实验一分子生物学实验室常用仪器设备简介
实验室主要仪器，设备的简介及使用方法
微量移液器
微量移液器是连续可调的、计量和转移液体的专用仪器，其装有直接读数容量计。
微量移液器有多种规格，在移液器量程范围内能连续调节读数。移液器常见的四种规格分别是：
～10μl(读数窗显示～,每转1档为μl);
10～100μl(读数窗显示～100, 每转1档为1μl);
20～200μl(读数窗显示20～200, 每转1档1μl);
100～1000μl(读数窗显示100～1000, 每转1档为5μl).
量液的操作步骤：
1．将微量移液器装上吸头（不同规格的移液器用不同的吸头）
2．将微量移液器按钮轻轻压至第一停点；
3．垂直握持微量移液器，使吸嘴浸入液样面下几毫米，千万不要将吸嘴直接插到液体底部；4．缓慢、平稳地松开控制按钮，吸上样液。否则液体进入吸嘴太快，导致液体倒吸入移液器内部，或吸入体积减少；
5．等一秒钟后将吸嘴提离液面
6．平稳地把按钮压到第一停点，再把按钮压至第二停点以排出剩余液体；
7．提起微量移液器，然后按吸嘴弹射器除去吸嘴。
量液操作注意问题：
1．未装吸嘴的微量移液器绝对不可用来吸取任何液体。
2．一定要在允许量程范围内设定容量，千万不要将读数的调节超出其适用的刻度范围，否则会造成损坏。
3．不要横放带有残余液体吸嘴的移液器。
4．不要用大量程的移液器移取小体积样品。
5. 移液器使用完后，将刻度调到最大刻度，收藏。
低温台式高速离心机
离心机的分类
低速：每分钟几千转
高速：每分钟1 ~ 3万转
超速：每分钟3万转以上
离心机的功能：分离，纯化
低速：细胞等大分子
高速：DNA，蛋白等
超速:病毒，蛋白等，根据用途又可分为分析超速离心机和制备超速离心机。
低温分离技术是分子生物学研究中必不可少的手段
基因片段的分离、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物样品的分离制备实验中都离不开低温离心技术
本实验室所用离心机为台式高速离心机（IBM），配有角式转头：24×；极限转速20000rpm 台式高速离心机使用步骤
1、把离心机放置于平面桌或平面台上，目测使之平衡，用手轻摇一下离心机，检查离心机是否放置平衡。
2、打开门盖，将离心管放入转子内，离心管必须成偶数对称放入，且要事先平衡，完毕用
手轻轻旋转一下转子体，使离心管架运转灵活。
3、关上门盖，注意一定要使门盖锁紧，完毕用手检查门盖是否关紧。
4、插上电源插座，按下电源开关（电源开关在离心机背面，电源座上方）。
5、设置转子号、转速、时间：
在停止状态下时，用户可以设置转子号、转速、时间，此时离心机处于设置状态，停止灯亮、运行灯闪烁；按下启动离心开始（常用，最高转速为13000r/min，时间最长为20分钟）；注意：对应的转子一定要设置在相应的转速范围内，不可超速使用，否则对试管或转子有损坏。
6、离心机时间倒计时到“0”时，离心机将自动停止，当转子停转后，打开门盖取出离心管，关断电源开关。
注意事项：
1、离心机在运转时，不得移动离心机，不要打开门盖。
2、安放离心机的台面应坚实平整，四只橡胶机脚都应与台面接触和均匀受力，以免产生振动。
3、离心前，离心管加液要平衡，若加液差异过大运转时会产生大的振动，此时应停机检查，使加液符合要求，离心试管必须成偶数对称放入。
4、若运转时有离心试管破裂，会引起较大振动应立即停机处理。
5、离心机彻底停止后，才可开盖，取样
恒温气浴摇床
使用及性能：
摇床（振荡器）为实验室的常规设备。广泛用于对温度和振荡频率有较高要求的细菌培养、发酵、杂交、生物化学反应以及酶和组织研究等。实验室常用的液体摇匀，微生物、细菌和细胞培养。
SHK-99-Ⅱ型台式空气恒温摇床，采用微电脑控制系统，温度范围：室温＋5℃～60℃，精度±0.5℃；时间范围：1分钟～99小时59分钟；转速范围：60RPM～250RPM
操作程序：
1）样品瓶牢固放入弹簧夹中
2）接通电源开关，仪器进入准备状态
3）参数设定，（设定温度、时间、转速等参数）
4）按启动键仪器开始工作，按暂停键可暂停托盘的旋转；
5）按下控制面板的电源键两秒，显示屏显示消失，关闭电源总开关
超净工作台
使用及性能：
超净工作台为分子生物学无菌操作提供可能，分为垂直送风和水平送风两种。
超净台由三相电机作鼓风动力，功率145～260W左右，将空气通过由特制的微孔泡沫塑料片层叠合组成的“超级滤清器”后吹送出来，形成连续不断的无尘无菌的超净空气层流，即所谓“高效的特殊空气”，它除去了大于μm的尘埃、真菌和细菌孢子等等。超净空气的流速为24～30m/min，这已足够防止附近空气可能袭扰而引起的污染，这样的流速也不会妨碍采用酒精灯或本生灯对器械等的灼烧消毒。工作人员就在这样的无菌条件下操作，保持无菌材料在转移接种过程中不受污染。
操作程序：
1）使用工作台时，先经过清洁液浸泡的纱布擦拭台面，然后用消毒剂擦拭消毒。
2）接通电源，提前30分钟打开紫外灯照射消毒，处理净化工作区内工作台表面积累的微生物，15分钟后，关闭紫外灯，开启送风机。
3）工作台面上，不要存放不必要的物品，以保持工作区内的洁净气流不受干扰。
4）操作结束后，清理工作台面，收集各废弃物，关闭风机及照明开关，用清洁剂及消毒剂擦拭消毒。
5）最后开启工作台紫外灯，照射消毒30分钟后，关闭紫外灯，切断电源。
注意事项：
操作时一定注意关掉紫外，防止对实验人员造成伤害
灭菌锅
使用及性能：
细菌和细胞培养以及核酸等有关实验所用的试剂、器皿及实验用具，应严格灭菌；应将实验器械，试剂等进行高压消毒。对于经过导入DNA重组分子的菌株，操作后必须进行严格的高压消毒灭活处理；大批实验物品、试剂、培养基等可以使用大型消毒器进行消毒。一些不能经受高压、高温消毒的试剂可用滤器滤膜除菌，器皿可用紫外线照射、75%乙醇或%的十二烷基硫酸钠（SDS）浸泡消毒。所有的细胞培养、细菌培养的操作，都应在紫外线消毒后的超净工作台中进行
操作程序：
1）开盖：转动手轮，使锅盖离开密封圈，添加蒸馏水刚没至板上
2）通电：将控制面板上电源开关按至ON处，若水位低（LOW）红灯亮
3）堆放物品：需包扎的灭菌物品，体积不超过200mm×100mm×100mm为宜，各包装之间留有间隙，堆放在金属框内，这样有利于蒸汽的穿透，提高灭菌效果，灭菌时间： 121℃，20min，；如为液体，液体必须装在可耐高温的玻璃器皿中，且不可装满，2/3即可， 121℃，18-20min
3）密封高压锅：推横梁入立柱内，旋转手轮，使锅盖下压，充分压紧
4）设定时间和温度，开始灭菌
5）灭菌结束，所有东西放入干燥箱干燥，排尽水气
注意事项：
如是手动的灭菌锅，在灭菌过程中，应注意排净锅内冷空气，锅内冷空气如排放不净，会影响灭菌效果，达不到彻底灭菌的目的。
要等温度降为“0”，才可打开灭菌锅锅盖；
由于高压蒸汽灭菌时，要使用温度高达120℃、两个大气压的过热蒸汽，操作时，必须严格按照操作规程操作，否则容易发生意外事故。
PCR仪
PCR仪，也称DNA热循环仪、基因扩增仪，是使一对寡核苷酸引物结合到正负DNA链上的靶序列两侧，从而酶促合成拷贝数为百万倍的靶序列DNA片段，它的每一循环包括在三种不同温度进行DNA变性、引物复性、DNA聚合酶催化的延伸反应的三个过程
PCR仪主要应用于基础研究和应用研究等许多领域，如基因分析、序列分析、进化分析、临床诊断、法医学等等
操作步骤
1、开机：打开开关，视窗上显示“SELFTEST”,显示10秒中后，显示RUN-ENTER菜单
准备执行程序。
2、放入样品管，关紧盖子。
3、如果要运行已经编好的程序，则直接按《Proceed》，用箭头键选择已储存的程序，按《Proceed》，则屏幕显示
按《Proceed》选择ENABLE，则开始执行程序。
4、如果要输入新的程序，则在RUN-ENTER菜单上用箭头键选择ENTERPROGRAM,按《Proceed》，
1）命名新的程序，最多8个字母，输入后按《Proceed》确认(如何输入字母、数字)。
2）输入程序步骤：名字输入后，确认，然后输入相关程序
