作用下,能够切断任何ECM 成分,调节细胞黏附、作用于细胞外成分或其他蛋白成分而启动潜在生物学功能,直接或间接参与胚胎发育、组织模型重建和场上恢复等正常生理功能。MMP-9其作用底物包括明

基质金属蛋白酶

基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs) 基质金属蛋白酶是一个大家族,因其需要Ca++、Zn++等金属离子作为辅助因子而得名,其家族成员具有相似的结构,一般由5个功能不同的结构域组成:(1)疏水信号肽序列;(2)前肽区,主要作用是保持酶原的稳定。当该区域被外源性酶切断后,MMPs酶原被激活;(3)催化活性区,有锌离子结合位点,对酶催化作用的发挥至关重要;(4)富含脯氨酸的铰链区;(5)羧基末端区,与酶的底物特异性有关。其中酶催化活性区和前肽区具有高度保守性。MMPs成员上述结构的基础上各有特点。各种MMP间具有一定的底物特异性,但不是绝对的。同一种MMP可降解多种细胞外基质成份,而某一种细胞外基质成分又可被多种MMP 降解,但不同酶的降解效率可不同。 MMPs几乎能降解ECM中的各种蛋白成分,破坏肿瘤细胞侵袭的组织学屏障,在肿瘤侵袭转移中起关键性作用,从而在肿瘤浸润转移中的作用日益受到重视,被认为是该过程中主要的蛋白水解酶。目前MMPs家族已分离鉴别出26个成员,编号分别为MMP1~26。根据作用底物以及片断同源性,将MMPs分为4类。 Ⅳ型胶原酶为其中重要的一类,它主要有两种形式,一种被糖化,分子量为92kD,命名为MMP-9;另一种非糖化,分子量为72kD,被称为MMP-2。当前对MMP-2,MMP-9的研究较深入。 MMP-2基因位于人类染色体16q21,由13个外显子和12个内含子所组成,结构基因总长度为27kb,与其他金属蛋白酶不同,MMP-2基因5’旁侧序列促进子区域含有2个GC盒而不是TATA盒。活化的MMP-2定位于细胞穿透基质的突出部位,估计其在酶解细胞间基质成分及基底膜的主要成分Ⅳ型胶原中有“钻头”的作用。 此外,已证实MMP-3 和MMP-10能作用于PG、LN、FN、Ⅲ型和Ⅳ型胶原及明胶。MMP-7能作用于明胶和FN。MMP-1的产生范围较广,可由基质纤维母

胃蛋白酶原III在普查中的意义

胃蛋白酶原I,II在早期胃癌普查中的意义胃蛋白酶原I,II在早期胃癌普查中的意义? ? ? 陈智周范振符? 中国协和医科大学? 肿瘤学院? 中国医学科学院? 肿瘤研究所? 北京 ?

