江苏省２６０株结核分枝杆菌Ｓｐｏｌｉｇｏｔｙｐｉｎｇ 基因分型研究 刘巧许卫国万康林王建明杨丹丹吕冰邵燕汪华 ［摘要］ 目的 研究江苏省结核分枝杆菌ＤＮＡ指纹图谱的分布特征，分析北京家族株与结 核分枝杆菌耐药的关联性。方法 江苏省３０个耐药监测点收集２６０株结核分枝杆菌分离株，应用 比例法检测分离株对于一线抗结核药物（异烟肼、链霉素、利福平和乙胺丁醇）的耐药性，应用间隔 区寡核苷酸分型（ Ｓｐｏｌｉｇｏｔｙｐｉｎｇ）方法进行基因分型，使用ＢｉｏＮｕｍｅｒｉｃｓ ５．０软件进行聚类分析，并 与ＳｐｏｌＤＢ４数据库比对。结果 ２６０株结核分枝杆菌分离株可分为３４个基因型（２７个独特基因型 和７个共享基因型），菌株经聚类分析分为两个家族：北京家族（８０．４％，２０９／２６０）和非北京家族 （１９．６％，５１／２６０）。ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析显示，北京家族株能增加结核分枝杆菌耐多药的发生风险 （ＯＲ＝ １１．０７，９５％ＣＩ：１．４５～８４．５０）。非北京家族包括Ｔ１、Ｔ２、Ｈ３、Ｈ４、ＣＡＳ、ＬＡＭ、Ｕ和ＭＡＮＵ２，其 中ＣＡＳ、ＬＡＭ和ＭＡＮＵ２家族在中国比较罕见，在江苏省是首次报道。结论 江苏省结核分枝杆 菌流行株具有明显的基因多态性，其主要流行型为北京家族，且该家族可能与结核分枝杆菌耐多 药之间存在关联。 结核分枝杆菌；基因分型；北京家族 Ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ ｏｆ ２６０ Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｂｙ Ｓｐｏｌｉｇｏｔｙｐｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ ｉｎ Ｊｉａｎｇｓｕ ｐｒｏｖｉｎｃｅ， Ｃｈｉｎａ ＬＩＵ Ｑｉａｏ１ＸＵ Ｗｅｉ－ｇｕｏ２ＷＡＮ Ｋａｎｇ－ｌｉｎ３ＷＡＮＧ Ｊｉａｎ－ｍｉｎｇ１ＹＡＮＧ Ｄａｎ－ ｄａｎＬＶ Ｂｉｎｇ３ＳＨＡＯ Ｙａｎ２， ＷＡＮＧ Ｈｕａ１１ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｂｉｏｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ， Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ， Ｎａｎｊｉｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｎａｎｊｉｎｇ ２１００２９， Ｃｈｉｎａ； ２ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｈｒｏｎｉｃ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｂｌｅ Ｄｉｓｅａｓｅ， Ｊｉａｎｇｓｕ Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ； ３ Ｓｔａｔｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｏｒ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｂｌｅ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ， Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ Ｔｈｉｓ ｗｏｒｋ ｗａｓ ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ ｂｙ ｇｒａｎｔｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｋｅｙ Ｐｒｏｇｒａｍ ｏｆ Ｍｅｇａ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ （Ｎｏ． ２００８ＺＸ１０００３－０１０） ａｎｄ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｍａｊｏｒ Ｐｒｏｊｅｃｔ ｏｆ Ｃｈｉｎａ （Ｎｏ． ２００９ＺＸ １０００４－９０４ ）． ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ ｏｆ Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ （Ｍ． ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ） ｓｔｒａｉｎｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｊｉａｎｇｓｕ ｐｒｏｖｉｎｃｅ ａｎｄ ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ＇Ｂｅｉｊｉｎｇ ｆａｍｉｌｙ＇ ａｎｄ ｔｈｅ ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｏｆ Ｍ． ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ． Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｗｏ ｈｕｎｄｒｅｄ ａｎｄ ｓｉｘｔｙ Ｍ． ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ３０ ｄｒｕｇ ｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ ｓｉｔｅｓ ｉｎ Ｊｉａｎｇｓｕ ｐｒｏｖｉｎｃｅ． Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｔｏ ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ－ｌｉｎｅ ａｎｔｉｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｄｒｕｇｓ （ｉｓｏｎｉａｚｉｄ， ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ， ｒｉｆａｍｐｉｃｉｎ ａｎｄ ｅｔｈａｍｂｕｔｏｌ） ｗａｓ ｔｅｓｔｅｄ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｔｙｐｉｎｇ ｏｆ Ｍ． ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｓｔｒａｉｎｓ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ Ｓｐｏｌｉｇｏｔｙｐｉｎｇ ａｎｄ ａｎａｌｙｚｅｄ ｗｉｔｈ ＢｉｏＮｕｍｅｒｉｃｓ ｓｏｆｔｗａｒｅ． Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｂａｓｅｄ ｏｎ Ｓｐｏｌｉｇｏｔｙｐｉｎｇ ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ， ２６０ ｓｔｒａｉｎｓ ｓｈｏｗｅｄ ３４ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ， ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ２７ ｅｘｃｌｕｓｉｖｅ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ ａｎｄ ７ ｓｈａｒｅｄ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ． Ｔｈｅｓｅ ｓｔｒａｉｎｓ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ ｉｎｔｏ ｔｗｏ ｇｒｏｕｐｓ：ｔｈｅ Ｂｅｉｊｉｎｇ ｆａｍｉｌｙ （８０．４％， ２０９／２６０） ａｎｄ ｔｈｅ Ｎｏｎ－Ｂｅｉｊｉｎｇ ｆａｍｉｌｙ （ １９．６％， ５１／２６０）． Ｄａｔａ ｆｒｏｍ ｌｏｇｉｓｔｉｃ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｔｈａｔ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｂｙ ｔｈｅ Ｂｅｉｊｉｎｇ ｆａｍｉｌｙ ｗａｓ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ａｎ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｒｉｓｋ ｏｆ ｍｕｌｔｉ－ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｍ． ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ， ｗｉｔｈ ｔｈｅ ＯＲ （９５％ ＣＩ） ｏｆ １１．０７ （１．４５－８４．５０）． Ｎｏｎ－Ｂｅｉｊｉｎｇ ｆａｍｉｌｉｅｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ Ｔ１， Ｔ２， Ｈ３， Ｈ４， ＣＡＳ， ＬＡＭ， Ｕ ａｎｄ ＭＡＮＵ２ ｆａｍｉｌｉｅｓ ｗｅｒｅ ａｌｓｏ ｆｏｕｎｄ． Ａｍｏｎｇ ｔｈｅｍ， ｔｈｅ ＣＡＳ， ＬＡＭ ａｎｄ ＭＡＮＵ２ ｆａｍｉｌｉｅｓ ｗｅｒｅ ｆｉｒｓｔ ｒｅｐｏｒｔｅｄ ｉｎ Ｊｉａｎｇｓｕ ｐｒｏｖｉｎｃｅ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｉｔ ｗａｓ ｒｅｖｅａｌｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｍａｒｋｅｄ ｇｅｎｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ ｄｉｄ ｅｘｉｓｔ ｉｎ Ｍ． ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｓｔｒａｉｎｓ． Ｔｈｅ Ｂｅｉｊｉｎｇ ｆａｍｉｌｙ ｈａｄ ｂｅｅｎ ｔｈｅ ｐｒｅｄｏｍｉｎａｎｔ ｓｔｒａｉｎ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ｉｎ Ｊｉａｎｇｓｕ ｐｒｏｖｉｎｃｅ，ｗｈｉｃｈ ｍｉｇｈｔ ｂｅ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｍｕｌｔｉ－ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｍ． ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ ｓｔｒａｉｎｓ． Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ； Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ； Ｂｅｉｊｉｎｇ ｆａｍｉｌｙ １０．３７６０／ｃｍａ．ｊ ．ｉｓｓｎ．０２５４－６４５０．２０１１．１２．０１６ 国家科技重大传染病专项（ ２００８ＺＸ １０００３－０１０）；国家科技重大专项（２００９ＺＸ１０００４－９０４） 作者单位：２１００２９ 南京医科大学公共卫生学院流行病与卫生统计学系（刘巧、王建明、汪华）；江苏省疾病预防控制中心慢性非传染病防治所（许卫国、杨丹丹、邵燕）；中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室（万康林、吕冰）
主堡迅遑痘堂盘查垫ｉＱ堡璺旦箜！生鲞筮垒塑￡ｈ迫』跑￡望趔Ｑｌ，血型垫ｉｇ№！：ｉ生№：曼 ａＥＬ均阴性。尿常规、血、尿１３：微球蛋白正常，ＨＬＡ—Ｂ２７阴性。肿瘤标志物ＡＦＰ、ＣＥＡ、前列腺特异抗体（ＰＳＡ）、ＣＡｌ９－９、神经元特异性烯醇酶（ＮＳＥ）均未异常升高，免疫固定电泳（一），乙型肝炎表面抗原（ＨＢｓＡｇ）（一），乙型肝炎核心抗体（ＨＢｅＡｂ）（＋），人类免疫缺陷病毒抗体（ＨＩＶＡｂ）（一），Ｔ淋巴细胞分类无异常。胸部高分辨ＣＴ示纵隔内见多发小淋巴结，提示轻度肺气肿改变。盆腹腔ＣＴ无异常。右眼磁共振成像（ＭＲＩ）示两侧球后肌内及眼球旁异常信号，代谢性疾病、炎性假瘤待除外，建议检查甲状腺功能。因病变部位较深，眼肌活检未做。查血清ｌｇＧ４＞３．７３ｇ／Ｌ（正常值范围０．０３～２ｇｅＬ），故诊断为ＩｇＧ４相关性炎性假瘤，给予甲泼尼龙８０ｍ异／ｄ，同时予双氯芬酸钠（迪菲）、复方妥布霉素（典必舒）交替滴眼，每日３次，３ｄ后１２Ｉ服泼尼松２５ｎａｇ，每日２次。ｌ周后眼部症状明显好转。 ，例３女，３３岁，因反复双眼睑、腮腺、下颌腺肿胀１年就诊，上眼睑以外１／２处明显，皮温、皮色正常，未扪及明显包块，无畏光、流泪，无眼干、眼分泌物增加。无视力减退。无发热、关节痛和皮疹。既往有过敏性鼻炎和哮喘史。外院考虑米枯力兹病，给予泼尼松４０ｍｇ／ｄ和中药治疗。腮腺和下颌腺肿胀缓解，残存上眼睑轻微肿胀。当泼尼松减量至３０ｍｇ／ｄ时，病情反复。２００７年５月来我院就诊，查血、尿常规、肝功能、肾功能均正常，ＥＳＲ１８ｍｍ／ｌｈ，ＣＲＰ０．１ｍｇ／Ｌ。补体正常。ＡＮＡ、ａＣＬ（一）、ＡＮＣＡ（一）、ＡＭＡ、ＡＳＡ均阴性。ＩｇＧ２０．３１ｇ／Ｌ，ＩｇＡ、ＩｇＭ未升高，免疫固定电泳（一。因活检可造成眼险挛缩。影响外观和眼闭合，在排除感染性疾病和恶性肿瘤后，考虑自身免疫性疾病可能，给予秋水仙碱０．５ｍｇ，每日２次和泼尼松１５ｍｇ／ａ，２个月后ＩｓＧ１６．３１ｇ／Ｌ，ＥＳＲ和ＣＲＰ正常。眼睑肿胀仍有轻度肿胀，以后加用硫唑嘌呤５０ｍｇ／ｄ。１年后，泼尼松５ｍｇ，隔天１次，硫唑嘌呤５０ｍｇＣｄ，双眼睑肿胀消退，一般状况佳。ＩｓＧ１６．１４ｇ／Ｌ，ＥＳＲ３ｍｍ／ｌｈ，ｈｓＣＲＰ０．５ｍｇ／Ｌ，血尿常规 非结核分枝杆菌感染一例 王媛郑毅 患者女，８２岁。因四肢散在皮下结节１５余年，加重２０ｄ于２００８年１０月９日人院。患者１５年前无明显诱因出现四肢散在皮下结节，主要分布于四肢伸面，为红色高于皮面结节，直径１。２ｃｍ，初发时为皮肤红肿热痛。逐渐变化为内有硬结的红色结节，偶有疼痛。边界清楚，无破溃，无瘙痒。于门诊检查示结核菌素皮肤试验［纯蛋白衍生物（ＰＰＤ）］（＋＋＋＋），考 ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１００７—７４８０．２０１０．０４．０２１ 作者单位：１０００２０首都医科大学附属北京朝阳医院风湿免疫科通信作者：郑毅，Ｅｍａｉｌ：竭ｒｙ９０＠ｓｉｎａ．Ｐ＿，ｏｍ和肝肾功能正常。同期测定血清ＩｇＧ４＞３．７３ｇ／Ｌ，因此，该患者诊断为ＩｓＧ４相关性涎腺炎。 讨论ＩｇＧ４相关的自身免疫性疾病（ＩｇＧ４一ｒｅｌａｔｅｄ ａｎｔｕｏｉｍｍｕｎｅｄｉｓｅａｓｅ）又称为ｌｓｃ＿，４相关的硬化性疾病，是以累及胰腺、腮腺、泪腺、下颌腺、胆道、后腹膜、肾脏等器官和脏器的慢性炎症性病变，血清学显示高＾ｙ球蛋白血症，病变部位 以淋巴浆细胞浸润和纤维化为突出表现。血清学ＩｇＧ４升高和病变组织Ｊｓｃ，４阳性浆细胞在每高倍镜视野下达到３０个以上 为确诊条件Ⅲ。对类Ｉ占ｌ醇激素治疗往往有效。本文诊治的３例患者以下颌腺、泪腺和眼肌病变为主，伴或不伴淋巴结肿大，临床检查排除了干燥综合征和肿瘤可能，通过病理检测ＩｓＣ－ｔ阳性浆细胞或血清中测定ＩｓＣＡ水平得以确诊［２－３１。ｌｇＧ４相关性自身免疫性疾病临床表现异质，有时与恶性肿瘤、弥漫性结缔组织的临床表现、影像学特征接近，甚至反复进行创伤性检查，仍不能甄别。如本文例ｌ，若不行Ｉｓｃ，４测定，诊断将不能确定。 通过３例的介绍以引起临床重视，不断积累临床病案，探究Ｉｓｃ，４相关性自身免疫性疾病的病因、发病机制和有效的治疗策略。 