5、输入完成的程序后，到RUN-ENTER菜单，选择新程序，开始运行。
6、其它：用《pause》可以暂停一个运行的程序，再按一次继续程序。
用《stop》或《Cancel》可停止运行的程序。
如何设置一个PCR程序：
一般分为8步：
1、预变性：可用94～95℃，2～10min,一般用 5min。
2、变性：一般用95℃，30s~2min,一般 45s~1min。
3、退火：温度自定，30s~2min。
4、延伸：72℃，对于〈1kb=1min,每增加 1kb加1min。
5、循环数：一般25～35个循环(2,3,4步循环）。
6、最终延伸：72℃，5～15min。
7、保存：4℃，时间设为0。
8、END。
电泳仪
电泳技术是分子生物学研究不可缺少的重要分析手段。电泳一般分为自由界面电泳和区带电泳两大类，自由界面电泳不需支持物，如等电聚焦电泳、等速电泳、密度梯度电泳及显微电泳等，这类电泳目前已很少使用。而区带电泳则需用各种类型的物质作为支持物，常用的支持物有滤纸、醋酸纤维薄膜、非凝胶性支持物、凝胶性支持物及硅胶-G薄层等，分子生物学领域中最常用的是琼脂糖凝胶电泳
应用电泳法可以对不同物质进行定性或定量分析，或将一定混合物进行组份分析或单个组份提取制备。
实验室所用DYY-12型电脑三恒多用电泳仪（北京六一仪器厂）
操作程序：
1．首先用导线将电泳槽的两个电极与电泳仪的直流输出端联接，注意极性不要接反。2．按电源开关，显示屏出现“欢迎使用DYY-12型电脑三恒多用电泳仪…”等字样后，同时系统初始化，蜂鸣4声，设置常设置。屏幕转成参数设置状态，根据工作需要选择稳压稳流方式及电压电流范围。
3．确认各参数无误后，按“启动”键，启动电泳仪输出程序。在显示屏状态栏中显示Start! 并蜂鸣4声，提醒操作者电泳仪将输出高电压，注意安全。之后逐渐将输出电压加至设置值。同时在状态栏中显示“Run”，并有两个不断闪烁的高压符号，表示端口已有电压输出。在状态栏最下方，显示实际的工作时间（精确到秒）
4．电泳结束，仪器显示：“END”，并连续蜂鸣提醒。此时按任一键可止鸣
注意事项
1．电泳仪通电进入工作状态后，禁止人体接触电极、电泳物及其它可能带电部分，也不能到电泳槽内取放东西，如需要应先断电，以免触电。同时要求仪器必须有良好接地端，以防漏电。
2．仪器通电后，不要临时增加或拨除输出导线插头，以防短路现象发生，虽然仪器内部附设有保险丝，但短路现象仍有可能导致仪器损坏。
3．由于不同介质支持物的电阻值不同，电泳时所通过的电流量也不同，其泳动速度及泳至终点所需时间也不同，故不同介质支持物的电泳不要同时在同一电泳仪上进行。
4.使用过程中发现异常现象，如较大噪音、放电或异常气味，须立即切断电源，进行检修，以免发生意外事故。
作业
列出分子生物学常用仪器的名称，用途及操作时的注意事项。
一，微量移液器
微量移液器是连续可调的、计量和转移液体的专用仪器，其装有直接读数容量计。
量液操作注意问题
1．未装吸嘴的微量移液器绝对不可用来吸取任何液体。
2．一定要在允许量程范围内设定容量，千万不要将读数的调节超出其适用的刻度范围，否则会造成损坏。
3．不要横放带有残余液体吸嘴的移液器。
4．不要用大量程的移液器移取小体积样品。
5. 移液器使用完后，将刻度调到最大刻度，收藏。
二，离心机的功能：分离，纯化
注意事项：
1、离心机在运转时，不得移动离心机，不要打开门盖。
2、安放离心机的台面应坚实平整，四只橡胶机脚都应与台面接触和均匀受力，以免产生振动。
3、离心前，离心管加液要平衡，若加液差异过大运转时会产生大的振动，此时应停机检查，使加液符合要求，离心试管必须成偶数对称放入。
4、若运转时有离心试管破裂，会引起较大振动应立即停机处理。
5、离心机彻底停止后，才可开盖，取样
三，恒温气浴摇床
使用及性能：
摇床（振荡器）为实验室的常规设备。广泛用于对温度和振荡频率有较高要求的细菌培养、发酵、杂交、生物化学反应以及酶和组织研究等。实验室常用的液体摇匀，微生物、细菌和细胞培养。
四超净工作台
使用及性能：
超净工作台为分子生物学无菌操作提供可能，分为垂直送风和水平送风两种。
注意事项：
操作时一定注意关掉紫外，防止对实验人员造成伤害
五．灭菌锅
使用及性能：
细菌和细胞培养以及核酸等有关实验所用的试剂、器皿及实验用具，应严格灭菌；应将实验器械，试剂等进行高压消毒
注意事项：
如是手动的灭菌锅，在灭菌过程中，应注意排净锅内冷空气，锅内冷空气如排放不净，会影响灭菌效果，达不到彻底灭菌的目的。
要等温度降为“0”，才可打开灭菌锅锅盖；
由于高压蒸汽灭菌时，要使用温度高达120℃、两个大气压的过热蒸汽，操作时，必须严格按照操作规程操作，否则容易发生意外事故。
六．PCR仪
PCR仪，也称DNA热循环仪、基因扩增仪，是使一对寡核苷酸引物结合到正负DNA链上的靶序列两侧，从而酶促合成拷贝数为百万倍的靶序列DNA片段，它的每一循环包括在三种不同温度进行DNA变性、引物复性、DNA聚合酶催化的延伸反应的三个过程
PCR仪主要应用于基础研究和应用研究等许多领域，如基因分析、序列分析、进化分析、临床诊断、法医学等等
七．电泳仪
电泳技术是分子生物学研究不可缺少的重要分析手段。电泳一般分为自由界面电泳和区带电泳两大类，自由界面电泳不需支持物，如等电聚焦电泳、等速电泳、密度梯度电泳及显微电泳等，这类电泳目前已很少使用。而区带电泳则需用各种类型的物质作为支持物，常用的支持物有滤纸、醋酸纤维薄膜、非凝胶性支持物、凝胶性支持物及硅胶-G薄层等，分子生物学领域中最常用的是琼脂糖凝胶电泳
注意事项
1．电泳仪通电进入工作状态后，禁止人体接触电极、电泳物及其它可能带电部分，也不能到电泳槽内取放东西，如需要应先断电，以免触电。同时要求仪器必须有良好接地端，以防漏电。
2．仪器通电后，不要临时增加或拨除输出导线插头，以防短路现象发生，虽然仪器内部附设有保险丝，但短路现象仍有可能导致仪器损坏。
3．由于不同介质支持物的电阻值不同，电泳时所通过的电流量也不同，其泳动速度及泳至终点所需时间也不同，故不同介质支持物的电泳不要同时在同一电泳仪上进行。
4.使用过程中发现异常现象，如较大噪音、放电或异常气味，须立即切断电源，进行检修，以免发生意外事故。
实验二琼脂糖凝胶电泳的制备及核酸检测
带电荷的物质在电场中的趋向运动称为电泳。电泳的种类多，应用非常广泛，它已成为分子生物学技术中分离生物大分子的重要手段。琼脂糖凝胶电泳由于其操作简单、快速、灵敏等优点，已成为分离和鉴定核酸的常用方法。
实验目的
掌握琼脂糖凝胶电泳的原理;
学习琼脂糖凝胶电泳的操作。
实验原理
琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，沸水中溶解，45℃开始形成多孔性刚性滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的浓度。
DNA分子在碱性环境中带负电荷，在外加电场作用下向正极泳动。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与分子筛效应。不同DNA，其分子量大小及构型不同，电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带。琼脂糖凝胶电泳法分离DNA，主要是利用分子筛效应，迁移速度与分子量的对数值成反比关系。
溴化乙锭（EB）为扁平状分子，在紫外照射下发射荧光。EB可与DNA分子形成EB-DNA复合物，其发射的荧光强度较游离状态EB发射的荧光强度大10倍以上，且荧光强度与DNA的含量成正比。用肉眼观察，可检测到5 ng以上的DNA。
1．影响DNA在琼脂糖凝胶中迁移速率的因素：
1)DNA分子大小
迁移速率U与logN成反比（N为碱基对数目）。分子大小相等，电荷基本相等（DNA结构重复性）。分子越大，迁移越慢。等量的空间结构紧密的电泳快（超螺旋>线性DNA）
2)琼脂糖浓度：不同的凝胶浓度，分辨不同范围的DNA
Agarose：%：1-30kb；
%： kb
%：kb；
%： kb.