幽门螺杆菌(Helicobacter Pylori,HP)感染和萎缩性胃炎是与胃癌密切相关的两种病变,HP感染是萎缩性胃炎的主要病因之一,而萎缩性胃炎已被普遍认为是胃癌的癌前病变.在由HP感染---萎缩性胃炎---胃癌的发展连锁中,均伴随着胃蛋白酶原(PG)的变化,而且后者已成为前面三种病变的良好诊断指标,以及治疗和预防干预过程中的监测指标。利用血清胃蛋白酶原的测定进行胃癌早期诊断的普查以及胃癌的预防干预计划已在日本,芬兰,挪威等国家实行,日本在“老年保健法”的指导下开展了“日本胃癌检测计划”,利用PGI,II,在大面积的人群普查中使胃癌的早诊率提高到了90%。我国也是胃癌高发的国家之一,胃癌的大面积普查应当摆在重要的地位。鉴于HP感染,萎缩性胃炎,胃癌三者的密切关系,我们要进行胃癌的普查,首先必须了解胃蛋白酶原在HP感染和萎缩性胃炎时的变化规律. 人的胃粘膜主要含有两种门冬氨酸蛋白酶,胃蛋白酶原-I(pepsinogen-I,PGA,PGI)和胃蛋白酶原 -II(pepsinogen-II,PGC,PG-II),为分子量42,000Da的单链肽链,它由胃主细胞合成和分泌并转化成有分解蛋白能力的胃蛋白酶(pepsin)。 一.PGI、PGII与HP感染的关系. HP感染已被普遍认为是慢性萎缩性胃炎的病因,其组织病理特点为急性,慢性炎症和腺体萎缩,它和胃癌的发生有很强的相关性,血清HP阳性者在1-24年中发生胃癌的危险性比阴性者高三倍(Parsonnet l991)。HP胃炎经多年后可发展成萎缩性胃炎,据某些作者估计,有60%的胃癌可归因于原始的HP感染;若早期HP感染得到控制胃癌的发生可以避免。HP感染显着的影响血清PG水平,起初是PGI,PGll均升高,PGI/PGII下降。0derda(1989)观察到血清HP阳性的儿童胃溃疡患者的血清PGI和抗HPlgG升高,PG1指标的灵敏度,特异度均为87%.Karnes(1991)检测了血清HP阳性的萎缩性胃体炎患者,发现PGII升高,PGI/PGII显着下降.1997 年Takahisa F(1)以血清PG在HP根治前后的变化作为新方法来判别根治的成功与否。将根治前的血清PGI/PGII比值分为三个等级,PGI/PGII 小于3,PG1/PGII在3-5之间,PGI/PGII不小于5; 根治的界值对上述三组分别为,根治后PGI/PGII上升40%,25%,10%.此界值诊断HP根治的灵敏度,特异度,及正确度分别为100%, %,和%,此界值对处于胃溃疡或十二指肠溃疡状态的患者均可适用。血清PG被认为是胃癌危险度和胃粘膜状态的指征, Kikuchi S. (2)研究了长时间HP 感染及其感染灶的大小对血清PG的影响,观察了2584例,时段为1989—1996,从1996年的PG1/PGII减去1989年的PGI/PGII被定为δPGI/PGII,实验观察了HP阳性对δPGI/PGII的影响.结果发现,在HP阳性组δPGI

基质金属蛋白酶_

基质金属蛋白酶_ 基质金属蛋白酶 细胞外基质和基底膜重塑是癌细胞侵袭转移过程中的关键环节,需借助于蛋白降解酶的表达和激活。基质蛋白酶主要有以下数种:丝氨酸蛋白酶类,包括血浆酶原激活剂;半胱氨酸蛋白酶类,包括组织蛋白酶0在内的溶酶体酶;金属蛋白酶类0^1&110^^0^611^565) [1]。金属蛋白酶类在肿瘤侵袭过程中的作用近年来倍受关注,大量证据表明基质金属蛋白酶,特别是基质金属蛋白酶- 2 (matrix metalloproteinase-2, MMP-2)在肿瘤细胞介导的细胞外基质降解中起关键作用,临床研究表明,順?_2活性和表达的增加与人类多种恶性肿瘤侵袭转移潜能及预后密切相关[2?4]。 一.嫩识-2基因及其表达和激活的调节 MMP-2基因位于人类染色体16q21,由13个外显子和12个内含子所组成,结构基因总长度为27此,与其他金属蛋白酶不同,_-2基因5'旁侧序列促进子区域含有2个60盒而不是1414盒[5]。_-2以前酶原的形式由多种细胞分泌,如成纤维细胞、巨噬细胞、内皮细胞和恶性肿瘤细胞等。与其他金属蛋白酶相似,嫩1?-2分子含有氨基末端片段、金属结合片段及竣基末端片段,其中带有高度保守序列PRCGV/NPD的氨基末端具有一个不配对的半胱氨酸残基,该残基与激活位点的锌原子相互作用介导着—_2的前体状态;金属结合片段是公认的锌结合部位,其含旁侧有2个组氨酸的保守序列册4出羧基末端具有类似凝血酶的片段,该片段的具体功能尚未明确。此外,_-2还具有一个 58个氨基酸残基组成的明胶结合片段,此片段与纤维连接素的明胶结合11型基元相似[6]。目前认为,_-2表达和功能的调节发生于转录、分泌、前酶原 的激活、细胞表面的结合以及与来源于肿瘤或宿主细胞的MMP抑制剂的相互作用等多个不同的水平。 MMP-2的转录调节与其他金属蛋白酶相比具有一定的独特性,如佛波醇酯 (phorbol 6316:^通过仙-1位点的介导增加腿?-9和间质胶原酶的表达,而