参考文献 ｉｌｌＯｋａｍｏｔｏＫＴ．ＩｇＧ４－ｒｅｌａｔｅｄｓｅｌｅｒｏｓｉｎｇｄｉｓｅａｓｅ．ＷｏｒｌｄＪＧａａｔｒｏｅｎ－ｔｅｒｏｌ。２００８．１４Ａ：３９４８－３９５５． 【２】ＫｉｔａｇａｗａＳ，ＺｅｔａＹ，Ｈ锄ｄａＫ。ｅｔａ１．ＡｂｕｎｄａｎｔｌｇＣ，４－ｐｏｓｉｔｉｖｅｐｌａｓｍａｃｅｌｌｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｓｃｈｒｏｎｉｃｓｅｌｅｒｏｓｉｎｇｓｉａｌａｄｅｎｉｔｉｓ．ＡｍＪＳｕｒｇＰａｔｈｏｌ，２００５，２９：７８３—７９１． 【３】ＹａｍａｎｍｔｏＭ，ＴａｋａｈａｓｈｉＨ，ＯｈａｒａＭ，ｅｔａ１．ＡｆｌｅｗｃｏｎｃｅｐｔｕａｌｉｚａｔｉｏｎｆｏｒＭｉｋｕｌｉｃｚ’ｓｄｉｓｅａｓｅａｓ∞ＩｇＧ４－ｒｅｌａｔｅｄ ｐｌａｓｍａｃｙｔｉｃｄｉｓｅａｓｅ．ＭｏｄＲｈｅｕｍａｔｏｌ，２００６，１６：３３５－３４０． （收稿Ｉ：１期：２００９埘－０１） （本文编辑：胡志彬） 虑结核性结节红斑。给予异烟肼、利福平、链霉素正规抗结核治疗１年，症状明显好转，停用抗结核药物后症状复发。再次正规抗结核治疗半年（用药同前），症状好转，但未完全消失。２０ｄ前双上肢皮下结节增多。自发病以来，患者无发热，无咳嗽、咯痰，无盗汗，体质量无明显变化。既往高血压，冠心病２９余年。口服药物，控制良好。入院查体：体温３６．４℃，呼吸２０次／ｍｉｎ，心率７５次／ｍｉｎ，血压１３０／７０ｍｍＨｇ（１ｍｉｌｌＨｇ＝ｏ．１３３ｋＰａ）；咽部无充血，扁桃体无肿大，双肺呼吸音清，未闻及明显干湿性哕音；心律齐，未闻及心脏杂音、无心包摩擦感；腹软．无压痛反跳痛，肝脾肋缘下未触及；双下肢不肿。双上肢散在 万方数据
结核分枝杆菌耐药分析与基因检测分析 目的探讨结核分枝杆菌耐药情况及基因检测分析。方法从2012年3月～2014年3月我院收治的结核病患者中选取62例为研究对象，按随机数字法对患者进行分组，首次诊治患者39例为观察组，首次诊治失败后行第二次治疗患者23例为对照组，对所有患者结核分枝杆菌进行耐药分析及rpsL、rpoB、embB、KatG基因检测。结果62例患者中共19例出现耐药，耐药率为30.65%，对照组患者1种药物耐药率为26.09%，同观察组10.26%比较，差异有统计学意义（P ＜0.05），2种药物耐药率为17.39%，同观察组7.69%比较，差异有统计学意义（P＜0.05），3种药物耐药率为8.70%，同观察组比较，差异有统计学意义（P ＜0.05）；rpsL、rpoB、embB、KatG基因突变率分别为83.33%，86.11%，88.89%，91.67%，x2检验显示，差异无统计学意义（P>0.05）。结论结核分枝杆菌耐药的产生同菌株基因具有较大关联，且耐药率同治疗次数有关，在结核病临床治疗中，需根据患者耐药情况，选择联合用药方案，提高治疗效果。 [Abstract] Objective To investigate the analysis in drug resistance of bacteriology tuberculosis and genetic testing. Methods 62 cases of TB patients from March 2012 to March 2014 in our hospital were selected as the objects，and allocated into an observation group and a control group according to the randomly grouping method，first diagnosis and treatment in 39 patients in the observation group，first diagnosis and treatment failure underwent secondary treatment of 23 patients in the control group，all patients were resistant Bacteriology tuberculosis was analyzed and rpsL，rpoB，embB，KatG genetic were tested. Results 62 cases of patients with 19 cases of drug resistance，the drug resistance rate was 1，the control group of patients with 26.09% was compared with the control group（10.26%），（P＜0.05），2 drug resistance rate was 17.39% and 7.69%，the differences were significant （P＜0.05），3 drug resistance rate was 8.70%，compared with the observation group，the difference was statistically significant （P＜0.05）；rpoB，embB，rpsL，KatG gene mutation rate was 86.11%，88.89%，91.67%，83.33%，x2 test showed no statistical