3)DNA构象：一般迁移速率超螺旋环状>线状DNA>单链开环。
4)所加电压：低电压时，线状DNA片段的迁移速率与所加电压成正比。使分辨效果好，凝胶上所加电压不应超过5V/cm
5)碱基组成与温度：一般影响不大4-30℃
6)嵌入染料的存在：降低线性DNA迁移率，(不提倡加在电泳液中)
7)电泳缓冲液的组成及其离子强度影响DNA的迁移率，无离子存在时，核酸基本不泳动，离子强度过大产热厉害，熔化凝胶并导致DNA变性，一般采用1×TAE，1×TBE，1×TPE（均含EDTA）。
2．溴化乙锭（EB）为致癌剂，操作时应戴手套，尽量减少台面污染。
3．电泳指示剂：核酸电泳常用的指示剂有两种，溴酚蓝（bromophenolblue,Bb）呈蓝紫色；二甲苯晴（xylenecyanol,Xc）呈蓝色，它携带的电荷量比溴酚蓝少，在凝胶中的迁移率比溴酚蓝慢。
仪器和试剂
仪器
微量移液器，电泳仪，电泳槽，微波炉
试剂
琼脂糖：%；
电泳缓冲液（50 × TAE 电泳缓冲液取Tris24.2g ，冰醋酸， L EDTA 20ml ，加蒸馏水至100ml ）
EB：5 μl / 100 ml TBE
电泳材料：标准分子量核酸（DL2000）
操作步骤
（1）制胶（以20 mL为例）
a. 称取0.2 g 琼脂糖，加入20 ml 的1XTAE缓冲液（pH ），摇匀；
b. 微波炉加热，至琼脂糖完全溶解（要防止过热溢出三角瓶）；
c.将制胶板放入制胶槽中，插入适当的梳子，将溶解的琼脂糖（约50℃）加入2ul EB后，混均匀，倒入其中，直至厚度为4～6 mm（如有气泡要把气泡赶出），在室温下冷却凝固(约30~ 45 min)；
d.小心垂直向上拔出梳子,以保证点样孔完好,将胶板置于电泳槽中。
（2）点样
用微量移液器将5 μl含蓝色染液的 DL2000 加入点样孔下部。
（3）电泳
打开电源开关，调节电压至3~5 V/cm(约100 V)，可见到溴酚蓝条带由负极向正极移动，约30-40分钟后即可观察结果。
（4）观察
将电泳好的胶置于紫外透射检测仪上，打开紫外灯，可见到橙红色核酸条带，根据条带粗细，可粗略估计该样品DNA的浓度。如同时有已知分子量的标准DNA进行电泳，则可通过线性DNA条带的相对位置初步估计样品的分子量。
实验结果及分析
实验结果不是很理想，可能的原因是小组间的点样间隔时间太长以至于样品扩散造成结果的不理想另一个人原因是点样没有到位造成的，第二种原因的可能性大一点。
作业
做琼脂糖凝胶电泳应注意哪些问题。
答：1，溴化乙锭（EB）为致癌剂，操作时应戴手套，尽量减少台面污染
制琼脂糖凝胶时在特定的操作区操作。
2，微波炉加热使琼脂完全溶解要防止过热溢出三角瓶，要在瓶上加一张纸。
3，制胶时插入适当的梳子，当琼脂糖冷却凝固后，要小心垂直向上拔出梳子，小心样孔被弄破
4，点样时，要把样品点入点样孔下部，电泳时条带平整明亮。
5，要正确使用微量移液器，等器材视点用后的结果不致出现错误。
检验科微生物实验室生物安全事件应急预案 This manuscript was revised by JIEK MA on December 15th, 2012.
检验科微生物实验室生物安全事件应急预案为了有效的预防微生物实验室生物污染，有效应对实验室突发污染事件，保证实验结果的科学准确，保障实验工作人员的健康、生命财产安全，防止实验室污染对周围环境造成严重污染，加强检验工作的质量控制和实验室的管理，根据《中华人民共和国传染病防治法》、《突发公共卫生事件应急条例》和《实验室生物安全通用要求》等相关法律法规的规定，特制定本预案，确保一旦发生实验室污染事件及安全事故时，能及时、规范、科学、迅速有效地控制。 一、适用范围 本预案适用于微生物实验室发生的、与实验室安全相关的、危害科室工作人员健康以及社会公众健康和社会稳定的所有事件。主要包括：1．病原微生物的实验室污染事件； 2．工作人员受到实验室内有毒病原微生物的感染或侵害； 3．病原微生物被泄漏出实验室事件。 4．由于停电、火灾等不可预测因素所引起的实验室其他污染事件。 当出现以上适用范围中的任意情况，启动本预案。 二、应急管理小组 有微生物实验室生物安全事件应急管理小组，科主任任组长，制定实验室生物安全防护指导方针，规划对实验室的硬件建设、组织实施科学管理。在实验室生物安全事件发生时，决策指挥，调动人员，全面部署。发生突发事件后应急处理小组全体成员，应立即按实验室污染突发事件处理
的技术规范，采取有效措施控制事件、调查原因，减少人员伤亡和财产损失。 三、预防措施 1．加强实验室标准化建设，对实验室设备的配置、个人防护和实验室安全行为应按《实验室生物安全通用要求》做出明确规定。 2．建立实验室病原微生物专库，对于传染病病原样本建立严格的监督管理制度。 3．增强安全意识，合理完善实验室生物安全的各项规章制度。把生物安全管理责任和措施落到实处，消除安全隐患。实验室工作人员应自觉遵守实验室生物安全管理规定，严格按照操作规程和技术规范开展研究工作。 4．提高警惕，加强安全保卫，防止不法之徒盗窃病原微生物和有毒有害化学试剂，用于对人群进行生物化学恐怖攻击，对公众健康产生严重损害，影响社会稳定。 5．建立有效的预警机制，为各种病原微生物和有毒有害化学试剂建立档案和使用纪录，填写准确。每次使用后及时登记，发现遗失或被盗，立即报告。 6．建立实验室工作人员健康档案，定期体检。发现与实验室生物安全有关的人员感染或伤害应立即报告。 7．定期开展自查，及时发现安全隐患，发出预警通报。 四、应急控制措施
七、病原微生物实验室生物安全管理（共15分） 1、一、二级实验室备案证明☆ （1）法律依据：《病原微生物实验室生物安全管理条例》第二十五条。 （2）检查内容：查一、二级病原微生物实验室是否向设区的市级卫生计生行政部门备案。 （3）检查方法：查备案材料或资格证书。 （4）结果评价：此项不合格则该项目整体不得分。 （5）监督关键点：①一、二级实验室的备案与实际情况是否相符；②有无存在未备案的一、二级实验室。 *2、三级、四级实验室开展高致病性病原微生物实验活动资格证书（重点项☆，或合理缺项） （1）法律依据：《病原微生物实验室生物安全管理条例》第二十条、第二十一条。 （2）检查内容：查三级、四级实验室是否经国家认可并取得从事高致病性病原微生物实验活动资格证书。 （3）检查方法：查备案材料或资格证书。 （4）结果评价：此项不合格则该项目整体不得分。 （5）监督关键点：三、四级实验室是否存在未取得资格证书从事高致病性病原微生物实验活动。 3、实验室建立生物安全委员会，建立健全实验室生物安全管理体系和感染应急预案（1分） （1）法律依据：《病原微生物实验室生物安全管理条例》第三十一条、第三十二条、第四十条，《实验室生物安全通用要求（GB19489-2008）》7.1。 （2）检查内容：实验室生物安全委员会的建立文件，成员应体现其组织及学科的专业范围，具体职责包括①制定生物安全规章制度、操作规程和标准操作程序等；②建立实验活动风险评估的工作制度和程序，组织开展风险评估工作； ③负责本单位生物安全的日常监督、检查；④对本单位实验室开展的第一、第二类病原微生物的实验活动进行审查。 实验室生物安全管理体系：生物安全管理手册、程序文件、作业指导书和记录。 感染应急预案：结合本单位实际制定。从事高致病性病原微生物相关实验活动的实验室制定的预案应向所在地省级卫生计生行政部门备案。 （3）检查方法：查阅生物安全管理体系、预案等文件。