基质金属蛋白酶酶谱分析法

基质金属蛋白酶酶谱分析法刘 煜 张嘉宁 朱正美 基质金属蛋白酶(m atrix m etallop ro teinases, MM P s)是一组重要的蛋白水解酶,可以水解细胞外基质中胶原、纤维连接蛋白等多种成分[1],参与了人体内许多生理和病理过程,如骨的重建[2]、肿瘤转移[3]等都与MM P s密切相关。近年来研究发现MM P s与生殖过程关系密切[4,5],如在月经的发生,着床与分娩过程都有一定的MM P s的变化,因而对MM P s的活性及种类的分析有着很重要的意义。目前分析MM P s活性及酶量的方法有多种,其中酶谱法是将非还原性SD S2 PA GE电泳分析酶种类与检测酶活性有效结合的一种酶学方法。尤其是具有在电泳中可将组织内与MM P s 紧密结合的组织抑制剂(T I M P s)分离,进而表现出酶的活性,从而达到在分离不同MM P s的同时又可直接显示其活性条带一举两得的特点。鉴于MM P s酶谱分析法具有方法灵敏,结果直观,能同时观察酶与酶原种类和活性等优点,且其方法较简便,适于在不同实验室应用。本研究用早孕子宫内膜样品经组织培养后,将其所分泌的MM P s运用酶谱分析法进行鉴别种类和活性分析,对方法的实验原理及条件进行了介绍,并就其优缺点进行讨论。 一、材料与方法 11材料:丙烯酰胺(A cry),十二烷基磺酸钠(SD S),T riton2X100,Pep statine A,苯甲基磺酰氟(P M SF),N,N2亚甲基丙烯酰胺(B is),1,10菲洛林(1,10phenan th ro line),ED TA,明胶蛋白,DM E M F12无血清培养基,考马斯亮蓝G250,以上均为Sig2 m a公司产品;冰醋酸,甲醇(国产分析纯);72、92×103明胶酶标准品(美国N I H,D r.Stetler2Steven son W G 惠赠)。 21子宫内膜组织块培养:子宫内膜用灭菌冷生理盐水冲洗血迹后,剪成2mm2大小,在24孔培养板中加重量约50m g 孔组织块及1m l培养基后,于5% CO2、37℃条件下,培养5小时,收集上清,-20℃冰箱冻存用于酶谱分析[6]。 31酶谱法:实验原理:MM P s与SD S结合使MM P s结构发生改变,后经SD S2PA GE电泳,将分子量不同的MM P s以及与MM P s结合的组织抑制剂同时分离,再用T rti on2X100除去SD S,在这一过程中引发了MM P s酶原蛋白体外活化机制,酶原在凝胶内除掉一个约10×103的小肽,转变为有活性的酶。MM P s 在体内常以酶原形式分泌并可被纤溶酶等物质激活[7],活化后的MM P s,在除掉SD S后也可以恢复酶活性,在酶谱上称之为活性型MM P s,从而与酶原相区别,由于它在体内已具有水解胶原等基质的作用,因而在功能上的意义要大于相应的酶原。经过酶的复性及酶原的活化后,凝胶内已经具有活性的MM P s则可在适宜的条件下将其所在位置的底物明胶蛋白或其它底物蛋白(制凝胶时已均匀掺入其中)水解,然后用考马斯亮蓝G250染色,再用脱色液脱色,结果见凝胶普遍蓝染,而底物被水解处即可见到清晰的透明条带,根据其透明的程度及面积的大小判断其酶活性的高底,该方法还可以通过变换底物,从而用来研究不同种类的MM P s。如用酪蛋白做底物研究基质溶解素等。 取上述收集的培养上清50Λl加入10Λl样品缓冲液(含1714%SD S,7%蔗糖)混匀后即可进行上样,然后将含有1m g m l明胶蛋白的10%的丙烯酰胺凝胶加入V216垂直电泳槽中,按照L aem n li[8]方法进行电泳,结束后将凝胶置于培养皿中,加入215%T riton2 X100100m l,振荡,重复洗6次,每次5分钟,再用T ris HC l缓冲液(50mmo l L T ris,pH714)冲洗3次,每次5分钟,之后将凝胶放入反应液中(50mmo l L T ris,pH714,200mmo l L N aC l,10mmo l L CaC l2), 37℃培养18小时(该步骤可根据实验要求分别加入1, 10phenan th ro line1mmo l L,ED TA20mmo l L,Pep2 statine A1mmo l L,P M SF20mmo l L等不同的蛋白酶抑制剂,用以鉴定MM P s存在),然后将凝胶置于011%考马斯亮蓝G2250染色液中染色1小时,最后放入脱色液(5%甲醇,715%冰醋酸)中进行脱色[9]。 二、结果 11早孕子宫内膜的MM P s酶谱:应用酶谱法从早 作者单位:116027 大连医科大学生化教研室