significance （P>0.05）. Conclusion The generation of drug-resistant Bacteriology tuberculosis strains with genes associated with a larger，and the number of drug-related rates with treatment in the clinical treatment of tuberculosis，to be based drug resistance in patients choose combination therapy programs，improve the therapeutic effect. [Key words] Bacteriology tuberculosis；Drug resistance；Gene；Detect 重大传染性疾病对于人们健康及社会稳定均具有较大危害，因此，对其进行快速诊断历来为人类生存发展所必须。自1882年发现结核分枝杆菌以来，结核病便成为严重影响患者健康的重要传染疾病。世界卫生组织1993年称“全球结核病处于紧急状态”，1998年称“遏制结核病行动刻不容缓，1999年数据显示[1]，全世界每年因结核病死亡人数高达300万，是其他传染病死亡人数之和；世界卫生组织（WHO）将结核病与艾滋病、疟疾列为21世纪人类需要攻克的三大传染
系统细菌学 课程论文 题目：结核分枝杆菌及其耐药基因的特征专业：生物工程 姓名：魏文凭 学号： 2016304120036 中国·武汉 二0一六年十二月
结核分枝杆菌及其耐药基因的特征 摘要：分枝杆菌属主要包括结核分枝杆菌复合群（包括结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌、田鼠分枝杆菌）、麻风分枝杆菌和非结核分枝杆菌。造成人畜共患病的结核分枝杆菌和引起麻风病的麻风分枝杆菌是威胁人类健康的两类病原菌，而非结核分枝杆菌病疫情也逐年增加。因此关注分枝杆菌具有重要的科学意义及应用价值，对农业、卫生和环境都用深远影响。本文主要介绍分枝杆菌的特征和一些耐药基因的研究。 关键词：耐药机制结核病生物学特征 1、结核病的认识及治疗发展 结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，M. tuberculosis）是全球第二大致死性传染病—结核病的病原体。结核分枝杆菌最大的特点就是持留性（persistence）[1]，有时感染可达几十年，因此全球约有三分之一的人口感染结核分枝杆菌，其中每年死于结核病的人数高达180万（World Health Organization. 2016）。中国是结核病高发的国家，已被世界卫生组织列为全球22个结核病高负担和特别警示的高耐药国家之一。 结核病很早就存在，在考古学界，从新石器时代人遗骨中发现有骨结核，古埃及木乃伊中也发现有结核病，说明结核病的历史可追溯到公元前2400-3400年。在中国历史上，结核病也是广泛流行的，当时称为痨病，是一种慢性呼吸道疾病，在认识到它的致病菌之前，人们没有治疗的手段，只能通过环境的影响，在空气清新、气候湿润的地域抑制结核病的发作。在1882年，德国微生物学家罗伯特·科赫（Robert Koch）通过特殊的染色技术，发现了细棒状的结核杆菌，又通过血清培养基获得了结核杆菌，证实了结核杆菌是结核病的病原菌。自此对结核病有了清晰的认识，对于结核病的检测技术也不断发展。法国科学家卡尔梅特（Calmette）和格林（Guerin）在1908年和1919年间，经过230次的传代，获得了一株牛分枝杆菌减毒株，卡介苗[2]。自1921年首次使用以来，成为有效治疗儿童结核病的疫苗，但对于成人型结核病的的治疗很有限。到了上世纪中期以来，临床上又应用了一些抗结核的药物，如异烟肼（INH）、利福平（RIF）、链
非结核分枝杆菌的医院感染预防与控制 IMB standardization office【IMB 5AB- IMBK 08- IMB 2C】
非结核分枝杆菌的医院感染预防与控制 非结核分枝杆菌是自然界中广泛存在的一种条件致病菌，存在于水、土壤和气溶胶中，可以导致免疫力低下的精神病患者发生感染。尤其是注射部位易造成非结核分枝杆菌感染暴发，对患者健康造成危害，因此应采取以下措施加强防控。 一、加大对消毒供应中心、治疗室、检验科等医院感染重点部门的管理力度，贯彻落实《医院感染管理办法》、《消毒管理办法》等有关规定，健全制度，细化工作规范，确保医疗安全。二、加强医疗用品的消毒灭菌工作。对耐高温、耐高湿的医疗器械、器具和用品应当首选压力蒸汽灭菌，尽量避免使用液体化学消毒剂进行浸泡灭菌。使用的消毒药械、一次性医疗器械、器具和用品应当符合国家有关规定。一次性使用的医疗器械、器具和用品不得重复使用。进入人体组织和无菌器官的相关医疗器械、器具及用品必须达到灭菌水平，接触皮肤、粘膜的相关医疗器械、器具及用品必须达到消毒水平。 三、规范使用医疗用水、无菌液体和液体化学消毒剂。各种抽吸的输注药液或者溶媒等开启后应当注明时间，规范使用，并避免患者共用。无菌液体开启后超过24小时不得使用。需要使用液体化学消毒剂时，要保证其使用方法、浓度、消毒时间等符合有关规定。同时加强对使用中的液体化学消毒剂的浓度监测。