实验一分子生物学实验室常用仪器设备简介 实验室主要仪器，设备的简介及使用方法 微量移液器 微量移液器是连续可调的、计量和转移液体的专用仪器，其装有直接读数容量计。 微量移液器有多种规格，在移液器量程范围内能连续调节读数。移液器常见的四种规格分 别是： 0.5～10μl(读数窗显示0.5～10.0,每转1档为0.1μl); 10～100μl(读数窗显示10.0～100, 每转1档为1μl); 20～200μl(读数窗显示20～200, 每转1档1μl); 100～1000μl(读数窗显示100～1000, 每转1档为5μl). 量液的操作步骤： 1．将微量移液器装上吸头（不同规格的移液器用不同的吸头） 2．将微量移液器按钮轻轻压至第一停点； 3．垂直握持微量移液器，使吸嘴浸入液样面下几毫米，千万不要将吸嘴直接插到液体底部；4．缓慢、平稳地松开控制按钮，吸上样液。否则液体进入吸嘴太快，导致液体倒吸入移液 器内部，或吸入体积减少； 5．等一秒钟后将吸嘴提离液面 6．平稳地把按钮压到第一停点，再把按钮压至第二停点以排出剩余液体； 7．提起微量移液器，然后按吸嘴弹射器除去吸嘴。 量液操作注意问题： 1．未装吸嘴的微量移液器绝对不可用来吸取任何液体。 2．一定要在允许量程范围内设定容量，千万不要将读数的调节超出其适用的刻度范围，否则会造成损坏。 3．不要横放带有残余液体吸嘴的移液器。 4．不要用大量程的移液器移取小体积样品。 5. 移液器使用完后，将刻度调到最大刻度，收藏。 低温台式高速离心机 离心机的分类 低速：每分钟几千转 高速：每分钟 1 ~ 3万转 超速：每分钟3万转以上 离心机的功能：分离，纯化 低速：细胞等大分子 高速：DNA，蛋白等 超速: 病毒，蛋白等，根据用途又可分为分析超速离心机和制备超速离心机。 低温分离技术是分子生物学研究中必不可少的手段 基因片段的分离、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物样品的分离制备实验中都离不开低温离 心技术 本实验室所用离心机为台式高速离心机（IBM），配有角式转头：24×1.5ml；极限转速20000rpm 台式高速离心机使用步骤 1、把离心机放置于平面桌或平面台上，目测使之平衡，用手轻摇一下离心机，检查离心机 是否放置平衡。
微生物实验室检测设备配置方案 一类微生物检验实验室配置——供国家级食品质检机构实验室参考 仪器设备检测用途 自动菌落成像分析系统菌种计数 全自动微生物鉴定仪主要可鉴定的菌属：肠杆菌、非发酵G（-）杆菌、葡萄球菌、酵 母菌、厌氧菌等 便携式细菌快速检测仪细菌总数、霉菌、酵母菌 PCR仪定量核酸检测及分子诊断 微量全自动荧光酶标仪微生物血清学鉴定 荧光定量PCR仪核酸定量 冷冻台式高速离心机用于离心、加速沉淀等前处理 冻干机保存样品 超低温冰箱保存样品 普通冰箱保存样品 超净工作台空气净化作用的设备 生物安全柜保护工作人员健康\样品\环境安全 生化培养箱微生物培养 霉菌培养箱霉菌培养 荧光显微镜微生物检验 生物显微镜微生物检验 高压蒸汽灭菌器灭菌设备 干热灭菌器灭菌设备 恒温水浴精密恒温、辅助加热 均质器微生物学检测的样品制备 用于经均质和/或稀释好的样品进行培养皿螺旋式接种全自动微生物平皿螺旋加 样系统 精密电子稀释仪样品稀释 数字式液体稀释仪样品稀释 细胞染色仪细胞染色
空气采样仪空气采样 二类微生物检验实验室配置——供省级和有条件的地市级食品安全实验室参考 仪器设备检测用途 全自动微生物鉴定仪主要可鉴定的菌属：肠杆菌、非发酵G（-）杆菌、葡萄球 菌、酵母菌、厌氧菌等 便携式细菌快速检测仪细菌总数、霉菌、酵母菌 微生物定量检测仪微生物定量检测 酶标仪定性或定量分析 冷冻台式高速离心机分子生物学鉴定 冻干机冷冻干燥 超低温冰箱菌种保存-86℃ 普通冰箱菌种保存 超净工作台局部净化 生物安全柜保护工作人员\样品\环境安全 生化培养箱细菌培养 霉菌培养箱霉菌培养 荧光显微镜微生物检验 生物显微镜细菌观察 高压蒸汽灭菌器灭菌设备 干热灭菌器灭菌设备 恒温水浴制备 均质器样品处理 全自动微生物平皿螺旋加样系统用于经均质或稀释好的样品进行培养皿螺旋式接种 精密电子稀释仪样品稀释 自动菌落成像分析系统菌落计数 数字式液体稀释仪样品稀释 细胞染色仪细胞染色 空气采样仪空气中微生物采样 三类微生物检验实验室配置——供地市级和有条件的县级食品安全实验室参考
微生物实验室生物安全操作规程 tiger 一、目的 制订本规则，保证实验室工作人员的健康安全、实验设备安全卫生以及防止对外界环境造成污染。 二、适用范围 适用于微生物实验室人员人身安全、卫生健康安全管理及设备安全。 三、职责 实验室工作人员必需严格遵守安全操作规程。 四、安全操作规程： 1.员工安全操作规程 1.1 实验室入口处须贴上生物危险标志，注明危险因子、生物安全级别、负责人姓名和电话、进入实验室的特殊要求及离开实验室的程序。 1.2 禁止非工作人员进入实验室。参观实验室等特殊情况须经实验室负责人批准后方可进入，做好卫生防护，并在有关人员陪同下方可进入，同时注意做好环境维护及保密工作。 1.3 进行感染性实验时，禁止他人进入实验室，或必须经实验室负责人同意后方可进入。免疫耐受或正在使用免疫抑制剂的工作人员必须经实验室负责人同意方可在实验室工作。 1.4 接触微生物或含有微生物的物品后，脱掉手套后和离开实验室前要洗手。 1.5 禁止在工作区饮食、吸烟、处理隐形眼镜、化妆及储存食物。 1.6 尽量以移液器吸取液体，禁止口吸。 1.7 实验过程中，严格按有关操作规程操作，降低溅出和气溶胶的产生。 1.8 每天至少消毒一次工作台面，活性物质溅出后要随时用75%乙醇或巴氏消毒液消毒。 1.9 工作人员应接受必要的免疫接种和检测(如乙型肝炎疫苗、卡介苗等)。工作人员要接受有关的潜在危险知识的培训，掌握预防暴露以及暴露后的处理程序。每年要接受一次最新的培训。人员暴露于感染性物质时，及时向实验室负责人汇报，并记录事故经过和处理方案。 1.10禁止将无关动物带入实验室。 2.无菌室安全操作规程 2.1无菌培养室每天都要用0.2%的新洁尔灭拖洗地面一次(拖布专用)，紫外线照射消毒30min以上，超净工作台台面每次实验前要用75％酒精擦洗。然后紫外线消毒30min。操作用具如移液器、废液缸、污物盒、试管架等用75%酒精擦洗后置于台内同时紫外线消毒。 2.2无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。 2.3无菌室应备有工作浓度的消毒液，如5％的甲酚溶液，75％的酒精，0.1％的新洁尔灭溶液，等等。 2.4无菌室应定期用适宜的消毒液灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。 2.5需要带入无菌室使用的器械、平皿等一切物品，均应包扎严密，并应经过适宜的方法灭菌。 2.6工作人员进入无菌室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换专用工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用75% 乙醇等消毒剂再次擦拭双手)，方可进入无菌室进行操作。 2.7无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌30分钟，并且同时打开超净台进