基质金属蛋白酶在皮肤病中的研究进展

突、枕鳞、部分枕髁和C1、C2的一侧后弓、侧块、椎弓及横突等。在分离C1、C2时注意保护椎动脉。骨质的切除范围包括一侧部分枕鳞、枕骨大孔后外缘、C1后弓、乳突,使乙状窦可被牵拉向外侧从而扩大对岩斜区的暴露角。沿乙状窦内侧5mm 处切开硬膜,硬脊膜的切开于椎动脉穿过寰枕膜处的外侧,硬膜瓣翻向中线侧。牵开小脑即可暴露相关解剖结构。 此区域神经、血管众多,包括Ⅶ~Ⅻ颅神经、C1和C2神经根、椎动脉Ⅴ3、Ⅴ4段、基底动脉、小脑前下动脉、小脑后下动脉、脊髓前后动脉和众多的小穿支。手术的重点在于寻找、暴露及保护椎动脉,椎动脉总是位于神经根的腹侧、下斜肌的下缘[8]。此处有丰富的静脉丛围绕椎动脉。C1横突孔是有价值的骨性标志[9]。 此种入路手术技术要求较高,但对于中、下斜坡区病变,其距离近,视野宽广,不失为一种较理想的手术入路。 3.5 颞底或颞下入路 耳前颞底或颞下入路为经岩骨前部从 前外侧方向到达斜坡的途径。颞底或颞下入路的皮肤切口自耳前颧弓下缘向下向后至颞上线处拐向前,止于眶外上方发际缘。分离颞肌至骨质,截断颧弓后形成颧颞骨窗,颞底部骨质切除可达翼突外侧板附近。处理桥静脉后可将颞叶抬起,解剖颈动脉池、脚间池、环池等脑池,可进一步抬起颞叶,如暴露仍欠佳,可切除部分颞叶。 此入路适合上岩斜区向外上发展,或突入颞下窝的病变。病变须较局限,如较大,则须使用联合入路。 4 小结 手术入路的选择是神经外科手术的重要组成部分,也是手术成功与否的决定性因素之一。在处理岩斜区病变时,手术入路的选择则显得更加重要。在选择手术入路时主要考虑以下 几点:(1)肿瘤的大小、部位及受累及的区域;(2)颅底骨质的改变;(3)脑干受压的程度、方向;(4)基底动脉与肿瘤的位置关系; (5)肿瘤的供血来源及静脉回流以及瘤周水肿;(6)术前神经功 能缺失的程度;(7)患者的年龄和一般状况;(8)术者的经验和对手术的认识程度。术前对影像学资料的精确分析可以提供预测岩斜区肿瘤的危险程度的重要信息,帮助神经外科医师估计手术风险。 参考文献 1 Y https://www.doczj.com/doc/eb5312929.html,teral suboccipital approach for vertebal and verebrobasilar lesions. Neurosurgery ,1986,64:5592562.2 Lorenz o ND.T rans oral approach to extradural lesions of the lower clivus and upper cervical spine :An experience of 19cases.Neurosurgery ,1989,24:37243. 3 Babu RP ,Sekhar LN ,Wright DC.Extreme lateral transcondylar approach : tethnical im provements and less ons earned.Neurosurgery ,1994,81:49259.4 Hakuba TR ,Sen CN ,Sekhar LN.Surgical management of anterionly placed lesions at the cranio 2cervical junction an alternative approach.Acta Neurochir ,1991,108:70277.5 Sam ii M ,G eorge B ,Demalons https://www.doczj.com/doc/eb5312929.html,teral approach to the anterior portion of the foramen magnum.Surg Neurol ,1998,29:484. 6 Sen N ,Carvalho C.Surgical results for meningiomas of the cranio 2cervical junction.Neurosurgery ,1998,39:108621087.7 S pektor S ,Aanclers on C J.Quantitative description of the far lateral transcon 2dylar and transtubercular approach to the clivus.Neurosurgery ,2000,92:824.8 W en HT ,Rhoton A L ,K alsnla T ,et al.M icrosurgical anatomy of the transcon 2dylar ,supercondylar ,and paracondylar extension of the far lateral approah. Neurosurgery ,1997,22:5552557.9 Salas E.Sekhar LS.Z ival LV.Variations of the far lateral transcondylar and transtubercular approach :anatom ical and clinical analysis of 69patients.Neurosurgery ,1999,90:2062219. (收稿日期:2006-08-29) ?综述与讲座? 基质金属蛋白酶在皮肤病中的研究进展 蔡丽 丁政云 作者单位:050011 石家庄市,河北医科大学第四医院皮肤科 基质金属蛋白酶(M MP )是一族锌依赖性内肽酶,可降解细胞外基质中各种蛋白成分,基质金属蛋白酶抑制剂(TI MP )能特异性抑制其活性。基质金属蛋白酶及其抑制剂是细胞外基质合成及代谢平衡中两个重要的酶系,参与多种与细胞外基质蛋白水解重塑有关的生理过程,如组织发生、组织修复、血管形成等,二者表达的失衡与类风湿性关节炎、骨性关节炎、慢性溃疡、皮肤老化、牙周炎以及肿瘤细胞侵袭转移有关[1]。近来研究表明,M MP 及其抑制剂与多种皮肤病发病有密切关系。 1 M MP 简述1.1 M MP 的结构 [2]  M MP 是一类含有锌离子,活性依赖于钙 离子的蛋白酶,有下列基本结构。(1)信号肽与前肽区:信号肽 位于N -末端,其作用是引导翻译后的产物至胞浆内质网。前肽区内含有保守的PRCG V ΠNPD 序列,其中保守的半胱氨酸在大 多数M MP 酶原活化中有重要作用。(2)催化区:催化区中存在两个锌离子结合区和至少一个钙离子结合区。两个锌离子结合区中,一个位于活性中心内,涉及M MP 的催化过程,称为催化性锌离子;另一个为结构性锌离子。催化区有三个保守的组氨酸残基,是催化性锌离子结合的位点。(3)铰链区与类血红素蛋白结合区:铰链区位于催化区与类血红素蛋白区之间,以二硫键与类血红素结合蛋白区末端氨基酸残基相连。类血红素结合蛋白区含有4个重复序列,与血红素结合蛋白及玻璃粘连蛋白有较弱的同源性。此区的作用认为与大多数M MP 底物特异性有关,同时在M MP 与TI MP 结合中有重要作用。(4)跨膜区:此区存在于膜型基质金属蛋白酶(MT 2M MP )中,有将其固定于细胞膜上的作用。