四、加强医院感染监测工作。及时发现早期诊断感染病例，特别是医疗机构发生聚集性、难治性手术部位或注射部位感染时，应当及时进行非结核分枝杆菌的病原学检测及抗菌药物敏感性、耐药模式的监测，根据监测结果指导临床及时应用抗菌药物，有效控制非结核分枝杆菌医院感染。 五、加强对医务人员的培训。特别要加大对一线医务人员非结核分枝杆菌医院感染预防与控制措施的培训力度，强化防控意识，加大对消毒灭菌、无菌技术操作、手卫生及隔离等措施的落实力度，提高医务人员有效预防和控制医院感染的工作能力和处置能力，切实保障医疗安全。
非结核分枝杆菌（NTM）医院感染预防与控制制度 一、认真贯彻落实《医院感染管理办法》、《消毒管理办法》及医院各项医院感染管理规定，严格执行各项技术操作规程及无菌技术操作原则。医务人员实施手术、注射、插管及其他侵入性诊疗操作技术时，严格遵守无菌技术操作规程和手卫生规范，避免因医务人员行为不规范导致患者发生感染，降低因医疗用水、医疗器械和器具使用及环境和物体表面污染导致的医院感染。 二、加强医疗用品的消毒灭菌工作。凡进入人体组织和无菌器官的相关医疗器械、器具及用品必须达到灭菌水平，接触皮肤、粘膜的相关医疗器械、器具及用品必须达到消毒水平。对耐高温、耐高湿的医疗器械、器具和用品首选压力蒸汽灭菌，避免使用液体化学消毒剂进行浸泡灭菌。如果使用戊二醛，消毒时间不少于30分钟，灭菌时间不少于10小时。使用的消毒药械、一次性医疗器械、器具和用品符合国家有关规定。一次性使用的医疗器械、器具和用品不重复使用。 三、严格医疗用水、无菌液体和各种化学消毒剂的监测和使用。各种抽吸的输注药液或者溶媒等开启后应当注明时间，并避免患者共用，开启的溶媒和配制好的药品4小时内使用，无菌液体开启后超过24小时不得使用。需要使用液体化学消毒剂时，保证其使用方法、浓度、消毒时间符合要求，每季度对使用中的液体化学消毒剂的浓度进行监测。氧气湿化瓶、雾化器、呼吸机、婴儿暖箱的湿化装置使用无菌水，每日更换。 四、加强NTM病例的诊断及监测工作。及时发现，早期诊断非结核分枝杆菌感染病例，根据2000年全国非典型分枝杆菌病研讨会拟定的《非结核分枝杆菌病诊断与处理指南》意见： （一）同时具有以下两项条件者可诊断为NTM感染：①PPD-NTM 皮肤试验阳性。②缺乏组织、器官受到结核分枝杆菌感染的依据。 （二）具有以下条件之一者为NTM病可疑者，须进行NTM检查：①经近规抗结核治疗无效的结核患者或标本涂片抗酸染色仍阳性者。②标本涂片抗酸杆菌阳性而临床表现与结核病不符者。③标本分枝杆菌培养阳性，但菌落状态、生长情况与结核杆菌复合群不同者。 ④显微镜检查有异常的分枝杆菌。⑤初治结核患者首次分离的分枝杆菌对抗结核药物耐药。⑥有免疫缺陷症、白血病、肿瘤而长期应用免疫抑制剂、糖尿病等已排除结核病的肺部感染。⑦医源性或非医源性软组织损伤、手术后伤口长期不愈找不到原因者。 （三）NTM肺病：具有呼吸系统症状或伴全身症状，有X线胸片显示的肺部病变，已排除其他疾病，在确保标本无污染的条件下，具有以下条件之一者可诊断为NTM肺病：①痰NTM培养3次均为
非结核性分枝杆菌病的传播途径 1.传染源 NTM 广泛存在于自然环境中，如土壤、水体、尘埃、饲料、家畜及野生动物等体内，一般认为人是从环境中感染NTM 而患病。动物也可能是传染源之一。在家禽饲养者中MAC 感染发病较多；在捕鱼及养鱼人中以海分枝杆菌感染发病较多。 2.传播途径主要从环境中获得NTM 而感染，人与人之间传播较少见。 (1)经空气传播：尘土中可分离出鸟-胞内分枝杆菌复合群。人吸入带有这些细菌的气溶胶而致病，这是人类感染NTM 的主要传播途径。在沿海地区胞内分枝杆菌感染率高，可能由于风浪大，悬浮于尘土上的NTM 被吸入有关。健康人呼吸道内可有NTM 寄生。当全身防御免疫机制遭到破坏时也可发病。 (2)经水体传播：据调查自来水、自来水制成的冰块、透析用水、制作溶剂用的蒸馏水中是NTM 医院内感染的病原菌来源。多种NTM 如MAC、蟾蜍、偶发、龟分枝杆菌等可生存于饮水中，一些NTM 对锌有代谢需要，可生存于自来水镀锌管道中。蟾蜍分枝杆菌是一种嗜热菌，生存于供热水的管道中。人可因吸入或饮用这些带菌的水体而受感染。 (3)经皮肤感染：寄生在游泳池、鱼塘等处的NTM 可通过皮肤创伤感染人体，引起皮肤及软组织感染。在被鱼或甲壳类水生动物刺伤或钳夹也可引起皮肤NTM感染。曾报道海水分枝杆菌可引起游泳者的皮肤肉芽肿，溃疡分枝杆菌可引起手术后伤口感染等。 3.易感人群不同人群对NTM 的易感性有差异。堪萨斯分枝杆菌、鸟分枝杆菌复合群可在免疫功能正常人群中感染，而免疫功能低下者如HIV 感染、肿瘤患者、长期应用肾上腺皮质激素或免疫抑制剂者更为易感，并可引起播散性NTM 感染。慢性呼吸道疾病如慢性阻塞性肺病、肺结核残余空洞、矽肺、支气管扩张、肺囊性纤维化等更易患呼吸道非结核性分枝杆菌感染。据日本报道在肺结核人群中MAC 感染发病率为18.7/10 万，比一般人群高10 倍。美国报道在HIV 阳性人群中鸟分枝杆菌复合群感染率达95%以上。 4．流行特征 (1)地区分布：世界上大多数国家都发现有非结核性分枝杆菌病，但其患病率常呈明显的地理差别。根据痰培养阳性标本进一步鉴定，近年来NTM 分离率，各国报道为1%～10%不等，多数为5%左右。目前非结核性分枝杆菌病有增加趋势，据日本报道，NTM 感染的患病率由1971 年的0.82/10 万上升到1997 年的3.52/10万，是25 年前的3.8 倍。艾滋病的出现更是加剧了NTM 病的流行，据美国研究表明，HIV 阳性者是。NTM 感染的高危人群，尤以MAC 为甚，其感染所占比例可高达95%以上。1982 年我国8 省市报道，在2537 份阳性标本中NTM 分离率为4.4%，致病菌为2.3%。其中以胞内、瘰疬分支杆菌为多。而1990 年我国第三次全国结核病流行病学调查显示，NTM 总感染率为15.35%，全国约有1 亿人受NTM 感染。最高为浙江省(44.89%)，其次为海南省(43.8%)，依次为福建省(37.7%)、北京市(3.3%)、黑龙江省(2.6%)，最低为西藏自治区(1.94%)。上述感染率提示南方高于北方，沿海高于内地，气候温暖地区高于寒冷地区，并发现感染率随年龄增加而上升，60 岁开始下降。1999 年上海第一肺科医院报道，15 年间5592 例痰抗酸杆菌阳性患者中，经鉴定为N