微生物实验室是生物学领域必备实验室。如何配置才能成就一个完备的微生物实验室，哪些仪器必不可少，哪些仪器可有可无？ (1)超净工作台 微生物的培养都是在特定培养基中进行无菌培养，那么无菌培养必然需要超净工作台提供一个无菌的工作环境。超净工作台的用途是微生物的接种及处理时的无菌操作。 (2)培养箱 培养箱有多种类型，它的作用在于为微生物的生长提供一个适宜的环境。培养箱有多种类型，包括生化培养箱，霉菌培养箱，厌氧培养箱等。具体来说区别如下： a. 生化培养箱只能控制温度。可作为一般细菌的平板培养。 b. 霉菌培养箱可以控制温度和湿度。可作为霉菌的培养。 c. CO2培养箱适用于厌氧微生物的培养，例如双歧杆菌。 (3)天平 天平用于精确称量各类试剂。实验室常用的是电子天平，电子天平按照精度不同有不同的级别。 (4)微生物均质器 用于从固体样品中提取细菌。用微生物均质器制备微生物检测样本具有样品无污染、无损伤、不升温、不需要灭菌处理，不需洗刷器皿等特点，是微生物实验中使用较为方便的仪器。 (5)菌落计数器
菌落计数仪可协助操作者计数菌落数量。通过放大，拍照，计数等方式准确的获取菌落的数量。有些高性能的菌落计数器还可连接电脑完成自动计数的操作。 (6)微波炉/电炉 用于溶液的快速加热，微生物固体培养基的加热溶化。 (7)高压灭菌锅 微生物学所用到的大部分实验物品、试剂、培养基都应严格消毒灭菌。灭菌锅也有不同大小型号，有些是手动的，有些是全自动的。用户需要根据自己的需要选购。 (8)移液器 液体量器用于精密量取各类液体。常见的液体量器有量筒、移液管、微量取液器、刻度试管、烧杯。 (9)冰箱 冰箱是实验室保存试剂和样品必不可少的仪器。微生物学实验中用到的试剂有些要求是4度保存，有些要求是负20度保存，实验人员一定要看清试剂的保存条件，放置在恰当的温度下保存。具体来说，不同温度下保存的物品如下： a. 4℃适合储存某些溶液、试剂、药品等。 b. -20℃适用于某些试剂、药品、配好的抗生素等。 c. -80℃适合某些长期低温保存的样品、大肠杆菌菌种、感受态等的保存。 (10)生物安全柜
一、疾病预防控制中心实验室仪器设备清单 1 气相色谱仪：定性定量分析 2 阿贝折射仪：测透明半透明液体或固体的折射率和平均色散 3 氨气分析仪：测样品中氨的含量 4 测汞仪：测固、体液体样品中汞含量 5 电导率仪：测电解质溶液电导率值 6 二氧化硫测定仪：大气环镜中二氧化硫浓度的自动监测 7 二氧化碳测定仪：大气环镜中二氧化碳浓度的自动监测 8 离子交换纯水器：使用离子交换法制纯水 9 粉层采样器：该采样器适用于煤矿及其它粉层作业环镜中进行粉层采样 10 光电浊度仪：测量浊度 11 光照度计：测定光照强度 12 火焰光度计：监床化验用病理研究 13 激光粉层仪：检测粉层浓度 14 紫外可见分光光度计：测量物质对不同波长单色辐射的吸收程度、定量分析 15 紫外辐射照度计：紫外辐射照度测量 16 自动量程照度计：测定光照强度 17 自动旋光仪：测物质旋光度，分析物质的浓度、纯度、含糖量 18 酶标仪：定性定量 19 冷原子荧光测汞仪：专用测贡仪器，测痕量贡 20 离子计：测离子浓度 21 CO分析仪：测大气环镜中一氧化碳含量 22 双道原子荧光光度计：固、液体中汞、砷、硒、锑、锗、锡含量测定析 23 手持糖量计：测体的含糖量 24 生化分析仪：测定样品的浓度，酶反映速率和酶的活性等数十种生化参数 25 洗板机：与酶标仪配套使用 26 微量可调移液器：移微量液体 27 显微镜：观察微小物质 28 荧光分光光度计：分析和测试各类微生物，氨基酸、蛋白质、核酸及多种监床药物 29 医用净化工作台：提供无尘无菌高洁净工作环镜 30 便携式红外线人析器：测定公共场所中的CO2浓度 31 电子微风仪：适用于工厂企业通风空调，镜污染览测动压平衡自动跟踪等速烟尘采样器的采样 32 放射性污染计量仪：测试放射性污染是否超标 33 热敏电阻（测辐射热计）：用于辐射探测 34 紫外光功力计：测试检测紫外光功率 35 热球式电风速仪：测定室内外或模型的气流速度时，是一种测量低风速的基本仪器 36 红血蛋白仪：检测血红蛋白
微生物检验实验室操作技术要求 第一节实验室管理制度 一、实验室管理制度 1．实验室应制定仪器配备管理、使用制度，药品管理、使用制度，玻璃器皿管理，使用制度，并根据安全制度和环境条件的要求，本室工作人员应严格掌握，认真执行。 2．进入实验室必须穿工作服，进入无菌室换无菌衣、帽、鞋，戴好口罩，非实验室人员不得进入实验室，严格执行安全操作规程。 3．实验室内物品摆放整齐，试剂定期检查并有明晰标签，仪器定期检查、保养、检修, 严禁在冰箱内存放和加工私人食品。 4．各种器材应建立请领消耗记录，贵重仪器有使用记录，破损遗失应填写报告；药品、器材、菌种不经批准不得擅自外借和转让，更不得私自拿出，应严格执行《菌种保管制度》。 5．禁止在实验室内吸烟、进餐、会客、喧哗，实验室内不得带入私人物品，离开实验室前认真检查水、电、暖气、门窗，对于有毒、有害、易燃、污染、腐蚀的物品和废弃物品应按有关要求执行。 6．科、室负责人督促本制度严格执行，根据情况给于奖惩，出现问题立即报告，造成病原扩散等责任事故者，应视情节直至追究法律责任。 二、仪器配备、管理使用制度 1．食品微生物实验室应具备下列仪器：培养箱、高压锅、普通冰箱、低温冰箱、厌氧培养设备、显微镜、离心机、超净台、振荡器、
普通天平、千分之一天平、烤箱、冷冻干燥设备、匀质器、恒温水浴箱、菌落计数器、生化培养箱，电位pH计、高速离心机。 2．实验室所使用的仪器、容器应符合标准要求，保证准确可靠，凡计量器具须经计量部门检定合格方能使用。 3．实验室仪器安放合理，贵重仪器有专人保管，建立仪器档案，并备有操作方法，保养、维修、说明书及使用登记本，做到经常维护、保养和检查，精密仪器不得随意移动，若有损坏需要修理时，不得私自拆动、应写出报告、通知管理人员，经科室负责人同意填报修理申请、送仪器维修部门。 4．各种仪器（冰箱、温箱除外），使用完毕后要立即切断电源，旋钮复原归位，待仔细检查后，方可离去。 5．一切仪器设备未经设备管理人员同意，不得外借，使用后按登记本的内容进行登记。 6．仪器设备应保持清洁，一般应有仪器套罩。 7．使用仪器时，应严格按操作规程进行，对违反操作规程的因管理不善致使仪器械损坏，要追究当事者责任。 三、药品管理、使用制度 1．依据本室检测任务，制定各种药品试剂采购计划，写清品名、单位、数量、纯度、包装规格，出厂日期等，领回后建立帐目，专人管理，每半年做出消耗表，并清点剩余药品。 2．药品试剂陈列整齐，放置有序、避光、防潮、通风干燥，瓶签完整，剧毒药品加锁存放、易燃、挥发、腐蚀品种单独贮存。
兽医微生物实验室的生物安全分类（2005年版）凡涉及微生物及其提取物或基因工程产物操作的实验室，根据对病原微生物不同种类的生物安全要求。实验室的设计、设施也有所不同。目前国际公认的微生物实验室分为生物安全（biosafety level，BSL）1至4级。其中BSL-1最低，BSL-4最高。BSL-1~4俗称P1~4。 BSL-1实验室可从事已知不会对健康成人造成危害、但对实验室工作人员和环境可能有微弱危害的、有明确特征的微生物实验工作。实验室与建筑物中的一般通道不隔开，一般在试验台上操作，不要求使用或经常使用专用封闭设备。 BSL-2实验室与BSL-1相似，适用于那些对人及环境有中度可能危害的微生物实验工作。其不同点在于：工作人员要经过操作病原因子的专门培训，并由能够胜任的专业人员进行指导和管理；工作时限制外人进入实验室；某些产生传染性气溶胶或溅出物的工作要在生物安全柜或其他封闭设备内进行；对污染的锐器采取高度防护措施。凡从事微生物基因的操作，均需在BSL-2实验室进行。 BSL-3实验室供处理危险病原体使用，适用于可以通过吸入途径引起严重的或致死性疾病病原体的实验工作，例如从事高致病性禽流感、口蹄疫和艾滋病研究或检测的实验室BSL-3实验室的实验人员在处理病原体方面要经专门培训，并由有关专家进行监督管理。传染性材料的所有操作均要在生物安全柜或其他物理防护设施内进行，工作人员要穿适宜的防护服。BSL-3实验室要经过专业的设计和建造。 BSL-4实验室有造成气溶胶感染和危及生命的病原微生物，如埃波拉病毒、尼帕病毒等研究的实验室，必须达到BSL-4的安全水平。BSL-4实验室对防止微生物扩散到环境中有特殊的工程和设计要求。每一名实验室工作人员在处理病原微生物方面均要有特殊和全面的培训；要具有法定资格的科学家监督管理。实验室主任要严格控制进入实验室的人员。实验室均应是毒力的建筑物或是建筑物内的隔离区。要实施特殊的实验室安全工作细则。 在此种实验室的工作区内，所有的工作都要限制在II级生物安全柜或者是安全柜与一套由生命维持系统工期的正压个人工作服联合使用。