胃蛋白酶原1检测

胃蛋白酶原Ⅰ/Ⅱ(PGⅠ/PGⅡ)定量检测 试剂盒(化学发光法) 简介: 胃蛋白酶原(pepsinogen,PG)是胃分泌的一种消化酶前体,是胃液中胃蛋白酶的无活性前体,为一由375个氨基酸组成的蛋白多肽链,平均相对分子质量为42,000,人胃粘膜中有7组胃蛋白同工酶原。PG 在核糖体上合成,由高尔基体分泌出细胞,被盐酸激活后变成胃蛋白酶。根据生化性质、免疫原性、细胞来源及组织内分布可分成PGⅠ、PGⅡ两个亚群,1~5组分免疫原性近似,称为PGⅠ(PGA),主要由胃腺的主细胞的粘液颈细胞分泌。利用化学发光分析法得出结果。【包装规格】 48人份/盒、96人份/盒 【预期用途】 用于血清中胃蛋白酶原Ⅰ的定量检测。 【样本要求】 1.采用正确医用技术收集血清样本。 2.样本中的沉淀物可能会影响试验结果,应离心除去,并确定样本未变质方可使用。 3.严重溶血或脂血的样本不能用于测定。 4.样本在24h内测定,则应存放于2℃~8℃冰箱中,如果长期使用,则应冻存于-20℃以下,避免反复冻融。使用前恢复到室温,轻轻摇动混匀。