浅谈非结核分枝杆菌(NTM) 陈星宇 台北市立联合医院仁爱院区临床病理科 摘要 非结核分枝杆菌(Non-Tuberculous Mycobacteria；NTM)在临床上普遍认为是伺机性感染的细菌，艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome；AIDS)的盛行而凸显现其重要性。根据在已发表的文献中发现AIDS病患在结核病盛行地区感染NTM 的比率较在非结核病盛行地区来得低。一些文献推测原因可能是分布情况、重视程度及诊断技术差异有关。临床检验室可以藉由优良的检体采集、培养技术及分子生物技术提高NTM的检出率。临床上可以采取不同于结核病之治疗模式进行治疗。在台湾，NTM感染症亦随着AIDS病患的增多而受到重视，如何可以快速诊断及治疗NTM在未来将会是医学检验上一个重要课题。 非结核分枝杆菌之简介 分枝杆菌(Mycobacterium)至今已有130余种(species)被发现，根据定义为只要是分枝杆菌而非结核杆菌(M. tuberculosis complex)及痲疯杆菌(M. leprosy)则被归类为非结核分枝杆菌(Non-Tuberculous Mycobacteria；NTM)。非结核分枝杆菌大部分是属于环境菌，可以在土壤、灰尘、饮水及植物被分离到[1, 2]。人们或是动物可
能会藉由接触带有病菌之环境而造成感染，亦有可能经由人们接触受感染的人类或是动物造成传递感染[3, 4]。根据生长速度可以将这些NTM约略分为两群，分别为快速生长菌群(rapid grower)及缓慢生长菌群(slow grower)[5]。快速生长菌群代表该菌可以在七天内在固态培养基生长成可见菌落群，而缓慢生长菌群则需要较长的时间才有办法长成可见菌落。一般而言，这两群分枝杆菌了生长速度有所差异外，其感染位置亦有所不同[6-8]。缓慢生长菌群最常造成肺脏及淋巴节之感染，而快速生长菌群一般造成表皮、骨头及关节之感染[5, 8, 9]。非结核分枝杆菌在以往认为是免疫系统低落而造成感染之伺机性致病菌，近年来则因为AIDS病患的增加而受到重视。在公元1990及1997年，美国胸腔医学会(American Thoracic Society；ATS) 发表NTM疾病诊治指引[10]。接着在2007年，美国胸腔医学会与美国感染学会(Infectious Diseases Society of America；IDSA) 共同联合针对这指引进行增修，显示NTM在临床医学角色的重要性与日俱增[4]。 非结核分枝杆菌的流行病学 外来的微生物进入体内所遭遇到的第一道防线为巨噬细胞，巨噬细胞将抗原吞噬处理后，将讯息传达给T淋巴球、B淋巴球与其它的细胞一起抵御外来的病原。当艾滋病患者因感染而造成体内CD4+淋巴球功能或数目的降低，则感染NTM的机率随之升高。研究学者意外发现在结核病非盛行区域，常会有病患在得到AIDS之后再感染NTM的病例报导，但是在结核病盛行的国家则是鲜少有AIDS病患感染NTM的病例
非结核分支杆菌的诊治思路 非结核分枝杆菌（NTM）是指除结核分枝杆菌（MTB）复合群和麻风分枝杆菌以外的一大类分枝杆菌总成，虽种群庞大，但对人体致病的种类仅为其中一小部分。近年来临床上NTM发病呈快速增多趋势，现已成为备受瞩目的公共卫生问题。关于NTM，现阶段有哪些研究？如何诊断和治疗呢？ NTM的分型及传播途径 NTM常根据不同的分类标准分型，常见的有根据生长速度分为快速生长型和缓慢生长型；根据该类菌群在试管中的生长温度、速度、菌落形态及色素产生与光反应的关系分为光产色菌、暗产色菌、不产色菌和快速生长分枝杆菌四组。以上NTM均可广泛存在于水、土壤和灰尘等自然环境中，有些甚至对消毒剂及重金属耐受。 NTM以潮热地带多见，人和动物均可感染，水和土壤是重要的传播途径。不同地区感染的NTM 类型和受累器官存在明显差异，在我国，以龟分枝杆菌、戈尔登分枝杆菌和脓肿分枝杆菌较为常见。近年来患病率增加的原因不明，可能与实验室技术与方法的改进、对疾病的认识提高、人口老龄化、免疫抑制人群增多及环境暴露的增加有关。 NTM侵入人体的常见途径有呼吸道、胃肠道和皮肤等，感染早期中性粒细胞捕杀大部分NTM，发病机制与结核病极为相似。对于肺部存在基础疾病的患者，其罹患NTM的风险更高。病理改变亦类似于MTB，肉芽肿结节是其典型病理改变。 常误诊为肺结核病，需谨慎鉴别 肺部为最常受累器官，全身中毒症状类似肺结核，故未经实验室分离培养及菌种鉴定者常误诊为肺结核病。 1、患者临床表现差异较大，常有基础疾病如COPD、支气管扩张症、囊性纤维化、尘肺等，部分患者原有脊柱侧弯、漏斗胸和二尖瓣脱垂，还有患者无明显症状由体检时发现。 2、侵犯淋巴结在儿童中较为常见，最常累及上颈部和下颌下淋巴结，亦可累及耳部、腹股沟和腋下淋巴结，多为单侧，可不伴有全身症状，仅表现为局部淋巴结受累，可无痛或仅轻度压痛，软化、破溃后形成慢性窦道。