实验室常用仪器及其使用 1.能区分和识别常用的仪器，了解化学实验常用仪器的主要用途 2.掌握常见反应器、加热仪器、计量仪器、分离仪器、干燥仪器的使用方法 3.能懂得选择合适的实验仪器进行实验，会绘制简单的仪器装置图 4.知道质谱仪、核磁共振仪、红外光谱仪等现代仪器在测定物质结构中的作用。 知识点1 反应器的使用方法 6.集气瓶
知识点2 计量仪器的使用方法 2.量筒 3.容量瓶 4.托盘天平 知识点3 加热、蒸发、蒸馏、结晶的仪器2.表面皿、蒸发皿
知识点4过滤、分离、注入液体的仪器 干燥管 干燥器 铁架台、 铁夹 试管夹 坩埚钳 二、质谱仪、核磁共振仪、红外光谱仪等现代仪器在测定物质结构中的作用 1.质谱仪 用途 。 2．核磁共振仪 用途 。 3．红外光谱仪
【例1】下列实验中所选用的仪器合理的是（） A. 用200mL量筒量取5.2mL稀硫酸 B. 用250mL容量瓶配制250mL0.2mol/L的氢氧化钠溶液 C. 用托盘天平称量11.7克氯化钠晶体 D. 用碱式滴定管量取25.1mL溴水 解析：这是一道考查称量仪器使用的题目。选用量筒时应注意选合适规格，量取5.2mL 稀硫酸要用10mL量筒，所以A不正确；滴定管量取液体时应精确到0.01mL，所以D不正确。 托盘天平可称量精确到0.1克，一般配制多大体积的溶液就选用多大体积的容量瓶。 答案：BC 【变式】准确量取25.00 mL高锰酸钾溶液，可选用的仪器是（ C ） A . 50 mL量筒 B. 10 mL量筒 C. 50 mL酸式滴定管 D. 50mL碱式滴定管【例2】一支40mL碱式滴定管注入苛性钠溶液后，液面正好在10mL刻度处，则苛性钠溶液体积为（） A . 10mL B. 大于10mL C. 30 mL D. 大于30 mL 解析：滴定管的0刻度线在上方，40mL刻度线下至尖嘴处仍有溶液，所以大于30 mL 答案：D 【变式】下列量器和温度计的刻度表示正确的是（CD） A.量筒的刻度值是由下向上增大，“0”刻度在下 B.250毫升容量瓶上一般刻有30℃250毫升的标记 C.滴定管的刻度值由上而下增大，“0”刻度在上 D.温度计的刻度是由下而上增大，“0”在有刻度标记区域 【例3】现有下列仪器或用品：①铁架台（含铁圈，各种铁夹）；②锥形瓶；③酸式滴定管与碱式滴定管；④烧杯（若干）；⑤玻璃棒；⑥胶头滴管；⑦天平（含砝码）；⑧滤纸；⑨量筒；⑩过滤漏斗。 （1）过滤时，应选用的上述仪器是（填编号）。 （2）配制一定物质的量浓度的溶液时，还缺少的仪器是。 （3）在中和滴定使用滴定管前，首先应。 解析这类试题的解题方法是首先看题目选项的具体操作。联想该操作的仪器、方法、注意事项等，对比题目中所给的仪器进行组合，看仪器是否完全具备进行某一项实验，这样才能得出正确结论，有时试题是给出一些仪器来完成某些实验操作，而所给的仪器不全，其解题方法与之类似，即通过联想完成。 答案（1）过滤所用的仪器有：铁架台、烧杯、玻璃棒、滤纸、过滤漏斗。 （2）配制一定物质的量浓度的仪器有：天平（含砝码）、容量瓶、烧杯、玻璃棒、胶头滴管。 （3）检查活塞是否漏水，在确保不漏水后方可使用。
化学实验室仪器设备清单 编号名称单位数量单价（元）金额（元）备注 1钢制黑板块1150.00150用于贴磁性图片2打孔器套411.0044 3打孔夹板个134.0034 4打孔器刮刀个114.0014 5手摇钻孔器台178.0078 6仪器车辆1300.00300 7离心沉淀器台173.0073 8酒精喷灯个243.0086 9电加热器个176.0076 10列管式烘干器台1270.00270 11注射器只50 5.00250 12塑料洗瓶个4 5.0020 13试剂瓶托盘个1219.00228 14实验用品提蓝个230.0060 15塑料水槽个508.00400JY 53 16碘升华凝华管个2515.00375可自制 17方座支架套2525.00625或称铁架台18万能夹个510.0050 19三脚架个257.00175 20泥三角个1 1.20 1.2 21试管架个257.00175 22漏斗架个112.0012 23滴定台个119.0019 24滴定夹个114.0014 25多用滴管架个2518.00450与多用滴管配套26教学电源台1150.00150可与物理共用27托盘天平台5046.002300 28托盘天平台175.0075 29温度计支50 1.5075 30温度计支1 2.50 2.5 31多用电表个185.0085
32密度计支1 4.004 33密度计支1 5.005 34水电解演示器台1120.00120 35水电解实验器台2577.001925可自制36原电池实验器个2513.00325可自制37贮气装置台251.00102 38分子间隔实验器件2560.001500 39溶液导电演示器台1110.00110 40微型溶液导电实验器套25120.003000 41初中分子结构模型套320.0060 42金属矿物、金属及合 金标本 盒160.0060 43原油常见馏分标本盒125.0025 44合成有机高分子材料 标本 盒122.0022 45走进化学实验室套175.0075 46身边的化学物质套175.0075 47物质的组成、性质和 变化规律 套175.0075 48化学与社会发展套175.0075 49元素周期表件138.0038 50量筒个50 3.00150 51量筒个50 4.00200 52量筒个2 5.0010 53量筒个215.0030 54量杯个18.008 55容量瓶个110.0010 56容量瓶个112.0012 57滴定管支125.0025 58滴定管支135.0035 59试管支2500.60150 60试管支250 1.00250 61试管支100 1.20120 62试管支50 1.0050
微生物实验室常用仪器配置 1 超净工作台（已有）微生物的培养都是在特定培养基中进行无菌培养，那么无菌培养必然需要超净工作台提供一个无菌的工作环境 2、培养箱（已有）培养箱有多种类型，它的作用在于为微生物的生长提供一个适宜的环境。生化培养箱只能控制温度，可作为一般细菌的平板培养;霉菌培养箱可以控制温度和湿度，可作为霉菌的培养;CO2培养箱适用于厌氧微生物的培养。 3、天平（已有待完善）天平用于精确称量各类试剂。实验室常用的是电子天平，电子天平按照精度不同有不同的级别。 4、微生物均质器（无）用于从固体样品中提取细菌。用微生物均质器制备微生物检测样本具有样品无污染、无损伤、不升温、不需要灭菌处理，不需洗刷器皿等特点，是微生物实验中使用较为方便的仪器 5、菌落计数器（无）菌落计数仪可协助操作者计数菌落数量。通过放大，拍照，计数等方式准确的获取菌落的数量。有些高性能的菌落计数器还可连接电脑完成自动计数的操作。 微波炉/ 电炉用于溶液的快速加热，微生物固体培养基的加热溶化。 7、高压灭菌锅（已有坏）微生物学所用到的大部分实验物品、试剂、培养基都应严格消毒灭菌。灭菌锅也有不同大小型号，有些是手动的，有些是全自动的。用户需要根据自己的需要选购。 