【检测步骤】 1.取出一定量的包被孔,每孔分别加入20μl校准品或血清样品。 2.每孔分别加入酶结合物50μl。 3.在微型振荡器上振荡30秒使孔内液体混合均匀,置37℃温育60分钟。 4.洗板5次(推荐使用洗板机),最后在吸水纸上拍干。 5.每孔分别加入发光底物A和B各50μl,室温(18℃~25℃)避光反应5分钟。 6.化学发光检测仪检测发光强度。 【结果计算】 选择适当的曲线拟合方式,本试剂盒推荐使用线性回归拟和方程建立标准曲线,但也可根据不同情况采用其他拟和方式。以系列校准品浓度的对数值为横坐标(X轴),以系列校准品发光强度值的对数值为纵坐标(Y轴)建立标准曲线(log-log),进行计算。 【胃蛋白酶原试剂盒检测优势】 优点:1.血清检测无创伤、更安全。 2.费用低廉,适用于普查体检。 3.操作简单,时间短,不会造成受检人员的长时间滞留。 4.胃癌检出率高,特异性强 5.操作简便 6.无创,病人耐受好 7.费用低

基质金属蛋白酶

基质金属蛋白酶 【关键词】肠肿瘤;基质金属蛋白酶;肿瘤坏死因子受体 Effects of matrix metalloproteinase9 on the expression of tumor necrosis factor receptorl in human colon carcinoma cell lines 【Abstract】 AIM: To study the effects of matrix metalloproteinase9 (MMP9) on the expression of tumor necrosis factor receptorl (TNFRl) and migratory and invasive potentials in human colon carcinoma cells. METHODS: Immunofluorescence staining was applied to examine the expression of TNFRl in SW1116 in human colon carcinoma cell lines. The expression of TNFRl was assayed by flow cytometry in human colon carcinoma SW1116 cells treated with iMMP9 at different concentrations and at different time periods of culture. RESULTS: TNFRl was expressed in SW1116 cells and MMP9 downregulated the expression of TNFRl on cell surface in a dose and timedependent manner. CONCLUSION: MMP9 decreases the expression of TNFRl on the surface of human colon carcinoma cells, which may be a factor associated with invasive and metastasis potentials of colon carcinoma. 【Keywords】 intestinal neoplasms; matrix metalloproteinase; TNFR 【摘要】目的:研究基质金属蛋白酶9 (MMP9)对大肠癌细胞肿瘤坏死 因子受体1 (TNFRl)表达的影响以及促进大肠癌侵袭和转移的可能途径.方法: 通过免疫荧光法研究TNFRl在大肠癌细胞SW1116中的表达;用MMP9干预培养

胃蛋白酶原常识(体检)

胃蛋白酶原常识 1.什么是胃蛋白酶原? 胃蛋白酶原(PG)是由胃部分泌的参与消化的胃蛋白酶的前体,通常约1%的PG可通过胃黏膜进入血液循环,可分为PGI和PGII两种亚型,血清胃蛋白酶原可以较为准确地显示胃黏膜的状态和功能。 2.检测PG的意义? PG是浅表性胃炎、糜烂性胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、萎缩性胃炎、胃癌等胃部疾病的初筛选指标和治疗的监控指标(如图)。 ①PG在体检中的应用价值——浅表性胃炎、糜烂性胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、萎缩性胃炎、胃癌等的初筛选指标 在常规体检中每个人做胃镜是不现实的,可通过非侵入性血清PG检测将浅表性胃炎、糜烂性胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、胃癌等胃病高危人群筛查出来,再进行胃镜检查是一个切实可行的方案。 研究发现,在常规体检中大约有15%左右的人的血清PG水平异常,而进一步进行胃镜检查,其中90%以上的患者有不同程度的浅表性胃炎、糜烂性胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、萎缩性胃炎、胃癌等胃部疾病。PGI及PGI/PGII比值明显降低的高危人群的胃癌发生率一般比正常人群高数十倍。 ②PG的临床意义——胃部疾病治疗的监控指标 幽门螺杆菌(Hp)治疗效果的评价指标:Hp感染与血清PG水平间存在相关性,Hp感染者血清PG值高于非感染者(尤其是PGII,除菌后则显著下降)。血