非结核分枝杆菌（NTM）医院感染预防与控制措施 一、认真贯彻落实《医院感染管理办法》、《消毒管理办法》及医院各项医院感染管理规定，严格执行各项技术操作规程及无菌技术操作原则。医务人员实施手术、注射、插管及其他侵入性诊疗操作技术时，严格遵守无菌技术操作规程和手卫生规范，避免因医务人员行为不规范导致患者发生感染，降低因医疗用水、医疗器械和器具使用及环境和物体表面污染导致的医院感染。 二、加强医疗用品的消毒灭菌工作。凡进入人体组织和无菌器官的相关医疗器械、器具及用品必须达到灭菌水平，接触皮肤、粘膜的相关医疗器械、器具及用品必须达到消毒水平。对耐高温、耐高湿的医疗器械、器具和用品首选压力蒸汽灭菌，避免使用液体化学消毒剂进行浸泡灭菌。如果使用戊二醛，消毒时间不少于30分钟，灭菌时间不少于10小时。使用的消毒药械、一次性医疗器械、器具和用品符合国家有关规定。一次性使用的医疗器械、器具和用品不重复使用。 三、严格医疗用水、无菌液体和各种化学消毒剂的监测和使用。各种抽吸的输注药液或者溶媒等开启后应当注明时间，并避免患者共用，开启的溶媒和配制好的药品4小时内使用，无菌液体开启后超过24小时不得使用。需要使用液体化学消毒剂时，保证其使用方法、浓度、消毒时间符合要求，每季度对使用中的液体化学消毒剂的浓度进行监测。氧气湿化瓶、雾化器、呼吸机、婴儿暖箱的湿化装置使用无菌水，每日更换。 四、加强NTM病例的诊断及监测工作。及时发现，早期诊断非结核分枝杆菌感染病例，根据2000年全国非典型分枝杆菌病研讨会拟定的《非结核分枝杆菌病诊断与处理指南》意见：（一）同时具有以下两项条件者可诊断为NTM感染：①PPD-NTM皮肤试验阳性。②缺乏组织、器官受到结核分枝杆菌感染的依据。 （二）具有以下条件之一者为NTM病可疑者，须进行NTM检查：①经近规抗结核治疗无效的结核患者或标本涂片抗酸染色仍阳性者。②标本涂片抗酸杆菌阳性而临床表现与结核病不符者。③标本分枝杆菌培养阳性，但菌落状态、生长情况与结核杆菌复合群不同者。④显微镜检查有异常的分枝杆菌。⑤初治结核患者首次分离的分枝杆菌对抗结核药物耐药。⑥有免疫缺陷症、白血病、肿瘤而长期应用免疫抑制剂、糖尿病等已排除结核病的肺部感染。⑦医源性或非医源性软组织损伤、手术后伤口长期不愈找不到原因者。 （三）NTM肺病：具有呼吸系统症状或伴全身症状，有X线胸片显示的肺部病变，已排除其他疾病，在确保标本无污染的条件下，具有以下条件之一者可诊断为NTM肺病：①痰NTM培养3次均为同一NTM 菌。②痰NTM培养2次为同一NTM菌，1次痰涂片抗酸染色阳性。③支气管灌洗液NTM培养阳性。④支气
非结核分枝杆菌病 非结核分枝杆菌病(nontuberculoausmycobacteriosis)，非结核分枝杆菌(nontuberculoausmycobacteriaNTM)病指除人型牛型结核杆菌及麻风杆菌以外的分枝杆菌感染所引起的肺部和肺外疾病，随着HIV感染和AIDS的流行非结核分枝杆菌病亦见增多。其组织病理学表现类似结核病即渗出性病变、增殖性病变和硬化性病变。 胸部X线检查 细菌学检查 概述 非结核分枝杆菌曾有许多命名，如非典型分枝杆菌(atypcalmycobacteria)非分类分枝杆菌(anonymousunclassifiedmycobacteria)等但均不够确切，目前普遍采用美国微生物学和疾病控制中心的命名，即非结核分枝杆菌其中以鸟复合分枝杆菌(M.aviumcomplex)堪萨斯分枝杆菌(M.Kartsasii)和蟾蜍分枝杆菌(M.xenopi)为引起肺部病变的最常见致病菌。 流行病学 国外NTM感染率健康搜索在1.6%～7.3%之间，我国1979年全国结核病流调52万人群中检查痰标本681份，分离出NTM29株，分离率为4.3%我国常见的NTM感染有8种即堪萨斯分枝杆菌(M.kanssasii)、瘰疬分枝杆菌(M.scrofulaceum)胞内分枝杆菌(M.intracellulare)偶发分枝杆菌(M.fortuitum)、戈登分枝杆菌(M.gordonae)草分枝杆菌(M.phliei)、转黄分枝杆菌(M.flavescens)、未分类分枝杆菌，其中前4种被认为有致病性国际公认为：结核病倾向于减少，非结核分枝杆菌病则有增多趋势，如日本连续观察1971年肺结核发病率为133.0/10万(表1)。 且12年中NTM病人数增加10倍左右这是1985年以前的看法，1986年以后全球包括绝大多数发达国家的结核病呈上升趋势(WHO宣布)，与此同时则未见非结核分枝杆菌病流行资料的动态调查报告1992年前文献报道经菌型鉴定而确诊的非结核分枝杆菌病例数国外仅有1500多例我国约有150多例，由于菌型鉴定技术没有普遍开展，有不少非结核分枝杆菌病被漏诊或误诊为结核病，实际上本病比较常见我国报告29例经菌型鉴定证实：鸟胞内分枝杆菌病14例，占48.3%偶发及?分枝杆菌 (M.cheIonei)病12例，占41.4%，堪萨斯分枝杆菌病3例，占10.3%这是引起我国非结核分枝杆菌病的常见致病菌。多数报告NTM的感染与发病都有明显的地区差异，一般是南方高，北方低，温暖潮湿地区高寒冷干燥地区低沿海高，内陆低，农村高，城市低但编者单位1990～1991年调查18省市入伍新兵14834人胞内分枝杆菌(PPD-B皮试)感染率为10.5%。病因 非结核分枝杆菌广泛存在于自然界的土壤，尘埃水，鱼类和家禽中