8、移液器（无）液体量器用于精密量取各类液体。常见的液体量器有量筒、移液管、微量取液器、刻度试管、烧杯。 9、低温冰箱（已有）冰箱是实验室保存试剂和样品必不可少的仪器。微生物学实验中用到的试剂有些要求是 4 度保存，有些要求是负20 度保存，实验人员一定要看清试剂的保存条件，放置在恰当的温度下保存。 11、摇床（已有）摇床是实验室常用的一种仪器，在微生物实验操作过程中，液体培养基培养细菌时需要在特定温度下振荡使用。 12、纯水装置 13、生物显微镜（无）由于微生物体积较小，所以在观察时需要借助生物显微镜。生物显微镜用于微生物和微小物品结构，形态等的观察。 16、恒温干燥箱 17、恒温水浴锅（已有------ 其他实验室） 水浴锅是一种控温装置，水浴控温对于样品来说比较快速且接触充分。有些微生物反应需要在37度，42度，56度下水浴进行，所以恒温水浴锅可以提供需要的温度。 （18）酸度计（无） 用于配置试剂时精确测量PH 值，从而保证配置的溶液的精确性。有时也需要利用pH 计测定样品溶液的酸碱度。 （19）离心机（无）用于收集微生物菌体以及其他沉淀物。离心机有冷冻和常温之分。 有些样品由于在常温下不太稳定，需要低温环境，要视样品的种类而定。 20 接种仪器：试管（有）、接种针、牛角勺（无）、药勺、接种环、接种钩，解剖刀、培养皿（无）、镊子、酒精灯、接种锄、玻璃刮刀（无）
病原微生物实验室生物安全培训试题 科室______ 姓名______ 分数______ 1.气溶胶是指悬浮于气体介质中粒径一般为（）的固态或液态微小粒子形成的相对稳定的分散体系。分散 相含有生物因子的气溶胶。?? 1. A.??μm 2. B.??μm 3. C.??μm 4. D.??μm 2.?? 去除生物污染不一定杀灭微生物。所以操作中需要：（）。?? 1. A.??安全柜内操作 2. B.??向室外排放的空气要用高效空气颗粒 (high-efficiency particulate air, HEPA滤器过滤, 3. C.??排出的废水和废物要进行高压灭菌, 对传出的仪器和样本容器表面进行消毒。 4. D.??以上都是 3.?? 下列不属于实验室一级防护屏障的是（）。?? 1. A.??生物安全柜 2. B.??防护服 3. C.??口罩 4. D.??缓冲间 4.《病原微生物实验室生物安全管理条例》中华人民共和国国务院令第424号于2004年11月5日国务 院第69次常务会议通过（）公布，自公布之日起施行。?? 1. A.??2004"年"12"月"1"日" 2. B.??2004"年"11"月"12"日" 3. C.??2005"年"1"月"1"日" 4. D.??2005"年"6"月"1"日" 5.生物实验室中产生微生物气溶胶的操作有（）。?? 1. A.??接种环操作：培养和划线培养、在培养介质中“冷却”接种环、灼烧接种环等 2. B.??吸管操作：混合微生物悬液、混合微生物悬液、吸管操作液体溢出在固体表面等 3. C.??针头和注射器操作：排除注射器中空气、从塞子里拔出针头、接种动物、针头从注射器脱落 等 4. D.??其他操作：离心、搅拌、混合、灌注和倒入液体、打开培养容器、感染性材料溢出、在真空 中冻干和过滤、接种鸡胚和培养物收取等 5. E.??以上都是 6.省、自治区、直辖市人民政府卫生主管部门和兽医主管部门负责（）级实验室的备案。?? 1. A.??一 2. B.??二 3. C.??三 4. D.??一和二 7.生物安全实验室所在单位的上级主管部门设立的生物安全专家委员会职责有（）。?? 1. A.??对涉及感染因子、动物使用、重组DNA以及基因修饰物质等研究方案进行审查和分析危害程 度评估； 2. B.??负责对下属单位生物安全的日常监督、检查；
知识精要?化学实验常用仪器及其使用 中学化学实验常用的仪器有20多种，对这些仪器应该在反复使用和训练规范操作的基础上，努力做到“三会”，即：会识别仪器的名称和能恰当地选用仪器(仪器的种类和必要的规格)；会正确地使用仪器进行实验；会画常用仪器的剖面图。 按照中学化学实验常用仪器的用途，大致可分为计量仪器、分离物质仪器、可加热的仪器、加热仪器、存放物质的仪器和其它仪器六类。现对这些仪器的名称、规格、用途和操作要领分述如下。 1．计量仪器 (1)量筒 量筒用于量度一定体积的液体。量筒的容积常见的有10mL、 50mL、100mL等多种，其分度(最小刻度每格)依次为0.2mL、1mL、1mL。应该根据需要量取液体的体积大小，选用适当规格的量筒；量取液体时，以液面的弯月形最低点为准；量筒不能加热，不能作反应容器(量筒是有刻度的玻璃容器，温度的变化会使刻度不准确，且量筒受热可能引起炸裂，因此，量筒不能用做反应容器或用来稀释浓硫酸、溶解强碱，也不能量取过热的液体或用于加热等)。量取液体时，应先往量筒里注液体到接近刻度然后改用滴管，将液体逐滴加入，直到指定量。读数时量筒必须方平视线必须与量筒内液体凹液面最底处保持水平。俯视使读数偏高；仰视使读数偏低。如右图 (2)托盘天平
固体药品称量使用托盘天平，一般能精确到0.1克。 使用步骤注意事项：①先调整零点；②称量物和砝码的位置为“左物右码”；③称量物不能直接放在托盘上，干燥的药品放在洁净的纸上称量，易潮解的和有腐蚀性的药品放在小烧杯等玻璃器皿里称量；④砝码用镊子夹取（“先大后小”）⑤称量结束后，应使游码归零，砝码放回砝码盒。 2．分离物质的仪器 漏斗漏斗内放滤纸用于过滤，也可通过漏斗向小口容器中转移液体。漏斗不能直接加热；过滤时应固定在铁架台的铁环上或固定在漏斗架上。 3．可加热的仪器 1)．试管用来盛放少量药品，常温或加热情况下进行少量试剂反应的容器，可用于制取或收集少量气体。 使用注意事项：①可直接加热,用试管夹夹在距试管口1/3管长处。 ②加热后不能骤冷，防止炸裂。③加热时试管口不能对着任何人；给固体加热时，试管要横放，管口略向下倾斜。 ④加入试管内的液体，不加热时不超过试管容积的l/2，加热时不超过l/3。 2)．烧杯用作配置溶液和加大试剂的反应容器，在常温或加热时使用。使用注意事项：①烧杯外壁擦干后方可用于加热，加热时应放置在石棉网上，使受热均匀，盛放液体的容量通常不超过容积的1/3。 ②溶解物质搅拌时，玻璃棒不能触及杯壁或杯底。
刚毕业的人，什么都不懂，前面叫我去去参加微生物培训，在他们那边要了两份新标准复印件，看着实验室空空的。就按照标准上面写的开始采购仪器设备试剂微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 1 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃，30 ℃±1 ℃。（一台） 2 冰箱：2 ℃~5 ℃。（一台） 3 恒温水浴箱：46 ℃±1 ℃。（一台） 4 天平：感量0.1g 。（一台还买了一台感量0.001g） 5 均质器。(一台) 6无菌吸管：1 mL （具0.01mL 刻度）、10mL （具o.lmL 刻度）或微量移液器及吸头。（3、4个） 7 无菌锥形瓶：容量250 mL 、500 mL 。（6个） 8 无菌培养皿：直径90 mm 。（20个） 9 pH 计或pH 比色管或精密pH 试纸。（一盒） 10 放大镜（一只） 11试管（大号的20支小号20支）、烧杯（大中小各三个）、试管架、小滴管 培养基和试剂 1 平板计数琼脂培养基 2 磷酸盐缓冲液 3 无菌生理盐水：称取8.59 氯化钠溶于1 000 mL 蒸馏水中，121 ℃高压灭菌15 min 。 4 1 mol/L 氢氧化钠（NaOH ) ：称取40g 氢氧化钠溶于1 000 mL 蒸馏水中。 