清PGI/PGII比值反映了除菌治疗后较早期的变化,可以作为早期Hp除菌效果评价的指标。 消化性溃疡初发、复发、治愈的判定指标:初发患者PGI升高明显,复发者PGII升高明显;而十二指肠溃疡复发患者的PGI、PGII均显著升高,治愈后PGI、PGII恢复正常。 胃癌切除术后复发的判定指标:胃癌患者全胃切除术后血清PGI、PGII含量作为随访指标,可为胃癌复发提供重要线索,胃癌切除术后PGI、PGII明显降低,复发者的PGI、PGII升高。 3.检测PG可发现哪些疾病? 可通过非侵入性血清PG检测将浅表性胃炎、糜烂性胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、萎缩性胃炎、胃癌等胃病高危人群筛查出来,再进行胃镜检查进行确诊。健康体检者和不同胃病患者的PG异常率如下,可以看到胃病患者的PG异常率远远大于健康体检者。 4.检测PG在胃癌防治上有什么意义? 部分胃癌的发生发展过程一般如下:Hp感染或其他原因→胃炎→慢性非萎缩性胃炎→萎缩性胃炎→肠上皮化生→异型增生→肠型胃癌,如果能尽早的阻止此进程,则得胃癌的可能性就大大降低,而此进程常伴随着PG值的变化,有报道在确诊胃癌患者中1/3在几年前的血清PG值已不正常。所以定期检测PG并积极干预治疗是预防胃癌的有效手段。

胃蛋白酶原检测意义

什么是胃蛋白酶原? 胃蛋白酶原是由胃黏膜分泌,为胃蛋白酶的无活性前体,为一由375个氨基酸组成的蛋白多肽链,平均相对分子质量为42 000,人胃黏膜中有7组胃蛋白酶同工酶原。属于门冬氨酸蛋白酶家族,按其生化性质和免疫原性不同,可分为两个亚群,即胃蛋白酶原Ⅰ(1-5组分)和胃蛋白酶原Ⅱ(6-7组分)。血清胃蛋白酶原的水平可反映胃蛋白酶的分泌及胃黏膜状态和功能情况,当胃黏膜发生病变时,血清中胃蛋白酶原的含量也随之发生改变。 胃蛋白酶原I,主要由胃底腺的主细胞和黏液颈细胞分泌;胃蛋白酶原II,除由胃底腺的主细胞和黏液颈细胞分泌外,贲门腺和胃窦的幽门腺的黏液颈细胞以及十二指肠上段的Brunner腺也能产生胃蛋白酶原II。胃几乎是PG的唯一来源,并且在分泌阶段的分泌量会发生变化,血清PGⅠ和PGⅡ反映了胃黏膜不同部位的分泌功能。胃液和血液PG水平与活组织病理变化结果常一致。 它的主要用途及代谢 大部分PG经细胞分泌后直接进入消化道,约1%经胃粘膜毛细血管进入血液,除血清外,PG 还可在胃液和24小时尿液中测定,但血清最为方便快捷,反应最广泛。PG I是检测胃泌酸腺细胞功能的指标。胃蛋白酶原没有日内变化和季节变化,不受饮食的影响,个体有较稳定的值。 胃癌早期筛查 主要用途:胃溃疡、慢性胃萎缩、HP感染筛查 幽门螺旋杆菌(HP)治疗效果的评价 消化性溃疡复发、治愈的判断标准 胃切除术后的复发判断指标 个人胃粘膜功能的动态检测 有何临床意义? 血清PG水平反映了不同部位胃粘膜的形态和功能: 1. PGI是检测胃泌酸腺细胞功能的指针,胃酸分泌增多PGI升高,分泌减少或胃粘膜腺体萎缩PGI降低;

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