5 1 mol/L 盐酸（HCl ) ：移取浓盐酸90 mL ，用蒸馏水稀释至1 000 mL 。 总结仪器设备和试剂采购有时候总是以为什么都买回来了，但是一旦你开始做试验你就会发现缺这个少那个，这个那个的没买，导致实验没法开始做，我当当就这两个项目的东西买了四次才全都买回来，没办法在列清单的时候好像什么都列好了，但是但采购回来又发现这个少了。所以但要买东西的时候，你先一步一步的把试验操作模拟出来看到用什么马上写出来，然后在对着实验操作步骤对一遍过去看哪个环节没想到没做到，加深印象，你就会发现很多东西上面没写但是必备的小瓶瓶罐罐的。 一、仪器设备采购、仪器试剂和整体布局 前面那就是开始布局要从这间房间里再分割一间小的房间作为无菌实验室，我们这个实验室占地面积大概就是一个高中教室那么大吧，而我们拿四分之一用来做无菌实验室。第二个就是自来水和管道的安装。（大概图如我画的） 我查阅相关资料食品实验室设计要求达到以下：⑴食品行业化工实验室实验台高度要求根据人体工力学，坐式操作实验台高度为750~850；站式操作高度850~920。试剂架高度1200~1650。高柜1800~2200。 ⑵食品行业化工实验室安全通道：常用实验室门宽为900~1500mm，并设有一个安全门，内部操作流程要求顺畅，防止发生危急情况时，出现通道堵塞现象，设计时常用岛型、半岛型、L字型、U字型等实验室布局方案。主通道、两个中央台双面操作，间距大于1500mm，边台单向距离大于1200。排毒柜双面操作距离大于1500mm。 ⑶食品行业化工实验室通风系统 通风气体管道符合安全要求：工程必须达到化学类实验室安全要求，诸如防火，防爆，防腐，防泄漏，防雷击，保证通风排毒系统在安全状态下运行，安全要求是本工程第一重要因素。
培训教材 实验室生物安全相关法律法规和标准 沅江市疾控中心吟 二零一一年三月十八日
病原微生物实验室生物安全 相关法律法规和标准 实验室生物安全防护的发展 二十世纪五十年代，美国在开展生物武器、化学武器的实验室研究中，为了防止生物因子(病原微生物)和化学毒剂泄漏逃逸到实验室外环境，研制了一系列的防护装备和设备，如高效粒子空气过滤器、生物安全柜等；建设了BSL－3实验室和BSL－4实验室等。 实验室生物安全防护的发展 实验室生物安全法律法规和标准的发展 实验室获得性感染的调查 美国实验室生物安全专家Sulkin and Pike调查了5000多个实验室，发现： ——累计实验室相关感染3921例； ——病原微生物实验室获得性感染的病原微生物有： 肝炎、布氏菌病、肺结核、野兔热(土拉弗氏菌)、斑疹伤寒、 委瑞拉马脑炎(Venzuelan Equine Encephalitis) 实验室获得性感染原因 在3921例实验室感染中，对导致感染的原因分析发现： ——低于20%的实验室获得性感染与已知的事故有关； ——80％与实验室工作人员暴露与感染性气溶胶有关。 ——80% 是不明原因的感染。 ——20% 感染的原因是明确的。 其中80% 是由工作人员操作失误引起的；20% 是由设备故障引起的。 实验室获得性感染原因 在3921例实验室感染中，对导致感染的原因分析发现： 导致感染最多的4种实验室事故 ——溢出和泼洒； ——针头和注射器； ——锐器、碎玻璃； ——动物或动物体外寄生虫的咬伤或抓伤。 案例一 ——新加坡实验室人员感染SARS(2003年) 案例二 ——国实验室人员感染SARS(2004年) 早在1979年，美国实验室生物安全专家Pike在他的一篇评论中指出： ——"生物安全知识、防护技术和设备对防止大多数实验室感染的发生是非常有用的"。 病原微生物危害和生物安全定义 为了避免微生物和医学实验室中有害或有潜在危害的生物因子对人、环境和社会造成的危害或潜在危害，而采取的防护措施（硬件）和管理措施（软件），达到对人、环境和社会的安全防护目的。 什么是实验室生物安全？
A1/A2型题42．病毒实验中用于浸泡和清洁玻璃器材的清洁浸泡液含有下列哪些化学成分 A．硫酸和重酪酸钾 B．硫酸 C．盐酸 D．醋酸 E．重酪酸钾 【答案】A 77．选定分光光度计测定颜色反应光的波长 680nm A． 580nm B． 560nm C． 450nm D． 200nm E． D 【答案】．选定分光光度计测定细菌浓度，光的波长为108 A．600nm ．530nm B ．430nm C ．330nm D ．230nm E A【答案】 ．选定分光光度计测定蛋白浓度，光的波长为109 A．680nm B．280nm C．260nm D．230nm ．200nm E 【答案】B 110．选定分光光度计测定核酸浓度，光的波长为A．680nm B．280nm 260nmC． ．D230nm ．200nm E C 【答案】．丙烯酰胺凝胶电泳通常采用何种装置111 ．柱状装置 A B．垂直装置 C ．水平装置．多柱装置 D E ．其他装置B【答案】 60．盐析法主要用途 A．蛋白的分离和纯化 B．盐的分离 C．糖的分离 D．核酸的分离和纯化 E．水的净化 【答案】A 72．下列哪种仪器能作微生物化学成分的分析 A．蛋白测序仪 B．DNA扩增仪 C．气相色谱仪 D．酶标仪 E．分光光度计 【答案】C 73．吕氏血清斜面培养基，尿素蛋黄琼脂培养基适用培养何种细菌 ．分离鼠疫杆菌 A ．布鲁司杆菌培养 B ．白喉杆菌培养 C ．肠道菌培养 D ．百日咳杆菌培养 E C 【答案】．哪一种显微镜能够用于病毒的检查74 ．普通光学显微镜 A ．暗视野显微镜 B C．荧光显微镜 D．相位差显微镜 E．电子显微镜【答案】E 75．哪一种培养箱更适合无电地区野外调查使用．直热式培养箱 A ．隔水式培养箱 B ．电
医院微生物实验室生物安全应急预案 由于存在仪器设备或设施出现意外故障或操作人员出现疏忽和错误的可能性，生物医学实验室发生意外事件是难以避免的，我室制订应急预案并定期演练，使所有工作人员熟知。 一、可能遇到的紧急情况及处理原则 （一）地震 若发生地震，应根据实验事被破坏的程度进行处理。 1、房屋倒塌实验室首先是设立适当范围的封锁区，其次是进行适当范围的消毒，边消毒边清理，最后由专业人员在做好个人防护的前提下对实验室边消毒边清理，清理到菌（毒）种保存室。如果菌（毒）种的容器没有破坏，可安全转移到其他安全的实验室存放。如果菌（毒）种的容器已有破坏和外溢应立即用可靠的方法进行彻底消毒灭菌。处理现场的人要进行适当的医学观察。 2、实验室轻微损坏可由专业人员按照上述方法处理。 （二）水灾 万一发生水灾报警时应停止工作，转移菌（毒）种和相关材料，对实验室进行彻底消毒。对仪器设备消毒转移并做有关防水处理。水灾过后对实验室进行消毒清理维修和试运转、安全参数检测验证合格后方可重新启用。
（三）火灾 实验室平时应加强防火。万一发生火灾，首先要考虑实验室人员安全撤离，其次是工作人员在判断火势不会迅速蔓延时，可力所能及地扑灭或控制火情，消防人员不得进入实验室，不得用水灭火。消防部门只管控制火情，以便火灾不会殃及邻居。 （四）停电 要迅速启动双路电源或备用电源或自备发电机，电源转换期间应保护好呼吸道；如时间较短，应屏住呼吸，待正常后恢复呼吸；如时间较长，应加强个人防护，如佩带专用头盔。 （五）生物安全柜出现正压 使用生物安全柜时应体现三个原则：保护人、保护环境、保护标本。 若生物安全柜出现正压，应被视为房间有试验因子污染并对实验人员危害较大，应立即关闭安全柜电源，停止工作，迅速将实验过程中所用的带有污染危险的实验器皿、试管等关盖，放置平稳，实验人员缓慢撤出双手离开操作位置，避开从安全柜出来的气流。在保持房间负压和加强个人防护的条件下进行消毒处理措施，撤离实验室，具体措施见二（二）。 二、意外事故的处理 （一）感染性材料洒溢处理的一般原则